Штамм бактерий bacillus suвтilis для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодсвой продукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении, и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанного средства. Целью изобретения является получение нового штамма бактерий, обладающего более широким спектром действия. Штамм бактерий Bacillus subtilis выделен из почвы, депонирован в коллекции ВНИИСХМ код V 131. Штамм позволяет уменьшить скорость развития возбудителей гнилей во время хранения яблок и винограда в 3 раза и снгзить поражение их на 23,6-66,6% по сравнению с контролем. 1 табл. с е С

CC - ОЭ СС, 2Е1 Э.МХ

Г СПУБД .К

sSl) S P 01 63/00, С 12 " 1/20 ю Ц Ф д 1Ф"Ъ Ю % Г 6,/ 1; 6 гг Ф Ъ1ФФ%Ъ р- Г, . i.?ЮВ1Р И р /:Г=р 1 с 1 ы 1 я., t:«(ом ir 1"i 3 p- (-„i I

Н АВТОРСКЫЛУ (;г- "ЫДЕТЕГ1ЬСТЕУ

ГОСУДC-!=СТ -"ЕККЫЙ КО . 1ТЕТ

ПО 112С.-...Тамг" hi{ И ОТ -:РЬТИЯМ

ПРИ П-М1 CCG (21} 47875:8/13 (22) 30. 1 1.90 (46) 23 ° 01,92. Бюл, 1 3 (71} Украи ский научно-исследовательский институт саловодства Южного отдепения BACi:НИЛ (72) А.М.Лапа, С.Р,Резник, С.В.Лапа, B.А, арагонов и И.Б,Сорокулова (53) 576.8:632.951(088.8) (56) Кудряшова А..А.Микробиологические основы сохранения плодов и овощей.

1986, с.167-17Ь.

Справочник по хранению плодов, ягод и виногр,"да. (54} ШТАММ БАКТЕРИИ КАГП.1.11Б SVBTILIS ЛЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ

ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНИЛЕИ ЯБЛОК И ВИНОГРАДА ПРИ ХРРHF.НИИ

Изобретение относится к микробислсгичес,ой промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодовой продукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанног з средства.

Известны способы защиты продукции при закладке ее на хранение предуборочнэй сбрабст кой йунгицилами (капт;1н, фолнет) дезинфекцией плодохранилир(и тары парами формалина, серь|, обработкой плодов антисептиками.

Однако использование этих препара тов перед . уборкой плодов и закладкой на длительное хранение не гарзн(57) Изобретение относится к микроби ологической промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодсвой продукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении, и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанного средства. Целью изобретения является получение нового штамма бактерий, обладающего более широким спектром действия. Штамм бактерий Bacillus subti lis выделен из почвы, депонирован в коллекции

ВНИИСХМ код Н 131. Штамм позволяет уменьuvrb скорость развития возбудителей гнилей во время хранения яблок и винограда в 3-4 раза и сн| зить поражение их нз 23,6-66,6> по сравнению с контролем, 1 табл. тирует получение биологически чистой продукции и приводит не только к загрязнению плодов остаточными кагичест- (;д вами пестицидов, но и снижает пищевую ценность плодов, что неблагоприятно сказывается на здоровье людей.

Известен способ биологической борьбы с монилиозом плодов персика. вызываемый грибом Monilia f.ructicola в период хранения. Цель достигается путем погружения плодов персика в рабочий pac TFAp или опрыскиванием плодов споровой суспснзисй Вас111ив „ 11

В-3 после товарной обработки.

Однако при этом применяетсл суспензия спор против возбудителя мои пипза плодов персика, вызываемым грибом

17 <»04 О>>1)1„ ) I !Ic(.(>а>н ipè (няс!я

11 .)От» Р (><, 3 .>. /л»1 f "..- .>; Г,>! И) C, " ЛОК И

" ) > и з

»и е ииоГрада пт«и у) >.н

Ц.ЛЬ >- >/: Е1- .И

»ОГО I: »>ча ба к т(. >

>ОЛЕЕ ЫI ) иt1 С "- и

ПОПУЧСII Е HO

<>бд«,";, л .:„;. ГО

1 РОМ /IPI«Cr!>!.л> Г>О

НЬ.: - . И СПОСО,НОГО

-.ра )-:.-нию с изя--.с1 г>ода влят ь зозбудит выx куя) т Jp

Штамм Bac il l().", ел е »

Г > )1< Й ПЛ",<)р

suhL11) s ЯН".ИСХМ 131 является антагонистом с/>еду.-.цих видов фитопатогенчы)1 грибов, вызыаак)цих гниги плодов яблок и ь1чогра...>» а именно 1fnnilia fructз т.ет)а, Rhiznpus

niBricaus, Pen).c i> 1iurI exI>ansum, Рег1с) .ilium с avifor >. Штамм репонирован в коллекции культур ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под номером 131 в качестве активчого àí- 20 тагониста возбудителей гнилей яблок и винограда.

Штамм выделен из почвы Киевской области в 1976 г, идентифицирован "..о

"Краткому определителю бактерии

Берджи".

Морфолого-культуральные признаки

Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 - культура спороносная, аэробная, грамположительная. 30

8 мазках из колоний, выросших на

МПА, через 18 ч обнарух<ива>зтся прямые палочковидчые кгетки 1,9-2,1»

)<0,3-0,4 мкм, распоп<:женные одиночно, иЗредка цепочкой. Клетка при спорооОразовании не раздувается, после роста на глокозном агаре в протопла-.ме гло..>угь> не обнаруживаются. На

МПБ культура образует пле> ку, о

Через 24 ч роста при Т = +37 С 40 на среде сусло-агар и Громыко культура имеет вид плоских, складчатых кожистых колоний диаметром 4-5 мм с изрезанными краями серовато-телесного цвета, хорошо сни; аемые петлей с 4r поверхности агара.

Через 24 ч роста при Т = +37 С о на стрептомицетном агаре культура имеет вид мелких колоний диаметром

0,4-1,0 ми, светло-серогоцяета сизрезанным краем, с центром внутри, слегка пр>1поднимаю<тимся над поверхностью агапа, паст<1образно>1 консистенции, хорошо снимается с поверхности агара.

Через 24 ч роста при T>"-+37 на мясо-пепто.>ном ага ре куль тупа инес T в.)д складчатых nJ>oc!,>)õ коро (>й диа>(..троя

0,2 - 0,5 мм От с.яетло-серогО до бех;<,;.о (> !I!, та, <,елкО и;,резанными кра;.-.i, пас тообр;>зной )«>»ñè: генц»и, Хор(Шо Г I; ">(i л. S I Ã-. > JI Й С П<>В< рХЧОСТИ ф,1ЗИОЛО> Π—:>НО".ИI,,ЧЕ<. К»ч СяÎv Ст Са, (! ñð;< .H -и-.>v< I ° л» ()av, араб(»1озу, >

IIaH!II :J)O,> / C <.Я>т),1 От)а: И<. М

I..ислОть без газа. ет no/I<1);»rcrisнух1 реа к;ию фогсс -Проскаузрз, гидролиa>ó< T >«>ахмаг>, желатину. Не р:)стет с анаэроб>ных усгояиях, не об >ар ет а p Гиии н/i»i Г!>/(р О/1/1 л

Не образует газ »з NA в аназробных услови»х. Продуцирует индол без образования сероводорода.

Из органических »сточников азота штамм Bacillus subti) is ВНИИСХМ 131 может использовать cne/1yioщие npr.sнические соединения: гидролизат казеича, /(рох<жевой автолизат, nei гоч, неорганические соединения ни1 f аты (KNO,, NANO ), аммонийные соли (NN4) rln5

Ми>)имальная температура роста штамма Baci11us sub Lil is ВНИИСХМ

131 -7 С, максимальная + „. С, оптимальчая 28 до 37 С.

Значение PH среды минимальное 5, максимальное 8, оптимальное Ь-7.

Штамм не патогенен для растений и теплокровных животных, ° Получение препарата грот»в возбудителей гнилей яблок и винограда пр» хранении На основе штамма бактери>

Bacillu subtilis ВНИИ ХМ 131.

Основнь е этапы изготовления препарата слегующие: порготовка штамма - засев на косячки с сусло-агаро:л, инкубиропанис при Т = 37 С в

><» течение 18-24 ч, Пересев на бактериологические матрацы. Инкубирсгание при Т = 37ОC в течение 7-11 сут для получения спор. Контроль сг орообразования проводим микрос.:опически.

С агаризованной среды культуру смывают физиологическим раствором, затем вносят в суспензию наполнительсахарозо-желатинояую среду (4 и 1Ф соответственно к общему объем, . Таким образом полученную суспензию доводят до 10 млрд, спор в 1 мл (c помощью оптического стандарта мутности) . /1ля дп»1ельчого хранения препарат полученную смесь разл)>вают ампулы или лотки из нержавеющей стали и пом(щасм в морозильную камеу 1ри Т не вы)»е -20 С на 48 ч. За<> тем >1р<>водят лиофилиз".I. !Iþ в вакуум1706504

Зона лизиса

К опытной сеMonilia Реп1с illium Penic illium РЬ1тор:s

fructigena expansurn clavifnrme niBricaus рии

16 18

19

17

19

17

19

18

19

1

3

5

21

19

21

18

19

17

1Ц

19

21

20 ных с, . „льны камерах в -,åöåíèå

3b ч при 1 .мпературо от 20 до

+36 C . Конт рог ь бактериальной чис тоты препарата проводят методом рассева на агаризояанные питательные ср дн (МПЯ, Громыко, Гаузе t" 2, Картофельный агар, стрептомицетный аг lp) .

Антагонистическую активность полученного препарата на основе штамма

Вгсillus sub til is ВНИИСХМ 131 определлют метолом радиальных штрихов (багоров, 1969).

Днтагонисти -.еская активность опытных серий препарата на основе штамма

Вас111 ;. subtilis ВНИИСХМ 13 1 (после лиофильной сушки) показана в таблице.

Пример 1. Препарат лля обработки плодов яблок и винограда получают на ращи ванием штамма Вас i). 1» s

subtilis РНИИСХМ 131 на тяеррой среде сусло-агар, при Т = +37 С в течение о

7-10 сут для получения спор.

Культуру смывают Физиологич ..скин раствором, затем вносят в суспен. ию наполнитель - сахароза-желатиновую среду (4 и 11 соответственно к общему обмму). Готовят рабочую суспензию с концентрацией 5 -106 и 1-107 спор/мл из расчета 1 л на 100 кг яблок, Обработку препаратом проворят в о условиях хранения (Т = +2-8 С, относительной влажности 85-9ß), при естественном инфекционном Фоне. Контролем служат плоды, которые обычно закладывают на хранение, обработанные перед уборкой Фунгицидом поликарбацином 80ь с.п. с нормой расхода с кг/га на 20 дн до уборки урожая .

При использовании суспензии штамма Вас il lu s sub t i l is ВНИИС XM 131 с гитром от 5 до 10 мпр>i.споо ло тиг»ется 10 !-ноя сохранност ь плсг св ябг;< к в течение-. 0,;н, в ro время ка" в orat»ролс уже на 7 су1 наблюдаются раз итие гнилей яблок

Увеличение нагр зки спор более

10 млрд. не ведет к глi ению результатов.

10 Пример 2. В 1989 г vхранилище совхоза "Зеленый Гай" Никглаевсксй облас- и проведена обработка прегаратс на основе штамма В; с111пв subtllls

ВНИИСХМ 131 с титром 10 млрд спор в

15 1 r сухoгo лиофильно высушенного препарата. Норма расхода 1. г ",.репарата на 1 кг ягод винсграда. Условия хранения: Т = +1-7 С, относительная влажо ность воздуха 85-90 .Контролем служат

?0 гроздья винограла,сбрабстанные перед ,хранением мед,ьсодержа,ими препаратами (купрозан 80 с.п.4-6 кг/га).

Через 2 мес, после обработки установлено, что количество пораженных

25 гроздей винограда возбудителями гни- лей уменьшается на . г,4 по сравнению с контролем.

Таким образом, применение штамма

Bacillus suhtilis ВНИИСХМ 131 против

30 возбудителей гнилей яблок и винограда позволяет уменьшить скорость развития гнилей во время хранения в 3-4 раза, а также снизить поражение возбудителями гнилей плодов яблок и винограда

35 на ?3,6-66,67 °

Формула изобретения штамм бактерий Bacillus subtilis

40 ВНИИСХМ 131 для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении.