Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови

 

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения содержания прекалликреина в плазме крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа определения за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина - α<SB POS="POST">2</SB> - макроглобулина. Для этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,5-2 ч при комнатной температуре. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК,.БО (g1! 4 С 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ ПНИЯ

H Д BTOPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР.1 (21) 4023697/28-14 (22) 14. 02.86 (46) 15,09.89, Бюл, 1 34 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад, И.П.Павлова (72) Г,N.Боголюбова, С.С.Михайлов, А.А.Санковский и И,Г.Щербак (53) 612.015(088,8) (56) Веремеенко К.Н,, Волохонская Л.И., Кизим А,И. и др. Методы определения прскалгикреин-калликреиновой системы в крови человека. Методические рекомендации, Киев, 1978.

Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам определения в плазме крови компонентов протеолитических систем, и может быть использовано в клинико-диагностических лабораториях.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа, Способ осуществляют следующим образом.

В полиэтиленовую пробирку вносят

0,4 мл плазмы и монометиламина в конечной концентрации 1,2% и оставляют на 1 ч при комнатной температуре, затем эту пробирку помещают в водяную баню при 25 С и вносят 0,4 мл суспензии 1%-ного раствора каолина, После 1-минутного контакта плазмы с каолином отбирают по 0,2 мп смеси в пробирки, содержащие 0,4 мл 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6. Добавля? (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

ПРЕКАПЛИКРЕИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицинской бирхимии, а именно к способу определения содержания прекалликреина в плазме крови. Цель изобретения — повышение чувствительности способа определения за счет специфичеСкого связывания свободного ингибитора калликреина — 1 -макроглобулина, Для этого в известном способе перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации 1-1,2%, выдерживают 1,52 ч при комнатной температуре, 1 табл.

1 ют О, 2 мл 1%-ного раствора протаминсульфата и инкубируют пробы 15 мин при 37 С, после чего реакцию останавливают, добавляют 0,8 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольные пробы протаминсульфат вносят после ТХУ. После осаждения не расщепившегося протаминсульфата ТХУ пробы центрифугируют 20 мин при

8000 об/мин.

В прозрачном центрифугате определяют содержание аргинина по реакции

Сакагучи в модификации Храмова и соавторов. Для этого к 1 мл центрифугата добавляют 1 мл арствора энтеросептола, 1 мл 2,5%-ного раствора

NaOH и 1 мл NaBrO, После добавления очередного реактива пробы тщательно перемешивают или встряхивают. Интенсивность окраски определяют на ФЭКе чающий активацию плазмы каолином, инкубацию активной плазмы с протаминсульфатом, остановку реакции трихлоруксусной кислотой и определение содержания калликреина по аргинину, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа за счет специфического связывания свободного ингибитора калликреина — -макроглобулина, перед активацией каолином в плазму добавляют метиламин в конечной концентрации

1-1,27., выдерживают ),5-2 ч при комнатной температуре и определяют содержание прекалликреина. !

P V <1000 Р.! 6 1000

А= - — — -----— 2. — 6,1 Р, аЧ N 15лО 1 я!74 2

Содержание ПК, мкмоль аргин. /.

/мин л, при использовании

Р п/п прототипа предложенного способа

Составитель Н.Литвиненко

Редактор И, Келемеш Техред И. Вере с

Корректор С,Черни

Заказ 5535/47 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,!О!

3 1508150 (светофильтр В 5, кювета 10 мм), сравнивая опытную пробу с контрольной.

Количетсво аргинина в пробах служит мерой определения активированно5 го прекалликреина, Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщеплен ного от протаминсульфата 1 л плазмы крови за 1 мин по формуле где Р— количество аргинина в пробе, мкг; !5

V„ — обьем инкубированной смеси, мл; обьем плазмы в пробе, мл; время инкубации;

М вЂ” молекулярная масса аргинина; 20

1000 — пересчет на 1 мл плазмы, При расчете уровня прекалликреина учитывают разность между содержанием аргинина в плазме, активированной в течение 1 мин каолином, и неактиви-.25 рованной плазме.

Полученные данные приведены в таблице.

Предложенный способ может быть использован для определения истинного значения преюалликреина при любых заболеваниях, сопровождающихся изменением прекалликреин-калликреиновой системы. ф о р м у л а и з о б р е т е н и н

Способ определения содержания прекалликреина в плазме крови, вклю1

3

5

7

9

1l

12

Среднее

128,9

112,9

110,2

109,3

122,1

ll4,8

107,2

103,8

112,6

115,2

103,2

124,6

114+8

204,3

198,3

202,0

215,1

216

184,5

200, 5

204, 0

192,4

202, 5

220, 6

204+8