Рнк-аптамер, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела



Рнк-аптамер, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела
Рнк-аптамер, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела
Рнк-аптамер, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела

 

C12N15/115 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2549704:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и касается РНК-аптамера. Предложенный РНК-аптамер представляет собой 57-звенный олигонуклеотид смешанного типа, имеющий нуклеотидную последовательность GGGAGGACGAUGCGGUGUUUUCUGAGUACAUCUCUGCCCCACCCUU GUUUACCCCCA, где A,G - рибонуклеотиды, U, С - 2'-дезокси-2'-фторрибонуклеотиды, обладает способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела. Охарактеризованное изобретение специфично и высокоафинно связывается с аутоантителами, характерными для рассеянного склероза и может быть использовано для диагностики рассеянного склероза. 3 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к РНК-аптамерам, способным специфично и с высоким сродством связываться с аутоантителами, характерными для рассеянного склероза.

Аптамеры - синтетические нуклеиновые кислоты, способные специфично узнавать молекулы-мишени за счет образования уникальной третичной структуры. Для их получения используют метод селекции in vitro из пулов олигонуклеотидов со случайными последовательностями. Мишенями аптамеров могут быть как низкомолекулярные соединения, так и белки или целые клетки.

Аптамеры, подобно пептидам, созданным с использованием фагового дисплея, или моноклональным антителам, способны модулировать активность выбранных мишеней за счет специфического связывания. Так, например, связывание аптамера с мишенью может блокировать ее функции. На данный момент получены аптамеры для большого количества разнообразных белков, включая факторы роста, факторы транскрипции, ферменты, иммуноглобулины и рецепторы [Zhu G., Ye M., Donovan M.J., Song E., Zhao Z., Tan W. // Chem. Commun. 2012. V.48. P.10472-10480]. Как правило, размер аптамеров лежит в диапазоне 25-90 нуклеотидов (10-30 кДа), они связывают свои мишени с наномолярной или субнаномолярной аффинностью и способны различать близкородственные мишени (например, белки из одного семейства генов). Связывание аптамеров с мишенями реализуется за счет тех же типов взаимодействий, которые определяют аффинность и специфичность связывания антитело-антиген (водородные связи, электростатические и ван-дер-ваальсовы взаимодействия) [Pendergrast P.S, Marsh H.N., Grate D., Healy J.M., Stanton M. // J. Biomol. Tech. 2005. V.16. P.224-234].

Аптамеры обладают рядом свойств, требуемых для применения в качестве терапевтических и диагностических средств, включая высокую специфичность и аффинность связывания, биологическую активность и превосходные фармакокинетические свойства. Кроме того, они обеспечивают конкретные конкурентоспособные преимущества по сравнению с антителами и другими биологически активными веществами белковой природы.

Рассеянный склероз (PC) - хроническое прогрессирующее аутоиммунное заболевание центральной нервной системы, которое характеризуется образованием хаотически рассеянных очагов демиелинизации, т.е. утраты миелина - белково-липидной мембраны, покрывающей нервное волокно [Т.Е. Шмидт, Н.Н. Яхно Рассеянный склероз. -M.: Медицина. 2003]. Своевременная диагностика и ранняя терапия иммуномодулирующими препаратами позволяют изменить течение PC и существенно замедлить его развитие. В то же время диагностика PC, особенно на начальных стадиях заболевания, представляет собой сложную комплексную задачу и требует анализа совокупности клинических и лабораторных данных в сочетании с результатами МРТ.

В настоящее время в качестве лабораторного теста для ранней диагностики PC используют анализ спинномозговой жидкости на наличие олигоклональных IgG-антител, однако положительный результат данного теста не является исчерпывающим доказательством и служит лишь для подтверждения диагноза [Awad A., Hemmer В., Hartung H.-P., Kieseier В., Bennett J.L., Stuve О. // J. Neuroimmunol. 2010. V.219. P.1-7], a специфичного метода лабораторной диагностики PC пока не существует.

Перспективным способом лабораторной диагностики является количественное определение белков-маркеров, характерных для тех или иных заболеваний. В настоящее время интенсивно развиваются подходы к детекции белков, основанные на использовании биосенсоров, в которых в качестве узнающей белок части выступает аптамер. По сродству к мишеням аптамеры сравнимы с моноклональными антителами и обладают при этом рядом дополнительных преимуществ [Ruigrok V., Levisson M., Eppink M.H.M., Smidt H., van der Oost J. Biochem. J. // 2011. V.436. P.1-13], среди которых отдельно следует выделить возможность отбора аптамеров практически к любой мишени, а также возможность химического синтеза аптамеров и введения в их состав различных модификаций [Mayer G. // Angew. Chem. Int. Ed. 2009. V.48. P.2672-2689].

На данный момент существует целый ряд ДНК- и РНК-аптамеров, способных высокоаффинно и специфично узнавать белки-маркеры различных заболеваний и биосенсоров на их основе [Hong P., Li W., Li J. // Sensors. 2012. V.12. P.1181-1193]. В частности, получены аптамеры, способные узнавать белки - медиаторы воспалительного ответа, характерные для ряда аутоиммунных заболеваний, в том числе и рассеянного склероза.

Например, известны РНК-аптамеры, способные специфично связываться с интерлейкином-17 [Nakamura Y., Ishigiro A., Miyakawa S. // Genes Cells. 2012. V.17. P.344-364], интерлейкином-12 и интерлейкином-23 [Aptamersto the human il-12 cytokine family and their use as autoimmune disease therapeutics. Cload S.T., Diener J.L, Ferguson A., Hamaguchi N., Keene S.C., Lagasse H. A.D., Sawhney P., Thompson K. WO 2005086835 A2, оп. 22.09.2005].

Наиболее ближайшим к заявляемому аптамеру - прототипом, является РНК-аптамер к мидкину (MKapt), представляющий собой 49-звенный олигорибонуклеотид, содержащий 2′-O-метилрибонуклеотиды, 2′-дезокси-2′-фторрибонуклеотиды и дезоксирибонуклеотиды в определенных положениях олигонуклеотидной цепи, остаток холестерина на 5′-конце и остаток тимидина, присоединенный 3′-3′-фосфодиэфирной связью. [Wang J. et al. Inhibition of midkine alleviates experimental autoimmune encephalomyelitis through the expansion of regulatory Т cell population. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008. V.105. P.3915-3920]. Мидкин - фактор роста с широким спектром биологической активности, который играет важную роль в процессе развития воспаления, в частности, для рассеянного склероза характерен повышенный уровень этого белка. Данный аптамер обладает высоким сродством к своей мишени (Kd=0.9 нМ) и способен замедлять развитие экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей (заболевание, аналогичное рассеянному склерозу).

С точки зрения потенциального диагностического применения, недостатком упомянутых выше аналогов и прототипа изобретения - аптамеров, направленных на белки-медиаторы воспалительного ответа, является отсутствие специфичности по отношению к конкретным аутоиммунным заболеваниям. При использовании таких аптамеров для детекции белка-мишени в биологических образцах можно получить лишь информацию о наличии или отсутствии аутоиммунных заболеваний в целом, однако определить конкретный вид заболевания с помощью таких аптамеров невозможно.

Одним из характерных признаков рассеянного склероза является появление в организме аутоантител-протеаз, способных гидролизовать основной белок миелина (ОБМ) [Ponomarenko N.A., Durova O.M., Vbrobiev I.I., Aleksandrova E.S., Telegin G.B., Chamborant O.G., Sidorik L.L., Suchkov S.V., Alekberova Z.S., Gnuchev N.V., Gabibov A.G. // J. Immunol. Meth. 2002. V.269. P.197-211; Polosukhina D.I., Kanyshkova T.G., Doronin B.M., Tyshkevich O.B., Buneva V.N., Boiko A.N., Gusev E.I., Favorova 0.0., Nevinsky G.A. // J. Cell. Mol. Med. 2004. V.8. P.359-368].

Задачей настоящего изобретения является создание устойчивого в биологических средах РНК-аптамера, способного специфично и с высоким сродством связываться с анти-ОБМ аутоантителами, полученными из крови больных рассеянным склерозом.

Технический результат: получение нового РНК-аптамера, который обладает способностью специфично и высокоафинно связываться с аутоантителами, характерными для рассеянного склероза.

Поставленная задача достигается предлагаемым РНК-аптамером (Apt-2-9с), представляющим собой 57-звенный олигонуклеотид смешанного типа, содержащий пуриновые рибонуклеотиды и 2′-дезокси-2′-фторпиримидиновые рибонуклеотиды, имеющий следующую нуклеотидную последовательность: GGGAGGACGAUGCGGUGUUUUCUGAGUACAUCUCUGCCCCACCCUU GUUUACCCCCA, где A, G - рибонуклеотиды; U, С - 2′-дезокси-2′-фторрибонуклеотиды.

Нуклеотидная последовательность аптамера Apt2-9c установлена с помощью метода селекции in vitro с использованием в качестве мишеней поликлональных анти-ОБМ антител, выделенных из крови больных рассеянным склерозом. После установления нуклеотидных последовательностей индивидуальных аптамеров проводили скрининг аффинности и специфичности их связывания с аутоантителами-мишенями. В результате минимизации нуклеотидной последовательности был получен 57-звенный аптамер Apt2-9c со следующими характеристиками:

- обладает высоким сродством к протеолитическим анти-ОБМ аутоантителам из крови больных рассеянным склерозом;

- обладает значительно более низким сродством к антителам из крови здоровых доноров.

Синтез РНК-аптамера по изобретению осуществляют на автоматическом ДНК/РНК-синтезаторе ASM-800 с использованием стандартного твердофазного фосфитамидного метода.

Определяющими отличиями предлагаемого РНК-аптамера от прототипа являются:

- заявляемый РНК-аптамер представляет собой 57-звенный олигонуклеотид смешанного типа, содержащий пуриновые рибонуклеотиды и 2′-дезокси-2′-фторпиримидиновые нуклеотиды, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, что позволяет повысить его стабильность к ферментативному и химическому разрушению в биологических образцах;

- РНК-аптамер специфично и с высоким сродством связывается с анти-ОБМ аутоантителами, являющимися биомаркерами рассеянного склероза, что позволит использовать его для диагностики данного заболевания.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение РНК-аптамера Apt2-9c

Синтез Apt2-9c проводили на автоматическом ДНК/РНК синтезаторе ASM-800 (Биоссет, Россия) по стандартным протоколам [Bellon L. Oligoribonucleotides with 2′-O-(tert-butyldimethylsilyl) groups. Current protocols in nucleic acids chemistry. 2001. S.1. P.3.6.1-3.6.13], оптимизированным для данного прибора, с использованием β-цианэтил фосфитамидов 5′,2′,N-защищенных пуриновых рибонуклеозидов и 5′,N-защищенных пиримидиновых 2′-дезокси-2′-F-рибонуклеозидов. В качестве полимерного носителя использовали стеклянные частицы CPG (controlled pore glass) с диаметром пор 500 А с присоединенным через 3′-гидроксильную группу 5′,2′,N-защищенным рибонуклеозидом.

Каждый цикл синтеза состоял из следующих стадий:

1) детритилирование - удаление диметокситритильной защитной группы с 5′-гидроксила растущей олигонуклеотидной цепи путем обработки 3%-ным раствором дихлоруксусной кислоты в дихлорметане;

2) присоединение очередного мономерного звена, которое представляет собой β-цианэтил-N,N-бис-диизопропиламидофосфит одного из защищенных нуклеозидов. В качестве активирующего агента при конденсации использовали 5-этилтио-1Н-тетразол;

3) кэпирование - блокирование непрореагировавших 5′-гидроксилов с использованием уксусного ангидрида и N-метилимидазола, что позволяет избежать пропусков нуклеозидов в последовательности требуемого олигонуклеотида;

4) окисление раствором йода в пиридине, в ходе которого происходит превращение фосфиттриэфирных межнуклеозидных связей в фосфотриэфирные.

После проведения необходимого числа синтетических циклов и удаления 5′-концевой диметокситритильной группы получали защищенный полимерсвязанный 2′-F-пиримидинсодержащий РНК-аптамер. Для отделения олигонуклеотида от полимерного носителя, деблокирования гетероциклических оснований и межнуклеозидных фосфатов к полимерсвязанному аптамеру добавляли 300 мкл 40%-ного водного метиламина, выдерживали в течение 2 ч при 25°С и постоянном перемешивании, затем при -20°С в течение 15-20 мин и отделяли от полимера центрифугированием. Полимер промывали 3×100 мкл смесиэтанол:ацетонитрил:вода (1:1:1). Растворы объединяли и упаривали до сухого остатка в вакуумном испарителе Speed-Vac Concentrator SVC-100Н. Для удаления трет-бутилдиметилсилильных защитных групп с 2′-гидроксилов пуриновых нуклеозидов к сухому остатку олигонуклеотида добавляли 200 мкл смеси N-метил-2-пирролидинон:триэтиламин:ТЕА·ЗНР (1.5:0.75:1, v/v/v) и выдерживали при 65°С в течение 1.5 ч. После охлаждения раствора до комнатной температуры добавляли 300 мкл этокситриметилсилана и перемешивали в течение 10 мин. К полученной смеси добавляли 1 мл серного эфира и центрифугировали, раствор декантировали, осадок промывали серным эфиром, высушивали на воздухе. Полностью деблокированный аптамер очищали препаративным электрофорезом в денатурирующем 12%-ном акриламидном геле в условиях: акриламид:N,N′-метиленбисакриламид (30:1), 8 М мочевина, 50 мМ Трис-борат (рН 8.3), 0.1 мМ Na2EDTA, при напряжении 50 В/см. После проведения электрофореза гель помещали на пластину для ТСХ и визуализировали аптамер в УФ-свете, затем вырезали соответствующие участки геля и осаждали в виде натриевой соли. Аптамер элюировали водным раствором 0.3 М перхлората натрия, элюат обессоливали с помощью картриджа Waters SepPac С18, упаривали до объема 100 мкл и осаждали аптамер добавлением 10-кратного избытка 2%-ного NaClO4 в ацетоне. Осадок отделяли центрифугированием в течение 10 мин при 4°С и 13200 об/мин. Супернатант отбирали, осадок олигонуклеотида промывали ацетоном, высушивали при 37°С.

Полученный Apt2-9c, представляющий собой 57-звенный олигонуклеотид смешанного типа, содержащий пуриновые рибонуклеотиды и 2′-дезокси-2′-фторпиримидиновые нуклеотиды, имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 (фиг.1).

РНК-аптамер Apt2-9c анализировали методами аналитического электрофореза в 12%-ном денатурирующем ПААГ с последующим окрашиванием геля раствором красителя "Stains-All" и MALDI-TOF масс-спектрометрии.

Пример 2. Использование РНК-аптамера Apt2-9c для детекции характерных для рассеянного склероза (PC) аутоантител.

Исследовано связывание Apt2-9c, несущего радиоактивную [32Р]-метку на 3′-конце, со смесью поликлональных анти-ОБМ аутоантител (смесь IgG, IgA и IgM-антител с преобладанием IgG) из крови 12 больных PC. Реакцию проводили при 25°С в течение 16 часов в буферном растворе (50 мМ Трис-HCl, рН 7.5, 100 мМ NaCl, 0.1% Tween 20) в присутствии следовых количеств радиоактивно меченого аптамера. Концентрация антител варьировала от 0.5 до 100 нМ. За образованием комплексов следили методом электрофореза в 6%-ном полиакриламидном геле, который позволяет отделить свободные аптамеры от комплексов аптамер-антитело, в условиях: акриламид:N,N′-метиленбисакриламид (50:1), 25 мМ Трис-борат (рН 8.3), напряжение 15 В/см. Аналогичным способом было исследовано связывание аптамера со смесью суммарных IgG-антител, выделенных из крови 12 здоровых доноров. После окончания электрофореза гель высушивали и помещали в кассету с фоточувствительным экраном. Экран сканировали при помощи фосфоримиджера Bio-Rad. Для получения количественных характеристик радиоавтографы переводили в цифровую форму в программном пакете Quantity One. С использованием программного пакета GraphPad Prism 5.0.4.533 для каждой серии опытов были постороены изотермы связывания, что позволило оценить сродство аптамеров к антителам и рассчитать константы связывания.

На фиг.2 приведен радиоавтограф 6%-ного неденатурирующего полиакриламидного геля после разделения реакционных смесей. Дорожки 1-5 - инкубация аптамера с патогенными аутоантителами из крови больных рассеянным склерозом в указанной концентрации; дорожка 6 (контроль) - аптамер после инкубации в условиях реакции в отсутствие антител; дорожки 7-13 - инкубация с суммарными IgG-антителами здоровых доноров в указанной концентрации.

На фиг.3 приведены изотермы связывания Apt2-9c с анти-ОБМ аутоантителами из крови больных PC и антителами из крови здоровых доноров.

Из фиг.2, 3 видно, что Apt2-9c эффективно связывается с анти-ОБМ аутоантителами от больных PC, в то время как с антителами от здоровых доноров образуется лишь незначительное количество комплексов. Константы диссоциации комплексов аптамер-антитело для патогенных антител (Kd=1.2±0.1 нМ) и антител здоровых доноров (Kd=2300±460 нМ) различаются почти в 2000 раз. Полученные результаты свидетельствуют о том, что Apt2-9c обладает высоким сродством к аутоантителам, характерными для рассеянного склероза, и селективно узнавать данные антитела.

Таким образом, предлагаемый РНК-аптамер Apt2-9c обладает высоким сродством и специфичностью связывания с протеолитическими анти-ОБМ аутоантителами, являющимися характерными для рассеянного склероза аутоантителами, и может быть использован для диагностики рассеянного склероза.

<110> Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН)
<120> РНК-аптамер, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела
<160> Номер SEQ ID NO
<210> SEQ ID NO: 1
<211> 57
<212> Олигонуклеотид смешанного типа, содержащий пуриновые рибонуклеотиды и 2'-дезокси,2'-фторпиримидиновые нуклеотиды
<213> искусственная последовательность
<400> 1
GGGAGGACGAUGCGGUGUUUUCUGAGUACAUCUCUGCCCCACCCUUGUUU 50
ACCCCCA 57

Фиг. 1.

РНК-аптамер, представляющий собой 57-звенный олигонуклеотид смешанного типа, содержащий пуриновые рибонуклеотиды и 2'-дезокси- 2'-фторпиримидиновые рибонуклеотиды, имеющий следующую нуклеотидную последовательность: GGGAGGACGAUGCGGUGUUUUCUGAGUACAUCUCUGCCCCACCCUU GUUUACCCCCA, где A,G -рибонуклеотиды, U, С - 2'-дезокси-2'-фторрибонуклеотиды, обладающий способностью узнавать характерные для рассеянного склероза аутоантитела.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено устройство для забора нуклеиновой кислоты, применение устройства для забора нуклеиновой кислоты, набор для амплификации нуклеиновой кислоты, а также способ амплификации нуклеиновой кислоты.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу выявления соматических мутаций в гене PI3K, ответственных за чувствительность опухоли к таргетной терапии, с помощью технологии ДНК-биочипов.

Изобретение относится к области молекулярной генетики, геносистематики и фармакогнозии и предназначено для выявления видовой принадлежности вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.).

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу выделения микроРНК из биологических жидкостей, содержащих экзосомы. Способ включает последовательное центрифугирование, ультрафильтрацию и ультрацентрифугирование культуральной конденсированной среды.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242).

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к предварительной оценке эффективности трансплантации аутологичного клеточного материала для стимуляции роста кровеносных сосудов, и может быть использовано в медицине.
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ выявления генома вируса инфекционной анемии лошадей предусматривает постановку полимеразной цепной реакции, амплификацию ДНК вируса, оценку проведения реакции.

Изобретение относится к области медицины, фтизиатрии и медицинской микробиологии и касается способа генотипирования штаммов Mycobacterium tuberculosis. Охарактеризованный способ основан на однонуклеотидном полиморфизме генов систем токсин-антитоксин II типа суперсемейств VapBC, HigAB и MazEF и характеризуется тем, что для идентификации проводят амплификацию с геномной ДНК с использованием набора олигонуклеотидных праймеров для 10 генов систем токсин-анатоксин.

Группа изобретений относится к многоканальным устройствам, модифицированным нанослоями анилинсодержащих полимеров. Предложен многоканальный наконечник для выделения нуклеиновых кислот, белков, пептидов и способ изготовления многоканального элемента, входящего в состав многоканального наконечника.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и иммунологии. В частности, настоящее изобретение относится к новому птичьему астровирусу; к антителам и их фрагментам, направленным против указанного нового вируса; к антигенным препаратам, белкам и ДНК-молекулам нового птичьего астровируса; к вакцинам на основе указанного нового вируса или к его антигенным препаратам, белку или ДНК; к способам получения таких вакцин и к диагностическим наборам.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242).

Изобретение относится к биохимии. Изобретение обеспечивает способ одновременной (мультиплексной) амплификации и флуоресцентного маркирования ДНК нескольких сегментов генома микобактерий туберкулезного комплекса (Mycobacterium tuberculosis, M.

Группа изобретений относится к генной инженерии, биохимии, биотехнологии и иммунологии. Представлена рекомбинантная плазмида pCFP10-DBD, состоящая из искусственного бактериального оперона химерного белка, включающего промоторную область раннего промотора бактериофага Т5, ген химерного белка, состоящий из последовательности белкового антигена CFP10 из Mycobacterium tuberculosis, слитой с последовательностью декстрансвязывающего домена (DBD) декстрансукразы Leuconostoc citreum KM20, и терминатор транскрипции, бактериального оперона бета-лактамазы и бактериального участка инициации репликации типа ColE1.

Заявленная группа изобретений относится к области биологии, в частности к оборудованию для автоматической очистки биологических образцов при выделении целевых веществ из множества биологических образцов, для автоматической очистки биологического образца, оснащенное элементом для приложения магнитного поля, в котором элемент для приложения магнитного поля для очистки биологических образцов и нагревательный элемент сформированы в виде единого компонента друг с другом так, чтобы быть подвижными вверх и вниз.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к созданию конъюгатов магнитная частица - нуклеиновая кислота, и может быть использовано для молекулярно-генетической диагностики.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способам получения ферментных препаратов. Изобретение касается термостабильной двухдоменной лакказы бактерии Streptomyces griseoflavus Ac-993 со щелочным оптимумом активности, последовательности ДНК, кодирующей данный фермент, и способа получения фермента, включающий клонирование в клетках бактерии Escherichia coli гена фермента, продукцию фермента в клетках Escherichia coli, внесение ионов меди в среду для культивирования рекомбинантного штамма для образования активного фермента, получение ферментного препарата методами металлхелатной хроматографии и гельфильтрации.

Группа изобретений относится к генной инженерии, биохимии, биотехнологии и иммунологии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pESAT6-CFP10-DBD, рекомбинантный штамм Escherichia coli M15 [pREP4, pESAT6-CFP10-DBD], способ получения, иммобилизации, концентрирования и очистки рекомбинантного белка ESAT6-CFP10-DBD на декстране, рекомбинантный белок ESAT6-CFP10-DBD с молекулярной массой 26,4 кДа, иммуногенную композицию, содержащую белок ESAT6-CFP10-DBD, иммобилизованный на декстране, специфически активирующую Т-лимфоциты, синтезирующие ИФН-гамма при стимуляции антигенами микобактерий.

Изобретение относится к биохимии, в частности к молекулярной биологии, биотехнологии, генной инженерии. Изобретение представляет собой оптимизированные последовательности ДНК, кодирующие легкую и тяжелую цепь моноклонального антитела, предназначенные для синтеза антитела в рекомбинантных CHO-S клетках, и способ получения данного антитела в указанных клетках.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой молекулярные конъюгаты, способные связываться с нуклеиновыми кислотами (ДНК или РНК) для доставки их в клетки млекопитающего, экспрессирующие рецепторы трансферрина.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генной инженерии. Предложена молекула RNAi для супрессии экспрессии тимидилатсинтазы за счет действия RNAi, содержащая домен двухцепочечной РНК, состоящий из смысловой цепи, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1, гибридизованной с антисмысловой цепью, гибридизующейся в жестких условиях со смысловой цепью.

Изобретение относится к биотехнологии и предоставляет собой способ получения полезных метаболитов с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в частности бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что она содержит генетическую экспрессионную систему, включающую транскрипционный аппарат, регулируемый белком типа LysR, и модифицированную таким образом, что самоиндуцируемая положительная регуляция по типу обратной связи указанной системы опосредована коиндуктором. Данный способ пригоден для продукции L-аминокислот с разветвленной цепью, в частности L-валина, L-изолейцина и L-лейцина, высших спиртов и D-пантотеновой кислоты. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 6 пр.
Наверх