Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами



Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами
Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами
Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами
Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами
Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами
Малые молекулы с ngf-подобной активностью, обладающие антидиабетическими свойствами

 


Владельцы патента RU 2613314:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова" (RU)

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и касается применения оригинальных димерных дипептидов, созданных на основе структуры β-изгиба 4-й петли факторов роста нервов крысы и человека, соответственно ГК-2 Rat(r) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина)) и ГК-2 Human(h) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глицил-L-лизина)), в качестве антидиабетических средств. Группа изобретений обеспечивает ослабление гипергликемии при лечении диабета как первого, так и второго типа. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 6 ил., 3 пр.

 

Предложено применение оригинальных димерных дипептидов, созданных на основе структуры β-изгиба 4-й петли факторов роста нервов крысы и человека, соответственно ГК-2 Rat(r) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина)) и ГК-2 Human(h) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глицил-L-лизина)), в качестве антидиабетических средств. Предполагаемый NGF-подобный механизм действия ГК-2(r) и ГК-2(h) подразумевает защиту бета-клеток поджелудочной железы и стимуляцию секреции инсулина в ответ на гипергликемию. Антидиабетических препаратов с NGF-подобным механизмом действия в настоящее время нет. Однако такие препараты могли бы быть использованы для лечения сахарного диабета как 1-го, так и 2-го типа. Показано, что введение крысам токсина стрептозотоцина в дозе 40 мк/кг (однократно внутрибрюшинно) ведет к развитию таких признаков диабета, как повышение содержания глюкозы в крови и потеря массы тела. Хроническое комбинированное (профилактическое и лечебное) внутрибрюшинное (в/б) введение ГК-2(r) в дозе 0,5 мг/кг или ГК-2(h) в дозе 0,1 мг/кг ослабляет выраженность перечисленных проявлений диабета. Кроме того, на модели стрептозотоцинового диабета было выявлено антикоагулянтное действие ГК-2(r), которое имеет большую значимость, поскольку при сахарном диабете отмечается нарушение микроциркуляции крови и повышена опасность тромбообразования. Полученные данные позволяют считать целесообразным применение ГК-2(r) и ГК-2(h) в качестве антидиабетических средств, а также в качестве молекулярных инструментов для изучения вовлеченности NGF в патогенез диабета.

Область изобретения

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается средств для предупреждения и лечения диабета.

Уровень техники

Сахарный диабет (СД) занимает 3-е место среди основных причин смертности населения в большинстве стран мира. По оценкам ВОЗ в настоящее время диабетом страдает более 180 млн человек, а по статистике, приводимой Shaw J.Е., 220 млн человек во всем мире страдают данной патологией [Спасов А.А. и соавт. // Экспер. и клин. фармакол. 2011. V.74. №11. С.14-6]. Прогнозируется, что к 2030 г. этот показатель может удвоиться [Shaw J.E., Sicree R.A. and Zimmet P.Z. // Diabetes Research and Clinical Practice. 2011. V.87. №1. Р.4-14]. Темпы нарастания распространенности этого заболевания носят угрожающий характер. Число больных диабетом в России по данным официальной статистики с показателя 8 миллионов в 1994 г. может возрасти к 2020 г. до 18 млн.

В настоящее время предпочтение при лечении диабета отдается препаратам из групп производных сульфонилмочевины [Ashcrof F.M., Reimann F. // Проблемы эндокринологии. 2001. №6. С.43-47], бигуанидам [Salpeter S.R., Buckley N.S., Kahn J.A. and al. // Am J Med. 2008. №121. P.149-157], производным тиазолидиндиона [Аметов A.C., Сокарева Е.В. // РМЖ. 2008. №28. С.1858]. Все большее значение приобретают препараты из группы ингибиторов дипептидилпептидазы - 4 (ДПП - 4), действие которых основано на повышении концентрации инкретинов, способствующих синтезу инсулина [Pratley R.E., Salsali A. //Curr. Med. Res. Opin. 2007. V.23. №4. P.919-931; Havale S.H. // Bioorg. Med. Chem. 2009. V.17. №5. P.1783-802].

Широкий спектр побочных эффектов и абсолютных противопоказаний ограничивает использование этих препаратов в клинической практике. Применение производных сульфонилмочевины лимитировано развитием вторичной резистентности к ним у 5-10% больных сахарным диабетом [Александров А.А. // Сахарный диабет: Consilium medicum. 2001. Т.1. №10. С.2-7]. Ограничение использования бигуанидов определяется возможностью развития лактоацидоза, а производных тиазолидиндиона - выявленной гепатотоксичностью [Forman L.M., Simmons D.A., Diamond R.H. // Ann Intern Med. 2000. V.132. №2. P.118-21] и повышением риска развития кардио-васкулярной патологии [Rohatgi A., McGuire D.K. // Cardiovasc Drugs Ther. 2008. V.22. №3. Р233-4]. Применение ингибиторов ДПП-4 нередко сопровождается развитием артралгий на фоне увеличения содержания в крови мочевой кислоты, но основным фактором риска при их применении считается повышение частоты развития панкреатита и рака поджелудочной железы [Elashoff М., Matveyenko A.V., Gier В. et al. // Gastroenterology. 2011. V.141. №1 Р.50-6].

Все перечисленные факты свидетельствуют о необходимости создания новых высокоэффективных, безопасных противодиабетических препаратов, поскольку только расширение спектра антидиабетических средств позволит обеспечить максимальную компенсацию сахарного диабета с учетом индивидуальных особенностей каждого больного, улучшить качество жизни больных, снизить инвалидизацию, сохранить работоспособность больных диабетом, что имеет большое социальное и экономическое значение для общества.

Высоким терапевтическим потенциалом для лечения СД и его осложнений обладает фактор роста нервов (NGF - nerve growth factor). Известно, что NGF играет важную роль в дифференцировке и поддержке функционирования бета-клеток поджелудочной железы [Polak М., Scharfmann R., Seilheimer В. et al. // Prod. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V.90. №12. P.5781-85]. Бета-клетки поджелудочной железы синтезируют и секретируют NGF, который путем аутокринной регуляции стимулирует секрецию инсулина; синтез и секреция NGF бета-клетками усиливаются в ответ на повышение концентрации внеклеточной глюкозы [Rosenbaum Т., Sanches-Soto М.С., Hiriart М. // Diabetes. 2001. V.50. №8. P.1755-62]. NGF и инсулин, секретируемые бета-клетками, необходимы для их выживания. Эти свойства NGF - поддержание жизнеспособности и функционирования бета-клеток, а также способность стимулировать секрецию инсулина, определяют его возможный потенциал для лечения СД как 1-го, так и 2-го типа.

Дефицит нейротрофических факторов является одной из важных причин замедленной пролиферации P-клеток при диабете [Nielsen J.H., Galsgaard E.D., Moldrup А. et all. // Diabetes. 2001. V.50 №1. P.25-9]; с этим дефицитом связывают развитие таких осложнений диабета, как периферическая кардиопатия, нейропатия, ретинопатия, нефропатия и др [Han. Н.Е, Goss, Goins W.F., Lacomis D.et. all. //Diabetes. 2006. V.51. №7. P.2227-32]. На модели стрептозотоцинового диабета было показано, что генная терапия NGF препятствует развитию диабетической нейропатии у мышей [Goss J.R., Goins W.F., Lacomis D. et. al. // Diabetes. 2002. V.51. №7. P.2227-32], а при введении в форме глазных капель NGF препятствует диабетической дегенерации сетчатки глаза у крыс [Colafrancesco V., Coassin М., Rossi S., Aloe L. // Ann. 1st Super Sanita. 2011. V.47, №3: Р.284-9].

Клинические испытания NGF при его системном введении больным диабетической нейропатией были прекращены из-за развития значительных побочных эффектов (боль в месте введения) и слабой выраженности положительных эффектов такого лечения [Pittenger G., Vinik, А. // Experimental Diab. Res.2003. V.4. №4. P.271-85]. Применение нативной молекулы NGF в клинике ограничено широким спектром его биологической активности, неспособностью проникать через гематоэнцефалический барьер и фармакологической нестабильностью.

В ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН на основе структуры β-изгиба 4-й петли NGF крысы и человека были созданы оригинальные димерные дипептидные миметики, соответственно ГК-2(r) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-L-глутамил-L-лизина)) [Середенин С.Б., Гудашева Т.А. // 2010. Патент РФ №2410392] и ГК-2(h) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глицил-L-лизина)).

Синтез ГК-2(h)

а) Синтез бис-(N-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутилоксикарбонил-лизил)-гексаметилендиамида, (Z-Lys(Boc)NH)2(CH2)6

Раствор 2,575 г (5.4 ммоль) Z-Lys(Boc)-OSu и 0.299 г (2.6 ммоль) гексаметилендиамина в 14 мл DMF перемешивали 4 ч при комнатной температуре, при этом образовывался мутный раствор. Реакционную смесь разбавляли 56 мл воды и оставляли на несколько часов. После затвердевания выпавший осадок отфильтровывали и промывали водой. После высушивания над P2O5 и получили 2,085 г (выход 96%) белого кристаллического продукта.

Rf 0.90(А), 0,93(Б), Тпл. 138-147, - 9,31 (с 0,29, этанол)

Спектр 1Н-ЯМР (ДМСО-d6): 1,05-1,69 (12H, м, 2 (CβН2, CγH2, CδH2) Lys; 8H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-; 1,35 18H, с,2 -С(СН3)3 Boc;), 2,87 (4Н, м, 2CεH2Lys), 3,01 (4H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 3,89 (2Н, м, 2CαHLys), 5,01 (4Н, с, 2OCH2, Z), 6,74 (2H, т, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 7,13-7,39 (10H, м, 2 C6H5 Z; 2Н, д, 2NНд Lys), 7,81 (2H, т, 2NHт Lys)

б) Синтез N-оксисукцинимидного эфира N-бензилоксикарбонил-глицина, Z-Gly-OSu.

К раствору 5,28 г (28 ммоль) Z-Gly-OH в 80 мл этилацетата добавляли 3,22 г (28 ммоль) HOSu и 6,36 г (28 ммоль) ДЦГК. Реакционную массу перемешивали при 10°C 2 ч. После исчезновения исходного вещества (ТСХ контроль) отфильтровали образовавшуюся дициклогексилмочевину. Растворитель удаляли в вакууме. Полученное масло перекристаллизовывали из смеси 3 мл петролейного эфира и 8 мл хлороформа. Получили 5,87 г (22,4 ммоль, 80%) продукта в виде белого кристаллического вещества. Физико-химические характеристики совпадают с описанными в литературе [Anderson G.W., Zimmerman J.Е. The use of esters of N-hydroxysuccinimide in peptide synthesis // J. Amer. Chem. Sco. - 1964. - 86, N9. - P.1839-1842].

в) Синтез бис-(Nε-трет-бутилоксикарбонил-лизил)-гексаметилендиамида, (Lys(Boc)NH)2(CH2)6

1,86 г (2,2 ммоль) (Z-Lys(Boc)NH)2(CH2)6 гидрировали в метаноле (25 мл) над 10% Pd/C (0,37 г) в течение 1 ч 25 мин при комнатной температуре. После исчезновения исходного вещества (ТСХ контроль) катализатор отфильтровывали, растворитель удаляли в вакууме. Полученное масло высушили над CaCl2 и парафином. Далее проводили высаживание смесью петролейного и диэтилового эфира (3:1) и отфильтровывали. Получили 0,99 г вещества в виде белого порошка (выход 78%).

Rf 0.48(A), 0,68(Б), Тпл. 70-75, 5,1 (с 1, этанол)

Спектр 1Н-ЯМР (ДМСО-d6): 1,11-1,65 (12Н, м,2 (CβH2, CγH2, CδH2) Lys; 8H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-; 18H, с, 2 -C(CH3)3 Boc;), 2,86 (4H, м, 2CεH2Lys), 3,04 (4Н, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 3,40 (2Н, м, 2CαH Lys), 6,73 (2H, т, 2NHт Lys), 7,78 (2H, т, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-)

г) Синтез гексаметнлендиамида бис-(N-бензилоксикарбонил-глицил-Nε-трет-бутилоксикарбонил-лизина), (Z-Gly-Lys(Boc)-NH-)2(CH2)6.

К раствору 0.90 г (1.6 ммоль) Lys(Boc)NH)2(CH2)6 в 6 мл DMF прикапывали при перемешивании раствор 1,103 г (3.8 ммоль) Z-Gly-OSu в 4 мл DMF и продолжали перемешивание 2 ч 10 мин при комнатной температуре (ТСХ контроль). Далее добавили 1,5 мл ДЭПДА и перемешивали еще 30 мин, после чего реакционную смесь разбавили 70 мл воды. Продукт и органические примеси экстрагировали хлороформом (3:1) и промывали поочередно 25 мл воды, 25 мл 2% H2SO4 и 25 мл 3% Na2CO3. Затем раствор сушили MgSO4 и отфильтровывали. После упаривания хлороформа получили продукт в виде смеси желтоватого масла с белыми кристаллами. Добавили 20 мл диэтилового эфира: при растирании шпателем продукт закристаллизовывался. Отфильтровывали эфир и получали 1,26 г (84%) белого порошка.

Rf 0.89(A), 0,95(Б), Тпл. 120-126, - 11,0 (с 0,1, этанол)

Спектр 1H-ЯМР (ДМСО-d6): 1,05-1,70 (12H, м, 2 (CβH2, CγH2, CδH2) Lys; 8H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-; 1,35 18Н, с, 2 -C(CH3)3Boc;), 2,85 (4Н, м, 2CεH2Lys), 3,00 (4H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 3,65 (4Н, д, 2CH2 Gly), 4,15 (2Н, м, 2CαH Lys), 5,03 (4H, с, 2OCH2, Z), 7,25 (2H, т, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 7,14-7,37 (10H, м, 2 C6H5 Z; 2Н, д, 2NHд Lys), 7,81 (2Н, т, 2NHт Lys)

д) Синтез бис-(глицил-Nε-трет-бутилоксикарбонил-лизил)-гексаметилендиамида, (Gly-Lys(Boc)NH)2(CH2)6

1,17 г (1,2 ммоль) (Z-Gly-Lys(Boc)NH)2(CH2)6 гидрировали в метаноле (20 мл) над 10% Pd/C (0,23 г) в течение 20 мин при комнатной температуре. После исчезновения исходного вещества (ТСХ контроль) катализатор отфильтровывали, растворитель удаляли в вакууме. Полученное масло высаживали диэтиловым эфиром (20 мл) и отфильтровывали. Вещество в виде белого порошка без дополнительной очистки отправляли на следующую стадию.

е) Получение гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глицил-Nε-трет-бутилоксикарбонил-лизина), (HOOC(CH2)2CO-Gly-Lys(Boc)-NH)2(CH2)6.

К раствору (Gly-Lys(Boc)NH)2(CH2)6 в 5 мл ДМФА добавили 0,24 г (2,4 ммоль) янтарного ангидрида. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 4 ч (ТСХ контроль). Реакционную смесь разбавляли 20 мл этилацетата и 15 мл H2O. При этом продукт переходил в водную фазу. К нему добавляли 5 мл 3% Na2CO3. Насыщали раствор 1,5 г Na2SO4 и прибавляли 15 мл бутанола и 10% H2SO4 до pH=3. Далее промывали 10% Na2SO4. Полностью упаривали растворитель. Остаток растирали с эфиром и отфильтровывали. Получили 0,872 г (0,984 ммоль) продукта в виде белого порошка (выход 82%).

Rf 0.80(A), 0,67(Б), Тпл. 86-92, - 10,4(с 1, этанол)

Спектр 1H-ЯМР (ДМСО-d6): 1,11-1,75 (12Н, м, 2 (CβH2, CγH2, CδH2) Lys; 8H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-; 1,35 18H, с, 2 -C(CH3)3Boc;), 2,36 (4H, м, 2 CH2 Suc), 2,72 (4H, м, 2CεH2 Lys), 2,96 (4H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 3,65 (4H, с, 2 CH2 Gly), 4,10 (2H, м, 2CαH Lys), 6,71 (2H, т, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 7,83 (2H, т, 2NHт Lys), 8,13 (2H, д, 2NHд Lys), 8,87 (2H, т, 2NHт Gly), 2 HOOC(CH2)2CO-обмениваются с HDO.

ж) Получение гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глицил-лизина), (HOOC(CH2)2CO-Gly-Lys-NH-)2(CH2)6).

Весь полученный (HOOC(CH2)2CO-GlyLys(Boc)-NH-)2(CH2)6 растворяли в уксусной кислоте и обрабатывали 3 мл 4M HCl/Dioxane. Через 40 мин растворитель декантировали, остаток промывали диэтиловым эфиром декантацией, растворяли в 5 мл воды и обрабатывали при перемешивании смолой Амберлит IRA-410 до стабилизации значения pH~5. Очистку проводили методом обращенно-фазовой С8 ВЭЖХ в градиенте 0-13% изопропанола в 0.1М уксусной кислоте. Соответствующие фракции собирали (ТСХ контроль), упаривали и сушили в вакууме. Лиофилизовали с помощью жидкого N2. перекристаллизовывали из смеси этилацетат-этанол (3:1). Получили 0,515 г (0,751 ммоль) (общий выход 29%) конечного продукта в виде белого порошка, Rf 0.14 (А), Rf 0.38 (Б), т.пл. 97-100°C, - 15.7° (с 1; вода).

Спектр 1H-ЯМР (ДМСО-d6): 1,06-1,85 (12H, м, 2 (CβH2, CγH2, CδH2) Lys; 8H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- NH-; 1,35 18H, с, 2 -C(CH3)3Boc;), 2,26(4H, м, 2CH2 Suc), 2,84 (4H, м, 2CεH2 Lys), 3,05 (4H, м, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 3,69 (4H, с, 2 СН2 Gly), 4,10 (2H, м, 2CεH Lys), 7,65 (2H, т, -NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-), 8,34 (2H, д, 2NHд Lys), 8,64 (2H, т, 2NHт Gly), 2 HOOC(CH2)2CO- обмениваются с HDO.

Пептид ГК-2 (r) продемонстрировал высокую NGF-подобную нейропротективную активность в наномолярных концентрациях в экспериментах in vitro [Гудашева Т.А., Антипова Т.А., Середенин СБ. // ДАН. 2010. Т.434, №4. С.549-52], а также проявил эффективность на in vivo модели инсульта мозга [Середенин С.Б., Силачев Д.Н., Гудашева Т.А. и др. Бюл. экспер. биол. 2011. Т.151. №5. С.518-521]. В экспериментах с использованием in vivo модели фокальной кортикальной ишемии выявлена также нейропротективная активность соединения ГК-2(h) [Гудашева Т.А., Романова Т.А., Шикова Ф.М., Котельникова СО. и др. // Экс и клин фарм. 2012 №10].

Было показано, что ГК-2(r), подобно нативной молекуле NGF, вызывает фосфорилирование специфических рецепторов TrkA и фосфорилирование Akt-киназы, участвующей в одном из внутриклеточных сигнальных каскадов, активируемых этими рецепторами [Gudasheva Т., Antipova Т., Seredenin S. // XXIInd International Symposium on Medicinal Chemistry. 2012. P.299]. Из литературы известно, что влияние NGF на поддержание жизнеспособности бета-клеток и секрецию ими инсулина опосредовано TrkA-рецепторами [Rosenbaum Т., Sanches-Soto М.С., Hiriart М. // Diabetes. 2001. V.50. №8. Р.1755-62; Navarro-Tableros, V., Sanches-Soto, М.С, Garcia, S., Hiriart, M. (2004). Autocrine regulation of single pancreatic beta-cell survival. Diabetes. Aug; 53(8): 2018-23]. Кроме того, известно, что в защите NGF бета-клеток от гибели участвует Akt-киназный сигнальный путь [Navarro-Tableros, V., Sanches-Soto, М.С., Garcia, S., Hiriart, M. (2004). Autocrine regulation of single pancreatic beta-cell survival. Diabetes. Aug; 53(8): 2018-23].

Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что ГК-2(r) и ГК-2(h) действуют по NGF-подобному механизму и могут быть эффективны в качестве антидиабетических средств.

Сущность изобретения

Сущность изобретения состоит в применении ГК-2(r) и ГК-2(h) в качестве антидиабетических средств и в качестве инструментов изучения молекулярных механизмов вовлеченности NGF в патогенез сахарного диабета.

Цель изобретения - разработка препаратов для лечения сахарного диабета на основе NGF, способных замедлять прогрессирование данного заболевания. Эта цель была достигнута путем исследования эффектов ГК-2(r) и ГК-2(h) на модели стрептозотоцинового диабета.

Техническим результатом изобретения является антидиабетический и гипокоагулянтный эффекты ГК-2(r) и ГК-2(h).

Изобретение иллюстрируют следующие примеры

Известно, что в эксперименте развитие гипергликемии удается воспроизвести введением диабетогенных токсинов аллоксана и стрептозотоцина (СТЗ), оказывающих прямое цитотоксическое действие на β-клетки поджелудочной железы. Преимущество стрептозотоцина по сравнению с аллоксаном состоит в относительно более высокой метаболической устойчивости, большей длительности гипергликемии, менее выраженном ацидозе и летальности экспериментальных животных [Szkudelski Т. // Minireview Physiol. Res. 50: 536-546, 2001]. Стрептозотоциновый диабет, являясь общепринятой экспериментальной моделью сахарного диабета, позволяет смоделировать как постепенно развивающуюся дисфункцию бета-клеток поджелудочной железы, так и нарушение толерантности к глюкозе и развитие связанных с ним расстройств [Хейфец И.А., Спасов А.А., Воронкова М.П. и др. // Бюл. экспер. биол. 2012. Т. 153. №1. - С.62-4].

Опыты проведены на полученных из питомника «Столбовая» РАМН самцах белых крыс Вистар массой 300-380 г (в начале эксперимента). Животных содержали в условиях вивария ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» РАМН по 10 особей в клетке при свободном доступе к стандартизированному корму и воде. Исследования проводили с 1000 до 1400. Соблюдались этические правила гуманного обращения с животными, изложенные в директивах Совета Европейского сообщества 86/609/ЕЕС.

Пример 1. Эффект комбинированного (профилактического и лечебного) введения ГК-2(r) на модели стрептозотоцинового диабета.

Эксперимент выполнен на 38 крысах, разделенных случайным образом на 3 группы: 1-я - пассивный контроль (n=12), 2-я - активный контроль (n=13), 3-я - опытная группа (n=13). 1. Животным группы пассивного контроля (Контроль) ежедневно вводили дистиллированную воду (ДВ) в течение 14 дней, затем однократно физиологический раствор (ФР), далее продолжалось введение воды в течение последующих 28 дней. 2. Животным группы активного контроля (СТЗ) в течение 14 дней вводили ДВ, затем однократно СТЗ (Sigma) в дозе 40,0 мг/кг, растворенный в ФР, далее продолжалось введение ДВ в течение последующих 28 дней. 3. Животным опытной группы (СТЗ+ГК-2r) профилактически ежедневно вводили ГК-2(r) в дозе 0,5 мг/кг, растворенный ex tempore в ДВ, затем однократно был введен СТЗ, и далее в течение 28 дней продолжали введение ГК-2(r) в той же дозе. Все вещества вводили внутрибрюшинно из расчета 2 мл/кг.

Определение уровня глюкозы в крови, взятой из хвостовой вены (глюкометр One Touch Ultra, USA), проводили непосредственно до введения СТЗ, а также на 3-й, 17-е и 28-е сутки после введения СТЗ. Животных взвешивали каждые 3-4 дня.

Для оценки статистической значимости межгрупповых различий применяли тест Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением выборок с использованием U теста Манна-Уитни и точный критерий Фишера. Результаты считались достоверными при p<0,05. Данные представляли в виде медиан выборок и интерквартильных интервалов.

Терапевтический эффект дипептида ГК-2 рассчитывали по формуле:

где гл. СТЗ - уровень глюкозы в крови в группе СТЗ, гл. (СТЗ+ГК-2r) - уровень глюкозы в крови в группе (СТЗ+ГК-2r), гл. вода - уровень глюкозы в крови в группе пассивного контроля.

В течение 2-х недель до введения СТЗ межгрупповых различий по массе тела и содержанию глюкозы в крови не наблюдалось, то есть хроническое введение ГК-2(r) здоровым крысам не влияло на данные показатели.

Согласно литературным данным, содержание глюкозы более 13-15 ммоль/л рассматривается как показатель диабета [Kuhada A., Bishnoia М., Tiwaria V. et al. // Pharmacology Biochemistry and Behavior. 2009. V.92. №2. P.251-259]. В наших экспериментах через 3 дня после введения СТЗ отмечалось повышение содержания глюкозы в венозной крови до 19,3 ммоль/л (медиана выборки). При тестировании через 14 и 28 дней после введения СТЗ гипергликемия в группе активного контроля сохранялась (тестирование в более поздние сроки в данных экспериментах не проводилось). На 3-и сутки после введения СТЗ ГК-2(r) достоверно снижал содержание глюкозы в крови с терапевтическим эффектом 60%. На 17 сутки после введения СТЗ ГК-2(r) снижал уровень глюкозы в крови более выраженно - терапевтический эффект ГК-2(r) составлял 80%.

На 28-е сутки после введения СТЗ антигипергликемический эффект ГК-2(r) также составлял 80% (Фиг.1. Антигипергликемическое действие ГК-2r при комбинированном лечебно-профилактическом введении).

Сравнение ГК-2(r) с применяющимися в настоящее время антидиабетическими препаратами показало, что ГК-2(r) превосходит по эффективности гипогликемического действия некоторые из них, такие как глибенкламид, и сравним с эффектом гликлазида и диабенола [Erejuwa О.О., Sulaiman S.A., Wahab M.S. et. al. // International Journal of Applied Research in Natural Products. 2011. V.4. №2. P.1-10; Tahara A., Matsuyama-Yokono A., Nakano R. et. al, II Basic. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2008. V.103. №6. P.560-8; Анисимова B.A., Балаболкин М.И., Вдовина Г.П. и др. // Патент РФ №2386634. 2010] (Табл.1).

Таблица 1
Сравнение гипогликемического действия дипептида ГК-2(r) и некоторых применяющихся в медицине антидиабетических препаратов на модели стрептозотоцинового диабета у крыс. Гипогликемическое действие оценивали на основе измерения содержания глюкозы в крови при хроническом лечебном введении препарата (А) или на основе теста толерантности к глюкозе при однократном введении препарата (Б).
Название препарата Режим введения Терапевтический эффект гипогликемического действия
ГК-2(r) 0,5 мг/кг, в/б, ежедневно в течение 4 недель 80% (А)
Глибенкламид 0,6 мг/кг, per os, ежедневно в течение 4 недель 32% (А)
(Erejuwa О.О., Sulaiman S.A., Wahab M.S. et. al. // International Journal of Applied Research in Natural Products. 2011. V.4. №.2. P.1-10)
Воглибоз 1,0 мг/кг, per os, за 30 мин до геста 40% (Б)
(Tahara A., Matsuyama-Yokono A., Nakano R. et. al. // Basic. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2008. V. 103. №6. P.560-8)
Метформин 1000,0 мг/кг, per os, за 30 мин до теста 60% (Б)
(Tahara A., Matsuyama-Yokono A., Nakano R. et. al. // Basic. Clin. Pharmacol. Toxicol. 2008. V.103. №6. P.560-8)
Гликлазид 50,0 мг/кг, per os, за 2 ч до теста 70% (Б)
(Анисимова B.A., Балаболкин М.И., Вдовина Г.П. и др. // Патент РФ №2386634. 2010)
Диабенол 25,0 мг/кг, per os, за 2 ч до теста 85% (Б)
(Анисимова В.А., Балаболкин М.И., Вдовина Г.П. и др. // Патент РФ №2386634. 2010)

Важным показателем диабетогенного эффекта СТЗ является потеря массы тела. Дипептид ГК-2(r) полностью препятствовал снижению прироста массы тела крыс (Фиг.2. Влияние ГК-2r на 4-недельный прирост массы тела крыс в условиях стрептозотоцинового диабета).

Таким образом, в этих экспериментах показана высокая эффективность ГК-2(r) при комбинированном лечебно-профилактическом введении.

Пример 2. Эффект комбинированного (профилактического и лечебного) введения ГК-2(h) на модели стрептозотоцинового диабета.

Эксперименты выполнены на 38 крысах, разделенных случайным образом на 3 группы: 1-я - пассивный контроль (n=12), 2-я - активный контроль (n=13), 3-я - опытная группа (n=13).

1. Животным группы пассивного контроля (Вода) ежедневно вводили ДВ в течение 14 дней, затем однократно ФР, далее продолжалось введение ДВ в течение последующих 28 дней.

2. Животным группы активного контроля (СТЗ) в течение 14 дней вводили ДВ, затем однократно СТЗ в дозе 40,0 мг/кг, растворенный в ФР, далее продолжалось введение ДВ в течение последующих 28 дней.

3. Животным опытной группы (СТЗ+ГК-2(h)) профилактически ежедневно вводили ГК-2(h) в дозе 0,1 мг/кг, растворенный ex tempore в дистиллированной воде, затем однократно был введен СТЗ, и далее в течение 28 дней продолжали введение ГК-2(h) в той же дозе. Все вещества вводили внутрибрюшинно из расчета 2 мл/кг.

Определение уровня глюкозы в крови, взятой из хвостовой вены (глюкометр One Touch Ultra, USA), проводили непосредственно до введения СТЗ, а также на 3-й, 17-е и 28-е сутки после введения СТЗ. Животных взвешивали каждые 3-4 дня.

Для оценки статистической значимости межгрупповых различий применяли тест Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением выборок с использованием U теста Манна-Уитни. Данные на рисунках представлены в виде средних значений и стандартной ошибки средней (M±SEM). Результаты считались достоверными при p<0,05.

Для характеристики динамики антигипергликемического эффекта ГК-2(h) были рассчитаны средние значения выборок уровня глюкозы в группах и по ним вычислялся относительный показатель терапевтического эффекта (Тэ) по формуле:

где гл. СТЗ - уровень глюкозы в крови в группе СТЗ, гл. (СТЗ+ГК-2h) - уровень глюкозы в крови в группе (СТЗ+ГК-2h), гл. вода - уровень глюкозы в крови в группе пассивного контроля.

До введения СТЗ статистически значимых различий между группами по уровню глюкозы не наблюдалось, т.е. ГК-2(h) не влияет на содержание глюкозы в крови у здоровых животных. Введение СТЗ вызвало выраженное повышение глюкозы в крови. Статистически значимые различия между группами активного и пассивного контролей отмечались на всех сроках наблюдения: через 3 дня после введения СТЗ эти показатели составляли 17,9±1,6 ммоль/л при уровне глюкозы для крыс группы пассивного контроля 5,4±0,1 ммоль/л, p<0,05 (Фиг.3А. Антигипергликемическое действие ГК-2b при комбинированном лечебно-профилактическом введении, 3-й день после введения СТЗ); через 17 дней - 14,6±1,7 ммоль/л по сравнению с 5,3±0,3 ммоль/л, p<0,05 (Фиг.3Б. Антигипергликемическое действие ГК-2h при комбинированном лечебно-профилактическом введении, 17-й день после введения СТЗ). Содержание глюкозы в крови крыс на 17-й день после введения СТЗ) и через 28 суток - 19,±2,5 ммоль/л по сравнению с 4,8±0,1 ммоль/л; p<0,05 (Фиг.3В. Антигипергликемическое действие ГК-2h при комбинированном лечебно-профилактическом введении, 28-й день после введения СТЗ). Поскольку содержание глюкозы более 13-15 ммоль/л рассматривается как показатель диабета [Shaw J.Е., Sicree R.А. and Zimmet P.Z. // Diabetes Research and Clinical Practice. 2010. V.87. №1, P.4-14], можно заключить, что в этом эксперименте был воспроизведен известный гипергликемический эффект СТЗ.

Комбинированное (профилактическое и терапевтическое) введение ГК-2(h) снижало выраженность гипергликемии уже через 3 дня после введения СТЗ (14 дней профилактики), когда уровень глюкозы в крови составлял 14,0±1,9 ммоль/л; p<0,05 (Фиг.3А.). Оно имело место также через 17 дней (11,6±1,7 ммоль/л) (Фиг.3Б.) и 28 дней терапии (12,8±2,3 ммоль/л; p<0,05 по сравнению с группой СТЗ) (Фиг.3В). Расчет динамики относительного показателя антигипергликемического эффекта ГК-2 свидетельствует о постепенном нарастании его величины в течение срока наблюдения.

В полном соответствии с литературными данными [Han Н.Е., Goss J.R., Goins W.F., Lacomis D. et. all. // Diabetes. 2006. V.51. №7. P.2227-52; T. Skudelski // Physiol. Res. 2001. V.50. №6. P.536-46] введение СТЗ в экспериментах приводило к уменьшению массы тела крыс группы активного контроля, в то время как в группе пассивного контроля имело место ее постепенное нарастание на всех этапах измерения. Вычисление разницы массы тела, Δ(г), между таковой в день введения СТЗ и в последующие дни показало следующие результаты (Фиг.4. Влияние ГК-2h на 4-недельный прирост массы тела крыс в условиях стрептозотоцинового диабета): на 4-й день в группе пассивного контроля она составляла +6,2±1,8 г, в группе активного контроля -16,6±2,7 г (p<0,05); на 17-е сутки +23,6±11,9 г и -14,0±8,5 г соответственно (p<0,05); а на 28-е сутки +34,5±5,2 г и -6,5±11,3 г соответственно (p<0,05).

Введение ГК-2(h) ослабляло вызванное СТЗ снижение массы тела крыс: на 4-й день показатель Δ составлял -11,6±2,6 г (p<0,05 по сравнению с группой активного контроля), на 17-й день -3,2±1,7 г (p<0,05), а на 28-й день наблюдался противоположный эффект - крысы стали набирать вес, показатель Δ составил +7,8±2,3 г (Фиг.4).

Таким образом, показано антидиабетическое действие низкомолекулярных миметиков NGF крысы и человека: ГК-2(r) и ГК-2(h). Способность NGF поддерживать жизнеспособность бета-клеток, защищать их от повреждения и стимулировать секрецию инсулина в ответ на повышение концентрации глюкозы опосредована TrkA рецепторами [Rosenbaum Т., Sanches-Soto М.С., Hiriart М. // Diabetes. 2001. V.50. №8. P.1755-62]. Кроме того, известно, что в защите NGF бета-клеток от гибели участвует Akt-гкиназный сигнальный путь [Navarro-Tableros, V., Sanches-Soto, М.С., Garcia, S., Hiriart, M. (2004)]. Было показано, что ГК-2(r) активирует TrkA рецепторы [Гудашева Т.А., Антипова Т.А., Середепин СБ. // ДАН. 2010. Т.434, №4. С.549-52], а также стимулирует фосфорилирование Akt-киназы, вовлеченной в передачу сигнала от этих рецепторов [Gudasheva Т., Antipova Т., Seredenin S. // XXIInd International Symposium on Medicinal Chemistry. 2012. P.299]. Эти данные позволяют предположить, что ГК-2(r) оказывает антидиабетическое действие по NGF-подобному механизму. ГК-2(h), аналогично миметику крысиного NGF, ГК-2(r), ослабляет гипергликемию и препятствует снижению массы тела, вызванные введением СТЗ. Таким образом, можно предположить что ГК-2(h) также оказывает антидиабетическое действие по NGF-подобному механизму.

Таким образом, предполагаемый NGF-подобный механизм действия ГК-2(r) и ГК-2(h) подразумевает защиту бета-клеток поджелудочной железы и стимуляцию секреции инсулина в ответ на гипергликемию. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности применения дипептидов ГК-2(r) и ГК-2(h) как антидиабетических препаратов, эффективных при СД как 1-го, так и 2-го типа.

Пример 3. Гипокоагуляционный эффект ГК-2(r)

Исследования выполнены на двух группах крыс-самцов Вистар весом 300-350 г, которым однократно внутрибрюшинно вводился СТЗ в дозе 40 мг/кг (группа активного контроля n=8), либо физиологический раствор (группа пассивного контроля, n=8). Эксперимент был проведен в условиях ex vivo: к плазме крови, взятой у животных обеих групп, добавляли ГК-2(r).

Кровь для исследования брали из яремной вены животных обеих групп при помощи шприца, содержащего 3,8% раствор цитрата натрия (соотношение 9:1) через 4, 10, 18 и 45 дней от начала эксперимента. С помощью глюкометра One touch Ultra (USA) измеряли концентрацию глюкозы, затем кровь центрифугировали в течение 10 минут при 2000 об/мин. Каждый образец полученной плазмы делили на 2 равные части (по 0,7 мл). К одной части плазмы крыс из группы активного контроля добавляли 0,035 мл дистиллированной воды (серия 1), к другой - 0,350 мл свежеприготовленного раствора пептида ГК-2(r) в дистиллированной воде в концентрации 10-5 М (серия 2). Аналогичным образом обрабатывали группу пассивного контроля (серии 3 и 4 соответственно). Все образцы инкубировали в течение 10 минут при 37°C. Затем в них определяли ряд показателей состояния гемостаза по расшифровке данных тромбоэластограммы (ТЭГ), записанной на тромбоэластографе фирмы Hellige. 0,735 мл плазмы крови, проинкубированной с водой или пептидом, помещали в кювету прибора, добавляли 0,030 мл 1,9%-го раствора хлорида кальция и производили запись. Полученные результаты позволяли оценить ряд параметров гемостаза (антикоагулянтную активность плазмы и свойства образующегося сгустка): r - время реакции, соответствующее тромбинообразованию, k - время начала образования сгустка, появления фибриновых нитей, ma - максимальная амплитуда и угол α (Фиг.5. Тромбоэластограмма). На основании этих параметров вычислялись следующие показатели: E - плотность сгустка , I и ci - индексы коагуляции, равные соответственно 160×tgα и ma/r+k. Фибринолитическую активность оценивали по времени лизиса сгустка эуглобулиновой фракции. Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью U теста Манна-Уитни.

Содержание глюкозы в крови у крыс группы пассивного контроля на протяжении всего эксперимента составляло 5,36±0,12 ммоль/л. У животных группы активного контроля через 4 дня после введения токсина уровень глюкозы был равным 20,0±1,6 ммоль/л, через 10 дней - 20,1±1,5 ммоль/л, через 18 дней - 20,8±1,3 ммоль/л, через 45 дней - 14,4±0,9 ммоль/л.

Ранее на модели диабета, вызванного введением СТЗ, было показано, что данный токсин вызывает гиперкоагуляцию [Hansen H.R., Wolfs J.L., Bruggemann L. et all. // Blood Coagul Fibrinolysis. Oct.; 18(7): 627-36 (2007)]. В нашем исследовании было обнаружено, что максимально выраженные изменения гемостаза (ускорение генерации тромбина, резкое возрастание индексов коагуляции при замедленном фибринолизе) развиваются через 10 дней после введения СТЗ, а к 45-му дню происходит постепенная нормализация показателей. На 4-й день эксперимента на фоне близких к норме показателей гемостаза добавление к плазме соединения ГК-2(r) вызывает лишь некоторое ускорение образования тромбина, которое нейтрализуется замедлением образования фибриновых нитей (Табл.2). На 10-й день эксперимента, в условиях ускоренного образования тромбина и, соответственно, повышения индексов коагуляции (ci и I) у диабетических крыс (серия 1), добавление к плазме соединения ГК-2(r) (серия 2) ведет к замедлению процесса тромбинообразования, снижению индексов коагуляции и ускорению фибринолиза. На 18-й день гипокоагуляционный эффект ГК-2(r) частично сохраняется и выражается в более медленном образовании тромбина и фибрина, почти в двухкратном снижении плотности сгустка и в полуторакратном - индекса коагуляции ci. Через 45 дней на фоне снижающейся гипергликемии гемостаз нормализуется и добавление к плазме соединения ГК-2(r) не сопровождается дополнительными изменениями показателей коагуляции (Фиг.6А. Влияние ГК-2h на индекс коагуляции плазмы крови крыс в условиях стрептозотоцинового диабета и в норме, группа активного контроля).

Таблица 2
Сравнение показателей ТЭГ после добавления дистиллированной воды (серия 1) или ГК-2 (серия 2) к плазме, взятой у диабетических крыс.
Сроки после СТЗ R, мм K, мм E, ед ci, ед I, Ед
4 дня
Серия 1 6.33±0.88 2.67±1.67 157.80±33.22 7.98±2.05 282.70±101.80
Серия 2 0.20±0.05* 4.50±2.29 156.70±36.88 8.42±1.42 307.30±66.75
10 дней
Серия 1 2.92±0,40 2.58±0.70 90,00±14.30 16.68±5.73 531.40±41.20
Серия 2 4.29±0,80* 2.58±0.92 80.16±14.37 7.11±1,00* 329.50±34.95*
18 дней
Серия 1 2.33±0.75 4.08±0.90 149.10±28.30 9.19±1.18 328.90±21.60
Серия 2 3.08±1.02 7.75±2.92* 90.52±4.93* 5.19±1.63* 262.90±66.07*
45 дней
Серия 1 6,00±2.04 2.50±1.19 162.80 ± 21.30 7.46±0.35 273,00±13.63
Серия 2 5.75±2.10 2.50±1.19 151.90±28.10 7.06±0.33 269.10±32.92
* - p<0,05 по сравнению с серией 1 (U тест Манна-Уитни).

У интактных животных при введении ГК-2(r) в плазму наблюдается тенденция к гипокоагуляции (Рис.6Б. Влияние ГК-2h на индекс коагуляции плазмы крови крыс в условиях стрептозотоцинового диабета и в норме, группа пассивного контроля) и ускорению фибринолиза, однако этот эффект выражен меньше, чем у диабетических крыс.

Таким образом, впервые выявлен гипокоагуляционный эффект ГК-2(r). Эксперименты ex vivo не позволяют сделать окончательного заключения о механизмах гипокоагуляционного действия ГК-2(r). В литературе описана опосредованная TrkA-рецепторами способность NGF стимулировать активность базофилов и активировать экскрецию гепарина в кровь [Welker P., Grbbe J., Gibbs В. et al. // Immunology. Mar; 99(3): 418-26 (2000)]. Учитывая антикоагуляционные свойства гепарина, а также исходя из выявленного факта взаимодействия соединения ГК-2(r) с TrkA рецепторами [Гудашева Т.А., Антипова Т.А., Середенин СБ. // ДАН. 2010. Т.434, №4. С.549-52; Антипова Т.А. // Экспериментальная и клиническая фармакология. Т.73. №12. С.6-8 (2010)], можно предположить, что способность усиливать высвобождение гепарина является одним из механизмов гипокоагуляционного действия ГК-2(r) в условиях диабета.

Сочетание антигипергликемических и антикоагуляционных свойств ГК-2(r) является чрезвычайно важным, т.к. при сахарном диабете отмечается нарушение микроциркуляции крови и повышена опасность тромбообразования.

Краткое описание чертежей.

На фиг.1 (Антигипергликемическое действие ГК-2r при комбинированном лечебно-профилактическом введении) показано антигипергликемическое действие ГК-2(r) при комбинированном (профилактическом и лечебном) введении. Ось абсцисс - время после введения СТЗ (сутки); ось ординат - содержание глюкозы в крови (ммоль/г). Данные представлены в виде медиан выборок и интерквартильных интервалов. * p<0,001 по сравнению с группой «Контроль» (критерий Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением с использованием U теста Манна-Уитни); ** p<0,0001 по сравнению с группой «Контроль» (критерий Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением с использованием U теста Манна-Уитна); # p<0,05 по сравнению с группой «СТЗ» (критерий Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением с использованием U теста Манна-Уитни), ^ p<0,05 по сравнению с группой «СТЗ» (точный критерий Фишера).

На фиг.2 (Влияние ГК-2r на 4-недельный прирост массы тела крыс в условиях стрептозотоцинового диабета) показано влияние ГК-2(r) на 4-недельный прирост массы тела крыс в условиях стрептозотоцинового диабета. Ось абсцисс - экспериментальные группы; ось ординат - прирост массы по сравнению с днем введения СТЗ. Данные представлены в виде медиан выборок и интерквартильных интервалов. * p<0,0001 по сравнению с группой «Контроль»; # p<0,01 по сравнению с группой «СТЗ» (критерий Краскела-Уоллиса с последующим пост-хок сравнением с использованием U теста Манна-Уитни).

На фиг.3 (Антигипергликемическое действие ГК-2h при комбинированном лечебно-профилактическом введении) показано влияние ГК-2(h) при комбинированном (профилактическом и лечебном) введении на содержание глюкозы в крови крыс на 3-й (А), 17-й (Б) и 28-й (В) дни после введения СТЗ. Ось абсцисс - экспериментальные группы; на оси ординат - содержание глюкозы в крови (ммоль/г). Данные представлены в виде средних значений выборок. * - достоверность различий по U тесту Манни-Уитни между пассивным контролем (вода) и активным контролем (СТЗ); # - достоверность различий между группами активного контроля (СТЗ) и опытной (введение ГК-2(h) 0,1 мг/кг в/б, 14 дней до и 28 после введения СТЗ).

На фиг.4 (Влияние ГК-2h на 4-недельный прирост массы тела крыс в условиях стрептозотоцинового диабета) показано влияние ГК-2(h) при комбинированном (профилактическом и лечебном) введении на изменение массы тела (r) со дня введения СТЗ (Δ веса). Ось абсцисс - время после введения СТЗ (сутки); ось ординат - изменение массы тела по сравнению с днем введения СТЗ (r). Данные представлены в виде средних значений выборок. * - достоверность различий по U тесту Манна-Уитни между пассивным контролем (вода) и активным контролем (СТЗ). # - достоверность различий между активным контролем (СТЗ) и терапевтическим введением препарата ГК-2(H) 0,1 мг/кг.

На фиг.5 (Тромбоэластограмма) показана стандартная тромбоэластограмма и методы измерения ее параметров.

На фиг.6 (Влияние ГК-2b на индекс коагуляции плазмы крови крыс в условиях стрептозотоцинового диабета и в норме) показано влияние ГК-2(r) на значение показателя ci (индекс коагуляции) плазмы крови крыс в условиях стрептозотоцинового диабета и в норме. А - группа активного контроля (СТЗ), Б - группа пассивного контроля (контроль). Ось абсцисс - время после введения СТЗ (сутки); ось ординат - значение ci (индекса коагуляции) плазмы крови крыс.

1. Применение димерного дипептида ГК-2 Rat(r) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина)) в качестве вещества, обладающего антидиабетической активностью.

2. Применение димерного дипептида ГК-2 Human(h) (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-глицил-L-лизина)) в качестве вещества, обладающего антидиабетической активностью.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается коррекции метаболических нарушений при сахарном диабете второго типа. Для этого осуществляют ежедневный прием в течение 12-14 недель биопрепарата на основе слоевищ лишайников рода Cladonia, листьев брусники Vaccínium vítis-idaéa, листьев толокнянки Arctostáphylos úva-úrsi.

Изобретение относится к аминосодержащему полимеру, фармацевтической композиции для снижения уровня холестерина, а также к применению аминосодержащего полимера и фармацевтической композиции.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции, обладающей антидиабетическим действием. Композиция, обладающая антидиабетическим действием, содержащая траву козлятника лекарственного (галеги), корни одуванчика лекарственного, цветки липы сердцевидной, листья шелковицы белой, корни девясила высокого, листья брусники обыкновенной, створки плодов фасоли обыкновенной, отличается тем, что также содержит листья лавра благородного, траву череды поникшей, при определенном содержании компонентов.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту из листьев разновидностей вида Cynara и к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента экстракт листьев разновидностей вида Cynara, которые полезны в лечении гипергликемии, гиперхолестеринемии, гипертензии и стеатоза печени.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предотвращения или уменьшения N-формилирования. Фармацевтическая композиция содержит смесь первичного аминосодержащего активного фармацевтического ингредиента, представляющего собой саксаглиптин, полиэтиленгликоля, присутствующего в смеси в количестве по меньшей мере 10%, и аминокислоты, представляющей собой глицин.

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и касается композиции для предупреждения или лечения диабета, а также способа лечения диабета. Сущность изобретения заключается в том, что композиция содержит конъюгат инсулина длительного действия и конъюгат инсулинотропного пептида длительного действия.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым производным 2,8-диазаспиро[4.5]декан-1-она или к их фармацевтически приемлемым солям, где R1 выбран из фенила, который замещен одним заместителем, выбранным из галогено-С1-4-алкокси; R2 выбран из фенила, пиридинила и 2-оксо-1,2-дигидро-пиридинила, которые замещены одним-двумя заместителями, независимо выбранными из C1-4-алкила, галогена, галогено-С1-4-алкила, гидрокси, С1-4-алкокси, галогено-С1-4-алкокси и бензилокси; n равно нулю.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам, способу их получения и применению в медицине: где А представляет собой фенил, , или тиенил, где фенил замещен 1-5 атомами галогена и -OR7; R7 представляет собой C1-6 алкил, где C1-6 алкил возможно замещен одной или более группами, выбранными из дейтерия, галогена, C1-6 алкокси и C1-6 циклоалкокси; или указанный фенил замещен только -OR7, где R7 представляет собой C1-6 алкил, и указанный C1-6 алкил дополнительно замещен 1-3 группами, выбранными из галогена и С3-10 циклоалкокси; или, если А представляет собой или тиенил, тиенил возможно замещен одной или более группами, выбранными из галогена, C1-6 алкила и фенила, необязательно замещенного дейтерием или галогеном; R1, R2, R3 или R4 выбраны из водорода, C1-6 алкила или галогена; R5 и R6 выбраны из водорода и дейтерия.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к комплексу гексамера конъюгата непептидильного полимера и инсулина с ионами трехвалентного кобальта, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к к новому (Z)-этил 2-(4-(4-хлорфенил)-2,4-диоксо-3-(3-оксо-3,4-дигидрохиноксалин-2(1Н)-илиден)бутанамидо)-4-метил-5-фенилтиофен-3-карбоксилату обладающему противодиабетичеcкой активностью, и способу его получения.Задачей создания изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Группа изобретений относится к области фармакологии и экспериментальной медицины и касается применения низкомолекулярных пептидных миметиков фактора роста нервов: гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина) - соединения ГК-2; гексаметилендиамида бис-(N-ацетил-лизил-глутаминовой кислоты) - соединения ГК-4; амида N-аминокапроил-глицил-лизина - соединения ГК-5; гексаметилендиамида бис-(N-аминокалроил-глицил-лизина) - соединения ГК-6, в качестве соединений, обладающих ангиогенной активностью.

Изобретение относится к пролекарствам опиоидного действующего вещества, которые обеспечивают контролируемое высвобождение действующего вещества путем ферментативного расщепления с последующей внутримолекулярной циклизацией.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), композициям, содержащим такие соединения; применению таких соединений в терапии для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, при которых предполагается активность калликреина плазмы; и способам лечения пациентов с помощью таких соединений; где R1 выбирают из Н, алкила, -СОалкила, -СОарила, -СОгетероарила, -(СН2)аОН, -(СН2)bCOOR10, -(СН2)cCONH2, -SO2алкила, -SО2арила, -SO2(СН2)hR13, -СО(СН2)iR14, -СОциклоалкила, -COCH=CHR15, -СО(СН2)jNHCO(СН2)kR16 и -CONR17R18; R2 выбирают из Н и алкила; R3 выбирают из алкила, -(СН2)dарила, -(СН2)егетероарила, (СН2)fциклоалкила, -СН(циклоалкила)2 и -(СН2)lарил-O-(СН2)m-арила; R4 и R6 независимо выбирают из Н и алкила; R5 выбирают из Н и ОН; или R4 и R5, вместе с атомами, к которым они присоединены, могут связываться с образованием 5- или 6-членной азациклоалкильной структуры; R7 выбран из Н и галогена; R8 выбран из Н, алкила, галогена и CF3; R9 представляет собой арил или гетероарил; R10 представляет собой Н или алкил; а, b, с, d, е, f, g, h, i, j, l и m независимо представляют собой 1, 2 или 3; k равно 0, 1, 2 или 3; *1 и *2 обозначает хиральные центры.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой ректальный поликомплексный гель для лечения язвенного колита, болезни Крона, свищей и осложнений, вызванных этими заболеваниями характеризующийся тем, что он содержит метронидазол, тимоген, карбопол, пропиленгликоль, динатриваевую соль ЭДТА, пропилпарагидроксибензоат, метилпарагидроксибензоат, натрия гидроксид и воду, причем компоненты в геле находятся в определенном соотношении в г/150 г.

Изобретение относится к конъюгату двойного действия формулы I, в котором доцетаксел связан с производным мурамилдипептида, что обеспечивает достижение противоопухолевого и противометастатического эффекта.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармации, и касается фармацевтической композиции, выполненной в твердой лекарственной форме и содержащей в качестве лекарственного вещества терапевтически эффективное количество амида N-(6-фенилгексаноил)глицил-L-триптофана, а в качестве вспомогательных веществ - связывающее вещество группы веществ, обеспечивающих достаточную массу таблетки или капсулы: целлюлозу или производные целлюлозы, такие как микрокристаллическая целлюлоза; лактозу, поливинилпирролидон, кальция карбонат, кальция фосфат; вспомогательные вещества, обладающие повышенной сорбционной способностью: коллоидный кремний, алюмометосиликат магния; группы скользящих веществ - стеариновая кислота и/или ее соли, поверхностно-активные вещества: олеат натрия, лаурилсульфат натрия; разрыхляющие вещества из группы: крахмал, пектин, поливинилпирролидон, кроскармеллоза натрия, натрия карбоксиметилцеллюлоза.

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается применения этилового эфира N-фенилацетил-L-пролилглицина для активации транскрипционного фактора HIF (фактор индуцируемый гипоксией), а также способа активации HIF с помощью указанного фактора и способа лечения заболеваний, связанных с дефицитом транскрипционного фактора HIF.

Изобретение относится к новому лиофилизированному фармацевтическому препарату, содержащему цитотоксический дипептид, такой как мелфалан фторфенамид гидрохлорид, и сахарозу, способам его получения, композициям, содержащим лиофилизированный фармацевтический препарат, и к их применению в лечении злокачественных опухолей.

Группа изобретений относится к медицине, а в частности к способу профилактики и/или лечения герпеса. Для этого пациенту вводят эффективное количество глутарилгистамина или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для применения метилового эфира N-капроил-L-пролил-L-тирозина (CH3(CH2)4 СО-Pro-Tyr-OCH3), (Дилепта) в качестве средства, обладающего психостимулирующей активностью.
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается профилактики и/или лечения инсулинорезистентности. Для этого вводят эффективное количество Eubacterium hallii в виде фармацевтической, пищевой или кормовой композиции. Способ обеспечивает эффективную коррекцию инсулинорезистентности за счет повышения уровня Eubacterium hallii в тонком кишечнике. 9 з.п. ф-лы, 3 пр., 1 табл.
Наверх