Способ определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов по морфологии печени при лечении острой постгеморрагической анемии животных


 


Владельцы патента RU 2586275:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии-МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ-МВА имени К.И. Скрябина) (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов по морфологии печени при лечении острой постгеморрагической анемии. Сущность способа заключается в проведении морфологического системного пошагового анализа гистологических срезов печени по образцам ткани печени после любого варианта традиционной гистологической обработки. Для морфометрического анализа измеряют количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в органе. Чем больше количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени, тем эффективнее лекарственный препарат. Изобретение обеспечивает повышение точности определения эффективности препаратов железа для лечения постгеморрагической анемии.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к патоморфологической диагностике и фармакологии, и может быть использовано для определения эффективности железосодержащих препаратов, применяемых для лечения острой постгеморрагической анемии.

Способ заключается в исследовании микроскопических изменений печени с выявлением экстрамедуллярных очагов кроветворения, количество которых зависит от эффективности препарата.

Кровотечение - одно из самых тяжелых осложнений различных заболеваний и повреждений. Массивная кровопотеря приводит к гиповолемии и несоответствию сниженного объема циркулирующей крови исходной емкости сосудистого русла, что сопровождается нарушением кровоснабжения органов и тканей [1, 2]. После благополучной ликвидации критического состояния животного, организм вынужден восполнить недостаток форменных элементов крови, прежде всего, эритроцитов, что связано с большими затратами различных пластических веществ, необходимых для эритропоэза. Одним из таких веществ является микроэлемент железо. В связи с этим возникает необходимость восполнения недостатка железа в организме [1, 3].

Однако в связи с тяжестью и остротой процесса многие железосодержащие препараты могут оказаться недостаточно действенными, в связи с чем возникает необходимость определения их эффективности.

Известен способ оценки эффективности лечения больных железодефицитной анемией, включающий исследования крови, которое проводят до начала курса лечения и через 56 дней после начала курса лечения, при этом регистрируют уровень ее хемилюминесценции в течение 5 мин, рассчитывают светосумму свечения, и при снижении показателя светосуммы свечения на 30% и более от показателя светосуммы, полученного до начала лечения, оценивают проводимое лечение как эффективное, а при значении менее 30% как неэффективное (заявка №95121929/14 от 26.12.1995, опубл. 10.04.1998). Недостатком этого способа является определение эффективности лечения только при железодефицитной анемии, но не при острой постгеморрагической анемии, которая отличается по механизму развития и течению. Кроме того, данный способ позволяет оценить лишь усвояемость того или иного препарата, не учитывая влияние его на процессы кроветворения.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ оценки морфологических изменений ткани печени при острой ишемии, включающий ее микроскопическое исследование с последующим проведением балльной оценки выраженности морфологических изменений (заявка №96116551/14 от 13.08.1996, опубл. 10.11.1998). Однако данный способ предназначен для оценки тканей печени только при ишемии, поэтому использование его для определения эффективности железосодержащих препаратов совершенно неинформативно, так как он не учитывает влияние железосодержащих препаратов на ткань печени. Также к недостаткам способа относится трудоемкость в подсчете баллов, что связано с большим количеством изучаемых параметров.

В предлагаемом нами способе диагностики используются наиболее объективные гистологические и морфометрические методы исследования, позволяющие наиболее точно определить эффективность гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Для определения эффективности железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии нами был выбран наиболее информативный морфологический критерий, указывающий на усиления кроветворения в организме - количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени. В заявленном способе учитывается влияние острой кровопотери на развитие компенсаторно-приспособительных процессов в органах, которые, прежде всего, характеризуются появлением кроветворной ткани в некоторых органах, включая печень.

Задачей изобретения является создание способа определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Целью изобретения является создание объективного метода определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов, предназначенных для лечения острой постгеморрагической анемии.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение точности и упрощение определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Указанный технический результат достигается путем введения железодекстранового препарата животным в терапевтической дозе и проведение морфологического системного последовательного анализа гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерение количества экстрамедуллярных очагов кроветворения на 10 день после введения препарата. Измерения проводятся с помощью светового микроскопа в 30 последовательных полях зрения при общем увеличении 100х. Для удобства подсчета количества экстрамедуллярных очагов кроветворения рекомендуется воспользоваться окулярной стереометрической сеткой, вмонтированной в окуляр микроскопа. А все полученные цифровые данные обработать методами математической статистики, принятой в биологии и медицине с определением вероятности различия между двумя средними по таблице Стьюдента.

Увеличенное количество экстрамедуллярных очагов кроветворения свидетельствует об усилении интенсивности компенсаторно-приспособительных процессов в организме, а следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения, можно считать более эффективными.

Для изучения эффективности железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии нами были проведены исследования на половозрелых белых крысах обоего пола, массой тела 180-200 г. На всем протяжении опыта животных содержали раздельно, в одинаковых условиях и на одинаковом рационе.

В опытах были использованы следующие железосодержащие препараты: Ферроглюкин-75, Ферранимал-75, Ферранимал-75М, Седимин. Препараты вводили однократно внутримышечно в область бедра согласно инструкции по применению.

Для изучения влияния препаратов на морфологию печени лабораторных животных было проведено моделирование постгеморрагической анемии. За 2-3 дня до опыта некоторым лабораторным животным проводили процедуру кровопускания из хвостовой вены в объеме 2% от массы тела животного, что составляет 25-35% от объема циркулирующей крови. Взятие крови из хвостовой вены производили на наркотизированном животном после смачивания хвоста спиртом. Хвост погружали в теплую воду (45°C на 1-3 мин.) и затем надрезали сосуд скальпелем. Для предупреждения травматизма, рану прижигали спиртовым раствором йода. Лабораторные животные с моделированной постгеморрагической анемией содержались в отдельных клетках.

В соответствии с задачами исследования лабораторные животные были разделены на 6 групп, по 20 животных в каждой:

1. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферроглюкин-75;

2. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферранимал-75;

3. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферранимал-75М;

4. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Седимин;

5. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили стерильный изотонический раствор натрия хлорида в эквивалентном объеме;

6. Контрольная группа животных, которым вводили стерильный изотонический раствор натрия хлорида в эквивалентном объеме.

Перед началом лечения и на 10-й день исследования проводили взятия крови для оценки показателей, характеризующих уровень гемопоэза (уровень гемоглобина, количества эритроцитов, цветовой показатель, среднее содержание и среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, величину гематокрита, количества железа в сыворотке крови).

По окончании срока наблюдения всех животных подвергали эвтаназии с последующими патологоанатомическим и гистологическим исследованиями. Материалом для гистологического исследования служили образцы печени крыс, из которых готовили гистологические препараты по общепринятым методикам с окрашиванием для обзорных целей гематоксилином и эозином.

Результаты морфологических исследований показывают, что в печени животных всех групп кроме контрольной наблюдается появление экстрамедуллярных очагов кроветворения при одновременном повышении показателей крови, характеризующих уровень гемопоэза. Однако количество их варьирует в зависимости от используемого препарата. Наименьшее количество экстрамедуллярных очагов кроветворения (n=3±1) наблюдается в печени животных с постгеморрагической анемией, которым не было проведено лечение препаратом железа. В печени животных, которым для коррекции постгеморрагической анемии применяли препараты Ферроглюкин-75 и Ферранимал-75 количество экстрамедуллярных очагов кроветворения увеличено (n=5±1). И наибольшее количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени было у животных, которым применяли для лечения постгеморрагической анемии препараты Седимин (n=7±2) и Ферранимал-75М (n=8±2).

Таким образом, эффективность гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии определяется по количеству экстрамедуллярных очагов кроветворения с одновременной оценкой уровня гемоглобина, количества эритроцитов, цветового показателя, среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в эритроците, величины гематокрита, количества железа в сыворотке крови, от чего зависит скорость выздоровления животных. Чем больше их количество экстрамедуллярных очагов кроветворения, тем интенсивнее протекают компенсаторно-приспособительные процессы в организме. Следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения и наиболее высоким показателям крови, характеризующим гемопоэз, можно считать более эффективными.

Литература

1. Кашин А.С. Профилактика и остановка кровотечений у животных. / А.С. Кашин. - М.: Колос - 1982. - 127 с.

2. Шакалов К.И. Хирургические болезни сельскохозяйственных животных. / Шакалов К.И., Башкиров Б.А., Лебедев А.В., Федоров А.И., Лукьяновский В.А.. - Л.: Колос - 1991. - 255 с.

3. Уразаев Д.Н., Дельцов А.А., Парасюк Л.П., Уразаева Р.Д. Биологическая роль железа. Применение железосодержащих препаратов в ветеринарной медицине: монография. - М.: Колос, 2010. - 104 с.

Способ определения эффективности гемопоэтических железодекстрановых препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии животных, включающий введение препарата животным в терапевтической дозе и проведение морфологического системного последовательного анализа гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерение количества экстрамедуллярных очагов кроветворения на 10 день после введения препарата, увеличенное количество которых свидетельствует об усилении интенсивности компенсаторно-приспособительных процессов в организме, а следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения, можно считать более эффективными.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и может использоваться для оценки эффективности профилактического скрининга у пациентов, относящихся к группам населения медико-демографического риска.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики идиопатической язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования исхода цитомегаловирусной инфекции у детей раннего возраста.

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики асцитно-инфильтративной формы рака яичников и абдоминального туберкулеза. В асцитической жидкости определяют уровень маркера НЕ4, при его значении 244,1±22,7 пМоль/л диагностируют асцитно-инфильтративную форму рака яичников, а при значении 43,5±4,8 пМоль/л диагностируют абдоминальный туберкулез.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для лечения цервикальных неоплазий II-III степени, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской хирургии. Для прогнозирования течения язвенно-некротического энтероколита у новорожденных определяют характеристику лейкоцитарной формулы (X1), как: регенераторный сдвиг - 1, нормопения - 2, лейкопения - 3; оценивают наличие или отсутствие признаков поражения дыхательной системы (Х2), как: пневмония - 1, гипоплазия легких - 2, кистозные поражения легких - 3, синдром дыхательных расстройств - 4, сочетанные пороки и заболевания легких - 5, нет признаков поражения дыхательной системы - 6; сывороточный уровень (нг/мл) матричной металлопротеиназы 2 типа (X3); концентрацию кальпротектина (мкг/г) в кале (X4); сывороточный уровень (нг/мл) ингибитора матричных металлопротеиназ 9 типа (X5); значение шкалы оценки тяжести полиорганных нарушений SOFA в баллах (X6).

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для лечение бесплодия у женщин с миомой матки. Для этого определяют уровень аутоантител к ХГЧ в сыворотке крови и при их значениях от +11% до +20% и от -21% до -30% назначают профилактическое лечение, при их значениях выше +20% и ниже -30% назначают хирургическое лечение.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования метастазов в печени при раке прямой кишки. Сущность способа состоит в том, что после радикального оперативного вмешательства в объеме гемиколэктомии в ткани злокачественной опухоли у больных раком прямой кишки определяют уровень активной формы васкулоэндотелиального фактора роста А (VEGF-A) и растворимого рецептора васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF-R), вычисляют их соотношение.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза.

Настоящее изобретение относится к области биоаналитических исследований и представляет собой способ анализа цитохрома С в интактных митохондриях с помощью спектроскопии гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), включающий подготовку митохондрий и их нанесение на подложку на основе диэлектрического химически инертного материала с наноструктурированным покрытием толщиной 1-10 мкм в виде кольцевых наноструктур серебра, при этом ободки серебряных колец состоят из сообщающихся друг с другом пористых агрегатов серебра, на поверхности которых расположены округлые наночастицы серебра размером 2-90 нм, с последующей иммобилизацией митохондрий на данные наноструктурированные покрытия, детектирование спектров ГКР с последующей расшифровкой характеристических колебаний анализируемой пробы спектров ГКР с использованием стандартного программного обеспечения.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики тяжелых форм псориаза у взрослых. Сущность способа состоит в том, что проводят определение функционального состояния клеточных мембран, которое оценивают по максимальной скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита, заключающегося в измерении обмена внутриклеточного лития, в загруженных этим ионом клетках, на внеклеточный натрий из среды инкубации. Скорость натрий-литиевого противотранспорта V определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия, по формуле. При значении скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита не ниже 420 мкМ лития/литр клеток/час диагностируют тяжелую форму псориаза. Способ обеспечивает достоверное и эффективное диагностирование тяжелых форм псориаза у взрослых. 10 з.п. ф-лы, 10 пр.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования острого повреждения почек у больных острым коронарным синдромом, заключающийся в том, что с целью улучшения прогнозирования определяется содержание эритропоэтина в сыворотке крови иммуноферментным методом, и при уровне эритропоэтина более 15,7 МЕ/мл диагностируется высокий риск развития острого повреждения почек. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования, а также позволяет расширить круг пациентов, для которых применим данный способ. 4 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа дифференциальной диагностики in vitro специфической сенсибилизации пациента к бактериальным аллергенам. Сущность способа состоит в отборе и подготовке венозной крови, введении тестируемого препарата, содержащего бактериальные антигены, и сравнении показателей люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ) с одноименными показателями, полученными для здорового организма. В отобранную кровь пациента вводят антикоагулянт, формируют образцы, содержащие (0,95-1,05)×106 лейкоцитов, и доводят их раствором Хенкса до объема 0,69 мл с получением проб крови. Тестируемый препарат бактериальных антигенов или смесь тестируемого препарата бактериальных антигенов с противоаллергическим препаратом тавегил и контрольный препарат в количестве 0,01 мл вводят в полученные пробы крови и их инкубируют при постоянном перемешивании при температуре 37°С в течение 45 минут. Затем в инкубированные пробы вводят активатор люминол в количестве 2 мМ и хемилюминометром измеряют уровень спонтанной ХЛ для указанного активатора, после чего в те же пробы вводят стимулятор свечения - сульфат бария в количестве 2 мг/мл и регистрируют уровень стимулированной ХЛ также для указанного активатора, причем измерения ХЛ проводят при постоянном перемешивании при температуре 37°С в течение 45 минут с получением временных зависимостей уровня ХЛ. Вычисляют индексы ИП по выражению ИП=Sба/Sк, где Sба; Sк - площадь под кривыми временной зависимости уровня спонтанной и стимулированной ХЛ для тестируемого и контрольного препаратов, соответственно, по которым диагностируют специфическую сенсибилизацию к бактериальным антигенам. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к области проточной цитометрии. Проточный цитометр содержит лазерный луч, установленный для освещения частиц пробы в зоне обнаружения, щель, которая направляет поток частиц пробы через зону обнаружения, а также систему фильтрации. При этом система фильтрации включает в себя фильтр, имеющий множество отверстий, фильтр находится в зоне проточного цитометра, где скорость жидкости составляет менее 200 микролитров в минуту. Также раскрывается система фильтрации проточного цитометра для фильтрации частиц пробы и способ предотвращения засорения щели проточного цитометра. Группа изобретений позволяет предотвратить и устранить повреждение частиц или клеток в образце, при прохождении их через фильтр. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 18 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики хронического эндометрита у женщин с аномальными маточными кровотечениями. Сущность способа состоит в том, что исследуют биологическую жидкость, проводят количественное определение уровней церулоплазмина в супернатанте менструальных выделений иммунотурбидиметрическим методом. При значении церулоплазмина, равном или выше 850 мг/дл, диагностируют хронический эндометрит. Использование заявленного способа позволяет с высокой точностью диагностировать хронический эндометрит у женщин с аномальными маточными кровотечениями. 3 пр.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки тяжести больных с постнекротическими кистами поджелудочной железы. Проводят исследование в крови больного субпопуляционного состава лимфоцитов. Вычисляют иммуно-регуляторный индекс (ИРИ). Определяют лейкоцитарно-Т-лимфоцитарный индекс (лТл). Если показатель лТл выше 11, а ИРИ ниже 0,9, оценивают состояние больного как тяжелое. Способ позволяет точно определять состояние больных, своевременно определить тактику их ведения и осуществить правильный выбор оперативного вмешательства. 3 пр.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ дифференциальной диагностики стадий гонартроза, включающий исследование крови и определение в ее плазме концентрации мочевой кислоты (МК), в мкМ/л, отличающийся тем, что в мононуклеарной фракции крови также определяют активность миелопероксидазы (МПО), в у.е./мин·мг, и активность ксантиноксидоредуктазы (КОР), в МЕ/г, после чего рассчитывают суммарный коэффициент диагностики К по формуле: при выполнении условия 3.1≤К<3.4 диагностируют I стадию; при выполнении условия 3.4≤К<3.9 диагностируют II стадию; при выполнении условия 3.9≤К<5.2 диагностируют III стадию; при выполнении условия К≥5.2 диагностируют IV стадию гонартроза по шкале Kellgren-Lawrence. Осуществление изобретения обеспечивает повышение надежности дифференциальной диагностики стадии гонартроза. 4 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в гастроэнтерологии. Предложен способ определения чувствительности Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам. Проводят серию двукратных разведений антибактериальных препаратов в бульоне Шедлера с рН 7,6±0,2 в горизонтальных лунках 96-луночного планшета. Приготовленную взвесь бактерий вносят в лунки, культуру инкубируют в микроаэрофильных условиях в течение 24 часов при температуре 37°С. Добавляют реагент, используемый при постановке уреазного теста идентификации Helicobacter pylori. Измеряют оптическую плотность содержимого лунок планшета с помощью спектрофотометра, используя длину волны 630 нм. Минимальная подавляющая концентрация антибиотика определяется при построении графика соотношения концентрации антибиотика и оптической плотности и находится в точке выхода кривой на нулевой уровень значения оптической плотности. Способ обеспечивает повышение точности определения чувствительности культур Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам. 2 ил., 6 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования исхода заболевания у больных метастатическим раком почки. Проводят морфологическое и иммуногистохимическое исследование операционного материала. Определяют уровень экспрессии транскрипционного фактора HIF-1α и содержание сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF. При уровне HIF-1α более 6,35 УЕ/мг белка в лунке и VEGF более 32 пг/мг белка прогнозируют благоприятный исход заболевания, а при уровне HIF-1α менее 6,35 УЕ/мг белка в лунке и VEGF менее 32 пг/мг белка прогнозируют неблагоприятный исход заболевания. Способ позволяет определять ожидаемый прогноз заболевания у больных метастатическим раком почки с промежуточным прогнозом по критериям MSKCC, а в случае прогрессирования заболевания позволяет менять тактику лечения. 4 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования гематогенного метастазирования при двухсторонней синхронной инвазивной карциноме неспецифического типа молочных желез. Проводят гистологическую оценку инфильтративного компонента ткани новообразований обеих молочных желез, при которой подсчитывают количество разных типов структур от 1 до 5, среди которых дополнительно выделяют альвеолярные, трабекулярные, солидные структуры и дискретные группы опухолевых клеток, оценивают наличие структур в баллах и рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле: Y=(-41,1+2,2X1-1,3X2-0,74X3), далее значение вероятности развития гематогенных метастазов P определяют по формуле: P=eY/(1+eY) и при P≥50% определяют высокий, а при P<50% низкий риск развития гематогенных метастазов. Способ позволяет повысить точность и информативность прогнозирования гематогенного метастазирования. 2 пр., 2 табл.
Наверх