Криоконсервант для замораживания ядерных клеток крови

Авторы патента:

Ветошкин Константин Александрович (RU)

A01N1/02 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2530149:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к медицине и трансфузиологии и касается создания раствора для замораживания ядерных клеток крови. Раствор содержит диметилацетамид - 3,5 мл, гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола») - 46,3 мл и фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2Н₂О, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0. Предлагаемый криофилактик для замораживания ядерных клеток крови при замораживании до температуры -80°С и последующем отогревании обеспечивает сохранность 94,2-97,1% функционально активных клеток, при замораживании до температуры -196°С и последующем отогревании обеспечивает сохранность 92,7-97,8% функционально активных клеток. 4 пр.

Изобретение относится к медицине и трансфузиологии и касается создания средства - протекторного раствора для криоконсервирования ядерных клеток крови - при низких и ультранизких температурах.

Комбинированный криопротекторный раствор для замораживания ядерных клеток крови имеет следующий состав: диметилацетамид (х.ч.) - 3,5 мл; гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола») - 46,3 мл; фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2H₂O, моль) в количестве, необходимом для обеспечения pH раствора 6,5-7,0.

Экспериментальные исследования выполнены в лаборатории консервирования крови и тканей Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства».

В качестве прототипа нами выбран хладоограждающий раствор «Лейкокриодмац» для замораживания и хранения лейкоцитов при -196°C для клинических целей // Трошина В.М. и соавт. «Применение диметилацетамида в качестве криопротектора при замораживании гранулоцитов» (ж. Проблемы гематологии и переливания крови. М.: Медицина. - 1977. - №5. - с.50-54), включающий эндоцеллюлярный криопротектор диметилацетамид, глюкозу, динатриевую соль ЭДТА и воду для инъекций.

Существенным недостатком прототипа является то, что предложенный его авторами ограждающий раствор не содержит гидроксиэтилкрахмала (ГЭК), который обладает рядом положительных эффектов: экстрацеллюлярный, иммунологически инертен и нетоксичен.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание криоконсерванта для замораживания ядерных клеток крови при -80°C и -196°C, обеспечивающего высокую морфологическую сохранность размороженных клеток.

Технический результат достигается тем, что криоконсервант дополнительно содержит криопротектор гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола»), 1) обладающий экстрацеллюлярным криопротекторным действием, что гармонично дополняет эндоцеллюлярное хладоограждающее влияние диметилацетамида на клетки и делает комбинированный криоконсервант более полноценным, дающим при охлаждении до -80°C и -196°C выраженный криобиологический (технический) эффект, и 2) включение нетоксичного «Инфукола» и диметилацетнамида в нетоксичной для клеток концентрации в криоконсервант не требует отмывания перед применением и снижает риск посттрансфузионных осложнений. Криоконсервант имеет рН среды 6,5-7,0, благоприятный для клеток крови. Его ингредиенты тропны ядерным клеткам крови и производятся в Российской Федерации.

Пример приготовления криоконсерванта для замораживания 50 мл суспензии ядерных клеток крови до -80°C

В стерильном боксе при температуре +22°C в мерную колбу на 50 мл наливают 3,5 мл диметилацетамида (х.ч.), к нему, используя градуированные пипетки, добавляют 46,3 мл «Инфукола» при постоянном помешивании. В смесь по каплям добавляют фосфатный буфер (NaH₂РO₄·2H₂O, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0. Флакон с протекторным раствором герметично укупоривают, маркируют, стерилизуют автоклавированием (1,2 атм - 30 минут).

Приготовленный таким образом протекторный раствор в количестве 5 мл отправляют на санитарно-бактериологическое исследование. При отсутствии бактериальной контаминации протекторный раствор может быть использован для консервирования ядерных клеток до -80°C. Готовый раствор хранят в холодильнике при +2÷+4°C.

Пример использования криоконсерванта для замораживания суспензии ядерных клеток крови до -80°C

Консервирующий раствор, включающий диметилацетамид (х.ч.) в концентрации 7%, «Инфукол» в концентрации 92,6%, фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2H₂O, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0, при постоянном помешивании смешивают в объемном отношении 1:1 с концентратом ядерных клеток крови в полимерном контейнере «Компопласт», последний помещают в металлический пенал-холдер. Суспензию клеток выдерживают 20 мин при комнатной температуре и помещают на 24 часа в электрический морозильник, охлажденный до -80°C, дальнейшее хранение осуществляют при указанной температуре.

Размораживание концентрата клеток осуществляют в 20-литровой водяной ванне, нагретой до +38°C в течение 45-60 секунд при интенсивном покачивании контейнера. Температура размороженного концентрата ядерных клеток в контейнере должна быть +2÷+4°C. Далее исследуют морфологическую сохранность размороженных ядерных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - N 9. - с. 58-59). Результаты выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями форменных элементов до замораживания.

Пример приготовления криоконсерванта для замораживания 50 мл суспензии ядерных клеток крови до -196°C

В стерильном боксе (ламинарном шкафу) при температуре +22°C в мерную колбу на 50 мл наливают 3,5 мл диметилацетамида (х.ч.), к нему, используя градуированные пипетки, добавляют 46,3 мл «Инфукола» при постоянном помешивании. В смесь по каплям добавляют фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2Н₂О, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0. Флакон с протекторным раствором герметично укупоривают, маркируют, стерилизуют автоклавированием (1,2 атм - 30 минут). Приготовленный таким образом протекторный раствор исследуют на бактериальное загрязнение. При отсутствии бактериальной контаминации протекторный раствор может быть использован для консервирования ядерных клеток до -196°C.

Пример использования криоконсерванта для замораживания суспензии ядерных клеток крови до -196°C

Консервирующий раствор, включающий диметилацетамид (х.ч.) в концентрации 7%, «Инфукол» в концентрации 92,6%, фосфатный буфер (NaH₂РO₄·2Н₂О, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0, при постоянном помешивании смешивают в объемном отношении 1:1 с концентратом ядерных клеток крови в полимерном контейнере «Компопласт», последний помещают в металлический пенал-холдер. Суспензию клеток выдерживают 20 мин при комнатной температуре и помещают в программный замораживатель клеточных суспензий. На первом этапе замораживание биоматериала производят со скоростью 1°C/мин до -80°C, после чего холдер с клетками переносят в биохранилище с жидким азотом (температура -196°C). Размораживание концентрата клеток осуществляют в 20-литровой водяной ванне, нагретой до +38°C в течение 90 секунд при интенсивном покачивании контейнера. Температура размороженного концентрата клеток в контейнере должна быть +2÷+4°С. Далее исследуют морфологическую сохранность размороженных ядерных клеток, их жизнеспособность по витальному красителю (с 1% раствором эозина) и фагоцитарную активность нейтрофилов в пробе с латексом (по Потаповой С.Г. и соавт., ж. Проблемы гематологии и переливания крови. - 1977. - N 9. - с. 58-59). Результаты выражают в процентах в сравнении с аналогичными показателями форменных элементов до замораживания.

Экспериментальные исследования выполнены на базе лаборатории консервирования крови и тканей ФБГУН Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России.

Готовый раствор криоконсерванта прозрачен, без цвета, без запаха, его рН составляет 6,5-7,0. Готовый криофилактик хорошо смешивается с концентратом ядерных клеток крови, не вызывает образования конгломератов клеток и обеспечивает их функциональную и морфологическую сохранность при экспозиции. Криоконсервант проявляет выраженные хладоограждающие свойства при замораживании ядерных клеток крови как до -80°C, так и до -196°C.

Разработанный криофилактик для замораживания ядерных клеток крови при температуре -80°C обеспечивал сохранность 94,2-97,1% функционально активных клеток. Тот же криоконсервант при температуре -196°C обеспечивал сохранность 92,7-97,8% функционально активных клеток.

Таким образом, новый криоконсервант может быть использован в учреждениях медицинского и криобиологического профиля, где имеются условия для замораживания и хранения клеток крови в условиях низких и ультранизких температур.

Криоконсервант для замораживания ядерных клеток крови, содержащий диметилацетамид, отличающийся тем, что он дополнительно содержит гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола») и фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2Н₂О, моль) при следующем соотношении исходных компонентов:

диметилацетамид (х.ч.)	3,5 мл
гидроксиэтилкрахмал (в составе «Инфукола»)	46,3 мл

фосфатный буфер (NaH₂PO₄·2H₂O, моль) в количестве, необходимом для обеспечения рН раствора 6,5-7,0.

Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано в работе анатомических музеев, коллекций, кафедр анатомии медицинских вузов. Способ консервации костных анатомических препаратов предусматривает нанесение на предварительно очищенную от мягких тканей, обезжиренную, высушенную кость композиции-консерванта, приготовленной из полимерного клея «Dragon» и ацетона, взятых в соотношении 1:(1-3).

Гомографт сердечно-сосудистой системы (варианты), способ получения гомографта, среда для воздействия на ткани гомографта (варианты) // 2525197

Группа изобретений относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и касается создания гомографтов сердечнососудистой системы (ГССС), применяемых в качестве сосудистых биологических протезов при операциях на сердечно-сосудистой системе.

Способ модификации биоткани для протезирования // 2523879

Изобретение относится к медицине. Биоткань перед ферментативной обработкой помещают в гипертонические растворы хлорида натрия и подвергают воздействию ультразвука в течение 20-300 минут.

Способ консервирования варочной пантовой воды // 2521666

Изобретение относится к пантовому оленеводству, в частности к консервированию варочной пантовой воды непосредственно на мараловодческой ферме в период панторезной компании.

Способ восстановления фертильности у пациенток с онкологическими заболеваниями // 2519637

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано при необходимости сохранения и восстановления репродуктивной функции у женщин с онкологическими заболеваниями.

Упаковка для вмещения и хранения жидкого вещества, предназначенного для замораживания // 2511337

Изобретение относится к упаковке для вмещения и хранения жидкого вещества, предназначенного для замораживания. Упаковка (1) для вмещения и хранения жидкого вещества (S), предназначенного для замораживания, содержит две герметизирующие стенки (4, 7), соединенные друг с другом для образования камеры (2) вмещения жидкого вещества (S), одно посадочное место (3), изолированное от герметизирующей камеры (2), для вмещения устройства (T) считывания температуры жидкого вещества (S).

Ростстимулирующее средство для предпосевной обработки семян // 2507744

Изобретение относится к химии азотсодержащих гетероциклических соединений, а именно к производным несимметричных триазинонов, которые могут быть использованы в сельском хозяйстве.

Устройство для консервирования замораживанием клеточных взвесей под давлением в атмосфере инертного газа - портативный криобароконтейнер // 2506748

Устройство для консервирования замораживанием клеточных взвесей под давлением в атмосфере инертного газа - портативный криобароконтейнер - выполнен из нержавеющей стали марки 12Х18Н10Е и состоит из передней и задней панелей.

Единица дозирования для замедленного высвобождения средства против насекомых, дозатор и устройство для этого и способ ее изготовления // 2501219

Единица дозирования в форме прессованной таблетки для замедленного высвобождения средства против насекомых содержит испаряющееся средство против насекомых и инертную твердую основу.

Способ приготовления препарата костной ткани и набор для его осуществления // 2500104

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и биологии. Проводят фиксацию образца, декальцинацию, промывание водой, дегидратацию в спиртовых растворах и заливку в парафин.

Способ изготовления рентгеноконтрастной массы для вазорентгенографии при посмертных исследованиях животных // 2530159

Изобретение относится к ветеринарии и анатомии. Способ изготовления рентгеноконтрастной массы для вазорентгенографии при посмертных исследованиях животных включает приготовление массы, состоящей из 45% свинцовых белил, соединенных с 45% живичного скипидара, и 10% порошка медицинского гипса, вводимого тонкой струей в данный состав. При этом порошок медицинского гипса предварительно просеивают через сито, а полученную массу интенсивно перемешивают в течение 20-30 мин до получения взвеси гомогенной консистенции с вязкостью, аналогичной плазме крови. Предлагаемое изобретение обеспечивает изготовление инъекционной массы, обладающей высокой рентгеноконтрастностью, мелкой дисперсностью, способностью оседания на стенках сосудистого русла, доступной и не дорогостоящей. 2 ил.

Способ полимерного бальзамирования биоматериалов // 2531605

Изобретение относится к медицине. Анатомический препарат после фиксации тканей и приготовления путем препаровки погружают в промежуточный растворитель - ацетон на 4 недели, охлаждают до -20°C, помещают в герметичную металлическую камеру, заполненную композицией, содержащей силоксановый полимер медицинского назначения, сшивающий агент и катализатор. Композиция разведена ацетоном в концентрации 50-75%. Создают в камере избыточное давление в 500 мм рт.ст., охлаждают препарат до температуры -8°C. При этом композиция заполняет межклеточные пространства препарата на протяжении 2-3 недель, после чего препарат вулканизируют в термостате при температуре 38°C в течение 4 часов. Изобретение позволяет повысить качество анатомических препаратов. 1 ил., 1 пр.

Состав для консервации аутодермотрансплантата // 2533000

Изобретение относится к медицине. Состав содержит рекомбинантный интерферон, выбранный из группы: рекомбинантный интерферон-альфа, рекомбинантный интерферон-бета, рекомбинантный интерферон-гамма, антибиотики, антисептики, гипромеллозу и воду при следующем соотношении компонентов в г на 1 мл состава: рекомбинантный интерферон, ME 100-1000000 антибиотики, г 0,00001-0,5 антисептики, г 0,00001-0,5 гипромеллоза, г 0,00001-0,5 вода остальное до 1 мл Указанный состав может содержать антибиотики широкого спектра действия, выбранные из группы: амоксициллин, ампициллин, оксациллин, метициллин, цефалексин в количестве 0,00001-0,5 г на 1 мл состава. Состав содержит антисептики, выбранные из группы: лизоцим, биклотимол, фузафунгин, амбазон, бензилдиметил-миристоиламино-пропиламмоний, ко-тримоксазол, амилметакризол, дихлорбензиловый спирт, цитилпиридиния хлорид, бензоксония хлорид в количестве 0,00001-0,5 г на 1 мл состава. Изобретение позволяет повысить терапевтическую эффективность состава. 2 з.п. ф-лы, 4 пр.

Способ презервирования миокарда при трансплантации // 2535036

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, и может быть использовано для презервирования миокарда при трансплантации. Для этого проводят перфузию и хранение изолированного сердца с использованием раствора Кустодиол при температуре 2-4°C. При этом перед эксплантацией сердца донору в течение 10-12 часов проводят инфузию левосимендана в дозе 10 мкг/кг массы тела, а для перфузии и хранения изолированного органа в раствор Кустодиола добавляют левосимендан из расчета 10 мкг препарата на 1 литр раствора. После выполнения хирургического этапа пересадки сердца, во время снятия зажима на аорте реципиента и восстановлении кровотока, в контур продолжающегося параллельного искусственного кровообращения вводят 12,5 мг левосимендана и осуществляют его инфузию в течение 1 часа. Изобретение предназначено для предотвращения ишемических и реперфузионных повреждений миокарда, обеспечения адекватной функции донорского сердца в организме реципиента. 2 пр.

Серосодержащие производные резорцина, способ их получения и косметическое применение // 2539589

Настоящее изобретение относится к новым соединениям общей формулы (I), где Х=S, SO или SO2, и один из радикалов R1 и R2 представляет собой атом водорода, а другой имеет значения, перечисленные в формуле изобретения, которые используют для депигментации кожи, и/или волос на голове, и/или волосяного покрова и для дезинфекции кожи, к косметическому применению предложенных соединений, а также соединений формулы (I), в которой R1 и R2 могут также одновременно представлять собой атом водорода. Кроме того, изобретение относится к косметической и фармацевтической композициям на основе предложенных соединений и к способам получения данных соединений. 6 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл., 30 пр.

Способы, композиции и наборы для лиофилизации // 2540480

Изобретение относится к способу лиофилизации композиции, содержащей очищенный антитромбин III (AT III) и кристаллизующееся вещество, выбранное из аланина, маннита, глицина или NaCl. Заявленный способ включает замораживание композиции при температуре от -52°C до -60°C в течение 6-15 часов, отжиг композиции при -30°C в течение 1 часа, повторное замораживание композиции при температуре от -52°C до -60°C в течение 2-15 часов при поддержании температуры продукта между -48°C и -52,7°C в течение 4-10 перед лиофилизацией и высушивание композиции с получением лиофилизованного кека. Также изобретение относится к фармацевтическому набору, который содержит указанный лиофилизированный кек и жидкий реагент. Изобретение обеспечивает получение лиофилизированной композиции, содержащей AT III, который сохраняет свою активность и стабильность. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 24 ил., 5 табл., 2 пр.

Раствор для бальзамирования трупов, используемых для обучения врачей-трансплантологов забору донорских органов для трансплантации // 2540498

Изобретение относится к области медицины, в частности к области нормальной анатомии, трансплантологии, и может быть использовано с целью подготовки трупов для обучения хирургов-трансплантологов приемам забора и пересадки внутренних органов. Предлагается для бальзамирования трупов с целью отработки у врачей навыков забора донорских органов и последующей их трансплантации осуществлять способ, при котором для насыщения тканей и органов бальзамирующими растворами, размещают труп в воду при t 40°С на 120-160 мин, вставляют канюли в бедренную артерию и в бедренную вену и промывают сосудистое русло теплым физиологическим раствором с добавлением 1-2% раствора цитрата натрия; герметизируют бедренную вену и вводят в артерию раствор, содержащий формалин, глицерин. Способ обеспечивает сохранение структуры внутренних органов за счет повышения консервирующих качеств раствора и обеспечения наполнения мелких сосудов.

Способ снижения низкотемпературного скачка растворов криопротекторов // 2540598

Изобретение относится к области криобиологии. Способ снижения влияния низкотемпературного скачка на раствор криопротектора обеспечивается за счет дистанционной обработки раствора криопротектора с клетками живых организмов ультразвуковым излучением частотой 0,50-10 перед его замораживанием. Предлагаемый способ обеспечивает снижение низкотемпературного скачка растворов криопротекторов, что позволяет исключить эффект переохлаждения, обеспечить непрерывный и плавный характер замерзания и повысить целостность дефростированных клеток после криоконсервации. 1 ил.

Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном // 2543534

Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к технологии консервирования ядерных клеток крови человека с применением инертного газа. Способ включает насыщение клеток в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в металлический криобароконтейнер, инертным газом ксеноном под давлением 0,6 атм в течение 20 мин в условиях комнатной температуры 21±2°C с последующим удалением избытка газа и извлечением из металлического контейнера, замораживанием биообъекта до -28°C в этиловом спирте и перемещением в электроморозильник на -80°C. Размораживание биообъекта осуществляется в водяной ванне 39±1,5°C в течение 1,5 мин. Осуществление изобретения обеспечивает надежное криоконсервирование лейкоцитов в среде инертного газа и высокий уровень количественной и морфологической сохранности лейкоцитных концентратов крови человека. 1 табл., 3 пр.

Способ бальзамирования палеонтологических объектов с мягкими тканями // 2547136

Изобретение относится к области консервации биологических объектов, в частности палеонтологических объектов с мягкими тканями, и может быть использован в палеонтологии и музейном деле. Палеонтологические объекты с мягкими тканями в течение 1-4 месяцев обрабатывают бальзамирующим раствором, включающим формалин 40% - 0,516%, фенол кристаллический - 0,262%, глицерин - 79,077%, спирт 96% - 18,576%, натрий хлорид - 1,569%. Соотношение бальзамирующего раствора к массе палеонтологического объекта должно составлять не менее 3:1. Бальзамирование производят при комнатной температуре. Способ бальзамирования палеонтологических объектов с мягкими тканями обеспечивает долговременную сохранность мягких тканей, минимизацию потерь мягких тканей, имеющих разные стадии гниения, приостановление гнилостных процессов, распрямление кожи, сохранение ее естественного окраса и естественных морфометрических параметров, что позволяет в дальнейшем использовать палеонтологический объект в научных целях, а также для экспонирования в сухом виде. 2 з.п. ф-лы.