Анксиолитическое средство и фармацевтическая композиция анксиолитического действия
Владельцы патента RU 2580311:
Кост Наталья Всеволодовна (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной генетики Российской академии наук (RU)
Ковалев Георгий Иванович (RU)
Липкин Валерий Михайлович (RU)
Богачук Анна Пайзеновна (RU)
Соколов Олег Юрьевич (RU)
Золотарев Юрий Александрович (RU)
Дадаян Александр Карэнович (RU)
Группа изобретений относится к медицине, в частности к разработке и применению нового анксиолитического средства. Предложены применение гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве анксиолитического средства и новый состав анксиолитического средства, содержащий активное вещество в виде указанного гексапептида (2-10 г/л), консервант в виде нипагина (0,95-1,05 г/л), хлорид натрия (10,0 г/л) и вода дистиллированная - остальное. Состав высокоэффективен в низких дозах и прост в применении: используется в виде капель в нос. Предлагаемая фармацевтическая композиция может найти применение в клинической практике для коррекции психических и неврологических расстройств. Противотревожный эффект препарата сопоставим, а по некоторым показателям и превосходит аналогичный эффект препаратов сравнения - диазепама (500 мкг/кг) и гептапептида селанка (300 мкг/кг). 2 н.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к разработке и применению нового анксиолитического средства. Предложено применение гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве анксиолитического средства. Предложен новый состав анксиолитического средства, содержащий: активное вещество в виде указанного гексапептида (2-10 г/л), консервант в виде нипагина (0,95-1,05 г/л), хлорид натрия (10,0 г/л) и вода дистиллированная - остальное. Состав высокоэффективен в низких дозах и прост в применении: используется в виде капель в нос. Предлагаемая фармацевтическая композиция может найти применение в клинической практике для коррекции психических и неврологических расстройств.
Изобретение относится к медицине, а именно к разработке и применению нового анксиолитического средства. Может быть использовано для лечения направленного на повышение мотивационной устойчивости и адекватного адаптивного поведения при психиатрических и неврологических заболеваниях для коррекции страха, тревоги, составляющих патогенетическую основу многих психоэмоциональных расстройств для повышения адаптационных возможностей здорового человека в экстремальных ситуациях.
Актуальность разработки препарата определяется возрастанием стрессовых ситуаций в современной жизни, связанных с техногенными и природными катастрофами, ухудшающейся экологической обстановкой, нестабильностью экономической обстановки в современном обществе и недостаточностью в современной медицине анксиолитиков, не обладающих побочными эффектами.
Известны в качестве анксиолитиков различные транквилизаторы, преимущественно бенздиазепинового ряда, нашедшие широкое применение в клинической практике. Однако они характеризуются большим числом побочных эффектов: седация, миорелаксация, гипно-седативное, снотворное действие, нарушение обучения, феномен отмены и другие.
Новым направлением в области создания эффективных и безопасных лекарственных средств для адекватного купирования страха, тревоги является создание анксиолитиков на основе эндогенных регуляторных пептидов, высокоэффективных и обладающих низкой токсичностью. Известен гексапептид общей формулы (Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2) в качестве нейропротекторного и ноотропного средства, направленного на профилактику и лечение болезни Альцгеймера и ишемического инсульта (заявка на патент Российской Федерации №2014130894. «Пептид, обладающий нейропротекторной и ноотропной активностью, и фармацевтическая композиция на его основе», приоритет от 25.07.2014). Однако возможность использовать его в качестве лекарственного препарата анксиолитического действия неизвестна. Техническим результатом, достигаемым при реализации изобретения, является обнаружение у известного пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, обладающего нейропротекторной и ноотропной активностью, анксиолитической активностью, что определяет возможность его использования в низких дозах в качестве анксиолитического средства в виде удобной для применения лекарственной формы без нежелательных побочных эффектов, характерных для транквилизаторов, с хорошей переносимостью.
Выраженность анксиолитического действия этого нового лекарственного препарата в дозах 100-300 мкг/кг более сопоставима с действием диазепама (0.5 мг/кг), феназепама (0.1 мг/кг), альпразолама (0.2 мг/кг) - любой из которых можно рассматривать в качестве прототипа предлагаемого нового лекарственного препарата. Однако в отличие от вышеперечисленных транквилизаторов, которые рассматриваются в качестве прототипа, увеличение дозы нового лекарственного препарата в 200-500 раз в различных тестах не сопровождается развитием нежелательных побочных эффектов.
Вышеописанный технический результат достигается тем, что известный гексапептид общей формулы: Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, применяется в качестве анксиолитического средства.
В лекарственном составе анксиолитического средства, содержащего активное вещество, хлорид натрия и дистиллированную воду, в качестве активного вещества содержится гексапептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, хлорид натрия и дополнительно консервирующее вещество нипагин при следующем соотношении компонентов, г/л:
Гексапептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 | 2-10 |
Нипагин - 0,95 | 1,05 |
Хлорид натрия | 10 |
Вода дистиллированная | Остальное |
Лекарственной форме присвоено название Анксилит.
Предложенный в качестве анксиолитического средства гексапептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 известен как стимулятор памяти и нейропротектор. Проведенные исследования на различных видах животных показали, что у интактных животных в условиях центрального и системного введения Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 наблюдается улучшение формирования и сохранения долговременной памяти. Эти свойства отличают фармакологическое действие гексапептида от фармакологического действия транквилизаторов, обладающих в качестве побочного действия седативным эффектом и снижением когнитивных функций.
Пример 1. Изучение влияния субхронического системного введения пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 на поведение мышей линий BALB/c неинвазивным методом в тестах «крестообразный лабиринт».
В опытах на мышах была использована модифицированная методика приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ). Установка ПКЛ для мышей представляет собой две взаимопересекающиеся под прямым углом горизонтальные дорожки 45×5 см. Два противоположных отсека имеют непрозрачные вертикальные стенки высотой 30 см. Лабиринт приподнят от пола на 40 см. В месте перекрестья плоскостей находится открытая центральная платформа 5×5 см. Методика ПКЛ основана на врожденном страхе открытого пространства и высоты у грызунов. Сущность метода заключается в анализе соотношения реакции страха животных в незнакомом пространстве и высоты, с одной стороны, и поисковой активности в новой обстановке, с другой. В соответствии с характеристиками для лабораторных мышей и крыс формами поведения реакция страха определяется стремлением животных находиться в закрытых рукавах лабиринта, снижением двигательной активности. Поисковая активность определяется пребыванием животных в открытых рукавах, увеличением двигательной активности. Для исследования предполагаемого анксиолитического эффекта гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 эксперименты проводили на инбредных мышах линии BALB/c, характеризующихся повышенным врожденным уровнем тревожности.
Эксперимент проводили в условиях дневного освещения. В начале тестирования животное помещали в центр лабиринта, головой к открытому рукаву. Фиксировали следующие показатели поведения в ПКЛ в течение 300 с: время нахождения в открытых рукавах; время нахождения в закрытых рукавах; время нахождения на центральной площадке; число заходов в открытые рукава; число заходов в закрытые рукава; число свешиваний с открытых рукавов ПКЛ. В качестве базового критерия анксиолитического действия использовали показатель времени, проведенного в открытых рукавах установки. Число пересечений центральной платформы (сумма заходов в темный и светлый рукава лабиринта) использовали для оценки влияния соединений на двигательную активность мышей. Каждая группа состояла из 16 мышей. Все препараты вводили ежедневно в течение 5 суток. Раствор пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 применяли интраназально в дозах 100 и 300 мкг/кг/день. В качестве препаратов сравнения были выбраны бензодиазепиновый транквилизатор диазепам (0,5 мг/кг/день, внутрибрюшинно), а также препарат пептидной структуры селанк (0,3 мг/кг/день, интраназально).
Установлено, что уже в дозе 100 мкг/кг амидная форма гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 увеличивала время пребывания мышей в открытых рукавах ПКЛ до 233% относительно группы активного контроля (физраствор). В этой дозе анксиолитическая активность Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 была сравнима с аналогичным эффектом для препаратов сравнения - диазепама и селанка, введенным в значительно большей дозе (Рис. 1). Увеличение дозы гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 до 300 мкг/кг сопровождалось существенным возрастанием времени нахождения, более чем в 3 раза (Рис. 1), что свидетельствует о высоком противотревожном эффекте гексапептида. Соответственно этому происходило уменьшение времени нахождения мышей в закрытых рукавах лабиринта (Рис. 2). При этом значимых признаков изменения двигательной активности у животных под влиянием препаратов не отмечалось (Рис. 3). Также был проведен анализ влияния пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 и препаратов сравнения на латентный период первого захода (Рис. 4) и время нахождения на центральной площадке (Рис. 5). Дополнительным подтверждением наличия у дозы 300 мг/кг гексапептида противотревожной (анксиолитической) активности является сопоставимое с селанком и диазепамом увеличение количества свешиваний с открытых рукавов (Рис. 6). Для всех исследованных экспериментов было показано, что в дозе 300 мкг/кг/день исследуемый препарат превосходит анксиолитический эффект препаратов сравнения - диазепама (500 мкг/кг) и гептапептида Селанк (300 мкг/кг). При этом значимых признаков изменения двигательной активности у животных под влиянием пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 не отмечалось.
Пример 2. Изучение влияния хронического системного введения пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, на поведение мышей линий BALB/c в тесте «открытое поле»
Для исследования анксиолитической активности пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в тесте «открытое поле» были использованы мыши-самцы линии Balb/c, полученные из питомника РАН «Пущино» и содержавшиеся в условиях вивария при температуре 20-22°С, световом режиме 12/12 (свет с 7 до 19 часов), пищевом и питьевом режиме adlibitum. После 2 недель акклиматизации к условиям вивария животные были разбиты на 5 групп по 15 в каждой. Первая группа мышей оставалась интактной, мышам второй группы интраназально (и/н) вводили физраствор (ф/р) в объеме 8 мкл, следующие 2 группы получали и/н пептид в дозировке 0.3 и 1.6 мг/кг в том же объеме ф/р, животным последней группы пептид в дозировке 0.3 мг/кг вводили внутрибрюшинно (в/б) в 200 мкл ф/р. Препараты вводили в течение 4 недель ежедневно 5 дней в неделю. В конце 1-й, 2-й и 3-й недели по 5 животных из каждой группы через 30 мин после инъекций тестировали в системе «открытое поле».
«Открытое поле» представляет собой ярко освещенную круглую площадку диаметром 1 м, которая ограничена высокими бортами и разлинована концентрическими окружностями и центральными лучами на сегменты. Периферическими сегментами считаются те, которые находятся около бортов установки, остальные - центральные. Переход животного в новый сегмент засчитывался в том случае, когда оно всеми 4 лапами пересекало его границы. Животных помещали в один из периферических сегментов, засекали время нахождения его в первом сегменте (латентный период), затем в течение 5 мин тестировали количество посещенных периферических и центральных сегментов, количество стоек, а также количество болюсов и уринаций.
Мыши линии Balb/c характеризуются высокой тревожностью. Это выражается в относительно продолжительном латентном периоде при их попадании в новую обстановку, низкой периферической активности, практическом отсутствии выходов в центральные сегменты и стоек, а также повышенном количестве дефекаций и уринаций (соматическая реакция на эмоциональный стресс). Именно такое поведение было характерно для интактных животных на всех 3 неделях тестирования (таблица). На этом фоне процедурные воздействия, сопровождающие и/н введение ф/р, существенно снижают тревожность мышей. На первой неделе это сказывается на достоверном снижении числа дефекаций и уринаций (таблица). При 2-м и 3-м тестировании к этому добавляется снижение латентного периода замирания мышей при попадании в «открытое поле» и увеличении их двигательной активности в периферических сегментах.
Тестирование мышей линии Balb/c в «открытом поле» показало, что хроническое введение исследуемого пептида в дозе, эквивалентной человеческой терапевтической, оказывает анксиолитическое действие. Фармакологически значимый эффект развивается в течение 2-3 недель. Выход животных в центральные сегменты «открытого поля» может рассматриваться как снижение их тревожности, так и как повышение поисковой активности, т.е. увеличение когнитивных функций. По этому параметру достоверный эффект пептида обнаружен после 2 недель и/н введения (р<0.01) и после 3 недель в/б инъекций (р<0.05) (таблица, рис. 6). Причем фармакологическое действие пептида более выражено и наступает быстрее при интраназальном, чем при внутрибрюшинном введении, о чем свидетельствует достоверное (р<0.05) отличие центральной активности мышей, получавших одну и ту же дозу пептида этими двумя способами в течение 3 недель (рис. 7). Результаты исследования в тесте «открытое поле» свидетельствуют о том, что хроническое введение тестируемого препарата на основе пептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 не вызывает изменений во внутренних органах мышей Balb/c в дозе, эквивалентной человеческой терапевтической, с учетом пересчета для данного вида животных и пятикратной терапевтической дозе.
Таким образом, результаты теста «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле» свидетельствуют, что амидная форма гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 обладает анксиолитическими свойствами, наиболее выраженными в дозе 300 мкг/кг/день. При этом противотревожный эффект препарата сопоставим, а по некоторым показателям и превосходит, аналогичный эффект препаратов сравнения - диазепама (500 мкг/кг) и гептапептида селанка (300 мкг/кг). Обнаружение дополнительного вида психотропной активности делает гексапептид Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 перспективным в плане внедрения в клиническую практику для коррекции психических и неврологических расстройств.
1. Применение гексапептида Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2 в качестве анксиолитического средства.
2. Фармацевтическая композиция анксиолитического действия, содержащая активное вещество и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит гептапептид формулы Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, хлорид натрия и дополнительно консервирующее вещество нипагин при следующих соотношениях компонентов, г/л:
Гексапептид указанной формулы | 2-10 |
Нипагин | 0,95-1,05 |
Хлорид натрия | 10,0 |
Дистиллированная вода | Остальное |