Способ концентрирования эндонуклеазы из яда кобры

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы с целью производства с помощью этого фермента олигорибонуклеотидов. Целью изобретения является снижение потерь эндонуклеазы при концентрировании и упрощении условий хранения целевого продукта. Способ заключается в том, что в раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеазу лиофилизуют.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 N 9/22

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ю (21) 4779880/13 (22) 09.01.90 (46) 23.03.92. Бюл. ¹ 11 (71) Новосибирский государственный университет им. Ленинского комсомола (72) В.И. Ямковой (53) 577,15.07(088. 8) (56) Скоупс P. Методы очистки белков. — M.:

Мир, 1985, с.255.

Василенко С.К., Райт В.К. Метод получения высокоочищенной рибонуклеазы из яда кобры. — Биохимия, 1975, т.40, ¹ 3, с,578-583. (54) СПОСОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ЭН ДОНУКЛЕАЗЫ ИЗ ЯДА КОБРЫ

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы.

Известен способ концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеаэы, осуществляемый путем упаривания растворителя из.целлофанового диализного мешка с раствором фермента в токе холодного (4-6 C) воздуха, последующего диализа эндонуклеаэы против буфера 0,02М трис -HCI (рН 7,8) и последующего заморажйвания фермента при -20 С.

Недостатками известного способа являются значительные потери активности эндонуклеазы при концентрировании и сложности с условиями хранения эндонуклеазы, предусматривающие наличие надежного кальвинатора.

Цель изобретения — снижение потерь эндонуклеазы при концентрировании.и упрощение условий хранений целевого продукта, „„Я3,„, 1721087 А1 (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы с целью производства с помощью этого фермента олигорибонуклеотидов. Целью изобретения является снижение потерь эндонуклеазы при концентрировании и упрощении условий хранения целевого продукта, Способ заключается в том. что в раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05 —.0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную зндонуклеазу лиофилизуют, В раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеазу лиофилиэуют.

Пример, Концентрирование эндонуклеазы проводят при 4 — 6 С. Фермент, выделенный из 1,5 г сухого яда кобры путем последовательного фракционирования раствора яда гель-фильтрацией на сефадексе

G-75 (сверхмелком) и катионообмен ной хроматографией на SP-сефадексе С-25 (объем

121 мл), помещают в целлофановый диализный мешок, вносят в него 20 мг (0,165 мг/мл) альбумина из сыворотки крови человека (99та, США) и упаривают до8 мл в течение

3 сут в токе воздуха, периодически ополаскивая внешние стенки мешка дистиллированной водой, Сконцентрированный раствор эндонуклеазы диализуют против двух порций по 1 л 0,02М трис-HCI-буфера (рН 7,8) в течение суток, Конечный объем

17,8 мл, потери фермента 18%. Затем препарат лиофилизуют. Потерь фермента нет.

1721087

Составитель h.ßìêîåoé

Редактор И.Дербак Техред М.Моргентал Корректор H.Ревская

Заказ 928 Тираж Подписное °

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина. 101

Лиофилиэованный препарат эндонуклеаэы хранят в герметично закрытых флаконах при 4-6 С без потери активности, по крайней мере, в течение 5 лет, Способ обеспе извет снижение потерь 5 эндонуклеаэы при концентрировании в 4,8 раза (c 86 до 18 ), а также возможноеть, хранения фермента в обычном холодильнике при 4-6 С и даже при комнатной температуре в течение нескольких недель. 16

Формула изобретения

Способ концентрирования эндонуклеазы из яда кобры, включающий упаривание растворителя иэ целлофанового диализного мешка сраствором фермента в токе воздуха при 4-6 С и последующий диалиэ эндонуклеэзы против 0,01-0,02 М трис-Н С!-буфера, рН 7,8, о тл и ч э ю шийся тем, что, с целью снижения потерь эндонуклеазы при концентрировании и упрощения условий хранения целевого продукта, в раствор фермента перед упэриванием добавляют эльбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеаэу лиофилизуют.