Способ специфической детекции microsporum canis в клиническом материале при различных клинических формах заболевания

Изобретение относится к области медицины и предназначено для детекции гриба Microsporum canis. Осуществляют выделение тотальной нативной ДНК из образца кожи и волос, проводят полимеразную цепную реакцию и амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Microsporum canis с использованием специфических праймеров. При электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. определяют наличие возбудителя. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию Microsporum canis в клиническом материале и может быть использовано для диагностики микроспории. 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, лабораторной микологии и дерматовенерологии, и может быть использовано для диагностики микроспории.

Дерматомикозы относятся к числу наиболее распространенных инфекций человека. Микроспория по распространенности занимает второе место после микозов стоп. Заболеваемость на территории РФ в 2009 году составила 45,2 на 100 тыс. населения, с максимумом среди детского населения (243,60/0000). Имеются региональные отличия, обусловленные в определенной мере, как особенностями среды обитания на конкретных территориях, так и существенными отличиями качества диагностики, зачастую не позволяющими выявить стертые и атипичные их формы, которые являются причиной многочисленных диагностических ошибок [Степанова Ж.В. Клинические особенности и лечение микроспории в современных условиях / Ж.В. Степанова // Вестник дерматологии и венерологии. - 2008. - №6. - С. 85-88; High prevalence of tinea capitis in newly arrived migrants at an English-language school, Melbourne, 2005 / M.E. McPherson [et al.] // Med.J. Aust. - 2008. - Vol. 189, N 1. - P. 13-16.].

Их число в последние десятилетия существенно нарастает, чему способствует низкая чувствительность культурального метода диагностики микроспории и дерматофитий вообще, составляющая лишь 40-70% [Иванова, M.А. Грибковые заболевания кожи в Амурской области и других субъектах Российской Федерации, 2008-2009 гг. [Электронный ресурс] / M.А. Иванова, А.В. Гречко, Н.E. Мельниченко // Социальные аспекты здоровья населения: электронный научный журнал. - 2010. - №15. - Режим доступа: http://vestnik.mednet.ru; Малишевская, Н.П. Современные особенности эпидемиологии, клиники и лечения микроспории / Н.П. Малишевская, С.Н. Нестеров // Лечащий врач. - 2006. - №1. - С.90-92; Щелкунова О.А. Клинико-эпидемиологические особенности микроспории и трихофитии, подходы к лечению: дис. канд. мед. наук: 14.01.10 / О.А. Щелкунова. Новосибирск, гос. медицинский ун-т. - Новосибирск, 2013. - 18 с.; Исаева Т.И. Клинико-эпидемиологические и медико-социальные аспекты микроспории в различных климато-географических условиях: автореф. дис. …канд. мед. наук / Т.И. Исаева// М., 2009. - 25 с.; Иванова Ю.А. Клинико-микологический профиль поверхностных микозов в Алтайском краевом кожно-венерологическом диспансере / Ю.А. Иванова О.В. Райденко // Проблемы медицинской микологии. - 2012. - Т. 14, №3. - С. 38-42.].

При подозрении на микроспорию основным методом лабораторной диагностики, как и при других дерматофитиях, является обнаружение возбудителя в исследуемом материале (частички кожи и волосы) [Микроспория в Краснодарском крае / В.В. Пархоменко [и др.] // Кубанский Научный медицинский вестник - 2011. - №2 (125). - С. 127-130]. Для этого в настоящее время применяются следующие методики [Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3.1 Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Лабора, 2009. - 880 с.]:

1. Микроскопия клинического материала - метод предварительной диагностики заболевания. В случаях отсутствия роста возбудителя в культуре положительный результат прямой микроскопии является единственным подтверждением микотической инфекции. Патологический материал изучают в нативных препаратах. Для просветления препаратов, т.е. для растворения роговых масс, используют 20% раствор едкой щелочи (КОН или NaOH).

2. Культуральный метод исследования до сих пор остается предпочтительным методом диагностики микозов. Осуществляется для окончательного уточнения диагноза и выяснения эпидемиологии. Он включает получение культуры гриба с последующим микроскопическим исследованием. По внешнему виду колоний на чашках Петри можно составить представление о роде возбудителя (Microsporum), его виде (Microsporum canis). Окончательное уточнение рода и вида гриба возможно только на основании микроскопического исследования полученной культуры.

3. При отборе материала также используют ультрафиолетовую лампу Вуда. Пораженные волосы светятся в ее лучах голубовато-зеленым цветом. Этот метод позволяет обнаружить волосы, пораженные микроспорумом, причем даже такие отдельные волоски, поражение которых обычно трудно уловить.

Однако все используемые методы имеют ряд существенных недостатков:

1. Микроскопия клинического материала не позволяет идентифицировать грибы в патологическом материале до вида по их морфологии. Кроме того, чувствительность этого метода недостаточна.

2. Культуральный метод исследования является очень трудоемким и занимает от 5 до 14 дней. Несмотря на то, что специфичность этого метода значительно выше, чем при микроскопии клинического материала, чувствительность этого метода тоже недостаточна.

3. Несмотря на то, что метод с использованием ультрафиолетовой лампы Вуда считается эффективным при массовых обследованиях, лечение противогрибковыми мазями приводит к прекращению свечения, которое возобновляется только через 3-4 дня после тщательного мытья волос. Следовательно, использование этого метода приводит к получению большого числа ложноотрицательных результатов.

Эффективность перечисленных методов лабораторной диагностики не в полной мере отражает истинную ситуацию по заболеваемости микроспорией. Следовательно, для формирования наиболее объективных представлений о масштабах ее распространения, необходимо широкое внедрение в практику здравоохранения и ветеринарной службы молекулярно-генетических методов диагностики, в частности полимеразной цепной реакции (ПЦР), которую отличает исключительно высокая чувствительность и специфичность, что позволит выявлять Microsporum canis в клиническом материале при различных формах заболевания и, в особенности, - при стертых и атипичных формах.

Известен способ диагностики дерматомикозов, заключающийся в том, что диагностику дерматомикозов осуществляют путем высева дерматофитов из клинического материала на плотную селективную среду Сабуро с добавлением антибиотика - левомицетина и гидролизата кератина, полученного из куриного пера. Питательная среда для выделения дерматофитов имеет следующий состав, г/л: глюкоза - 40,0; пептон - 10,0; агар - 18,0-20,0; гидролизат кератина (в пересчете на сухое вещество) - 10,0-20,0; левомицетин - 50000 ЕД; дистиллированная вода - остальное. Посев инкубируют при температуре 22-24°C в течение 4-8 дней с последующей идентификацией вида колоний. Способ наиболее эффективен при выделении из материала от больных культур грибов-дерматофитов, в частности Microsporum canis, Trichophyton vermcosum, Trichophyton mentagrophytes var. gypseum, Trichophyton rubrum [патент RU №2275631, 2006 г.].

Прототипом предлагаемого изобретения является способ диагностики онихомикоза кистей и стоп, сущность которого заключается в том, что грибок Trichophyton rubrum идентифицируют методом ПЦР, для чего выделяют ДНК из образца кожи или ногтевых пластинок, при этом для выделения ДНК образец инкубируют в 2-4 М растворе щелочи не менее 1 ч при температуре 50-65°C, нейтрализуют раствор 30%-ной соляной кислотой, переосаждают образец в 50%-ном растворе этанола при температуре минус 10 - минус 20°C и высушивают при температуре 50-65°C; проводят ПЦР ДНК с применением высокоспецифичных для гена 28 S РНК Trichophyton rubrum синтетических ДНК-зондов, имеющих последовательность: TR-1-F (смысловой): 5' atcgaatctttgaacgcaca 3'; TR-1-R (антисмысловой): 5' tataaagattggggccaggg 3' и при положительном результате диагностируют онихомикоз, вызванный грибком Trichophyton rubrum [патент RU №2319962, 2008 г.].

Задачей изобретения является разработка высокоспецифичного и высокочувствительного способа детекции Microsporum canis при различных формах заболевания и, в особенности, при стертых и атипичных формах.

Технический результат при использовании изобретения - повышение точности лабораторной диагностики микроспории у человека за счет достоверного обнаружения мицелия и спор Microsporum canis вне зависимости от вида исследуемого клинического материала и формы заболевания.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе детекции Microsporum canis, включающем выделение тотальной нативной ДНК из клинического материала, представляющего образец кожи, проведение полимеразной цепной реакции, согласно изобретению в качестве клинического материала дополнительно используют волосы, проводят специфическую амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Microsporum canis с использованием праймеров следующей структуры:

5' TGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAA 3',

5' GGTCCTGGAGGCGATGGTATGTC 3' и при электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. определяют наличие возбудителя.

Предлагаемый способ детекции Microsporum canis осуществляется следующим образом. Из клинического материала (частички кожи и волосы) выделяют тотальную нативную ДНК, после чего проводят специфическую амплификацию (ПЦР) фрагмента гена 5.8S рибосомальной РНК (рРНК) Microsporum canis с использованием праймеров следующей структуры:

5' TGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAA 3',

5' GGTCCTGGAGGCGATGGTATGTC 3'.

При электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. констатируют факт присутствия возбудителя в клиническом материале и подтверждают соответствующий диагноз.

ДНК выделяют из клинического материала (частички кожи и волосы). Для обеспечения необходимой степени чистоты ДНК и достаточного ее количества используют методику Boom R. [Boom R., et al. 1990. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids. J.Clin.Microbiol. 28: 495-503]:

1. В пробирку с 300 мкл лизирующего раствора (5М гуанидинтиоционат, 1% Triton X100) вносится 1 грамм исследуемого материала. Проба тщательно перемешивается на вортексе и прогревается 5 мин при температуре 65°C. Центрифугировали 5 сек при 5 тыс.об/мин на микроцентрифуге. Когда проба растворялась не полностью, пробирку центрифугировали на микроцентрифуге 5 мин при 12 тыс.об/мин. Надосадочная жидкость переносится в новую чистую пробирку.

2. Отдельным наконечником в пробирку вносят 25 мкл ресуспендированного сорбента (силикагель, SiO2). Перемешивают на вортексе, ставят в штатив на 2 мин, еще раз перемешивают и оставляют в штативе на 5 мин.

3. Сорбент осаждается центрифугированием при 5 тыс. об/мин в течение 30 сек. Надосадочная жидкость удаляется с использованием вакуумного отсасывателя.

4. Далее в пробирку с сорбентом вносится 300 мкл раствора для отмывки (5М гуанидинтиоционат). Образовавшуюся смесь тщательно ресуспендируют на вортексе.

5. Сорбент осаждается центрифугированием при 5 тыс.об/мин на микроцентрифуге в течение 30 сек. Надосадочная жидкость удаляется, с помощью вакуумного отсасывателя и чистого наконечника.

6. Добавляется 950 мкл отмывочного раствора (70% этиловый спирт). Сорбент ресуспендируют на вортексе, центрифугируют 30 сек при 10 тыс. об/мин на микроцентрифуге. Надосадочную жидкость удаляют, используя вакуумный отсасыватель и чистый наконечник.

7. Пробирку инкубируют при температуре 65°C 5-10 мин для подсушивания сорбента. При этом крышка пробирки должна быть открыта. В пробирку после подсушки добавляется 50 мкл ТЕ-буфера (1 мМ EDTA, 10 мМ TRIS-HCl рН 8.0) для элюции ДНК. Перемешивается на вортексе. Для лучшей элюции пробирка инкубируется в термостате при температуре 65°C в течение 5 мин с периодическим встряхиванием на вортексе.

8. Далее сорбент осаждается центрифугированием при 12 тыс.об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость, содержащая очищенную ДНК, готова к постановке ПЦР.

Раствор ДНК можно хранить при температуре -18°C в течение 6 месяцев.

В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) и амплификации нужного фрагмента гена 5.8S рРНК выявляемого при помощи подобранных нами праймеров следующей структуры:

5' TGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAA 3',

5' GGTCCTGGAGGCGATGGTATGTC 3'.

Амплификацию специфичного фрагмента гена 5.8S рРНК проводят в 30 мкл общего объема смеси, содержащей 1 мкл тотальной ДНК, 3 мкл 10-кратного буфера для Taq-полимеразы, по 1 мкл каждого праймера, 3 мкл dNTP, и 1 мкл Taq-полимеразы.

Режим амплификации следующий: начальная денатурация при 94°C в течение 2 мин; 25 циклов, включая денатурацию при 94°C - 20 сек, отжиг праймеров и синтез ДНК при 64°C - 20 сек.; элонгация при 72°C - 10 сек; терминальная элонгация - 1 мин.

Амплифицированные фрагменты ДНК разделяют электрофоретически в 1% агарозном геле и после окрашивания геля бромидом этидия идентифицируют в ультрафиолетовом свете. В качестве электролита для электрофореза применяют 0,5 X боратный буфер (0,089 М трис-HCl, рН=7,9; 0,089 М борная кислота, 0,002 ЭДТА, рН=8,0).

Электрофорез проводят при постоянном напряжении 100 В. Детекцию результатов проводят путем окрашивания агарозного геля бромистым этидием в течение 10-15 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе. Продукт амплификации размером 182 п.н. обнаруживается в виде светящейся полосы красно-оранжевого цвета.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Больной А., 5 лет, поступил с жалобами на высыпания на волосистой части головы, сопровождающиеся зудом.

Анамнез: Заболевание заметили родители 10 дней назад. Лечился самостоятельно йодом, без улучшения. Заразился от котенка.

Status localis: На коже волосистой части головы на гиперемированном и инфильтрированном фоне имеется крупный очаг размером 6×5,5 см в диаметре, округлой формы, четко отграниченный от здоровой кожи, розовато-красного цвета, покрытый толстым слоем серозно-гнойных чешуек и корок, масса пустул. В пределах пораженного участка волосы обломаны на уровне 5-6 мм.

Результаты лабораторных исследований:

OAK лейкоциты - 6,0×109/л, СОЭ 15 мм/ч.

Микроскопия: Microsporum ectothrix.

Тест с использованием ультрафиолетовой лампы Вуда: голубовато-зеленое свечение обломков волос.

Посев: нет роста.

Результаты ПЦР: в клиническом материале (частички кожи и волосы) методом полимеразной цепной реакции обнаружены и идентифицированы специфичные для Microsporum canis фрагменты гена 5.8S рРНК.

Окончательный диагноз: Микроспория волосистой части головы (1 очаг).

Пример 2.

Больной Т., 16 лет, поступил с жалобами на высыпания на предплечьях, сопровождающиеся зудом.

Анамнез: Болен около 3 недель. Лечился самостоятельно йодом и 3% серной мазью, без улучшения. Заразился от кошки.

Status localis: Процесс поражения локализовался на предплечьях, где имелось 15 очагов, округлой формы, красновато-розового цвета, различной величины со склонностью к слиянию. Кожа очагов умеренно инфильтрирована, отечна, со значительной пустулизацией на поверхности, покрыта гнойными корками.

Результаты лабораторных исследований:

Микроскопия: С гладкой кожи споры не обнаружены. В пушковых волосах мицелий не обнаружен.

Тест с использованием ультрафиолетовой лампы Вуда: свечение отсутствует.

Посев: Microsporum canis.

Результаты ПЦР: в клиническом материале (частички кожи и волосы) методом полимеразной цепной реакции обнаружены и идентифицированы специфичные для Microsporum canis фрагменты гена 5.8S рРНК.

Окончательный диагноз: Распространенная микроспория гладкой кожи предплечий (15 очагов).

Таким образом, предлагаемый способ специфической детекции Microsporum canis в клиническом материале при различных формах заболевания, в отличие от микроскопического, культурального методов и теста с использованием ультрафиолетовой лампы Вуда позволяет выявлять и идентифицировать мицелий и споры Microsporum canis в доступном клиническом материале при различных формах заболевания (в особенности, при стертых и атипичных формах), что надежно коррелирует с результатами других исследований и, соответственно, обеспечивает единую интерпретацию данных.

Способ детекции Microsporum canis, включающий выделение тотальной нативной ДНК из клинического материала, представляющего образец кожи, проведение полимеразной цепной реакции, отличающийся тем, что в качестве клинического материала дополнительно используют волосы, проводят специфическую амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Microsporum canis с использованием праймеров следующей структуры:
5' TGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAA 3',
5' GGTCCTGGAGGCGATGGTATGTC 3' и при электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. определяют наличие возбудителя.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования эффективности антиэстрогенной терапии тамоксифеном. У пациенток с люминальным типом рака молочной железы проводят иммуногистохимическое исследование ткани опухоли, определяют характер распределения экспрессии рецепторов эстрогенов альфа в ткани опухоли.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде, включающий исследование генетического полиморфизма Fok-I гена VDR и прогнозирование остеопенического синдрома при выявлении генотипов Ff или ff.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения риска развития рака тела матки у женщин с гиперпластическими процессами эндометрия. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят генотипирование гена APOE, выявляют полиморфные аллели APOE*2, APOE*3, APOE*4 и при наличии генотипов, содержащих аллели APOE*2 прогнозируют высокий риск рака эндометрия.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики биполярного аффективного расстройства. Сущность способа состоит в том, что выявляют достоверные различия в спектре распределения белков сыворотки крови без белков альбумина, иммуноглобулина G, иммуноглобулина А, антитрипсина, трансферина и гаплоглобина у больных эндогенным психозом.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике бесплодия женщин. Для этого проводят определение цитотоксичности сыворотки женщин к мужским лимфоцитам, включая их совместное культивирование с контрольной мужской и исследуемой женской сывороткой в лунках 96-луночного планшета в присутствии питательной среды RPMI 1640 в СО2-инкубаторе.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. У пациента определяют возраст, уровень общего гомоцистеина в крови, наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовской мутации G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа, затем рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле.

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии, и касается способа биохимической идентификации высокотоксичных антихолинэстеразных ядов и может быть использовано в чрезвычайных ситуациях (аварии на объектах по уничтожению химического оружия) для отождествления опасных для человека ядов.
Способ относится к области медицины и может быть использовано для лабораторной диагностики угрозы прерывания беременности. Способ осуществляют путем биохимического исследования крови с дальнейшим определением диагностического индекса по формуле: D=X1×K1+X2×K2+X3×K3+X4×K4+const, где значения X соответствуют биохимическим параметрам: X1 - концентрация церулоплазмина, г/л; Х2 - концентрация креатинина, мкмоль/л; Х3 - концентрация общего белка, г/л; Х4 - концентрация альбумина, г/л; K1, K2, K3; K4 - коэффициенты: K1=10,4, K2=-0,04, K3=-0,10, K4=0,26, const=-6,84.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики нейродегенеративного заболевания у индивидуума, включающего стадии (i) определения одного или нескольких параметров, выбранных из группы, состоящей из 3ab40 или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 и 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42; (ii) сравнения величины параметра с эталонной величиной, соответствующей величине указанного параметра в эталонном образце; и (iii) диагностики нейродегенеративного заболевания, в случае, если наблюдается увеличение величины параметра по сравнению с эталонной величиной.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования развития приобретенной близорукости у школьников. Сущность способа состоит в том, что измеряют концентрации гемоглобина крови у школьников 6-8 лет и определяют дефицит гемоглобина по разности между оптимальным значением концентрации гемоглобина для данного возраста и фактической концентрацией гемоглобина у ребенка.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выделения коротких РНК из биологических жидкостей.

Представленное изобретение относится к области биотехнологии и касается способа обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованный способ включает выявление фрагмента LTR (Long Terminal Repeat) - последовательности провируса лейкоза.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ обнаружения присутствия или отсутствия нескольких серотипов вируса папилломы человека (ВПЧ) в биологическом образце с помощью многоканальной системы анализа, где указанная система анализа обнаруживает большее количество серотипов, чем существует каналов обнаружения.

Изобретения относятся к области ДНК-генеалогии и касаются способа определения гаплогрупп Y-хромосомы человека, тест-системы и олигонулкотидных праймеров. Охарактеризованный способ осуществляют в два этапа.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения риска развития рака тела матки у женщин с гиперпластическими процессами эндометрия. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят генотипирование гена APOE, выявляют полиморфные аллели APOE*2, APOE*3, APOE*4 и при наличии генотипов, содержащих аллели APOE*2 прогнозируют высокий риск рака эндометрия.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития профессиональных гиперкератозов. Сущность способа состоит в том, что выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, проводят генотипирование полиморфизма rs1625895 гена ТР53 методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, молекулярной биологии и биотехнологии. Предложен способ определения чувствительности клеток рака легкого к цисплатину, включающий определение уровня экспрессии генов MLH1, ERCC1, DDB2, AKR1B1, FTL в зависимости от IC50 цисплатина для известных клеточных линий, построение градуировочной прямой зависимости IC50 цисплатина для этих клеточных линий от полученного уровня экспрессии указанных генов и гибридизацию на микрочипе.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу идентификации изменений в экспрессии генов, характерных для старения, в выбранной ткани. Выбранная ткань представляет собой сердечную, мышечную, мозговую или жировую ткань.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в диагностике кардиомиопатий различной природы. Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для выявления мутаций кодирующей части гена десмина (DES), ассоциированных с кардиомиопатиями.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к ингибиторам сигнального пути AXL, и может быть использовано в медицине. Получают растворимый вариант полипептида AXL без трансмембранного домена AXL, который содержит по меньшей мере одну модификацию аминокислоты в положении номер n, где n выбран из 32, 72, 87, 92 или 127 или их сочетание, где n+7 соответствует нумерации SEQ ID NO: 1 - последовательности AXL дикого типа, в котором указанная модификация повышает сродство связывания полипептида AXL со специфически задерживающим рост белком 6 (GAS6), которое, по меньшей мере, примерно в 2 раза сильнее, чем сродство полипептида AXL дикого типа.

Настоящее изобретение предоставляет способ предсказания ответа трижды негативного рака молочной железы на терапию противоопухолевым средством. Способ включает: (a) лизирование опухолевых клеток, взятых от трижды негативной опухоли молочной железы, для получения клеточного экстракта; (b) определение уровня экспрессии VEGFR2 в клеточном экстракте; и (c) сравнение уровня экспрессии VEGFR2 в клеточном экстракте, полученном на стадии (b), с эталонным уровнем экспрессии VEGFR2. Наличие низкого уровня экспрессии VEGFR2 предсказывает ответ на терапию противоопухолевым средством, где противоопухолевое средство представляет собой комбинацию бевацизумаба (Авастин®), карбоплатина и паклитакселя. 15 з.п. ф-лы, 14 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для детекции гриба Microsporum canis. Осуществляют выделение тотальной нативной ДНК из образца кожи и волос, проводят полимеразную цепную реакцию и амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Microsporum canis с использованием специфических праймеров. При электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. определяют наличие возбудителя. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию Microsporum canis в клиническом материале и может быть использовано для диагностики микроспории. 2 пр.

Наверх