Способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии высокой степени


 


Владельцы патента RU 2575574:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тюменский государственный нефтегазовый университет" (ТюмГНГУ) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и может быть использовано для диагностики стационарной миопии высокой степени. Для этого при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С. Для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD-маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют. Далее удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы. В полученной суспензии определяют CD-маркеры и при превышении содержания CD49f+, CD49f+HLADR+, CD146+CD54-HLADR+, CD249+, CD45+CD14+HLADR+ клеток и снижения содержания CD45-CD14-CD44+, CD45-CD14-CD44+CD80+, CD207+, CD146+, CD146+CD54+HLADR-, CD146+CD34+ клеток диагностируют стационарную миопию высокой степени. Использование данного способа позволяет с помощью определения субпопуляций клеток теноновой капсулы диагностировать стационарную миопию высокой степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов для определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии высокой степени.

Как показали углубленные клинические исследования последних лет, соединительно-тканные структуры глазного яблока играют ведущую роль в патогенезе практически при всех патологических процессов органа зрения - аномалии развития, дистрофии, новообразования, повреждения и воспаления.

Для прижизненного исследования фиброзной оболочки глазного яблока А. Arciniegas с соавт. (1986), G.R. Bell (1993) и Е.Н. Иомдина (1992) предлагают использовать механико-математическую модель на основе анализа кривых зависимости напряжение-деформация, полученных для образцов изолированной и миопической склеры.

Известен способ оценки биомеханических свойств склеры определения отношения скорости распространения в склере акустических поверхностных волн в середине верхнего века в горизонтальном и вертикальном направлении. При его отрицательном значении прогнозируют прогрессирование течения близорукости (патент RU 2068654 опубл. 10.11.1996).

Недостатком известного способа является низкая информативность, не позволяющая прижизненно оценить морфо-функциональные характеристики соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Известен инструментальный метод, в котором в качестве прогностического критерия используется величина акустической плотности экваториальных отделов склеры, определяемого с помощью ультразвукового В-сканирования плотности экваториальных отделов склеры в стандартизированных условиях (патент RU 2055522, опубл. 10.03.1996).

Данная методика также не обладает достаточными возможностями для доклинической диагностики дистрофических изменений соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Наиболее близким к заявляемому является способ использования в качестве объекта для прижизненного изучения патогенеза прогрессирующей миопии теноновой капсулы глаза - соединительно-тканную оболочку, прилежащую к склере, образцы которой получают во время различных хирургических вмешательств (Иомдина Е.Н., Тарутта Е.П., Игнатьева Н.Ю., Костанян И.А., Минкевич Н.И., Какуев Д.Л., Радченко В.В., Шехтер А.Б., Данилов Н.А., Кварацхелия Н.Г., Чернышева С.Г. Фундаментальные исследования биохимических и ультраструктурных механизмов патогенеза прогрессирующей миопии // Российский офтальмологический журнал. - 2008. - Том 1, №3. - С. 7-12). Изучались образцы теноновой оболочки, взятые во время склероукрепляющих вмешательств с последующим применением комплекса фундаментальных методов - дифференциальной сканирующей калометрии (ДСК), трансмиссонной электронной микроскопии, электрофореза в агарозном геле, вестерн-блот анализа, иммуногистохимии, биохимии.

Недостатком этого метода является трудоемкость, длительность его проведения, односторонность и вследствие этого низкая информативность и точность оценки клеточного состава теноновой капсулы (анализ только фибробластов), что не обеспечивает учета полноты анализа популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и их активационно-пролиферативного потенциала.

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в разработке способа диагностики стационарной миопии высокой степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока, повышающего точность и объективность результатов исследования, универсальность применения и стандартность проводимой оценки.

Указанный результат достигается тем, что в качестве способа прижизненной оценки морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока предлагается метод проточной цитометрии теноновой капсулы. А предлагаемый способ включает в себя использование проточного цитофлюориметра и многоцветного цитометрического анализа, которые дают возможность индентификации популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и определения их активационно-пролиферативных характеристик.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Забор теноновой капсулы производится во время оперативного вмешательства при проведении склероукрепляющих операций. Затем теноновую капсулу помещают в криопробирки 2 мл (Costar) с раствором для замораживания (эмбриональная телячья сыворотка 90% + диметилсульфоксида 10% + криопротектор (90% Fetal Bovine Serum + 10% DMSO)). Замораживание производят в парах жидкого азота до -180°С со скоростью заморозки 1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания). Охлажденные криопробирки с материалом помещают в жидкий азот (t -180°С) в сосуды Дюара (СДС-35М ОАО «НПО ГЕЛИЙМАШ» г. Москва). Для проведения проточной цитометрии замороженный материал подвергают медленной разморозке в парах жидкого азота со скоростью +1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания) для сохранения высокой жизнеспособности клеток.

Размороженный материал переносят в стерильную стеклянную центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%. Затем измельчают клеточные элементы в Medimashine (Becton Dichinson, Cod 79300, maximal volume 1 ml, нож BD medicors) до получения гомогенной клеточной суспензии. Осаждают строму в центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут.

Надосадок, содержащий клетки теноновой капсулы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки. Супернатант удаляют, а к осадку, содержащему клетки теноновой капсулы, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и рессуспендируют. В полученной суспензии определяют фенотип клеток с использованием моноклональных антител (CD) согласно международному протоколу.

Предлагаемый способ апробирован при заборе теноновой капсулы у 5 пациентов с эмметропической рефракцией и у 5 пациентов со стационарной миопией высокой степени. В таблице приведены усредненные результаты содержания популяций и субпопуляций клеток, полученных при исследовании фрагментов теноновой капсулы.

Выбор панели анализируемых CD-маркеров основывался на результатах проведенного аналитического обзора и анализа современной научно-технической, нормативной, методической литературы, затрагивающей раздел структурной организации клеток соединительной ткани организма человека, в частности теноновой капсулы глазного яблока.

Установлено, что тенонова капсула при стационарной миопии высокой степени достоверно отличается от эмметропии следующим содержанием популяции и субпопуляции клеток:

1. Повышенным содержанием кератиноцитов с фенотипами CD49f+ и CD49f+HLADR+, эндотелиальных клеток с фенотипом CD146+CD54-HLADR+, тучных клеток с фенотипом CD249+ и моноцитов (макрофагов) с фенотипом CD45+CD14+HLADR+.

2. Более низким содержанием фибробластов (фиброцитов) с фенотипами CD45-CD14-CD44+ и CD45-CD14-CD44+CD80+, клеток Лангенгарса с фенотипом CD207+, эндотелиальные клетки с фенотипами CD146+, CD146+CD54+HLADR- и CD146+CD34+.

Таким образом, современный метод проточной цитометрии и многоцветный цитометрический анализ позволили одновременно проанализировать коллосальное количество различных клеток теноновой капсулы, локализовать отдельные их группы, классы, популяции, субклассы, субпопуляции и оценить их функциональное состояние с использованием моноклональных антител (CD-маркеров).

В конечном итоге объективность интерпретации полученных результатов анализа содержания популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы позволяет использовать заявленный способ для выявления значимых патогенетических механизмов формирования стационарной миопии высокой степени, в которых активно участвуют соединительно-тканные структуры глаза, а значит разработать более эффективные методы профилактики миопии и добиться более высоких результатов в их лечении.

Заявителю неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, обеспечивающие в совокупности достижение заданного результата, поэтому авторы считают, что заявляемый способ соответствует критериям: новизны, изобретательского уровня и промышленной применимости. Заявляемый способ может найти широкое применение в медицине, офтальмологии, аллергологии и иммунологии, общей и клинической фармакологии.

Способ диагностики стационарной миопии высокой степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока, отличающийся тем, что при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD-маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы, в полученной суспензии определяют CD-маркеры и при превышении содержания CD49f+, CD49f+HLADR+, CD146+CD54-HLADR+, CD249+, CD45+CD14+HLADR+ клеток и снижения содержания CD45-CD14-CD44+, CD45-CD14-CD44+CD80+, CD207+, CD146+, CD146+CD54+HLADR-, CD146+CD34+ клеток диагностируют стационарную миопию высокой степени.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики in vitro повышенной чувствительности к псевдоаллергенам и подбору противоаллергических препаратов. Для этого формируют образцы, содержащие 0,95-1,05×106 лейкоцитов, и доводят их раствором Хенкса до объема 0,69 мл с получением проб крови.
Изобретение касается способа выявления пациента с риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения в режиме, который истощает лимфоциты. Способ включает определение до лечения наличия антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы или микросом щитовидной железы, у пациента.

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Представленный штамм вируса африканской чумы свиней 8-го серотипа, семейства Asfarviridae, род Asfivirus, адаптирован к перевиваемой культуре клеток COS-1 и депонирован в Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №.3096.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики острого лимфобластного лейкоза у пациента, включающий выявление признаков лейкоза, тестирование клеток крови на лейкоз, инкубирование клеток крови фактором, идуцирующим лейкоз, с тем, чтобы индуцировать экспрессию клеточных поверхностных маркеров, которые являются признаком лейкоза, где фактор, индуцирующий лейкоз - это супернатант Aspergillus flavus, EBV-инфицированный CCL87 супернатант, очищенная EBV культура или их комбинации.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Для этого окрашивают исследуемый образец крови моноклональными антителами CD235a (FITC)/ CD59(PE)/CD71 (АРС).

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления нарушения энергетического обмена в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации.

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и предназначено для оценки риска неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных с клиническими проявлениями атеросклероза.

Изобретение относится к области медицины, а более конкретно к медицинской лабораторной диагностике, и описывает способ экспресс-диагностики женского эндокринного бесплодия.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у подростков в возрасте от 14 до 17 лет включительно с помощью измерения соотношения 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 в моче, отличающийся тем, что проводят количественное определение метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона и 16α-гидроксиэстрона в моче in vitro, вычисляют их соотношение и сравнивают полученные значения с установленными нормативами для здоровых сверстниц, при значении 0,71±0,03 диагностируют СПКЯ.

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии, эндокринологии, и может быть использовано для прогнозирования неблагоприятного исхода в течение двенадцати месяцев у больных после эпизода острого коронарного синдрома с сопутствующим сахарным диабетом 2 типа.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу проведения иммунохроматографического анализа. Способ включает регистрацию окрашенных коллоидным маркером специфических комплексов антиген-антитело на поверхности рабочей мембраны. Используют обратимую иммобилизацию иммунореагентов в аналитических зонах рабочей мембраны, для чего иммуноспецифические реагенты конъюгируют с магнитными наноразмерными носителями и удерживают в аналитических зонах наложением магнитного поля, что дает возможность снять ограничения по иммобилизации реагентов на рабочих мембранах и проводить специфическую реакцию вне тест-полоски. Предложенное изобретение позволяет обеспечить наилучшее детектирование и оценку результата, а также повысить чувствительность метода. 2 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени. 2 пр.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для выявления in vitro антитела, обладающего эффекторной функцией. Для этого смешивают естественные клетки-киллеры и опухолевые клетки, добавляют примерно по 104 клеток на 200 мкл в лунки многолуночного планшета. Затем проводят центрифугирование многолуночного планшета и тем самым индукцируют образования трехмерного сфероида. Добавляют каждого из полученных антител в индивидуальную лунку многолуночного планшета и инкубируют в течение промежутка времени, составляющего от примерно 20 до примерно 72 ч. Анализируют клетки в лунках многолуночного планшета с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции и тем самым оценивают эффекторную функцию антитела. Выявляют антитела, обладающие эффекторной функцией, при применении которого обнаружено, что соотношение мертвых к жизнеспособным клеткам превышает 1. Группа изобретений относится также к применению трехмерного сфероида или агрегата, который содержит опухолевые клетки и естественные клетки-киллеры, для оценки эффекторной функции комбинации антител. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии, и касается диагностики клеточного иммунодефицита у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием. Для этого создают экспериментальную модель стронциевого иммунодефицита путем внутрижелудочного введения в течение 45 суток экспериментальному животному водного раствора хлорида стронция преимущественно концентрацией 10 мг/л, из расчета 1 мг/кг веса животного. Затем производят забор у этого животного пробы крови и последующее извлечение селезенки, извлекают иммунокомпетентные клетки из крови и клетки-спленоциты из гомогенизированного материала селезенки и определяют на мембранах указанных клеток уровень экспрессии CD62L+. Рассчитывают критериальный коэффициент экспрессии, равный отношению CD62L+ кровь/CD62L+ селезенка, и при его значении, равном 8 и менее, диагностируют клеточный иммунодефицит у экспериментальных животных в условиях экспозиции стронцием. Способ обеспечивает возможность изучения патогенетических механизмов токсического действия стронция на иммунную систему. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности терапии генитального туберкулеза, включающий контрольные иммунологические обследования, отличающийся тем, что по окончании интенсивной фазы терапии проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса терапии, при этом в случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы противотуберкулезной терапии был выше 7, 8 - только по ИФН-γ с ППД-Л, в случае если оптическая плотность IgM к МБТ была более 0,600 - только по IgM к МБТ, в случае если оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ; при этом по результатам контрольных исследований рекомендуют продление, или коррекцию, или окончание терапии. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности оценки противотуберкулезной терапии. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области методов молекулярно-генетической диагностики в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и касается прогнозирования качества получаемых эмбрионов. Сущность способа: пациентку генотипируют по полиморфным локусам, по результатам генотипирования определяют вероятность получения эмбрионов низкого качества по формуле р=1/(1+е-z), где Z=-2236-0,79*AMHT/G - 20,621*AMHG/G +0,993*FSHRA/G+ 0,364*FSHRG/G - 1,206*LHCGR(935 A>G)A/G + 1,164*LHCGR(935 A>G)A/A + 22,888*LHCGR(872 A>G)A/G + 21,6*LHCGR(872 A>G)A/A. При значениях p больше 0,5 прогнозируют получение эмбрионов низкого качества, а при значениях р меньше 0,5 не прогнозируют получение эмбрионов низкого качества. Изобретение может быть полезным в выборе персонализированной схемы стимуляции суперовуляции, разработке индивидуальной тактики эмбриологического этапа в ходе лечения пациентки методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Генотипирование может служить малоинвазивным, доступным, недорогим тестом, применяемым однократно перед началом проведения программы ВРТ. 1 пр., 1 табл., 1 ил.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ идентификации антитела, которое специфически связывается с интересующим антигеном на клеточной поверхности, предусматривающий иммунизацию животного вектором экспрессии, кодирующим антиген клеточной поверхности; приведение в контакт клеток, содержащих на своей поверхности антитела и выделенных из животного, подвергнутого иммунизации, причем антитела связаны с первой сортируемой меткой, с клетками, экспрессирующими антиген, связанный со второй сортируемой меткой; определение специфического связывания с использованием клеточного сортера по наличию первой и второй сортируемой метки в клеточном комплексе; а также идентификацию участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR), у идентифицированного антитела и прививку CDR на каркасную область акцепторного антитела. Данное изобретение предполагает скрининг антител, специфичных в отношении мембраносвязанных антигенов, что может найти дальнейшее применение в разработке терапевтических и диагностических средств. 3 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115. Штамм обладает высокой инфекционной активностью, накапливается в культурах клеток костного мозга свиней и лейкоцитах свиней в титре 6,0-7,0 lgГАЕ50/см3. Гибель зараженных свиней наступает с признаками острой формы АЧС через 6-8 суток после проявления клинических признаков болезни. Изобретение может быть использовано в качестве референс-штамма при проведении мониторинговых исследований в РФ с новыми изолятами вируса, циркулирующими в популяции кабанов, а также выделенными от домашних свиней. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в крови. Сущность способа заключается в том, что производят отбор пробы крови, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа. При этом подготовку пробы производят путем добавления к ней гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть пробы к 1,6 массовой части гидроксида калия, с последующей отгонкой дистиллята с помощью водяного пара и введением в дистиллят гидроксида калия при соотношении 1 объемная часть дистиллята к 1,6 массовой части гидроксида калия. Далее смесь дистиллята и гидроксида калия помещают в замкнутую систему дозатора равновесного пара, где в изотермических условиях осуществляют термостатирование, преимущественно в течение 20 мин, для установления фазового равновесия. Производят отбор газовой фазы над дистиллятом и вводят ее в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина. Количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики нагноившейся постнекротической псевдокисты поджелудочной железы. Для этого в крови больного определяют активность фагоцитов по уровню экспрессии CD 14+/HLA-DR+ методом проточной цитометрии и статистического ROC-анализа. При содержании CD14+/HLA-DR+ ниже 85% диагностируют нагноившуюся постнекротическую псевдокисту поджелудочной железы. Использование данного способа позволяет диагностировать нагноившуюся постнекротическую псевдокисту поджелудочной железы, что позволяет определять тактику ведения таких больных и осуществлять выбор оперативного вмешательства. 2 пр., 1 табл.
Наверх