Способ определения гомолитической активности веществ

 

Изобретение относится к клинической медицине и экспериментальной биологии, к способам определения гемолитической активности веществ. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. Это достигается за счет того, что в способе, заключающемся в смешивании суспензии эритроцитов с постоянной концентрацией с лизирующим веществом различной концентрации, определяют долю лизированных клеток по изменению оптической плотности в непрерывном потоке. Регистрацию ΔД проводят трижды при равном времени контакта суспензии с исследуемым веществом, а расчет проводят по формуле A=B/R, где A - гемолитическая активность вещества, M<SP POS="POST">-N</SP> <SP POS="POST">.</SP> мин<SP POS="POST">-1</SP>

B - концентрационная константа распределения эритроцитов по резистентности

R - временная константа

N - коэффициент Хилла.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК д11 4 G 01 N 33/48

«Э! i < < .,Д с

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4215128/28-14 (22) 19. 03. 87 (46) 15.09.89. Бюл, 34 (71) Научно-исследовательский институт технологии и безопасности лекарственных средств (72) Н.М.Митрохин, А.В.Команов, И.Ф.Плетень и В.В,Скибенко (53) 612.015(088.8) (56} Митрохин Н.М., Юртаев В.В. и

Голиков Ю.В. Исследование распределения эритроцитов по резистентности к хипжческим: гемолитикам. Фармакологическая коррекция кислородэависимых патологических состояний. Тезисы докладов 1-ro Всесоюзного симпозиума, M, 1984, с. 70-71. (54) ° СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКОИ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к клинической медицине и экспериментальной

Изобретение относится к клинической медицине и экспериментальной биологии и может быть использовано для экспресс-анализа гемолитической активности веществ и химической реэистивности эритроцитов.

Цель изобретения — упрощение за счет сокращения стадий и ускорения способа, а также возможности одновременного определения распределения ! эритроцитов по резистентности к исследуемому веществу.

Цель достигается тем, что определяют долю лизированных клеток по asменению оптической плотности в непрерывном потоке, регистрируют кон2 биологии, к способам определения гемолитической активности веществ. Цель изобретения — сокрашение времени анализа и упрощение способа. Это достигается за счет того, что в способе, заключающемся в смешивании суспензии эритроцитов с постоянной концентрацией с лизирующим веществом различной концентрации, определяют долю лизированных клеток по изменению оптической плотности в непрерывном потоке. Регистрацию 4 П проводят трижды при равном времени контакта суспензии с исследуемым веществом,а расчет проводят по формуле А=В/R, где А — гемолитическая активность

-n -1 вещества, М мин ;  — концентрационная константа распределения эритроцитов по резистентности; R — временная константа; n — - коэффициент

Хилла. центрации вещества, вызывающие лизис

25,. 50 и 75Х клеток при равном времени контакта суспензии эритроцитов с литическим веществом (t<) и определяют коэффициенты уравнения лизиса, используя зависимосTb

ВС t 1ï 3=0;

ВС,", tÄ-R-0;

ВС,t +1n 3=0.

Способ осуществляется следующим образом.

Эритроциты человека отмывают в

10-кратном объеме физиологического

4 . Для проведения анализа по предлагаемому способу с использованием ЭВМ необходимо 10-15 мин, в то время как по способу-прототипу 10-15 мин необходимы лишь для регистрации значения и.

Формула изобретения

n l,0> 8=235,7; R=5.5

Составитель В.Митошин

Редактор М.Келемеш Техред И.Верес

Корректор С.Черни

Заказ 5535/47 Тираж 789 .Подписное

BHHHIIH Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР, 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

3 150815 раствора и суспендируют до концентрации 0,04%, До проведения анализа готовят суспензии, содержащие 25, 50 и 75Х эритроцитов/мм от исходного раствора, з и определяют величины оптических плотностей этих суспензий в измери- тельной кювете.

В камеру смешения подают 0 05 N 10 раствор Na0H с убывающей по экспоненциальному закону концентрацией и суспензию клеток. Время движения жидкости от камеры смещения до измерительной кюветы составляет 2 00 мин, 15 а от включения устройства до до-. стижения гемолитиком камеры смешения1,22 мин, Оптическая плотность раствора, проходящего через измерительную кювету, изменяется по $-образному 20 закону и достигает 257.-ной плотности нелизированных клеток через б,50 мин (доля лизиса 0,75), 507.-ной через

8,20 мин (доля лизиса 0,50) и 75%-ной через 11,00 мин (доля лизиса 0,25).

Концентрации NaOH, рассчитанные по закону изменения концентрации с учетом времени контакта щелочи с эритроцитами и времени движения гемолитика до камеры смешения, составляют

0,0094, 0,0! 1 7, и 0,01 4 1 11 для С

С -„и С 5-соответственно.

Подставляя полученные результаты в приведенную систему уравнений, рас-, считывают коэффициенты гемолитичес- 35 кой активности:

Способ определения гемолитической активности веществ включающий смешивание суспензии эрйтроцитов с исследуемым веществом путем непрерывного добавления его в убывающей концентрации в камеру смешивания с последующей регистрацией 60 в проточной кювете, определением доли лизирующих клеток и рассчетом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения за счет сокращения стадии и ускорения способа, а также возможности одновременного определения распределения эритроцитов по резистент"ности к исследуемому веществу, регистрацию Ь.D осуществляют трижды при равном времени контакта суспензии с исследуемым веществом, а расчет проводят по формуле

 — л

А=—

R где А — гемолитическая активность

I7 "l вещества, м "мин

В, — крнцентрационная константа распределения эритроцитов по . резистентности, R — временная константа;

n — коэффициент Хилла.