Способ модификации биоткани для протезирования


 

A01N1/00 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2523879:

Общество с ограниченной ответственностью "Кардиоплант" (RU)

Изобретение относится к медицине. Биоткань перед ферментативной обработкой помещают в гипертонические растворы хлорида натрия и подвергают воздействию ультразвука в течение 20-300 минут. Затем обрабатывают ферментом террилитином в концентрации 0,1-10 ПЕ на 1 грамм ткани, отмывают в растворе уксусной кислоты и гидрокарбонате натрия, выдерживают в многократно заменяющихся растворах глутарового альдегида возрастающих концентраций и стерилизуют. Изобретение позволяет гарантированно сохранить коллагеново-эластическую структуру биоткани, снизить степень ее минерализации, сократить расход используемых для обработки реактивов, получить неиммуногенный, прошитый по всему объему, биоматериал. 1 з.п. ф-лы, 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к протезированию пораженных участков органов и тканей в травматологии, кардиохирургии, стоматологии, офтальмологии, полостной хирургии.

Известно несколько способов обработки биоткани с целью подавления ее иммуногенности и минерализации.

Один из способов включает в себя обработку биоткани 2-5% раствором диглицидилового эфира этиленгликоля с дальнейшей обработкой гепарином с концентрацией не менее 100 МЕ/мл (Пат. РФ 2008767 C1, МКИ 6 A01N 1/100, 1994). Недостаток данного метода обработки состоит в том, что диглицидиловый эфир этиленгликоля образует дополнительные сшивки между волокнами коллагена только на поверхности биоткани, и любое ее повреждение приведет к нарушению этого «защитного» слоя, следствием чего будет являться развитие кальцификации трансплантата.

Предложен способ химической обработки ксеноперикарда, включающий химическую стабилизацию ксеноперикарда 0,625% раствором глутарового альдегида и последующую обработку 1% раствором додецилсульфата натрия, при этом химически стабилизированный ксеноперикард дополнительно обрабатывают 0,05÷0,25% водным раствором хитозана или металлсодержащего хитозана. Недостатком данного метода является тот факт, что из биоткани не удаляются клеточные элементы, что гарантированно не обеспечивает снижения иммуногенности (Пат. РФ 2384348 C2, МПК, A61L 27/36, 2008).

Близким к заявляемому способу модификации биоткани является способ подготовки биоткани к ксенопротезированию, по которому биоткань перед ферментативной обработкой выдерживают в течение 15-72 ч в гипертоническом растворе хлорида натрия 1-10%-ной концентрации, обрабатывают ферментом в боратном буферном растворе при 32-37°C, отмывают сначала в 0,6-6%-ном растворе уксусной кислоты, затем в растворах гидрокарбоната натрия и хлорида натрия, выдерживают в многократно заменяемом растворе глутарового альдегида в буферном растворе с возрастающей концентрацией и стерилизуют (Пат. РФ 2197818 C1, МПК7, A01N 1/100, 2001).

Недостатками данного способа являются высокая концентрация используемого фермента и длительная ферментативная обработка, а также использование в качестве растворителя террилитина боратного буферного раствора, что может привести к разрушению коллагеново-эластической структуры биоткани в ходе обработки и повышению степени ее минерализации.

Предлагаемый способ позволит устранить эти недостатки.

Целью данного способа является снижение риска разрушения коллагеново-эластической структуры биоткани при ферментативной обработке и, как следствие, снижение ее минерализации.

Сущность способа состоит в том, что биоткань перед ферментативной обработкой помещают в гипертонические растворы хлорида натрия, во время которой биоткань подвергают воздействию ультразвука, по крайней мере, однократно, в течение 20-300 минут, затем обрабатывают ферментом террилитином в концентрации 0,1-10 ПЕ на 1 грамм ткани, отмывают в растворе уксусной кислоты и гидрокарбонате натрия, выдерживают в многократно заменяющихся растворах глутарового альдегида возрастающих концентраций и стерилизуют.

Отличие предлагаемого способа заключается в том, что при предварительной обработке в гипертонических растворах хлорида натрия биоткань подвергается ультразвуковой обработке, по крайней мере, однократно в течение 20-300 минут, а ферментативную обработку проводят в ацетатном буферном растворе, количество используемого фермента при этом снижается до 0,1-10 ПЕ на один грамм ткани.

Времени обработки, меньшего, чем 20 минут, не достаточно для эффективного разрушения клеточных элементов, а время более 300 минут является не целесообразным, т.к. процесс разрушения клеточных элементов будет окончен. При воздействии ультразвука на биоткань в указанном временном диапазоне разрушения коллагеново-эдастической структуры не происходит.

Ферментативная обработка гарантированно обеспечивает разрушение оставшихся после ультразвуковой обработки клеточных элементов биоткани и гликозамингликанов как основных носителей антигенности. Замена боратного буферного раствора на ацетатный позволит снизить риск разрушения коллагеново-эластической структуры биоткани.

Концентрация террилитина от 0,1 до 10 протеолитических единиц на один грамм влажной биоткани объясняется тем, что концентрация фермента менее 0,1 ПЕ не достаточна для разрушения оставшихся клеток ткани, а концентрация более 10 ПЕ приведет к разрушению коллагеновых и эластических волокон.

Для того чтобы остановить воздействие террилитина на биоткань, необходима его инактивация. Для этого нужно изменить параметры, от которых напрямую зависит активность фермента, а именно температуру ацетатного буферного раствора, уровень рН, концентрацию фермента в зоне его действия. Поэтому биоткань выдерживают в охлажденном кислотном растворе, а затем промывают в проточной дистиллированной воде.

С целью инактивации оставшихся после промывания на биоткани кислотных групп биоткань помещают в раствор гидрокарбоната натрия. Затем выдерживают в гипертонических растворах солей для извлечения продуктов протеолиза клеток из ткани и промывают дистиллированной водой.

Обработка биоматериала растворами глутарового альдегида возрастающих концентраций необходима для стабилизации ткани и снижения ее иммуногенности.

Способ модификации биоткани для протезирования пораженных участков органов и тканей осуществляется следующим образом.

Биоткань помещают в тару с гипертоническим раствором хлорида натрия в концентрации 1-10% и оставляют на 24-76 ч, меняя каждый день гипертонический раствор в таре. Во время проведения этой обработки биоткань подвергают воздействию ультразвука в течение 60 минут. После окончания обработки в гипертонических растворах хлорида натрия биоматериал промывают в дистиллированной воде. Далее проводят ферментативную обработку. Для этого рассчитывают количество террилитина, необходимого для процесса: 0,1-10 ПЕ на 1 грамм влажной биоткани - и растворяют его в ацетатном буферном растворе, нагретом до 37°C. После ферментативной обработки биоматериал выдерживают в инактивирующем растворе (6-60 г уксусной кислоты, 100 г хлорида натрия, 840-894 г дистиллированной воды) не менее чем 20 минут, промывают в дистиллированной воде и помещают в 0,1 М раствор гидрокарбоната натрия и снова промывают дистиллированной водой. Затем проводят постферментативную обработку гипертоническими растворами солей 2%-ной и 7%-ной концентрации в течение 17 и 6 ч соответственно, и промывают в проточной дистиллированной воде, помещают в раствор глутарового альдегида. Проводят смену раствора глутарового альдегида на раствор с более высокой концентрацией и стерилизуют.

Пример 1.

Биоткань помещают в тару с гипертоническим раствором хлорида натрия в концентрации 2% и оставляют на 72 ч, меняя каждый день гипертонический раствор в таре, затем проводят смену на 7%-ный раствор хлорида натрия и оставляют биоматериал на 6 часов. Во время данной обработки биоткань однократно подвергают воздействию ультразвука в течение 120 минут. По истечении времени предварительной обработки образцы промывают в дистиллированной воде и проводят ферментативную обработку. Для этого рассчитывают количество террилитина, необходимого для процесса: 1 ПЕ на 1 грамм влажной биоткани - и растворяют его в ацетатном буферном растворе, нагретом до 37°C. После ферментативной обработки биоматериал выдерживают в инактивирующем растворе (6-60 г уксусной кислоты, 100 г хлорида натрия, 840-894 г дистиллированной воды) не менее чем 20 мин, промывают в дистиллированной воде и помещают в 0,1 М раствор гидрокарбоната натрия и снова промывают дистиллированной водой. Затем проводят постферментативную обработку гипертоническими растворами солей в концентрациях 2% и 7% в течение 17 и 6 ч соответственно и промывают в проточной дистиллированной воде, помещают в раствор глутарового альдегида. Проводят смену раствора глутарового альдегида на раствор с более высокой концентрацией и стерилизуют.

Пример 2.

Отличается от примера 1 тем, что биоткань помещают в тару с гипертоническим раствором хлорида натрия в концентрации 2% на 48 ч, а затем в 7% гипертонический раствор на 12 ч, подвергают действию ультразвука в течение 60 минут, ферментативную обработку проводят с концентрацией террилитина 5 ПЕ на 1 грамм влажной биоткани.

Пример 3.

Отличается от примера 1 тем, что биоткань подвергают действию ультразвука в течение 100 минут, ферментативную обработку проводят с концентрацией террилитина 5 ПЕ на 1 грамм влажной биоткани.

Применение заявляемого способа модификации биоткани для протезирования позволит гарантированно сохранить коллагеново-эластическую структуру биоткани, снизить степень ее минерализации, сократить расход используемых для обработки реактивов, получить неиммуногенный, прошитый по всему объему, биоматериал.

Источники информации

1. Патент РФ №2008767.

2. Патент РФ №2384348.

3. Патент РФ №2197818.

1. Способ модификации биоткани для протезирования пораженных участков органов и тканей, включающий предварительную обработку в гипертонических солях хлорида натрия, обработку биоткани ферментом в буферном растворе, последовательную отмывку в растворе уксусной кислоты и гидрокарбонате натрия, выдержку в растворах глутарового альдегида и стерилизацию, отличающийся тем, что во время предварительной обработки в гипертонических растворах хлорида натрия биоткань подвергается воздействию ультразвука, по крайней мере, однократно, в течение 20-300 минут; ферментативную обработку проводят в ацетатном буферном растворе с концентрацией фермента 0,1-10 ПЕ на один грамм биоткани.

2. Способ модификации биоткани по п.1, отличающийся тем, что на этапе постферментативной обработки биоткань выдерживают в гипертонических растворах солей.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к пантовому оленеводству, в частности к консервированию варочной пантовой воды непосредственно на мараловодческой ферме в период панторезной компании.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано при необходимости сохранения и восстановления репродуктивной функции у женщин с онкологическими заболеваниями.

Изобретение относится к упаковке для вмещения и хранения жидкого вещества, предназначенного для замораживания. Упаковка (1) для вмещения и хранения жидкого вещества (S), предназначенного для замораживания, содержит две герметизирующие стенки (4, 7), соединенные друг с другом для образования камеры (2) вмещения жидкого вещества (S), одно посадочное место (3), изолированное от герметизирующей камеры (2), для вмещения устройства (T) считывания температуры жидкого вещества (S).

Изобретение относится к химии азотсодержащих гетероциклических соединений, а именно к производным несимметричных триазинонов, которые могут быть использованы в сельском хозяйстве.

Устройство для консервирования замораживанием клеточных взвесей под давлением в атмосфере инертного газа - портативный криобароконтейнер - выполнен из нержавеющей стали марки 12Х18Н10Е и состоит из передней и задней панелей.

Единица дозирования в форме прессованной таблетки для замедленного высвобождения средства против насекомых содержит испаряющееся средство против насекомых и инертную твердую основу.

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и биологии. Проводят фиксацию образца, декальцинацию, промывание водой, дегидратацию в спиртовых растворах и заливку в парафин.

Изобретение относится к офтальмологии. Раствор для хранения роговицы содержит смесь биологических сред M199 и DMEM, хондроитина сульфат, L-аланил-L-глутамин, 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновую кислоту (HEPES), пируват натрия, β-гидроксибутират натрия, гентамицина сульфат, амфотерицин В, 2,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этилнафталиндион-1,4 (эхинохром А) и гидроксиэтилкрахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%: среда M199 0,64; среда DMEM 0,447; гидроксиэтилкрахмал 5-10; хондроитина сульфат 2,5; эхинохром А 0,001-0,01; L-аланил-L-глутамин 0,05425; буфер HEPES 0,5958; пируват натрия 0,0055; β-гидроксибутират натрия 0,151; гентамицина сульфат 0,01; амфотерицин В 0,0000250; дистиллированная вода до 100.

Изобретение относится к области криобиологии, клеточной биологии, морской биотехнологии и гидробиологии. Проводят обработку клеток морских микроводорослей криопротекторной смесью, содержащей проникающий и непроникающий криопротекторы и питательную среду.
Изобретение относится к медицине. Проводят получение донорской крови, смешивание с гемоконсервантом глюцир в соотношении 4:1, разделение донорской крови на плазму и эритроцитную массу с последующим хранением эритроцитной массы в течение 30 суток при t=+4°С.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и касается создания гомографтов сердечнососудистой системы (ГССС), применяемых в качестве сосудистых биологических протезов при операциях на сердечно-сосудистой системе. Предлагаются варианты гомографта, представляющего собой изъятый из трупа участок магистральных сосудов или выходных трактов правого и левого желудочков сердца. Гомографт характеризуется также тем, что в течение, по крайней мере, 30 минут его подвергают предварительной обработке средой, содержащей гентамицин, дифлюкан и стабилизатор рН. Затем на стадии препаровки обрабатывают средой с рН 7,0-7,4, представляющей собой раствор DMEM/F12, содержащей гентамицин, дифлюкан, цефалоспорин и метрогил. Последующее хранение гомографта осуществляют в среде, содержащей раствор DMEM/F12, гентамицин, дифлюкан и фосфатный буфер. Предложены также способы получения указанных вариантов ГССС, а также среды для воздействия на ткани гомографта на разных этапах получения, хранения и транспортировки. Изобретения обеспечивают создание ГССС более жестких конструкций, устойчивых по отношению к воздействию повреждающих факторов сред обработки, транспортировки и хранения, что улучшает их функционирование в организме. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 10 пр., 9 табл., 10 ил.
Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано в работе анатомических музеев, коллекций, кафедр анатомии медицинских вузов. Способ консервации костных анатомических препаратов предусматривает нанесение на предварительно очищенную от мягких тканей, обезжиренную, высушенную кость композиции-консерванта, приготовленной из полимерного клея «Dragon» и ацетона, взятых в соотношении 1:(1-3). Предлагаемый способ обеспечивает механическую прочность и естественный цвет кости, прост и безопасен в применении. 3 пр.
Изобретение относится к медицине и трансфузиологии и касается создания раствора для замораживания ядерных клеток крови. Раствор содержит диметилацетамид - 3,5 мл, гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола») - 46,3 мл и фосфатный буфер (NaH2PO4·2Н2О, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0. Предлагаемый криофилактик для замораживания ядерных клеток крови при замораживании до температуры -80°С и последующем отогревании обеспечивает сохранность 94,2-97,1% функционально активных клеток, при замораживании до температуры -196°С и последующем отогревании обеспечивает сохранность 92,7-97,8% функционально активных клеток. 4 пр.

Изобретение относится к ветеринарии и анатомии. Способ изготовления рентгеноконтрастной массы для вазорентгенографии при посмертных исследованиях животных включает приготовление массы, состоящей из 45% свинцовых белил, соединенных с 45% живичного скипидара, и 10% порошка медицинского гипса, вводимого тонкой струей в данный состав. При этом порошок медицинского гипса предварительно просеивают через сито, а полученную массу интенсивно перемешивают в течение 20-30 мин до получения взвеси гомогенной консистенции с вязкостью, аналогичной плазме крови. Предлагаемое изобретение обеспечивает изготовление инъекционной массы, обладающей высокой рентгеноконтрастностью, мелкой дисперсностью, способностью оседания на стенках сосудистого русла, доступной и не дорогостоящей. 2 ил.

Изобретение относится к медицине. Анатомический препарат после фиксации тканей и приготовления путем препаровки погружают в промежуточный растворитель - ацетон на 4 недели, охлаждают до -20°C, помещают в герметичную металлическую камеру, заполненную композицией, содержащей силоксановый полимер медицинского назначения, сшивающий агент и катализатор. Композиция разведена ацетоном в концентрации 50-75%. Создают в камере избыточное давление в 500 мм рт.ст., охлаждают препарат до температуры -8°C. При этом композиция заполняет межклеточные пространства препарата на протяжении 2-3 недель, после чего препарат вулканизируют в термостате при температуре 38°C в течение 4 часов. Изобретение позволяет повысить качество анатомических препаратов. 1 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине. Состав содержит рекомбинантный интерферон, выбранный из группы: рекомбинантный интерферон-альфа, рекомбинантный интерферон-бета, рекомбинантный интерферон-гамма, антибиотики, антисептики, гипромеллозу и воду при следующем соотношении компонентов в г на 1 мл состава: рекомбинантный интерферон, ME 100-1000000 антибиотики, г 0,00001-0,5 антисептики, г 0,00001-0,5 гипромеллоза, г 0,00001-0,5 вода остальное до 1 мл Указанный состав может содержать антибиотики широкого спектра действия, выбранные из группы: амоксициллин, ампициллин, оксациллин, метициллин, цефалексин в количестве 0,00001-0,5 г на 1 мл состава. Состав содержит антисептики, выбранные из группы: лизоцим, биклотимол, фузафунгин, амбазон, бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний, ко-тримоксазол, амилметакризол, дихлорбензиловый спирт, цитилпиридиния хлорид, бензоксония хлорид в количестве 0,00001-0,5 г на 1 мл состава. Изобретение позволяет повысить терапевтическую эффективность состава. 2 з.п. ф-лы, 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, и может быть использовано для презервирования миокарда при трансплантации. Для этого проводят перфузию и хранение изолированного сердца с использованием раствора Кустодиол при температуре 2-4°C. При этом перед эксплантацией сердца донору в течение 10-12 часов проводят инфузию левосимендана в дозе 10 мкг/кг массы тела, а для перфузии и хранения изолированного органа в раствор Кустодиола добавляют левосимендан из расчета 10 мкг препарата на 1 литр раствора. После выполнения хирургического этапа пересадки сердца, во время снятия зажима на аорте реципиента и восстановлении кровотока, в контур продолжающегося параллельного искусственного кровообращения вводят 12,5 мг левосимендана и осуществляют его инфузию в течение 1 часа. Изобретение предназначено для предотвращения ишемических и реперфузионных повреждений миокарда, обеспечения адекватной функции донорского сердца в организме реципиента. 2 пр.

Настоящее изобретение относится к новым соединениям общей формулы (I), где Х=S, SO или SO2, и один из радикалов R1 и R2 представляет собой атом водорода, а другой имеет значения, перечисленные в формуле изобретения, которые используют для депигментации кожи, и/или волос на голове, и/или волосяного покрова и для дезинфекции кожи, к косметическому применению предложенных соединений, а также соединений формулы (I), в которой R1 и R2 могут также одновременно представлять собой атом водорода. Кроме того, изобретение относится к косметической и фармацевтической композициям на основе предложенных соединений и к способам получения данных соединений. 6 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл., 30 пр.

Изобретение относится к способу лиофилизации композиции, содержащей очищенный антитромбин III (AT III) и кристаллизующееся вещество, выбранное из аланина, маннита, глицина или NaCl. Заявленный способ включает замораживание композиции при температуре от -52°C до -60°C в течение 6-15 часов, отжиг композиции при -30°C в течение 1 часа, повторное замораживание композиции при температуре от -52°C до -60°C в течение 2-15 часов при поддержании температуры продукта между -48°C и -52,7°C в течение 4-10 перед лиофилизацией и высушивание композиции с получением лиофилизованного кека. Также изобретение относится к фармацевтическому набору, который содержит указанный лиофилизированный кек и жидкий реагент. Изобретение обеспечивает получение лиофилизированной композиции, содержащей AT III, который сохраняет свою активность и стабильность. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 24 ил., 5 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к области нормальной анатомии, трансплантологии, и может быть использовано с целью подготовки трупов для обучения хирургов-трансплантологов приемам забора и пересадки внутренних органов. Предлагается для бальзамирования трупов с целью отработки у врачей навыков забора донорских органов и последующей их трансплантации осуществлять способ, при котором для насыщения тканей и органов бальзамирующими растворами, размещают труп в воду при t 40°С на 120-160 мин, вставляют канюли в бедренную артерию и в бедренную вену и промывают сосудистое русло теплым физиологическим раствором с добавлением 1-2% раствора цитрата натрия; герметизируют бедренную вену и вводят в артерию раствор, содержащий формалин, глицерин. Способ обеспечивает сохранение структуры внутренних органов за счет повышения консервирующих качеств раствора и обеспечения наполнения мелких сосудов.
Наверх