Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с



Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с
Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с
Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с
Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с
Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом с

 


Владельцы патента RU 2557926:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии и инфекционным болезням, и может использоваться для определения стадии фиброзного процесса при мониторинге больных хроническим гепатитом C.

Для осуществления способа у больных хроническим гепатитом C с установленной в результате биопсии или другим неинвазивным методом стадией фиброзного процесса 2 раза в год определяют уровни цитокинов сыворотки крови и на их основе рассчитывают интегральный показатель цитокинового профиля (ИПЦП), далее при исходной стадии F0 рост ИПЦП выше -8 свидетельствует о дебюте фиброзных изменений в печени (переход на стадию F1), при исходной стадии F1 падение ИПЦП ниже -10 свидетельствует о переходе на стадию F2, при исходной стадии F2 рост ИПЦП выше -3 свидетельствует о переходе фиброза на стадию F3, при исходной стадии F3 падение ИПЦП ниже -3 свидетельствует о развитии цирроза печени. 3 пр., 1 табл., 5 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии и инфекционным болезням, и может использоваться для определения стадии фиброзного процесса при мониторинге больных хроническим гепатитом С. Для осуществления способа у больных хроническим гепатитом С с установленной в результате биопсии или другим неинвазивным методом стадией фиброзного процесса 2 раза в год определяют интегральный показатель цитокинового профиля (ИПЦП), далее при исходной стадии F0 рост ИПЦП выше -8 свидетельствует о дебюте фиброзных изменений в печени (переход на стадию F1), при исходной стадии F1 падение ИПЦП ниже -10 свидетельствует о переходе на стадию F2, при исходной стадии F2 рост ИПЦП выше -3 свидетельствует о переходе фиброза на стадию F3, при исходной стадии F3 падение ИПЦП ниже -3 свидетельствует о развитии цирроза печени METAVIR.

Инфицирование вирусом гепатита С (ВГС) характеризуется очень широкой распространенностью во всем мире (около 200 миллионов человек), высоким уровнем хронизации процесса с неблагоприятными исходами в цирроз или рак печени [1, 2, 3]. С социально-экономической точки зрения хронический гепатит С требует значительных затрат на диспансерное наблюдение за больными при дорогостоящем диагностическом сопровождении их мониторинга [3, 4]. С клинических позиций «золотой стандарт» диагностики фиброзного процесса в виде биопсии печени небезопасен для больного [5, 6], а многочисленные способы неинвазивной диагностики фиброза печени не всегда точны, требуют сочетания нескольких тестов [7, 8, 9, 10] и нуждаются в пополнении новыми эффективными диагностическими приемами, наиболее полно отражающими патогенез фиброзных изменений в печени и вполне доступными для мониторинга больных как с методической, так и с экономической точек зрения.

Известно, что фиброзные процессы в печени очень тесно связаны с иммунологическими сдвигами у больных хроническим гепатитом С и во многом зависят от соотношения в организме больного цитокинов профиброзного и противофиброзного действия. В частности, было показано, что прогрессированию фиброза печени в немалой степени способствуют цитокины, связанные с CD4+ Tx2 иммунным ответом (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-13, ИЛ-21), в то время как противофиброзными свойствами обладают Tx1-ассоциированные цитокины ИФНγ и ИЛ-12 [11]. Особенно выраженным профиброзным действием характеризуется трансформирующий фактор роста β (ТФРβ), который через рецепторы на мембране миофибробластов в значительной мере влияет на транскрипцию генов, отвечающих за синтез проколлагена I и III [11, 12]. В свою очередь, секреция ТФРβ макрофагами эффективно индуцируется ИЛ-13 [13]. Очень важную функцию блокады фиброзных изменений в печени выполняет ИЛ-10, действие которого показано на многочисленных моделях, в том числе и при ХГС [14].

В связи с этим целью настоящего изобретения была разработка нового способа мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом С на основе интегральной оценки цитокинового профиля сыворотки крови при данном заболевании.

В настоящее время существуют способы оценки фиброзного процесса на основе цитокинового статуса больных хроническим гепатитом С. Так, известны способы прогнозирования цирроза печени на фоне ХГС с использованием генетических методов исследований, в частности, по анализу ДНК пациентов на наличие полиморфизма генов цитокинов [15, 16]. Анализ уровня цитокинов при диагностике фиброза печени может входить в состав комплекса иммунологических тестов, предназначенных для неинвазивной диагностики фиброза печени у больных хроническим гепатитом C [17].

Оба указанных метода по своей доступности значительно уступают способу мониторинга тяжести течения и прогноза цирротических изменений в печени при ХГС на основе определения в сыворотке крови уровней различных цитокинов [18], который может служить аналогом заявляемого изобретения. Для осуществления способа в сыворотке крови определяют содержание цитокинов ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р70, ФНОα. При ИЛ-4 выше 5,6 пг/мл, ИЛ-10 выше 35 пг/мл, ФНОα выше 14 пг/мл и ИЛ-12р70 выше 8,5 пг/мл устанавливают наличие выраженного фиброза печени. Общность аналога и заявляемого изобретения заключается в методах иммунологического тестирования, основанного на определении уровня сывороточных цитокинов методом твердофазного иммуноферментного анализа, а также в проведении исследований под контролем пункционной биопсии печени.

Достоинством обоих способов можно считать их экономическую целесообразность и доступность, поскольку определение уровней цитокинов входит в категорию рутинных методов иммунодиагностики на основе иммуноферментного анализа и в принципе может осуществляться на основе отечественных тест-систем, что значительно снижает их себестоимость.

Наряду с этим, у аналога имеются определенные недостатки, один из которых - возможность разового определения выраженного фиброза печени у пациента при отсутствии перспектив его использования для длительного мониторинга состояния больного ХГС и, следовательно, определения показаний к проведению противовирусной терапии на основании выраженности и степени прогрессирования фиброзного процесса. Кроме того, с помощью способа устанавливается только выраженный фиброз без возможности четкой идентификации каждой стадии фиброзного процесса. Этот недостаток способа связан с методическим подходом к его решению, поскольку он основан на определении уровня отдельных цитокинов в сыворотке крови без учета вклада («весового коэффициента») каждого цитокина в развитие отдельных этапов фиброзных изменений в печени.

В связи с этим особенностью данного изобретения является то, что для достижения технического результата используется другой набор тестируемых цитокинов в сыворотке крови с расчетом на его основе особого коэффициента - интегрального показателя цитокинового профиля (ИПЦП), который учитывает «вклад» каждого цитокина в развитие фиброзного процесса в печени на каждой стадии его развития у больных хроническим гепатитом C.

Объектом исследования служили 66 человек с верифицированным диагнозом хронического гепатита C, которым предварительно была проведена пункционная биопсия печени и гистологически установлена стадия фиброза печени по шкале METAVIR [19]. В результате все обследованные пациенты в соответствии со стадиями фиброза печени была подразделена на 5 подгрупп: на стадии F0 (отсутствие фиброза) - 4 человека, на стадии F1 (начало фиброзных изменений) - 25 человек, на стадии F2 (выраженный фиброз) - 7 человек, на стадии F3 (значимый фиброз) - 9 человек, на стадии F4 (цирроз печени) - 21 человек. Контролем служила группа из 17 здоровых человек (доноры).

У каждого обследуемого определялся уровень следующих цитокинов сыворотки крови: интерферона α (ИФНα), интерферона γ (ИФНγ), интерлейкина-10 (ИЛ-10), интерлейкина-12 (ИЛ-12), интерлейкина-13 (ИЛ-13), фактора некроза опухолей α (ФНОα), трансформирующего фактора роста β (ТФРβ).

Материалом для исследования являлась венозная кровь больных в количестве 5 мл, которую забирали шприцем из локтевой вены, центрифугировали при 3000 об/мин на холоде в течение 10 минут, сыворотку разливали по 0,5 мл в эпендорфы, замораживали и хранили до использования при -70°C. Иммуноферментный анализ (ИФА) проводился из проб сыворотки крови с использованием планшетного фотометра «OPSYS MR» (ридер) фирмы «THERMOLABSYSTEMS» (Финляндия) в соответствии с инструкцией по применению аппаратуры и комплекта моноклональных антител. Последний включал: anti-IFNα MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ИФНα; anti-IFNγ MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ИФНγ; anti-IL-10 MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ИЛ-10; anti-IL-12 MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ИЛ-12; anti-IL-13 MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ИЛ-13; anti-TNFα MKAT (Вектор Бест, Россия) для определения уровня ФНОα; anti-TGFβ MKAT (Biosource, Канада) для определения уровня ТФРβ.

Статистическую обработку данных проводили на основе пакета статистических программ SPSS 17.0. Сравнительный анализ осуществлялся методом непараметрической статистики с использованием критерия Манна-Уитни в соответствии с распределением данных. Статистическое определение формулы для расчета ИПЦП проводилось путем составления уравнения линейной регрессии. Проверка положения о соответствии полученных данных разработанным критериям диагностики осуществлялась на основе расчета 95% доверительных интервалов в соответствии со стадиями фиброза печени METAVIR, определенных по результатам биопсии. Соотношения чувствительности и специфичности разработанных тестов по определению отдельных стадий фиброза печени устанавливались методом линейной регрессии с построением ROC-кривой и расчетом площади под кривой - AUROC [20, 21, 22].

Основные различия между цитокиновыми профилями у больных ХГС на разных стадиях фиброзного процесса выявлялись, в основном, при сопоставлении с группой здоровых лиц (таблица 1). В этом случае каждая стадия характеризовалась своими достоверными сдвигами, в которые были вовлечены практически все тестированные цитокины. Однако различия между самими стадиями были единичными и не позволяли идентифицировать отдельные стадии.

Все полученные данные были использованы для проведения регрессионного анализа с построением уравнения линейной регрессии. В результате был получен интегральный коэффициент цитокинового профиля (ИПЦП), который рассчитывался по формуле 1.

Формула 1

ИПЦП=5,052-0,192*[ИФНα]-0,006*[ИФНγ]+0,169*[ИЛ-10]+0,044*[ИЛ-12]-0,146*[ИЛ-13]-0,145*[ФНОα]-0,050*[ТФРβ],

где [ИФНα] - уровень ИФНα в пг/л в сыворотке крови больного, [ИФНγ] - уровень ИФНγ в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-10] - уровень ИЛ-10 в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-12] - уровень ИЛ-12 в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-13] - уровень ИЛ-13 в пг/л в сыворотке крови больного, [ФНОα] - уровень ФНОα в пг/мл в сыворотке крови больного, [ТФРβ] - уровень ТФРβ в пг/л в сыворотке крови больного.

Результаты соответствующих расчетов ИПЦП по каждому пациенту, выраженные в диапазонах значения 95% доверительных интервалов этого коэффициента, представлены на фиг.1.

Как следует из фигуры, если бы исследование проводилось однократно при первичном обследовании больного, определить стадию фиброза печени было бы довольно затруднительно, поскольку данные на разных стадиях могут «наслаиваться» друг на друга. Однако при мониторинге больного и знании исходной стадии фиброза печени использование ИПЦП для оценки стадий является диагностически высоко эффективным.

Так, в случае исходной стадии F0 рост ИПЦП выше -8 свидетельствует о дебюте фиброзных изменений в печени, то есть переходе фиброзного процесса на стадию F1. Диагностическое значение этого теста, оцененное путем построения ROC-кривой и вычисления площади под кривой (AUROC), довольно высоко, поскольку AUROC=0,765, как об этом свидетельствует фиг.2.

При исходной стадии F1 падение ИПЦП ниже -10 свидетельствует о переходе процесса на стадию выраженного фиброза печени F2, а диагностическое значение теста, судя по ROC-кривой, характеризующей этот переход по величине ИПЦП, выражается еще большей величиной AUROC=0,824 (фиг. 3).

При исходной стадии F2 рост ИПЦП выше -3 свидетельствует о переходе фиброза на стадию значимого фиброза F3, как это видно на фиг. 4. Этот переход, оцененный по величине ИПЦП, также является диагностически значимым, при этом диагностическая точность теста приближается к абсолютной, поскольку AUROC=1 (переход из одного диапазона значений в другой наблюдается в 100% случаев).

При исходной стадии F3, наоборот, падение ИПЦП ниже -3 свидетельствует о развитии цирроза печени - F4 (фиг. 5) при довольно высоком AUROC=0,824.

Способ иллюстрируется следующими фигурами.

Фиг.1. 95% доверительные интервалы (95% ДИ) значений ИПЦП у больных ХГС на разных стадиях фиброза печени.

Фиг.2. ROC-кривая ИПЦП для перехода больных ХГС со стадии F0 на стадию F1.

Фиг.3. ROC-кривая ИПЦП для перехода больных ХГС со стадии F1 на стадию F2.

Фиг.4. ROC-кривая ИПЦП для перехода больных ХГС со стадии F2 на стадию F3.

Фиг.5. ROC-кривая ИПЦП для перехода больных ХГС со стадии F3 на стадию F4.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1.

Пациент А., 37 лет, наблюдается амбулаторно в гепатологическом центре на базе Инфекционной клинической больницы №1 с диагнозом «Хронический гепатит С выраженной активности, минимальный фиброз (стадия 1 по шкале METAVIR)».

По данным анамнеза впервые антитела к вирусу гепатита С выявлены в апреле 2011 г. при диспансеризации в поликлинике №49. Далее результат был подтвержден исследованием в мае 2011 г. на анти-ВГС и выявлением РНК ВГС. Пациент обратился в ИКБ №1, диагностирован генотип 1b ВГС. При биохимическом исследовании крови выявлен уровень активности АЛТ 47 ЕД/л. Лечения препаратами интерферона, пегилированного интерферона, рибавирина в течение жизни пациент не получал.

Сопутствующие другие хронические заболевания отрицает. Со слов пациента аллергии на лекарственные препараты нет. Из перенесенных заболеваний по данным анамнеза: сепсис в возрасте 2-х лет, (переливание плазмы крови), тонзилэктомия в 1983 г., ревматизм в возрасте 10 лет. Работает юристом.

Больному было рекомендовано выполнение биопсии печени 16.06.2011 г. По результатам биопсии диагностирован хронический гепатит С выраженной активности, минимальный фиброз (стадия 1 по шкале METAVIR).

Результаты исследования цитокинового статуса за 3 дня до выполнения биопсии печени (13.06.2011 г.): ИФНα - 4,75 пг/л, ИФНγ - 40 пг/л, ИЛ-10 - 11,67 пг/л, ИЛ-12 - 8,25 пг/л, ИЛ-13 - 74,5 пг/л, ФНОα - 0, ТФРβ - 8,72 пг/л. ИПЦП=-7,24, что соответствует стадии F1 и было подтверждено результатами последующей биопсии печени.

С января 2012 г. у больного отмечался подъем уровня АлАТ: 31.01.2012 г. - 163 ЕД/л и было рекомендовано проведение противовирусной терапии. Перед началом терапии в январе 2012 года пациент проходил всестороннее обследование. При физикальном обследовании - без особенностей. По данным УЗИ брюшной полости эхографическая картина соответствует диффузным изменениям печени по типу хронического гепатита вне обострения, КВР увеличен до 162 мм.

Результаты исследования цитокинового статуса: ИФНα - 8,93 пг/л, ИФНγ - 110 пг/л, ИЛ-10 - 14,11 пг/л, ИЛ-12 - 11,57 пг/л, ИЛ-13 - 83,8 пг/л, ФНОα - 5,04 пг/мл, ТФРβ - 11,0 пг/л. ИПЦП=-13,89, что свидетельствует в пользу перехода фиброза печени на стадию F2. Больному была назначена процедура транзиентной эластографии, на которой был установлен средний показатель плотности печени - 8,8 кПа, что подтверждало наличие у пациента стадии F2, свидетельствовало о прогрессировании фиброзного процесса за последние полгода и подтверждало диагностическое значение мониторирования пациента путем исследования его цитокинового профиля.

Пример 2.

Пациентка П., 31 год, наблюдается амбулаторно в гепатологическом центре на базе Инфекционной клинической больницы №1 с диагнозом «Хронический гепатит С умеренной активности». По данным анамнеза и выписки из стационара впервые антитела к вирусу гепатита С выявлены в августе 2010 г. в процессе обследования в гинекологическом отделении ГКБ №70. В сентябре 2010 г. выявлена РНК ВГС, генотип 1b. При углубленном обследовании в сентябре 2011 г. по результатам фиброэластографии печени диагностирована вторая стадия фиброза печени (7,8 кПА). Лечения препаратами интерферона, пегилированного интерферона, рибавирина в течение жизни пациентка не получала, не принимает никаких препаратов постоянно. За последние 6 мес. отмечается подъем уровня АлАТ: 16.08.2011 г. - 46 ЕД/Л, 05.01.2012 г. - 49 ЕД/Л. Сопутствующие, другие хронические заболевания отрицает. Со слов пациентки аллергии на лекарственные препараты нет. В течение жизни болела ОРВИ и гриппом, стационарное лечение проходила по поводу неполного самопроизвольного выкидыша при беременности малого срока. Работает менеджером.

Перед началом противовирусной терапии в августе 2011 года пациентка проходила всестороннее обследование. При физикальном обследовании - без особенностей. По данным УЗИ брюшной полости: эхопризнаки диффузных изменений печени по типу гепатоза-гепатита.

Результаты исследования цитокинового статуса (11.08.2011 г.): ИФНα - 2,66 пг/л, ИФНγ - 214 пг/л, ИЛ-10 - 7,70 пг/л, ИЛ-12 - 16,34 пг/л, ИЛ-13 - 8,1 пг/л, ФНОα - 6,8 пг/мл, ТФРβ - 7,2 пг/л. ИПЦП=-8,81, что соответствует стадии F2.

Через несколько месяцев пациентка стала получать терапию пегилированным ИФНα2b 1 раз в неделю подкожно и рибавирином в дозе, рассчитанной по массе тела. Вирусная нагрузка до лечения составляла 1,09×106 МЕ/мл РНК ВГС, через месяц терапии определялась вирусная нагрузка 7,14×102 МЕ/мл РНК ВГС. Таким образом, быстрый вирусологический ответ достигнут не был.

В феврале 2012 г. пациентке проводилась биопсия печени, была установлена стадия F2 по шкале METAVIR и параллельно было выполнено повторное исследование цитокинового статуса.

Результаты исследования цитокинового статуса (03.01.2012 г.): ИФНα - 10,23 пг/л, ИФНγ - 30 пг/л, ИЛ-10 - 10,56 пг/л, ИЛ-12 - 8,40 пг/л, ИЛ-13 - 78,5 пг/л, ФНОα - 0, ТФРβ - 11,04 пг/л. ИПЦП=-8,57, что соответствует стадии F2. Как видно, уровни отдельных цитокинов, будучи лабильными показателями, у данной больной через 6 месяцев довольно изменились, но величина ИПЦП, несмотря на это, оставалась стабильной и по-прежнему свидетельствовала о наличии у больной стадии F2.

Пример 3.

Пациент К., 43 года, наблюдается амбулаторно в гепатологическом центре на базе Инфекционной клинической больницы №1 с диагнозом «Хронический гепатит С выраженной активности, выраженный фиброз (стадия 3 по шкале METAVIR)». По данным анамнеза впервые антитела к вирусу гепатита С выявлены в ноябре 2010 г. при обследовании в ГКБ №57, где пациент проходил лечение по поводу токсико-аллергического дерматита. При биохимическом исследовании крови выявлен высокий уровень активности АЛТ - более 600 мкмоль/мин.л. В январе 2011 г. выявлена РНК ВГС, генотип 1b.

Данные определения стадии фиброза печени были противоречивыми. При углубленном обследовании по данным транзиентной эластографии выявлен фиброз 4 стадии (16,3 кПа). По результатам биопсии печени диагностирован хронический гепатит С, значительный фиброз (стадия 3 по шкале METAVIR).

Для решения спорного вопроса было проведено определение цитокинового статуса и получен следующий результат: ИФНα - 12,5 пг/л, ИФНγ - 55,0 пг/л, ИЛ-10 - 18,2 пг/л, ИЛ-12 - 6,0 пг/л, ИЛ-13 - 21,3 пг/л, ФНОα - 7,3 пг/мл, ТФРβ - 5,0 пг/л. ИПЦП=-1,73, что соответствует стадии F3 и подтверждает данные биопсии, но не транзиентной эластографии.

Результаты определения уровней цитокинов на разных стадиях фиброза печени в сопоставлении с контролем представлены в таблице 1.

Таблица 1
Средние значения показателей уровней цитокинов в крови больных ХГС на разных стадиях фиброза печени и у здоровых лиц
Стадия фиброза печени Тестированные цитокины Больные ХГС Здоровые люди, n2=17 p1 p2
ИФНα, пг/л 5,60±4,63 7,70±3,87 0,531 -
ИФНγ, пг/л 45,0±90,0 85,6±56,0 0,136 -
F0 ИЛ-10, пг/л 8,16±1,62 12,3±3,87 0,066 -
n1=4 ИЛ-12, пг/л 10,6±1,59 12,7±6,69 0,964 -
ФНОα, пг/мл 5,34±4,05 2,45±3,36 0,209 -
ИЛ-13, пг/л 98,8±29,6 64,6±40,2 0,044 -
ТФРβ, пг/л 5,90±0,84 7,06±2,08 0,234 -
ИФНα, пг/л 8,08±4,03 7,70±3,87 0,547 0,363
ИФНγ, пг/л 27,4±35,7 85,6±56,0 0,001 0,870
F1 ИЛ-10, пг/л 10,9±5,08 12,3±3,87 0,178 0,442
n1=25 ИЛ-12, пг/л 10,1±5,10 12,7±6,69 0,095 0,617
ФНОα, пг/мл 3,33±5,39 2,45±3,36 0,984 0,735
ИЛ-13, пг/л 57,0±47,1 64,6±40,2 0,890 0,158
ТФРβ, пг/л 10,6±2,25 7,06±2,08 <0,00 0,520
ИФНα, пг/л 8,62±4,27 7,70±3,87 0,591 0,427
ИФНγ, пг/л 92,0±67,7 85,6±56,0 0,941 0,221
F2 ИЛ-10, пг/л 12,0±3,41 12,3±3,87 0,924 0,958
n1=7 ИЛ-12, пг/л 12,6±3,43 12,7±6,69 0,531 0,634
ФНОα, пг/мл 2,96±3,49 2,45±3,36 0,921 0,777
ИЛ-13, пг/л 65,0±38,2 64,6±40,2 0,530 0,751
ТФРβ, пг/л 10,5±1,46 7,06±2,08 0,002 0,610
ИФНα, пг/л 10,4±2,54 7,70±3,87 0,035 0,999
F3 ИФНγ, пг/л 52,4±4,45 85,6±56,0 0,082 0,564
n1=9 ИЛ-10, пг/л 18,8±14,4 12,3±3,87 0,178 0,564
ИЛ-12, пг/л 8,93±2,80 12,7±6,69 0,049 0,564
ФНОα, пг/мл 7,17±3,44 2,45±3,36 0,011 0,999
ИЛ-13, пг/л 41,1±44,3 64,6±40,2 0,145 0,999
ТФРβ, пг/л 5,77±2,56 7,06±2,08 0,124 0,043
ИФНα, пг/л 10,1±4,40 7,70±3,87 0,210 0,621
ИФНγ, пг/л 10,6±24,8 85,6±56,0 0,001 0,348
F4 ИЛ-10, пг/л 11,8±3,31 12,3±3,87 0,607 0,399
n1=21 ИЛ-12, пг/л 13,0±7,76 12,7±6,69 0,999 0,999
ФНОα, пг/мл 3,28±4,56 2,45±3,36 0,714 0,939
ИЛ-13, пг/л 55,6±36,0 64,6±40,2 0,934 0,573
ТФРβ, пг/л 10,7±3,42 7,06±2,08 0,001 0,505
Примечание: p1 - вероятность различий между показателями у больных и здоровых людей, p2 - вероятность различий между показателями у больных людей на разных стадиях фиброза с предыдущей стадией, n1 - число больных, n2 - число здоровых, серым цветом обозначена достоверность различий по критерию Манна-Уитни при p<0,05

Литература

1) Fung J, Lai CL, Yuen MF (2009) Hepatitis В and С virus-related carcinogenesis. Clin Microbiol Infect 15: 964-970.

2) Pham TN, Michalak TI (2008) Occult persistence and lymphotropism of hepatitis С virus infection. World J Gastroenterol 14: 2789-2793.

3) Craxi A (2011) EASL Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis С virus infection. J Hepatol 55: 245-264.

4) Stauber RE, Lackner С (2007) Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis C. World J Gastroenterol 13: 4287-4294.

5) Mysorekar VV, Rao SG, Mahadeva КС. Liver histology in patients on hemodialysis with chronic hepatitis С viral infection // Indian J Pathol Microbiol. 2008 Apr-Jun; 51(2): 182-5.

6) Yeshua H, Oren R. Non invasive assessment of liver fibrosis // Ann Transplant. 2008; 13(2): 5-11.

7) Stauber, R.E. Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis С / R.E. Stauber, C. Lackner // World J. Gastroenterol. - 2007. - Vol.13, N32. - P.4287-4294.

8) Zhang, Y. X. Noninvasive assessment of liver fibrosis with combined serum aminotransferase/platelet ratio index and hyaluronic acid in patients with chronic hepatitis В / Y.X. Zhang, W.J. Wu, Y.Z. Zhang et al. // World J. Gastroenterol. - 2008. - Vol.14, N46. - P.7117-7121.

9) Castéra, L. Prospective comparison of two algorithms combining non-invasive methods for staging liver fibrosis in chronic hepatitis С / L. Castéra, G. Sebastiani. B. Le Bail et al. // J. Hepatol. - 2010. - Vol.52, N2. - P.191-198.

10) Dascalu, D. N. Non-invasive methods for hepatic fibrosis evaluation / D.N. Dascalu, M. Deac // Acta Medica Transilvanica. - 2010. - Vol.2, N3. - P.244-246.

11) Галимова С.Ф., Надинская М.Ю., Маевская М.В., Ивашкин В.Т. Новые данные о диагностике и течении фиброза печени. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2001. - Т.11. - N4. - C.22-28.

12) Пинцани M. Эволюция фиброза печени: от гепатита к циррозу. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2002. - Т.12. - №5. - С.4-9.

13) Weng HL, Liu Y, Chen JL et al. The etiology of liver damage imparts cytokines transforming growth factor betal or interleukin-13 as driving forces in fibrogenesis // Hepatology. 2009 Jul; 50(1): 230-43.

14) Wynn T.A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis // J. Pathol. - 2008. - Vol.214, N2. - P.199-210.

15) Самоходская Л.М. Способ прогнозирования прогрессирующего течения хронического гепатита С (развития цирроза печени) путем анализа комбинации полиморфизмов генов цитокинов / Л.М. Самоходская, С.М. Абдуллаев, Ю.И. Целищева и соавт. // Патент РФ 2317335, 2008.

16) Wright, M. Bayesian model for the prognosis of hepatitis С virus infectionark / M. Wright, M. Thursz // Patent GB WO 2004086031 (A2), publ. 2004-10-07.

17) Ющук Н.Д. Способ оценки фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С / Н.Д. Ющук, И.П. Балмасова, О.О. Знойко и соавт. // Патент РФ №2416794, 2011.

18) Скляр Л.Ф. Способ мониторинга фиброза печени у больных хроническим гепатитом С (ХГС) / Л.Ф. Скляр, Е.В. Маркелова, О.Г. Полушин, Е.В. Алейникова // Патент РФ 2309406, 2007.

19) Bedossa, P. An algorithm for the grading of activity in chronic hepatitis С / P. Bedossa, T. Poynard. The METAVIR Cooperative Study Group / P. Bedossa // Hepatology, 1996; 24(2): 289-293.

20) Петри А. Наглядная медицинская статистика. 2-е издание / А. Летри, К. Сэбин // М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2009; 168 с.

21) Altman, D.G. Statistics Notes: Diagnostic tests 1: sensitivity and specificity / D.G. Altman, J.M. Bland // BMJ, 1994; 308 (6043): 1552.

22) Long, E.R., De Long D.M., Clarke-Pearson D.L. Comparing the areas under two or more correlated receiver operating characteristic curves: a nonparametric approach / E.R. Long, D.M, De Long, D.L. Clarke-Pearson // Biometrics, 1988; 44(3): 837-845.

Способ мониторинга фиброзного процесса в печени у больных хроническим гепатитом С, включающий исследование содержания в сыворотке крови интерферонов α и γ, интерлейкинов-10, -12, -13, фактора некроза опухолей α, трансформирующего фактора роста β, отличающийся тем, что рассчитывают Интегральный Показатель Цитокинового Профиля (ИПЦП) по формуле: ИПЦП=5,052-0,192*[ИФНα]-0,006*[ИФНγ]+0,169*[ИЛ-10]+0,044*[ИЛ-12]-0,146*[ИЛ-13]-0,145*[ФНОα]-0,050*[ТФРР], где [ИФНα] - уровень ИФНα в пг/л в сыворотке крови больного, [ИФНγ] - уровень ИФНγ в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-10] - уровень ИЛ-10 в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-12] - уровень ИЛ-12 в пг/л в сыворотке крови больного, [ИЛ-13] - уровень ИЛ-13 в пг/л в сыворотке крови больного, [ФНОα] - уровень ФНОα в пг/мл в сыворотке крови больного, [ТФРβ] - уровень ТФРβ в пг/л в сыворотке крови больного; и при при исходной стадии F0 рост ИПЦП>-8 оценивают как переход на стадию F1, при исходной стадии F1 падение ИПЦП<-10 - как переход на стадию F2, при исходной стадии F2 рост ИГЩП>-3 - как переход фиброза на стадию F3, при исходной стадии F3 падение ИПЦП<-3 - как развитие цирроза печени, при этом стадии фиброза печени оценивают по шкале METAVIR.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования спонтанного наступления беременности у женщин с I и II стадией наружного генитального эндометриоза.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ прогноза эффективности биоуправления параметрами вариабельности сердечного ритма с учетом уровня интерлейкина-6 в периферической крови.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Описано антитело, которое специфически связывает денатурированный CD70.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для определения еx-vivo эффективности лечения рака. Для этого после введения одной или более доз иммуногенной композиции субъекту измеряют уровень активированных Т-лимфоцитов (CD3+ CD69+) в организме.

Изобретение относится к иммунологии и представляет собой способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину Е, который заключается в связывании исследуемых антител с IgE человека в растворе с последующим инкубированием данного раствора с периферической кровью человека, индукцией дегрануляции клеток и последующим определением доли клеток с высоким уровнем экспрессии поверхностного маркера CD63 (CD63high) в популяции базофилов с фенотипом CD123+HLA-DR-.

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии и предназначено для лечения фармакологической формы синдрома «сухого глаза» (Ф-ССГ). Для лечения Ф-ССГ выявляют анамнез, определяют снижение относительно нормы объема слезопродукции и повышение показателя ксероза глазной поверхности.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования формирования окклюзионной постгеморрагической гидроцефалии у недоношенных детей с экстремально низкой массой тела при рождении.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики нейродегенеративного заболевания у индивидуума, включающего стадии (i) определения одного или нескольких параметров, выбранных из группы, состоящей из 3ab40 или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 и 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42; (ii) сравнения величины параметра с эталонной величиной, соответствующей величине указанного параметра в эталонном образце; и (iii) диагностики нейродегенеративного заболевания, в случае, если наблюдается увеличение величины параметра по сравнению с эталонной величиной.
Изобретение относится к области медицины, в частности к ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ревматоидного артрита (РА) с остеоартрозом (OA).

Изобретение касается способа диагностики ревматоидного артрита, способа определения лечебного эффекта терапевтического агента для лечения ревматоидного артрита и набора для осуществления способов.
Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ иммунохроматографического анализа. В основе способа лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют детектируемые иммунные комплексы. Отличительной особенностью предлагаемого способа определения антигенов является то, что на тест-полоску в зоне контакта с тестируемой пробой дополнительно наносится определенное количество специфических антител, которые при движении фронта жидкости взаимодействуют с определяемым антигеном, потенциально содержащимся в пробе, и блокируют определенное количество сайтов связывания. Количество наносимых свободных антител подбирается таким образом, чтобы при низком их содержании в анализируемой пробе, не имеющем диагностического значения, происходило полное блокирования центров связывания, предотвращающее связывание антигена в аналитической зоне тест-полоски и развитие детектируемой окраски в аналитической зоне. Предлагаемый подход позволяет проводить достоверную диагностику на основании результатов определения антигенов заболеваний желудочно-кишечного тракта, исключая получение положительных результатов тестирования для проб с низким содержанием детектируемых антигенов, не свидетельствующем о протекании у лица - источника тестируемой пробы - процесса развития заболевания. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования уровня артериального давления у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России. Способ включает выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови и анализ генетических полиморфизмов +46G/A ADRB2 и 4a/4b eNOS методом полимеразной цепной реакции. Прогнозируют уровень систолического артериального давления у женщин в конце беременности по результатам уравнения множественной регрессии следующего вида: Y1=15,455+2,544x1+9,946x2+0,736x3+4,716x4+0,185x5, где x1 - генетический вариант по локусу - 4а/4b eNOS, а именно 4b4b=1; 4a4b=2; 4a4a=3; x2 - наличие преэклампсии у родственников: да=0, нет=1; x3 - уровень систолического артериального давления до беременности, мм рт.ст.; x4 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы: да=0, нет=1; x5 - вес женщины до беременности, кг. Прогнозируют уровень диастолического артериального давления у женщин в конце беременности, для чего используют уравнение множественной регрессии следующего вида: Y2=14,200+7,768x1-2,877x2+7,500x3+0,414x4+3,668x5, где x1 - генетический вариант по локусу - 4а4b eNOS, а именно 4b4b+4a4b=1, 4а4а=0; x2 - генетический вариант по локусу+46G/A ADRB2, а именно GG+GA=1, АА=0; x3 - наличие преэклампсии у родственников: да=0, нет=1; x4 - систолическое артериальное давление до беременности, мм рт.ст.; x5 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы: да=0, нет=1. Изобретение позволяет осуществить раннее прогнозирование повышения уровня артериального давления у женщин в конце беременности, позволит формировать среди женщин при прегравидарной подготовке и на ранних сроках беременности группы высокого риска развития гипертензии в конце беременности, а также своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития данного осложнения беременности. 2 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития сочетания пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. Для этого выделяют ДНК из периферической венозной крови. Проводят анализ комбинаций генетических вариантов полиморфных маркеров генов цитокинов гена регулятора активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (-403 G/А RANTES), макрофагального воспалительного протеина -1β (+1931 A/T MIP 1β), фактора стромальных клеток (-801 G/A SDF1), интерлейкин-1 (-511 C/T IL-1B), моноцитарного хемоаттарактанта протеина -1 (C/G MCP-1), интерлейкина-4 (-590 С/T IL-4). Прогнозируют повышенный риск развития сочетания миомы матки с эндометриозом и гиперпластическими процессами эндометрия при выявлении сочетания аллелей -403 А RANTES, G MCP-1,+1931 A MIP 1β, -590 C IL-4 или сочетания аллелей -403 А RANTES,+1931 A MIP 1β, -801 G SDF1, -511 C IL-1B. Использование данного способа позволяет выявить группу больных с риском развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы, что позволяет назначить адекватную терапию для профилактики дальнейшего прогрессирования заболевания. 3 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения целесообразности проведения иммунологического обследования у работников животноводства. Для этого выявляют хронические инфекционно-воспалительные заболевания (ХИВЗ). Выполняют общий анализ крови и бактериологическое исследование. Затем рассчитывают индекс аллергизации (ИА) и индекс иммунореактивности (ИИР), определяют общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха рабочей зоны с подсчетом общего микробного числа (ОМЧ). При значении ОМЧ менее 500 КОЕ/м3, отсутствии ХИВЗ, значении ИА менее 1,08 усл. ед., значении ИИР менее 13 усл. ед. считают нецелесообразным проведение иммунологического исследования. При значении ОМЧ 500-2500 КОЕ/м3, выявлении одного ХИВЗ, значении ИА 1,08-1,3 усл. ед., значении ИИР 13,1-15,7 усл. ед. считают целесообразным проведение иммунологического исследования тестами первого уровня. При значении ОМЧ более 2500 КОЕ/м3, наличии не менее двух ХИВЗ, значении ИА 1,4-1,5 усл. ед., значении ИИР 15,8-18,3 усл. ед. считают целесообразным проведение иммунологического исследования тестами второго уровня. Изобретение позволяет выявить работников, нуждающихся в дальнейшем обследовании с целью своевременной иммунокоррекции в условиях массовых периодических осмотров. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии, и может быть использовано для выявления риска развития гиперпластических процессов эндометрия у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья России. Выделяют ДНК из периферической венозной крови. Типируют методом полимеразной цепной реакции генетические полиморфизмы гена фактора некроза опухоли α (-308 G/А TNFα), рецептора фактора некроза опухоли 1 (+36 A/G TNFR1), интерферона индуцебельного хемоаттрактанта Т-клеток (А/G I-TAC), интерлейкина 1А (-889 С/Т IL-1A), лимфотаксина α (+250 А/G Ltα). Прогнозируют повышенный риск развития гиперпластических процессов эндометрия при выявлении сочетания аллелей -308 G TNFα, +36 A TNFR1, A I-TAC, -889 T IL-1A и/или сочетания аллелей+36 A TNFR1, A I-TAC, -889 T IL-1A и/или сочетания аллелей -308 G TNFα,+250 G Ltα, -889 T IL-1A. 2 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения иммуно-функционального резерва организма. Для этого определяют лейкоцитарные показатели периферической крови до и после нагрузочной пробы, используя ступенчатую субмаксимальную физическую нагрузку. Проводят дифференцированное выделение различных типов лейкоцитов из крови с получением препарата, определяют уровень общих Т-клеток (То) и активных Т-клеток (Та), рассчитывают индекс То/Та, мононуклеарные клетки инкубируют с гранулоцитами, оценивают индекс гранулоцитосвязывающих лимфоцитов (ИГЛ) по соотношению гранулоциторозеткообразующих (ГРЛ - контактно связанных с тремя гранулоцитами) и гранулоцитоконтактных лимфоцитов (ГЦЛ - контактно связанных с одним гранулоцитом) в препарате, определяют лейкоцитарные индексы: лимфоцитарный индекс (ЛИ), индекс иммунореактивности (ИИР), индекс адаптации, (СПНР), определяют коэффициенты адаптации иммуно-функционального состояния (К) для каждого показателя. Находят суммарный показатель иммуно-функционального состояния организма СПИФСО по формуле СПИФСО=Кспнр+Кли+Киир+Кигл+Китл до нагрузки - СПИФСО1 и после нагрузки - СПИФСО2. Рассчитывают удельный коэффициент иммуно-функционального резерва УКИФ по формуле УКИФ=(СПИФСО1+СПИФСО2)/5 и определяют уровень иммуно-функционального резерва УКИФ. При значениях УКИФ выше +1,0 считают уровень иммуно-функционального резерва оптимальным, при значениях УКИФ от 0 до 1,0 - удовлетворительным, при значениях УКИФ ниже 0 - неудовлетворительным. Данный способ позволяет оценить функциональные резервы организма, используя совокупную характеристику, включающую адаптационный потенциал организма (СПНР, ЛИ), иммунореактивность (ИИР, ИТЛ) и взаимодействие иммунных клеток между собой - лимфоцитов и гранулоцитов. 1 пр.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для обнаружения контаминантов полимеров глюкозы. Для этого проводят анализ воспалительного ответа in vitro с применением клеточной линии, которая представляет собой клеточную линию либо макрофагов, либо дифференцируемую в макрофаги, либо клетку, экспрессирующую один или несколько толл-подобных рецепторов (TLR) или NOD-подобных рецепторов, выбранных из TLR2, TLR4 и NOD2. Анализ содержит этапы: (a) размещение макрофагов в присутствии препарата полимеров глюкозы, которые могут содержать провоспалительные контаминанты, и измерение продуцирования цитокина RANTES, причем продуцирование цитокина RANTES указывает на то, что препарат содержит контаминанты, способные к инициации воспалительной реакции, и (b) размещение клеточной линии, которая позволяет обнаружить активность рецептора врожденного иммунитета или нескольких рецепторов врожденного иммунитета, выбранных из TLR2 и NOD2, в присутствии препарата и обнаружение сигнала репортерного гена, связанного с этим рецептором, причем обнаружение данной активности или данного сигнала указывает на присутствие в препарате контаминанта, который представляет собой агонист рецептора. Использование данного способа позволяет обнаружить контаминанты полимеров глюкозы, причем добавление компонентов, таких как MDP или LPS, в тестируемый образец позволяет действовать синергично с контаминантами, что повышает чувствительность и понижает порог обнаружения, при этом синергитический ответ отмечен для RANTES. 27 з.п. ф-лы, 5 пр., 23 ил., 5 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и касается способа прогнозирования развития гиперплазии эндометрия у пациенток с миомой матки после проведения эмболизации маточных артерий (ЭМА). Сущность способа: до ЭМА всем пациенткам проводят лечебно-диагностическое выскабливание, через 6 мес после ЭМА проводят пайпель-биопсию эндометрия с последующим патоморфологическим исследованием биоптата. При отсутствии патологии биоптаты подвергают иммуногистохимическому исследованию с использованием моноклональных антител к Ki-67, определяют процентное содержание маркера пролиферации Ki-67 в эпителии желез эндометрия - коэффициент А и в строме эндометрия - коэффициент В и вычисляют прогностический индекс Д1 - при исходной (до ЭМА) гиперплазии без атипии и Д2 - при исходном (до ЭМА) эндометрии, соответствующем фазе поздней пролиферации: Д1=А*0.05-0.74 и Д2=В*0,02-0,3. При Д1, более или равном 0, прогнозируют рецидив гиперплазии эндометрия, а при Д1 менее 0 делают заключение о низком риске рецидива гиперплазии эндометрия. При Д2 более 0 судят о низком риске развития гиперплазии эндометрия, а при Д2, менее или равном 0, прогнозируют развитие гиперплазии эндометрия. Предлагаемый способ позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие гиперплазии эндометрия после ЭМА, что дает возможность своевременно назначить превентивную гормональную терапию. 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования риска снижения уровня здоровья ребенка в возрасте 12-16 лет. Для этого через час после еды полость рта за 15 минут до забора ротовой жидкости промывается раствором натрия хлорида 0,9%. Проводится исследование ротовой жидкости ребенка с определением отношения концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G. Исследование проводится двукратно с разницей в 14 дней. В случае снижения отношения концентрации иммуноглобулина А к концентрации иммуноглобулина G при втором исследовании в 1,4 раза и более ребенка относят в группу риска снижения уровня здоровья. Использование данного способа позволяет проводить скрининг при проведении диспансеризации для планирования оздоровительных мероприятий в группах диспансерного наблюдения. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гемотрансфузиологии, и может быть использовано при отборе доноров, для получения плазмы крови. Для этого получают плазму крови, выявляют в ней антимикробные пептиды дефензины. При титре дефензинов у мужчин от 180 до 545 нг/мл и у женщин - от 128 до 386 нг/мл отбирают донора для получения плазмы крови. Изобретение позволяет использовать донорскую плазму при лечении пациентов с инфекционными заболеваниями и осложнениями после оперативных вмешательств, травм и ожогов.
Наверх