Способ моделирования тромбообразования у мышей для оценки действия препаратов антикоагулянта


 


Владельцы патента RU 2570162:

Общество с ограниченной ответственностью "АптаНова" (RU)

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, в частности к способу моделирования тромбообразования у мышей для изучения эффективности препаратов антикоагулянта. Способ характеризуется тем, что открывают сонную артерию и яремную вену у наркотизированного животного. Под сонную артерию подкладывают изолирующий ее от окружающих тканей материал. Затем вводят препарат антикоагулянта или контрольного раствора в яремную вену. После этого приводят сонную артерию в соприкосновение с тонкой стальной иглой, соединенной с источником постоянного тока с напряжением 3 В. При этом второй электрод вводят подкожно в область бедра животного и пропускают через него ток силой 200-250 микроампер в течение одной минуты. Затем осуществляют под микроскопом видеосъемку, в результате которой отснятый видеоматериал анализируют посредством компьютерной программы для определения размера образовавшегося тромба. Способ обеспечивает приемлемую скорость образования тромба, повышая тем самым эффективность определения тромбообразования у модельных животных с электрически индуцированным тромбозом. 10 з.п. ф-лы

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу моделирования тромбообразования у подопытных животных (например, мышей), и предназначено для использования при изучении эффективности антитромботических аптамеров.

Общие сведения.

В ответ на повреждение сосудов тромбоциты быстро прилипают к ткани стенок сосуда и друг к другу с образованием тромба, который, в сочетании с системой свертывания, позволяет восстановить нормальный кровоток в нарушенном сосуде. Компоненты гемостаза не могут отличить травматических повреждений от поражений, которые происходят в патологических сосудах, например, при разрыве атеросклеротической бляшки. Таким образом, неконтролируемая активация тромбоцитов в пораженных сосудах может привести к артериальной окклюзии и инфаркту жизненно важных органов.

Аптамерные нуклеиновые кислоты (аптамеры) - перспективный класс узнающих элементов, способных избирательно связываться как с низкомолекулярными химическими соединениями, так и с веществами белковой природы. Аптамеры представляют собой рибо- или дезоксирибо-олигонуклеотиды, обладающие конкретной структурой, узнающей вещество-мишень. В случае мишеней-белков аптамеры выступают ингибиторами белок-белковых взаимодействий, предотвращая образование функциональноактивных белок-белковых комплексов.

Предшествующий уровень техники.

В настоящее время значительная часть разработанных аптамеров узнают белки, опосредствующие свертывание крови человека. Т.о. эти аптамеры представляют собой антитромботические препараты. Для исследования функциональной активности антитромботических аптамеров в животных моделях in vivo использовалось несколько подходов, которые можно разбить на два класса: 1) исследование каскада коагуляции в образцах плазмы крови, полученных из животного, инъецированного антитромботическим аптамером; 2) исследование влияния антитромботического аптамера на динамику образования тромба в сосуде животного in vivo.

Первый подход представлен в работе DeAnda et al. (Ann. Thorac. Surg., 1994, v. 58, pp. 344-350). Эксперименты были проведены на беспородных собаках (массой 25-35 кг), анестезированных тиопенталом натрия (25 мг/кг). Собаки были интубированы и подсоединены к системе механической вентиляции легких, далее животных перевели на систему искусственного кровообращения. После этого животным проводили внутривенную инфузию ДНК-аптамера к тромбину последовательности 5′-GGTTGGTGTGGTTGG-3′ со скоростью 0,3-1,5 мг/кг/мин. Инфузию прекращали через 37±3 мин. Через определенные промежутки времени у собак отбирали пробы крови, которые анализировались коагуляционными тестами: тестами протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени, активированного времени свертывания. Помимо этого, эффективность аптамера in vivo определяли качественно по отсутствию крупных сгустков крови в экстракорпоральном контуре кровообращения.

Другая модификация первого подхода представлена в статье Griffin et al. (Gene, 1993, v. 137, pp. 25-31). Макаки-крабоеды (4,2-5,5 кг) были анестезированы 10 мг/кг кетамин-хлоридом. В головную вену был помещен катетер для инфузии аптамера, а в подкожную вену был вставлен катетер для отбора проб крови. После завершения действия анестезии обезьянам вводили ДНК-аптамер к тромбину последовательности 5′-GGTTGGTGTGGTTGG-3′ со скоростью 0,3 мг/кг/мин на протяжении 60 мин. Через определенные промежутки времени у животных отбирали пробы крови, которые анализировались коагуляционным тестом протромбинового времени.

Еще один пример первого подхода продемонстрирован в работе Diener et al., 2007 (международная заявка WO 2007/025049 А2, 01.03.2007). Несколько ДНК-аптамеров к тромбину были введены болюсно в яремную вену крысам породы Sprague-Dawley через канюлю в дозах 1,5-6,4 µмоль/кг. Через определенные промежутки времени с помощью канюли из бедренной вены отбирали пробы крови, которые анализировались коагуляционным тестом активированного времени свертывания. В этой же работе проведены эксперименты на обезьянах. ДНК-аптамеры к тромбину были введены макакам-крабоедам болюсно через катетер в головную вену. С помощью этого же катетера проводился отбор проб крови обезьян через определенные промежутки времени. Пробы были проанализированы коагуляционным тестом активированного времени свертывания. Аналогично проведены и эксперименты болюс + инфузия ДНК-аптамеров к тромбину (скорость ввода аптамера 0,144-2,5 мг/кг/мин).

Итак, первый подход к изучению эффективности антитромботических аптамеров in vivo заключается в исследовании каскада коагуляции в образцах плазмы крови, полученных из животного, инъецированного антитромботическим аптамером. Достоинством этого подхода является простота манипуляций и количественный результат эксперимента, однако данный подход не позволяет оценить эффект антикоагулянта на тромбообразование непосредственно в кровеносном сосуде in vivo. Второй подход, напротив, направлен на решение именно этого вопроса, поскольку он заключается в исследовании влияния антитромботического аптамера на динамику образования тромба в сосуде животного in vivo. Для антитромботических аптамеров известно несколько примеров второго подхода, которые перечислены ниже.

В работах Rusconi et al. (Nat. Biotechnol., 2004, v. 22, n. 11, pp. 1423-1428) и Nimjee et al. (Mol. Then, 2012, v. 20, n. 2, pp. 391-397) описано исследование антитромботической эффективности РНК-аптамера к фактору фон Виллебранда на мышиной модели тромбоза. Мыши были интубированы, в левую яремную вену была вставлена канюля, а к правой общей сонной артерии прикреплен датчик потока. Каждое животное получило болюсную внутривенную дозу 0,5-3 мг/кг РНК-аптамера к фактору фон Виллебранда. Затем к сонной артерии в месте возле датчика потока прикладывали кусочек ватмана (1 мм2), смоченный в 10% растворе хлорида железа, который вызывает образование тромба. Через 5 минут бумагу убирали и регистрировали скорость потока крови в сонной артерии. Среднее время тромбирования сосуда составляло 10 минут в группе животных без введения аптамера и до 60 минут в группе с введением аптамера.

В работе Dieneret al. (J. Thromb. Haemost., 2009, v. 7, pp. 1155-1162) описана модель электрически индуцированного артериального тромбоза макак-крабоедов. Обезьяны были анестезированы, интубированы и переведены на ингаляцию изофурана для поддержания анестезии. В периферическую вену был помещен катетер для ввода антитромботического РНК-аптамера к фактору фон Виллебранда (болюс 0,1-0,6 мг/кг и инфузия 1,0-3,7 мкг/кг/мин), кроме того, бедренная артерия была катетеризирована для наблюдения за кровяным давлением и отбора проб крови. Доплеровский датчик потока был помещен возле сонной артерии возле места вставки внутриартериального электрода и стеноза. Стеноз уменьшал поток крови на 50-60%. Через 15 минут после начала инфузии аптамера производилось повреждение сонной артерии постоянным электрическим током 100 мкА с помощью внутривенного электрода, прикладываемого на 0,5-3 часа до полной окклюзии. Время полной окклюзии измерялось как показатель антитромботической эффективности аптамера.

Для изучения эффективности антикоагулянтов используются и другие модели тромбозов in vivo. Для изучения процесса образования тромба, а также для испытания антитромботического действия лекарственных антикоагулянтов образование тромба индуцируется в ходе эксперимента. Было разработано много различных моделей тромбоза, каждая из которых имеет свои достоинства и недостатки. Модели различаются как по способу индуцирования тромба, так и по способам регистрации последствий его образования, например его размеров или динамики изменения скорости кровотока в исследуемом сосуде. Способы индуцирования состоят, как правило, в повреждающем воздействии на стенку сосуда. Среди них механическое разрушение стенки сосуда, фотоокисление эндотелия с помощью красителя бенгальского розового или эритрозина, перевязка сосуда, окисление и удаление эндотелия со стенки участка сосуда с помощью хлорида железа, повреждение стенки сосуда с помощью лазера. Каждый из этих способов, вероятно, имитирует различные типы патофизиологии тромбоза, который может возникать спонтанно в организме человека.

Наиболее популярные модели тромбоза, используемые для исследования действия антикоагулянтов.

1. Измерение времени кровотечения. Простейшими моделями тромбоза, пригодными для испытаний антикоагулянтов, являются модели с разрезанием сосудов и измерением времени кровотечения до его полной остановки. Эта модель разработана в 1953 году (Hugues, Arch. Int. Physiol., 1953, v. 61, pp. 565-711). В этом исследовании производили рассечение брызжеечных артериол и венул с последующим измерением времени кровотечения. Еще более простым тестом является определение времени кровотечения из кончика обрезанного хвоста крысы или мыши (Dejana et al., Thromb. Haemost., 1982, v. 48, n. 1, pp. 108-11).

2. Использование хлорида железа является часто используемым методом индукции тромбоза. Метод состоит в наложении на сосуд полоски фильтровальной бумаги, смоченной 5-10% раствором FeCl3. Длительность наложения варьирует в зависимости от методов контроля последствий и от вида и размеров сосуда. Этот метод индукции тромбоза в сонной артерии крыс был впервые применен Kurz et al. (Thromb. Res., 1990, v. 60, pp. 269-280). Авторы измеряли время окклюзии - интервал времени от момента наложения FeCl3 до полной остановки кровотока в сонной артерии - посредством мониторинга температуры на сонной артерии дистальнее места наложения FeCl3. Концентрацию FeCl3 варьировали от 5% (время окклюзии 60 минут) до 65% (время окклюзии менее 10 минут). Динамика развития тромбоза может быть прослежена также с помощью ультразвуковой детекции кровотока: Wang et al., Thromb. Res. 2005, v. 115, pp. 95-100; Cooley et al., Thromb. Res., 2007, v. 119, n. 6, pp. 747-751; Hennan et al., J. Thromb. Haemost., 2008, v. 6, n. 9, pp. 1558-1564; Heran et al., Eur. J. Pharmacol., 2000, v. 389, pp. 201-207). В других работах с использованием FeCl3 измеряли объем тромба с помощью серийных срезов сонной артерии, зафиксированной спустя 24 часа после индукции тромба (Farrehi et al., Circulation, 1998, v. 97, pp. 1002-1008), однако этот метод регистрации не годится для исследования действия антикоагулянтов.

3. Метод артериовенозного шунта. Метод, предложенный Петерсом с соавторами (Peters et al., Thromb. Haemost., 1991, v. 65, pp. 268-274) для исследования на крысах, неоднократно применялся с небольшими вариациями для определения активности антикоагулянтов (Mizurini et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2013, v. 436, n. 2, pp. 235-239; Sato et al., Br. J. Pharmacol., 1998, v. 123, n. 1, pp. 92-96; Xiong et al., J. Pharm. Pharmacol., 2009, v. 61, n. 1, pp. 89-94). В яремную вену и сонную артерию вставляют по 8 сантиметровой полиэтиленовой канюле. Канюли соединены между собой изогнутой пластиковой трубкой длиной 6 см и диаметром 3 мм. В трубку вставлена нейлоновая нить диаметром 0,25 мм и длиной 5 см, предварительно поцарапанная скальпелем для большей тромбогенности. Экстракорпоральная циркуляция продолжается 15 минут. Далее шунт удаляют, нейлоновую нить вместе с прилипшим тромбом взвешивают (Berry et al., Br. J. Pharmacol., 1994, v. 113, n. 4, pp. 1209-1214). Следует отметить, что для успешного применения этой модели перед началом эксперимента часто необходимо заполнять канюли и шунт физраствором или даже гепарином, что может влиять на результат (Mizurini et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2013, v. 436, n. 2, pp. 235-239).

4. Индукция венозного тромбоза посредством стазиса.

Для венозного тромбоза применяют также метод Весслера, адаптированный для применения на крысах (Freund et al., Thrombos. Haemostas., 1990, v. 63, pp. 187-192). В этой модели тромб индуцируют с помощью внутривенной инъекции тромбопластина (20 микрограмм на кг) с последующим 15 минутным стазисом 1 см отрезка нижней полой вены 10 с после инъекции тромбопластина. Стазис осуществляли с помощью лигатуры и микрозажима с образованием венозного мешка. Сразу после окончания стазиса вену вырезают, тромб выделяют и взвешивают. Исследуемое вещество вводят или болюсно за 5 минут до инъекции тромбопластина, или посредством непрерывной инфузии начиная за 30 минут до инъекции тромбопластина в течение всего эксперимента (45 минут) (Berry et al., Br. J. Pharmacol., 1994, v. 113, n. 4, pp. 1209-1214; Perzborn et al., J. Thromb. Haemost., 2005, v. 3, n. 3, pp. 514-521). В некоторых случаях эксперименты со стенозисом нижней полой вены проводили без предварительного введения тромбопластина (Kaptanoglu et al., Eur. J. Pharmacol., 2008, v. 578, pp. 238-241).

5. Артериальный тромбоз с помощью механического повреждения. Тромбоз в дорзальной аорте крыс получают с помощью механического сдавления (ущемления - pinching) аорты посредством модифицированного зажима Spencer-Wells в течение 1 минуты. За 24 часа до начала эксперимента крысам вводили Индиум 111 меченые тромбоциты, а за 10 минут до начала эксперимента йод 125 меченый фибриноген. Через 45 минут артерию вынимали, промывали в 5% цитрате натрия и регистрировали интенсивность излучения в гамма-диапазоне. Исследуемое вещество вводили за 1 минуту до зажима артерии внутривенно болюсно или за час до зажима подкожно (Brundish et al., J. Med. Chem., 1999, v. 42, n. 22, pp. 4584-4603).

6. Комбинация воздействия света и введения флуоресцентного красителя. Rosenblum и El-Sabban в 1977 году (Circ. Res., 1977, v. 40, рр. 320-328) показали, что облучение ультрафиолетовым светом сосудов тонкой оболочки головного мозга приводит к образованию тромбоза микрососудов, но только после системного введения флуоресцеина. Образование тромба тормозилось введением аспирина, но не изменялось под воздействием гепарина. Позднее было показано, что к тому же результату приводит облучение зеленым светом после предварительного введения Бенгальского розового или эритрозина. Механизм фототоксичности опосредуется выделением реактивного кислорода - синглетного кислорода - генерируемого при возбуждении флюорохрома (Valenzeno, Photochem. Photobiol., 1987, v. 46, pp. 147-160). Индуцируемые таким образом тромбы состоят преимущественно из тромбоцитов и содержат лишь очень небольшое количество фибрина (Rosenblum and Sabban, Circ. Res., 1977, v. 40, рр. 320-328). Существующие межвидовые различия и различия между сосудистыми системами следует учитывать при планировании экспериментов с использованием этой модели тромбоза.

7. Электрическая индукция тромбоза также часто используется для изучения действия актикоагулянтов. Этот метод был разработан в 1973 году для индукции тромба в сонной артерии (Hladovec, Thromb. Diath. Haemorrh., 1973, v. 29, p. 407-410). Постоянный ток подводили к поверхности сонной артерии с помощью стального электрода. Образование тромба определяли по резкому падению температуры, которую измеряли с помощью термистора. Таким образом определяли время окклюзии. Согласно модификации Гуарини к сонной артерии подводится ток с помощью двух электродов, закрепленных на специальном держателе, закрепленном под сосудом (Guarini, J. Pharmacol. Toxicol. Methods, 1996, v. 35, pp. 101-105). Ток силой 2 миллиампера пропускали в течение 5 минут. Падение тока вследствие поляризации электродов компенсировали с помощью потенциометра вручную. Во время пропускания тока на артерию накладывали гемостатический зажим. Интенсивность кровотока оценивали с помощью ультразвукового измерителя кровотока, определяющего скорость кровотока по эффекту Допплера. Мониторинг кровотока продолжали 45-120 минут после индукции тромбоза. Впоследствии этот метод применяли неоднократно для испытания действия антикоагулянтов in vivo (Berry et al., Br. J. Pharmacol., 1994, v. 113, n. 4, pp. 1209-1214; Berry etal., Br. J. Pharmacol., 1998, v. 125, n. 1, pp. 29-34).

Электрическую индукцию тромбоза применяют и в модели венозного тромбоза. Так, тромбоз нижней полой вены получают с помощью пропускания тока силой 250 микроампер в течение 15 минут после хирургической операции по вскрытию брюшной полости. Далее животное зашивали и через 2 суток взвешивали тромб, образовавшийся в нижней полой вене (Diaz et al., J. Vis. Exp., 2011, v. 53, p.e 2737). Однако такая длительная экспозиция не годится для испытания антитромботических медикаментов.

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ моделирования тромбоза, который включает воздействие электрическим током на кровеносный сосуд. На стенку кровеносного сосуда уха кролика в течение 2-5 с воздействуют переменным электрическим током плотностью мощности 8,5×10-5 - 5,2×10-4 Вт/мкм2 поверхности электрода, проводником которого является микроигла, введенная в просвет сосуда (SU 1345239, 15.10.1987).

Недостатком данного способа является использование в качестве модели достаточно крупного животного, а значит, необходимы значительные количества антикоагулянтов для изучения их антитромботического эффекта и воспроизводимый объективный метод оценки размера тромба. Кроме того, для изучения антитромботического эффекта новых препаратов важнее исследовать гемостаз не периферийных сосудов, а сонной артерии.

Задача, на решение которой направлено предложенное изобретение, заключается в создании способа моделирования тромбообразования, который исключал бы указанные выше недостатки.

Технический результат, достигаемый при реализации данного изобретения, заключается в приемлемой скорости образования тромба у модельных животных, за счет чего повышается эффективность определения тромбообразования у модельных животных с электрически индуцированным тромбозом.

Заявленный технический результат достигается за счет использования в качестве модельных животных лабораторных мышей, а также за счет индукции тромбоза в сонной артерии животного посредством воздействия постоянным током с напряжением 3 вольта и использования видеосъемки сосуда для определения размера тромба.

Способ моделирования тромбообразования у подопытных животных характеризуется тем, что открывают сонную артерию для индукции тромбоза и яремную вену для введения исследуемого образца антикоагулянта или контрольного раствора у наркотизированных животных, под сонную артерию подкладывают изолирующий ее от окружающих тканей материал, затем вводят препарат антикоагулянта или контрольного раствора в яремную вену, после чего приводят сонную артерию в соприкосновение с тонкой стальной иглой, соединенной с источником постоянного тока и выполняющей функцию первого электрода, при этом второй электрод вводят подкожно в область бедра животного и пропускают через него ток силой 200-250 микроампер в течение одной минуты, затем осуществляют под микроскопом видеосъемку, в результате которой отснятый видеоматериал анализируют посредством компьютерной программы для определения размера образовавшегося тромба.

В качестве изолирующего материала может быть использована полоска полиэтилена.

В частности, сонную артерию приводят в соприкосновение с тонкой стальной иглой через 1 минуту после введения антикоагулянта или контрольного раствора, при этом сонную артерию приводят в соприкосновение с тонкой стальной иглой под контролем стереомикроскопа. В качестве тонкой стальной иглы может быть использована инъекционная игла туберкулинового шприца.

Кроме этого, источник постоянного тока имеет напряжение 3 вольта, что обеспечивает образование тромба с приемлемой скоростью - несколько минут; в качестве антикоагулянта используют аптамер или бивалирудин, а в качестве контрольного раствора - физиологический раствор, который не обладает антитромботическим действием; видеосъемку производят с помощью цифровой камеры в течение 25 минут, а отснятый видеоматериал анализируют после захвата кадров с 1-минутным интервалом.

Далее отснятый материал анализируют с помощью компьютерной программы, в качестве которой применяют программу "Image Tool", при анализе индуцированный тромб выделяется белым оттенком на фоне окружающей крови и таким образом регистрируют изменение величины индуцированного тромба во времени.

В нашей работе использовали дешевую модификацию метода электрической индукции артериального тромбоза у лабораторных мышей. Для индукции тромбоза у наркотизированных мышей открывали сонную артерию и яремную вену. Под сонную артерию подкладывали полоску полиэтилена, изолирующую ее от окружающих тканей. Через 1 минуту после введения аптамера, бивалирудина (препарат для сравнения) или физиологического раствора (контрольный препарат) под контролем стереомикроскопа тонкую стальную иглу (инъекционная игла туберкулинового шприца) приводили в соприкосновение с сонной артерией. Эта игла соединялась с источником постоянного тока напряжением 3 вольта. Второй электрод вводили подкожно в область бедра. Через электрод пропускали ток силой 200-250 микроампер в течение 1 минуты, после чего мышь переносили на столик микроскопа Olympus и производили видеосъемку с помощью цифровой камеры Nikon D5100. Съемку проводили в течение 25 минут. С тем же увеличением была отснята масштабная линейка. Отснятый цифровой видеоматериал анализировали после захвата кадров с 1-минутным интервалом с помощью программы "Image Tool". Индуцированный тромб хорошо выделялся белым оттенком на фоне красного цвета окружающей крови. Таким образом, удавалось регистрировать изменения величины индуцированного тромба во времени.

1. Способ моделирования тромбообразования у мышей для оценки действия препаратов антикоагулянта, характеризующийся тем, что открывают сонную артерию и яремную вену у наркотизированного животного, под сонную артерию подкладывают изолирующий ее от окружающих тканей материал, затем вводят препарат антикоагулянта или контрольного раствора в яремную вену, после чего приводят сонную артерию в соприкосновение с тонкой стальной иглой, соединенной с источником постоянного тока с напряжением 3 В, при этом второй электрод вводят подкожно в область бедра животного и пропускают через него ток силой 200-250 микроампер в течение одной минуты, затем осуществляют под микроскопом видеосъемку, в результате которой отснятый видеоматериал анализируют посредством компьютерной программы для определения размера образовавшегося тромба.

2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что изолирующий материал представляет собой полоску полиэтилена.

3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что сонную артерию приводят в соприкосновение с тонкой стальной иглой через 1 минуту после введения аптамера и контрольного раствора.

4. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что сонную артерию приводят в соприкосновение с тонкой стальной иглой под контролем стереомикроскопа.

5. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве тонкой стальной иглы используют инъекционную иглу туберкулинового шприца.

6. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве контрольного раствора используют бивалирудин.

7. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что видеосъемку производят с помощью цифровой камеры.

8. Способ по п. 7, характеризующийся тем, что видеосъемку производят в течение 25 минут.

9. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что отснятый видеоматериал анализируют после захвата кадров с 1-минутным интервалом.

10. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что в качестве компьютерной программы применяют программу "Image Tool".

11. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при анализе индуцированный тромб выделяют белым оттенком на фоне окружающей крови и таким образом регистрируют изменение величины индуцированного тромба во времени.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для моделирования пролиферативной витреоретинопатии (ПВР). Для этого в оба глаза кролика осуществляют однократное интравитреальное введение 2000 Ε Интерлейкина 1-b в объеме 0.1 мл.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, результаты которого могут быть использованы в области восстановительной медицины, геронтологии и гериатрии. В эксперименте используют белых беспородных крыс-самок предстарческого возраста, весом 290,7±31,6 г, содержащихся в стандартных условиях вивария.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции при гипоэстрогенемии.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования отграниченного перитонита для изучения патогенеза и тестирования новых средств профилактики и лечения этого заболевания.

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохимии, патофизиологии, неврологии и психиатрии, и касается выявления противосудорожного действия цитиколина.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования кишечного иерсиниоза у мелких животных, для изучения влияния антигенов данного возбудителя на макроорганизм.

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для обучения студентов и врачей-стоматологов. Модель корня зуба выполнена прозрачной и содержит разрушенную коронковую часть и заполненные по всей длине гуттаперчей корневые каналы корня зуба.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной токсикологии, и может быть использовано для моделирования хронического токсического поражения печени.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, токсикологии, и может быть использовано для изучения формирования и прогрессирования изменений печени, возникающих под действием токсико-химических повреждающих факторов.

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии и может быть использовано для лечения, коррекции и профилактики последствий ишемического воздействия на печень в условиях временного ее выключения из кровообращения.

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии. Цирроз печени у кроликов воспроизводят путем подкожного введения тетрахлоруглерода. Измеряют сатурацию в левом, нижнем и правом краях большого сальника. При сатурации 87-97% рассекают большой сальник на 3-6 лоскутов. В каждом лоскуте две сальниковые артерии, анастомозирующие друг с другом. На диафрагмальной поверхности печени, на глубине от 0,5 см до 1,0 см формируют каналы длиной от 7,0 см до 10,0 см на расстоянии 2,0-3,0 см друг от друга. Проводят рассеченные участки большого сальника через печеночную ткань. Способ позволяет осуществить разгрузку портального кровотока при циррозе печени с компенсированным и декомпенсированным синдромом портальной гипертензии за счет образования коллатералей между сосудами печени и большого сальника. 5 ил.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, эндокринной хирургии и онкологии, предназначено для установления возможных вариантов лимфо- и ангиоархитектоники щитовидной железы (ЩЖ) и может быть использовано для экспресс-диагностики вариантов метастазирования и выбора объема резекции при раке ЩЖ. Проводят рентгеноконтрастное исследование ЩЖ методом тиреоидолимфографии путем введения рентгенконтраста в паренхиму левой доли ЩЖ экспериментального животного - крысы породы «RЕХ». В качестве рентгенконтраста вначале вводят 0,2 мл водорастворимого контрастного вещества «Омнипак» и после введения на 1-й, 2-й, 3-й, 5-й, 10-й, 20-й и 40-й мин на тиреограмме оценивают распространение рентгенконтраста. Затем в паренхиму левой доли ЩЖ в качестве рентгенконтраста вводят 0,2 мл жирорастворимого контрастного вещества «Липиодол» и оценивают его распространение на тех же минутах исследования. При этом выделяют четыре варианта распространения используемых рентгенконтрастных веществ на контрлатеральную долю ЩЖ: сангвинический - при распространении только водорастворимого контрастного вещества, что характеризует наличие обособленного лимфооттока и перекрестного типа кровоснабжения долей железы; лимфатический - при распространении только жирорастворимого контрастного вещества, что характеризует наличие перекрестного лимфооттока и обособленного типа кровоснабжения; смешанный - при распространении обоих видов рентгенконтрастных веществ, что характеризует наличие перекрестного лимфооттока и перекрестного типа кровоснабжения; и обособленный - когда ни одно рентгенконтрастное вещество не перешло на контралатеральную долю, что характеризует наличие обособленного лимфооттока и кровоснабжения в каждой доле ЩЖ. Способ позволяет определить вариант междолевых сообщений долей ЩЖ, связи между ее анатомическими долями. 4 ил.

Изобретение относится к медицине, биологии, ветеринарии, фармакологии и касается оценки биосовместимости скаффолдов в эксперименте. Проводят подкожную имплантацию скаффолда в межлопаточную область крысы. При этом перед имплантацией скаффолда крысе в качестве инструментального исследования проводят лазерную допплеровскую флоуметрию микрокровотока (ЛДФ), определяя показатель перфузии. Используя спектральный вейвлет-анализ, нормированные амплитуды эндотелиальных, нейрогенных и миогенных колебаний микрокровотока, принимают полученные результаты за исходный уровень. Имплантируют скаффолд в форме диска диаметром порядка 15 мм, толщиной порядка 0,1 мм. Затем трехкратно на 7, 14, 21 сутки после имплантации проводят ЛДФ микрокровотока кожи над областью имплантации с определением указанных показателей. Анализируют результаты, сравнивая их с показателями исходного уровня. Скаффолд считают биосовместимым, если повышение показателя перфузии сопровождается сдвигом нормированных амплитуд нейрогенных и миогенных колебаний кровотока на 7-е сутки после имплантации и показатели нормированных амплитуд полностью нормализуются к 14-м суткам, а полное восстановление показателя перфузии наблюдается к 21-м суткам после имплантации. Способ обеспечивает динамическую оценку биосовместимости скаффолдов в эксперименте при использовании малого числа лабораторных животных. 3 пр., 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной гинекологии и патофизиологии репродуктивной системы, и может быть использовано для моделирования и последующего изучения женского ановуляторного бесплодия. Моделирование проводят на крысах породы Wistar. Причем используют половозрелых самок крыс с регулярным эстральным циклом в возрасте не менее 120 дней весом 180-210 грамм. Животным однократно в фазу диэструса, подтвержденного цитологическим анализом влагалищных мазков, вводят в носовые ходы 10 мкл раствора (2×10-3 моль) блокатора кисспептинэргических рецепторов - kisspeptin-234 trifluoroacetate salt. Пролангацию ановуляторой фазы подтверждают цитологически. Способ позволяет создать приближенную к физиологическим условиям экспресс - модель женского ановуляторного бесплодия, обладает хорошей воспроизводимостью результатов и возможностью продления сроков эксперимента без вреда для жизни животного неограниченно долго. 1 табл., 5 ил.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно нейрохирургии, патологической анатомии, и может быть использовано для изучения сосудистого спазма при нетравматических субарахноидальных кровоизлияниях. Способ включает введение в затылочную цистерну крысы свежей человеческой венозной крови. Причем перед введением выполняют пункцию или дренирование затылочной цистерны с выведением спинномозговой жидкости. После первого введения крови осуществляют повторное введение крови в затылочную цистерну через время, обеспечивающее постоянное присутствие крови с момента первого введения, необходимое для развития церебрального сосудистого спазма. Способ обеспечивает воспроизведение морфологических изменений интракраниальных сосудов, наиболее близких к таковым у человека, и возможность изучения сосудистой активности препаратов, специфичных к белкам крови человека. 8 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, и может быть использовано для моделирования экспериментального амилоидоза у животных. Для этого проводят введение молодой мыши через день подкожно в течение 30 дней эксперимента белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, при этом в качестве белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, вводят 30% раствор нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке по 0,5 мл. Изобретение обеспечивает образование амилоидных масс преимущественно в печени, селезенке, почках у молодых мышей с целью дальнейшего использования их в экспериментах, например, при апробации способов лечения амилоидоза. 13 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины. В качестве экспериментальных животных используют самок крыс породы Wistar в возрасте не менее 10 месяцев, которым выполняют тотальную паратиреоидэктомию с одномоментной резекцией ткани щитовидной железы вглубь на расстояние 0,1-0,2 мм от капсул околощитовидных желез. На раневую поверхность щитовидной железы наносят медицинский клей «Сульфакрилат». Способ позволяет получить стабильную, стандартизированную со 100% воспроизводимостью модель гипокальциемии при отсутствии летальности экспериментальных животных. 6 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для снижения нейротоксичности изониазида в эксперименте. Для этого в процессе лечения изониазидом дополнительно вводят витамин В6 и таурин в соотношении изониазид:витамин В6:таурин - 200:1,3-3,9:255. Изобретение обеспечивает профилактику и лечение нейротоксических реакций на противотуберкулезные препараты при разработке новых способов лечения туберкулеза в эксперименте. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальному моделированию псориаза, и может найти использование при изучении механизмов патогенеза и разработки лечения этого заболевания. Моделирование псориаза проводят путем перорального выпаивания крыс в течение 21 суток культурой бактерий β-гемолитического стрептококка. Используют взвесь культуры в воде. Содержание бактерий составляет 105-109 КОЕ/мл. Вводят по 1 мл взвеси 1 раз в день. Способ обеспечивает создание адекватной модели псориаза при исключении летальности экспериментальных животных. 6 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине и касается лечения головокружения или укачивания. Для этого проводят выбор на окуляре зон коррекции, определенных как угловые зоны в поле зрения субъекта. Причем зона коррекции включает точку коррекции (i), определяемую двухмерной системой координат. Точка коррекции (i) представляет собой точку в полярной системе координат, включающей полярный угол (Ǿi) и радиальную координату (ri). Полярный угол включает угол против часовой стрелки от горизонтальной линии (HL), соединяющей левый оптический центр (LOC) и правый оптический центр (ROC) субъекта. Радиальная координата включает расстояние до указанной точки от LOC или от ROC. При этом указанная угловая зона включает в себя комбинацию полярных углов 045 из центра левого глаза субъекта и 135 из центра правого глаза субъекта и радиальной координаты 14. Затем располагают на очках корректирующий элемент, представляющий собой метку с определенной геометрической формой в указанной одной или более чем одной зоне коррекции. Указанное расположение включает закрепление, включение или изображение одного или более чем одного корректирующего элемента на очках. Обеспечивают субъекта указанными очками для ношения. Аналогичным образом дополнительно подбирают зоны коррекции для лечения состояний, сопровождающих головокружение или укачивание. Способ обеспечивает коррекцию указанных состояний без применения лекарственных средств. 11 з.п. ф-лы, 4 пр., 4 табл., 10 ил.
Наверх