Способ определения вольтарена в биологической жидкости
Изобретение относится к методам определения вольтарена в биолоа ических жидкостях. Цель изобретения увеличение чувствительности способадостигается тем, что определение ведут по цветной реакции вольтарена с феррицианидом калия в щелочной среде,- при этом содержание продукта реакции регистрируют при 430-460 нм через 30-60 мин после добавления реагентов . Чувствительность способа 0,17 мкг в 1мл, коэффициент вариации 1,18%. 4 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
COUHAËÈÑTÈ×ÅÑHÈХ
РЕСПУБЛИК (51)4 С 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СЕВЩЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4231445/28-14 (22) !5.04.87 (46) 30.03.89. Бюл. Р 12 (71) Винницкий медицинский институт им.Н.И.Пирогова (72) Н.А.Станиславчук, А.А.Пентюк, А.П.Лычко, P.И.Иикунис и Л.N.ÑTàíèñëàâ÷óê (53) 612.015(088.8) (56) фармацевтический журнал, 1984, В 4, с. 46-49.!
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения вольтарена в биологических жидкостях или лекарственных формах.
Цель изобретения — повышение чувствительности способа.
Способ осуществляется следующим образом.
К пробе, содержащей вольтареи, прибавляют раствор гидроксида натрия до конечной концентрации 40-160 ммоль/л, раствор феррицианида калия до конечной концентрации 1,25- 2,5 ммоль/л, окрашенный продукт фотометрируют в интервале 30-60 мин при длине волны
ÄÄSUÄÄ 1469459 А 1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЛЬТАРЕБА
В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ШДКОСТИ (57) Изобретение относится к метоцам определения вольтарена в биологических жидкостях. Цель изобретения увеличение чувствительности способадостигается тем, что определение ведут по цветной реакции вольтарена с феррицианидом калия в щелочной среде, при этом содержание продукта реакции регистрируют при 450-460 нм через 30-60 мин после добавления реагентов. Чувствительность способа
О, 17 мкг в 1мл, коэффициент вариации
1, 18Х. 4 табл.
450-460 нм. При конечной концентрации гидроксида натрия 40-160 ммоль/л и феррицианида калия 1,25-2,5 ммоль/л, оптическая плотность окрашенного продукта существенно не изменяется в М интервале 30-60 мин. При других соот- (В ношениях реактивов окрашенный продукт Я ) имеет более низкую оптическую плот- фь ность либо быстро обесцвечивается. ©
Зависимость оптической плотности Я окрашенного продукта от концентрации гидроксида натрия и феррицианида калия в различные промежутки времени после прибавления реактивов приведена .в табл. 1. Ъ
1469459
Т а б л и ц а 1
Оптическая плотность после прибавления реактивов, мин
Конечная концентрация, ммоль/л
60 75
Феррицианид Гидроксид калия натрия
30
120
1,25
1,25
О, 150
0,450
0,600
0,650
0,540
О, 180
0,600
0,655
0,630
0,510
0,400
0,550
0,610
0,610
0,480
0,540.
0,630
0,520
0,460
0,375
5,0
10,0
П р и м е ч а н и е. Конечный объем проб 3 мл, содержание вольтарена в пробе 20 мкг.
Величина оптической плотности окрашенного продукта при различных длинах волн приведена в табл. 2.
Максимальное поглощение окрашенного продукта вольтарена с феррицианидом калия в щелочной среде наблюдается при длине волны 450-460 нм.
Таблица 2
Длина волны, Оптическая
I нм плотность
Длина волны, Оптическая плотнм ность
П р и м е ч а н и е. Для исследования взята проба с содержанием вольтарена 20 мкг.
452.
454
456
458
462
464
160.
320
0,110
О, 160
О, 175
О, 190
0,250
0,380
0,542
0,650
0,665
0,682
0,68Q
0,650
0 645
0,620
0,590
0,020
0,220
0,450
0,590
0,620
0,060
0,410
О, 650
0,660
0,590
0,280
О, 500
0,630
0,630
0,550
0,480
0,640
О, 540
О, 500
0,450
466
468
600
0,270
0,540
0,620
0,630
0,470
0,300
0,640
0,650
0,600
0,430
0,500
0,560
0,580
0,560
0,410
0,550
0,620
0,440
0,380
0,275
0,325
0,580
0,610
0,625
0,420
0,330
0,640
0,630
0,560
0,350
0,540
0,550
0,540
0,520
0,330
0,600
0 580
0,420
0,290
0,200
0,555
0,520
0,495
0,410
0,345
0,295
0,252
О, 178
О, 135
О, 112
0,060
0,050
0,028
0,020
0,440
0,625
0,560
0,520
0,380
0,460
0,640
0,570
0,470
0,260
0,540
0,520
0,470
0,440
0,280
0,520
0,560
0,400
0,240
О, 150
0,500
0,630
0,530
0,510
0,280
0,470
0,635
0,525
0,440
0,210
О, 540
О, 51 5
0,430
0,400
0,250
0,500
0,540
0,З8О
0,220
0,090
1469459
Продолжение табл,.
Количество, мкг
Препарат
Найдено зято
Таблица 3
Сравнение чувствительности предлагаемого способа определения вольтарена с прототипом (калибровочная кривая для определения нольтарена) дано в табл. 3.
0
Индометацин
Зуфиллин
Аспирин Количество вольтарена в пробе, мкг плотности
0,5
1,0.
2,5
5,0
10,0
15,0
20,0
30,0
40,0
50,0
0
0
0,035
0,060
0,096
О, 105
О, 124
0,040
0,070
О, 110
0,220
0,325
О, 506
0,650
0,950
1,200
1, 280
Таблица 4
Количество, мкг
Препарат
Взято Найдено
Вольтарен
Анальгин
Амидопирин
0,650
Величина оптической
Прототип Предлагаемый способ
Определение вольтарена по А.Ф.Фартушкому (1983, 1984) вели следующим образом: к пробе вольтарена прибавляли 3 мп 5Õ-ro раствора перйодата натрия в 75А растворе сернистой кислоты. Окрашенный продукт фотометрировали через 15 мин при 550 нм на спектрофотометре.
Как видно из табл. 3, чувствительность предлагаемого способа выше по сравнению с прототипом более чем в !О раз.
Воспроизводимость предложенного способа определения вольтарена была изучена при параллельном определении
5 проб, содержащих по 16 мкг вольта-рена; коэффициент вариации 1,18Х.
Специфичность способа определения вольтарена была проверена на лекарственных препаратах, применение которых совместно с вольтареном наиболее вероятно.
Специфичность способа определения вольтарена приведена в табл. 4.
Как следует из табл. 4, икдометацин, амидопирин, эуфиллин, аспирин, анальгин не дают окрашенного продукта в условиях определения.
Пример 1. Определение вольтарена в инъекционном препарате.
Инъекционный препарат вольтарена (фирмы Плива, Югославия, в сотрудничестве с фирмой Сиба-Гейги) разводили лист. !ллированной водой в 100 раз, 0,1 мл разведенного раствора вольтарена переносили в другую пробирку, куда прибавляли 2,5 мл О, 1 М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл 15 MH раствора феррициакида калия, Пробы перемешивали и через 30 мин фотометрировали 455 нм в кювете ка 1 см, против контроля, содержащего все реактивы, за исключением вольтарена.
Пример 2. Определение вольтарена в биологических жидкостях.
К 1 мл плазмы крови или мочи прибавляли 4 мл 2,5 н.раствора фосфорной кислоты и 5 мл хлороформа (1:4:5).
Пробы перемешивали путем переворачивания (не допуская вспенивания) в течение 15 мик. После расслоения фаз хлороформный слой перекосили в другую пробирку. К остатку прибавляли такое же количество хлороформа и повторяли экстракцию. Объединенные хлороформкые экстракты упаривали досуха при 4060 С. К сухому экстракту вольтарека прибавляли 2,5 мл О,! М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл 15 мМ раствора феррицианида калия и размешивали. Через 30 мин пробы фотометрировали в кювете с длиной светового пути f см на спектрофотометре при
455 нм, против контроля, который готовили сливанием 2,5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл
15мМ раствора феррицианида калия.
Расчет вели по калибровочной кривои.
При концентрации вольтарена в плазме крови менее 1 мкг/мл можно использовать микрокюветы, пропорционально, уменьшив количество прибав1469459 ляемых реактивов или увеличив объемы плазмы или мочи, взятые для экстракции.
Составитель В. Иитюшин
Редактор И. Рыбченко Техред M.Äèäûê Корректор Л. Пилипенко
Заказ 1355/52 Тираж 788 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР, 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5, Производственно-издательский, комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101
Формула изобретения
Способ определения вольтарена в биологической жидкости путем экстракции, добавления к экстракту реагентов с последующей фотометрической регистрацией содержания продукта цветной реакции, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в
5 качестве реагентов используют гидроокись натрия в концентрации 80160 ммоль, феррицианид калия 1,252,5 ммоль, а содержание продукта цветной реакции регистрируют через
30-60 мин после добавления реагентов при 450-460 нм.
