Способ диагностики сахарного диабета путем определения активности эритроцитарной cu,zn-супероксиддисмутазы



Способ диагностики сахарного диабета путем определения активности эритроцитарной cu,zn-супероксиддисмутазы
Способ диагностики сахарного диабета путем определения активности эритроцитарной cu,zn-супероксиддисмутазы

 


Владельцы патента RU 2569750:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения России (ФГБУ "РКНПК" МЗ РФ) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования. Изобретение представляет способ диагностики сахарного диабета II типа, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что у пациентов при наличии гликемии определяют активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы и при значении менее 1402 единиц/грамм гемоглобина судят о наличии сахарного диабета II типа. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и точности диагностики сахарного диабета. 2 ил, 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования.

Развитие сахарного диабета сопровождается нарушениями углеводного обмена вследствие развития гипоинсулинемии и резкого увеличения содержания глюкозы в плазме крови (гипергликемия). Около 10-15% глюкозы в плазме крови присутствует не в циклизованной форме, а в виде енольной формы, включающей свободные альдегидные группы. Альдегиды легко реагируют с аминогруппами с образованием прочной ковалентной связи, вследствие чего может происходить альдегид-опосредованная модификация белков, в частности глюкоза способна присоединяться к молекулам гемоглобина и вызывать их модификацию с образованием так называемого гликозилированного гемоглобина.

В настоящее время в клинике широко используются способы диагностики и мониторинга сахарного диабета путем оценки содержания гликозилированного гемоглобина в образце, в частности один из запатентованных способов включает стадии: (а) гемолиза образца с целью высвобождения клеточного гемоглобина; (b) контактирования гемоглобина, выделенного из указанного образца согласно стадии (с), описанной ниже, с помощью сигналобразующих молекул, включающих конъюгат из одного или более дигидроксиборильных остатков или их солей, связанных с сигналобразующей меткой; (с) выделения гликозилированного и негликозилированного гемоглобина и любых связанных с ним молекул из образца и их определение электрофоретическим методом.

(Патент РФ №2111494, МПК G01N 33/66, опубл. 20.05.1998 г.)

Недостатком данного способа является сложность проведения исследования и использование дорогостоящего оборудования, кроме того, образцы крови для исследования данным способом не могут храниться длительное время в замороженном виде.

Кроме того, способов определения содержания гликозилированного гемоглобина для диагностики сахарного диабета в настоящее время существует достаточно много, но все они имеют определенные недостатки:

- высокоэффективная жидкостная хроматография - недостатком данного способа является необходимость приобретения специализированного дорогостоящего оборудования (хроматограф, детектор и т.п.), значительная зависимость от температуры, необходимость удаления лабильного HbA1C, чтобы результаты не были завышены;

- миниколоночная ионообменная хроматография - значительная зависимость метода от температуры и завышение результатов, если до исследования не удален лабильный HbA1;

- миниколоночная аффинная хроматография - определение только общего GHb;

- электрофорез - необходим дорогостоящий прибор - денситометр, агарозные гели и реактивы для электрофоретической системы;

- иммунохимические методы - возможность автоматизации анализа, быстрое получение результатов, специфичность делают этот метод весьма привлекательным, но весьма дорогостоящим.

Задачей изобретения является создание альтернативного и эффективного способа диагностики сахарного диабета путем определения активности эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы (Cu,Zn-СОД), устраняющего все недостатки при проведении определения содержания гликозилированного гемоглобина.

Технический результат изобретения заключается в повышении эффективности и точности диагностики сахарного диабета, простоты и быстроты осуществления анализов, степени сохранности образцов для исследования (возможно низкотемпературное хранение в течение 3-6 месяцев), а также возможность автоматизации определений.

Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики сахарного диабета II типа, включающем биохимическое исследование крови, согласно изобретению у пациентов при наличии гипергликемии определяют активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы и при значении менее 1402 единиц/грамм гемоглобина судят о наличии сахарного диабета II типа.

Помимо прямого присоединения глюкозы к молекулам белка - процесса гликозилирования, возможно также глиоксилирование, связанное с окислительными превращениями глюкозы. В результате подобных процессов могут образовываться низкомолекулярные альдегиды (дикарбонилы), такие как метилглиоксаль, образующийся при трансформации триозофосфатов, и глиоксаль, образующийся при автоокислении глюкозы.

Было определено, что активность эритроцитарной Cu,Zn-СОД у больных сахарным диабетом 2 типа существенно снижается. Снижение активности Cu,Zn-СОД в крови больных сахарным диабетом может быть связано с взаимодействием молекул фермента с низкомолекулярными альдегидами, образующимися при окислительных превращениях глюкозы, что вызывает ингибирование активности фермента. Доказательством этого являются проведенные эксперименты, в которых инкубация эритроцитов в среде, содержащей глиоксаль и метилглиоксаль, приводит к ингибированию внутриэритроцитарной Cu,Zn-СОД человека.

Из этого следует, что низкомолекулярные альдегиды легко проникают через клеточную мембрану и могут вызывать модификацию ферментов, сопровождающуюся подавлением активности. На фиг. 1 показано влияние метилглиоксаля и глиоксаля на активность внутриэритроцитарной Cu,Zn-СОД (эритроциты человека инкубировали в присутствии 10 мМ глиоксаля или метилглиоксаля, после чего измеряли активность эритроцитарной Cu,Zn-СОД).

В проведенных клинических исследованиях было установлено, что при сахароснижающей терапии больных сахарным диабетом типа 2 с высоким уровнем гликозилированного гемоглобина одновременно с компенсацией нарушений углеводного обмена происходит увеличение активности эритроцитарной Cu,Zn-СОД.

Из этого следует, что активность эритроцитарной Cu,Zn-СОД должна отражать уровень нарушений углеводного обмена. Полученные данные свидетельствуют о том, что активность этого фермента в эритроцитах больных сахарным диабетом типа 2 находится в обратной корреляции (r=-0,652; p<0,0001) с уровнем гликозилированного гемоглобина. На фиг. 2 показана корреляция между активностью эритроцитарной Cu,Zn-СОД и уровнем гликозилированного гемоглобина у обследованных пациентов.

Следует отметить, что еще одним достоинством это способа является тот факт, что образцы крови для исследования могут достаточно длительное время храниться в замороженном виде, что исключено при имеющихся способах определения уровня гликозилированного гемоглобина.

Осуществление способа.

Активность Cu,Zn-СОД измеряют согласно общепринятому методу по ингибированию восстановления синего нитротетразолия супероксидным радикалом, генерируемым в системе ксантин-ксантиноксидаза, определяя кинетику образования формазана на регистрирующем спектрофотометре или химическом анализаторе в кинетическом режиме при 560 нм. За единицу активности Cu,Zn-СОД принимают количество фермента, необходимое для 50% подавления восстановления синего тетразолия в условиях определения.

Нормальные значения эритроцитарной Cu,Zn-СОД 1402-1800 единиц/грамм гемоглобина.

Пациенту определяют активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы.

При значении менее 1402 единиц/грамм гемоглобина у пациента диагностируют сахарный диабет.

Клинический пример 1:

Пациент С., 51 год, 03.05.2012 г. доставлен больницей скорой медицинской помощи в городскую клиническую больницу №67 им. Л.А. Ворохобова с жалобами на сухость во рту, жажду. В течение последних 6-ти месяцев отметил уменьшение массы тела на 12 кг. При поступлении в стационар зафиксирована гипергликемия 24,6 ммоль/л.

При поступлении активность эритроцитарной Cu,Zn- составила супероксиддисмутазы 955 единиц/грамм гемоглобина.

Для контроля был определен уровень гликозилированного гемоглобина, который составил 11,68%.

На основании клинических, анамнестических и лабораторных методов исследования больному был поставлен диагноз: впервые выявленный сахарный диабет типа 2.

Сразу после постановки диагноза пациенту начато проведение инсулинотерапии в интенсивном режиме с последующим переводом на прием пероральных сахароснижающих препаратов.

При контрольном обследовании 14.08.2012 г.: уровень гликозилированного гемоглобина 7,12%, активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы 1324 единиц/грамм гемоглобина.

Клинический пример 2:

Пациентка Ч., 47 лет, 12.05.2012 г., доставлена больницей скорой медицинской помощи в городскую клиническую больницу №67 им. Л.А. Ворохобова с жалобами на сухость во рту, жажду. Вышеуказанные жалобы беспокоили в течение последнего месяца, за который пациентка отметила уменьшение массы тела на 15 кг. Обратилась к эндокринологу поликлиники, зафиксирована гипергликемия 18,7 ммоль/л, направлена на госпитализацию.

При поступлении активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы 887 единиц/грамм гемоглобина.

Для контроля определили уровень гликозилированного гемоглобина, который составил 10,45%.

На основании клинических, анамнестических и лабораторных методов исследования больной был поставлен диагноз: впервые выявленный сахарный диабет типа 2.

Сразу после постановки диагноза начато проведение инсулинотерапии в интенсивном режиме с последующим переводом на прием пероральных сахароснижающих препаратов.

При контрольном обследовании 16.08.2012 г. уровень гликозилированного гемоглобина составил 6,93%, активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы 1289 единиц/грамм гемоглобина.

Клинический пример 3:

Пациентка Ш., 54 года, 04.07.2012 г. доставлена больницей скорой медицинской помощи в городскую клиническую больницу №67 им. Л.А. Ворохобова с жалобами на сухость во рту, жажду, уменьшение веса на 4 кг за последний месяц, повышение уровня гликемии до 20 ммоль/л. Из анамнеза известно, что пациентка страдает сахарным диабетом типа 2 в течение 12 лет. Амбулаторно зафиксировано развитие диабетической полинейропатии. Пациентка получает комбинированную сахароснижающую терапию: пероральные сахароснижающие препараты из групп сульфонилмочевины и бигуанидов, а также инъекции инсулина средней продолжительности действия дважды в день. На этом фоне уровень гликемии колебался от 9 до 16 ммоль/л, активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы увеличивалась с 754 до 1115 единиц/грамм гемоглобина, содержание гликозилированного гемоглобина снизилось с 12,11 до 8,1%.

Таким образом, определение активности эритроцитарной Cu-Zn СОД может быть альтернативным способом выявления наличия сахарного диабета, а учитывая тот факт, что этот способ значительно более удобен и может быть осуществлен в лабораториях клинической биохимии, не имеющих специального оборудования, применение его является более простым и доступным. Кроме того, современные биохимические лаборатории, имеющие обычные химические анализаторы, могут выполнять определения в полуавтоматическом или автоматическом режиме. Возможно использование стандартных тест-наборов для определения активности супероксиддисмутазы.

Способ диагностики сахарного диабета II типа, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что у пациентов при наличии гликемии определяют активность эритроцитарной Cu,Zn-супероксиддисмутазы и при значении менее 1402 единиц/грамм гемоглобина судят о наличии сахарного диабета II типа.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, а именно к диагностике и реабилитации инсульта, и может быть использовано для объективного прогнозирования восстановления неврологических функций у пациентов после первого полушарного ишемического инсульта в восстановительном периоде.

Группа изобретений относится к сорбентам на основе наноалмазов, которые могут быть использованы для иммобилизации или удаления вирусов, специфических антител, иммуносорбции, в диагностических целях, для дезактивации и удаления вирусов из внешней среды.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов у детей раннего и дошкольного возраста, включающий определение в назальном секрете провоспалительных и проаллергических интерлейкинов, а именно интерлейкина-1-бэта (IL-1beta), интерлейкина-4 (IL-4), рецепторного антагониста интерлейкина-1 (IL-1RA), интерферона-альфа (INF-alpha) и фактора некроза опухоли - альфа (TNF-alpha), отличающийся тем, что увеличение содержания INF-alpha, TNF-alpha и IL-1beta более чем в 2 раза по отношению к нормальным значениям является диагностическим критерием вирусной этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов, а увеличение содержания IL-4 выше 26 нг/мл и IL-1RA выше 1000 нг/мл является диагностическим критерием для инфекционно-аллергической этиологии рецидивирующих острых ринофарингитов и аденоидитов.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования ишемически-геморрагических церебральных осложнений у новорожденных. Сущность способа состоит в том, что в пуповинной крови определяют уровни 6-keto-простагландина F1α (6-KetoPGF-1α) и тромбоксана В2 (ТХВ2) и рассчитывают их соотношение К=6-KetoPGF-1α/TXB2.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогноза неблагоприятных исходов псевдотуберкулезной (ПСТ) инфекции у детей.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в нейрохирургии для прогнозирования направленности патологического процесса у пациентов со зрелыми внемозговыми интракраниальными опухолями.

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития патологических изменений в тканях пародонта и слюнных железах у женщин при эстрогендефицитных состояниях.

Изобретение относится к области биохимии и медицины, в частности к аналитической химии и иммунохимическому анализу, и описывает способ обработки образца сыворотки или плазмы крови.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования риска прерывания беременности в раннем сроке после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов у пациенток с бесплодием трубно-перитонеального генеза.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное антитело и его фрагмент, способные специфически связывать бета-амилоид, охарактеризованные фрагментами последовательностей на основе антитела мыши 8F5, и Fc-областью человеческого IgG1, содержащей аминокислотную замену D265A; а также кодирующая нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, продуцирующие антитело или его фрагмент клетки, способ продуцирования антитела или его фрагмента; композиция, применение антитела и его фрагмента для изготовления лекарственного средства, способ предупреждения, лечения или облегчения эффектов амилоидоза; способ диагностики амилоид-ассоциированных заболеваний или состояний, способ определения степени нагрузки амилоидогенных бляшек и тест-набор для выявления и диагностики амилоид-ассоциированных бляшек.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения трихофитии. В супернатантах культур мононуклеаров до и на 14 день лечения определяют показатели спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами крови твердофазным иммуноферментным анализом. При увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозируют вероятность перехода инфильтративной формы трихофитии в нагноительную. Предлагаемый способ повышает точность диагностики и обеспечивает возможность направленной профилактики неблагоприятного течения заболевания. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, неврологии, инфекционным болезням и может быть использовано для прогнозирования высокого риска развития постгерпетической невралгии. Сущность способа: в сыворотке крови пациента в остром периоде опоясывающего герпеса определяют концентрацию серотонина и при его значении ниже 100 нг/мл прогнозируют высокий риск развития постгерпетической невралгии. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, неврология, нейротравматологии и может быть использовано для прогнозирования риска развития депрессии в отдаленном периоде ушиба головного мозга. Сущность способа: в сыворотке крови больного в течение первых двух суток с момента травмы определяют количественное содержание мозгового нейротрофического фактора. При его значении до 300 пг/мл прогнозируют высокий риск развития, а при значении показателя от 300 пг/мл - низкий риск развития депрессии в отдаленном периоде ушиба головного мозга. Использование способа обеспечивает ускорение и упрощение способа при высокой точности. 4 пр.

Изобретение относится к новым молекулам-ингибиторам JNK, способам получения антител к указанным молекулам-ингибиторам JNK, а также к соответствующим антителам и клеткам, продуцирующим указанные антитела. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 32 ил., 4 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антигенсвязывающей молекуле (АСМ), которая специфически связывает связанный с мембраной человеческий карциноэмбриональный антиген (CEA). Также раскрыты полинуклеотид, кодирующий АСМ, вектор для экспрессии закодированной АСМ, клетка-хозяин для экспрессии АСМ и композиция для лечения рака, для которого характерна аномальная экспрессия CEA. Раскрыты способ индукции клеточного лизиса опухолевой ткани, способ диагностики заболевания, способ увеличения времени выживания, способ индукции регресса опухоли, способ лечения и способ ингибирования опосредуемой CEA клеточной адгезии опухолевой клетки. Изобретение обладает способностью специфически связывать связанный с мембраной человеческий карциноэмбриональный антиген (CEA), что позволяет эффективно лечить заболевания, ассоциированные с экспрессией полипептида CEA. 12 н. и 19 з.п. ф-лы, 16 ил., 11 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, способные связываться с дельта-подобным лигандом 4 (DLL4) человека, в том числе в форме меченого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, конструкции с константным доменом иммуноглобулина, конъюгата с терапевтическим или цитотоксическим средством и в кристаллизованной форме. Кроме того, рассмотрены: изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его фрагмент по изобретению, вектор экспрессии, клетка-хозяин и способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента; а также фармацевтическая композиция для модуляции заболевания или расстройства, способы снижения активности человеческого DLL4 и способ лечения пациента, страдающего расстройством, ассоциированным с негативным воздействием DLL4. Антитело по настоящему изобретению и его антигенсвязывающий фрагмент обладают способностью блокировать передачу сигнала Notch1, что может найти дальнейшее применение в терапии заболеваний, опосредованных повышенной активностью сигнального пути Notch1. 14 н. и 35 з.п. ф-лы, 31 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии, ортопедии и травматологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики новообразований костной ткани. Сущность способа: осуществляют взятие венозной крови и подготовку образцов проб сыворотки крови. Исследуют полученные образцы методом иммуноферментного анализа ИФА на планшетах с определением количественного значения уровня неоптерина NP, фактора некроза опухоли TNF-α, интерлейкина-6 IL-6, фактора роста эндотелия сосудов VEGF, матриксных металлопротеиназ ММР-2 и ММР-9, тканевого ингибитора матриксной металлопротеиназы-1 TIMP-1. Анализируют полученные данные и рассчитывают с их учетом коэффициент К по формуле: При значении К≤15,8 диагностируют доброкачественный процесс, при значении К>15,8 - злокачественный процесс. Использование данного способа позволяет повысить специфичность и информативность диагностики новообразований костной ткани с возможностью определения характера опухоли малоинвазивным методом на дооперационном этапе для оптимизации тактики ведения пациента с обеспечением внесения корректировок в технологию проведения хирургического вмешательства и распределения его в специализированное лечебное учреждением с учетом уровня сложности выполнения планируемых манипуляций. 2 пр.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено поликлональное или моноклональное антитело, которое специфически связывает эпитоп, состоящий из пептида TKSLDKGYNK нейротоксина Clostridium, и получено путем применения олигопептида с упомянутым эпитопом. Раскрыт способ получения антитела, специфичного к протеолитически непроцессированному и/или частично процессированному ботулиническому нейротоксину типа А. Поликлональную антисыворотку, полученную иммунизацией иммуногеном TKSLDKGYNKА, смешивают с указанным пептидом. Удаляют образовавшийся комплекс пептида и антитела из антисыворотки. Отделяют антитело из указанного комплекса. Описано поликлональное антитело, полученное указанным способом, образующее комплекс с TKSLDKGYNKА. Предложено применение антител для отделения или обнаружения протеолитически частично процессированного и/или непроцессированного полипептида. Описан способ получения протеолитически процессированного полипептида ботулинического нейротоксина типа А. Раствор со смесью протеолитически процессированного, частично процессированного и/или непроцессированного полипептида ботулинического нейротоксина типа А смешивают с антителом с образованием комплексов антитела с протеолитически частично процессированным и/или непроцессированным полипептидом. Удаляют образовавшийся комплекс полипептида и антитела из раствора. Раскрыт способ получения лекарственного средства, в котором используют способ получения протеолитически процессированного полипептида ботулинического нейротоксина типа А с последующим формированием упомянутого раствора в качестве лекарственного средства. Использование изобретения обеспечивает отделение протеолитически частично процессированного и/или непроцессированного полипептида ботулинического нейротоксина типа А, что может найти применение в получении лекарственных композиций ботулинического нейротоксина типа А. 7 н. и 9 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области биохимии. Предложены способы скрининга антитела IgG, обладающего повышенной способностью элиминировать антиген в плазме, основанные на отборе IgG, антигенсвязывающая активность которого при рН от 6,7 до 10,0 выше антигенсвязывающей активности при рН от 4,0 до 6,5. Антитела IgG, обладающие более слабой антигенсвязывающей активностью при рН внутри ранних эндосом, чем при рН в плазме, способны к многократному связыванию с антигеном, имеют длительный период полужизни в плазме и увеличенные продолжительности периода времени, в течение которого они могут связываться с антигеном. Таким образом, антитела IgG, полученные способами по данному изобретению, обладают улучшенной фармакокинетикой и увеличенным числом раз связывания с антигеном in vivo. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 29 ил., 17 табл., 18 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и предназначено для прогнозирования исходов стандартной противовирусной терапии хронического гепатита В. Для этого у пациента определяют в крови концентрацию α-интерферона сывороточного и α-интерферона индуцированного. Выполняют эхографию селезенки, измеряя величину ее сечения. Вычисляют значение дискриминантной функции по формуле: DF=5,3769x1-0,8186x2-0,4369x3, где DF - значение дискриминантной функции; x1 - сечение селезенки, мм; x2 - концентрация α-интерферона сывороточного, МЕ/мл; x3 - концентрация α-интерферона индуцированного, МЕ/мл. Значения 5,3769; - 0,8186; и - 0,4369 - коэффициенты дискриминантной функции. Полученное значение дискриминантной функции сравнивают с константой, равной 296,1005. При значении дискриминантной функции более 296,1005 прогнозируют рецидив, а при значении дискриминантной функции, менее или равной 296,1005, прогнозируют стойкий ответ после стандартной противовирусной терапии хронического гепатита B. Использование данного способа позволяет прогнозировать исходы стандартной противовирусной терапии хронического гепатита B до ее начала, выполняя эхографию селезенки и определяя в крови концентрации α-интерферона. 2 пр.
Наверх