Композиция на основе r(-)-празиквантела для лечения и профилактики гельминтозов у теплокровных
Владельцы патента RU 2613490:
Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания "СКиФФ" (RU)
Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для лечения и профилактики гельминтозов у теплокровных, включая сельскохозяйственных и домашних животных, в частности кошек и собак. Для этого предложена антигельминтная композиция, содержащая в качестве активного начала комбинацию энантиомера празиквантела (R-празиквантела, R-PZQ), представленного в виде комплекса с бета-циклодекстрином, и пирантела памоата, а также воду и растительное масло, нейтральные наполнители и вспомогательные добавки, в частности добавки с гепатопротекторным и восстанавливающим микрофлору ЖКТ действием, при следующем соотношении компонентов (мас. %):
Предложенная водно-масляная суспензия характеризуется широким спектром действия, стабильностью при хранении, удобством в применении, приемлемыми для животных консистенцией и вкусом и отличается от известных аналогов более высокой эффективностью цистоцидного действия, достигаемой за счет возможности 2-5-кратного снижения эффективной дозы R(-)-празиквантела в сравнении с традиционно используемой рацемической смесью. Изобретение обеспечивает улучшение показателей потребления животными, в том числе любых пород собак, котят и щенков, а также возрастных и/или ослабленных животных. 5 з.п. ф-лы, 9 табл., 5 пр.
Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для лечения и профилактики гельминтозов у теплокровных, включая сельскохозяйственных и домашних животных, в частности кошек и собак. Предлагается композиция, содержащая комбинацию активного энантиомера празиквантела (R-празиквантела, R-PZQ) с пирантелом (пирантела памоатом) в качестве активного начала, циклодекстрин, воду и растительное масло, нейтральные наполнители, вкусовые и другие вспомогательные добавки, в частности добавки с гепатопротекторным и восстанавливающим микрофлору ЖКТ действием. Заявляемый антигельминтный препарат предназначается для перорального применения в виде водно-масляной суспензии, вносимой с помощью дозатора.
Гельминтозы - заболевания, возникающие вследствие паразитирования в животном организме гельминтов и сопровождающиеся тяжелыми клиническими симптомами. Жизнедеятельность гельминтов в организме хозяина имеет следствием различные патологии желудочно-кишечного тракта, являющиеся результатом как механических повреждений кишечника, так и различных нарушений обменных процессов, возникающих вследствие выделения гельминтами в процессе их жизнедеятельности токсичных для организма хозяина продуктов обмена. Присутствие в организме животного гельминтов, которые являются чужеродными для него объектами, может приводить к развитию выраженных аллергических реакций, а также повышает вероятность возникновения инфекционных заболеваний как в результате прямого внесения гельминтами патогенной микрофлоры, так и в силу снижения иммунитета хозяина, зараженного гельминтами.
Развитие техники, сопровождающееся открытием новых природных антигельминтиков и расширением возможностей органического синтеза новых химических соединений с антигельминтными свойствами, а также веществ, выполняющих роль целевых добавок, с одной стороны открывает новые возможности для совершенствования медикаментозной базы в области борьбы с гельминтозами, а с другой - является основанием для предъявления повышенных требований к их качеству. Современный антигельминтик должен обладать широким спектром действия, высокой эффективностью, пролонгированным действием, максимальной токсичностью для паразита при минимально возможном уровне токсичности для организма хозяина, иметь форму, обеспечивающую поступление в организм животного необходимой терапевтической дозы активного агента и удобство применения, а в случае оральных препаратов - приемлемый для потребления вкус.
В связи с этим, представляется очевидной актуальность задачи, связанной с продолжением разработки и внедрением новых препаратов для лечения и профилактики гельминтозов у теплокровных животных, которые отвечали бы указанной совокупности современных требований к их качеству.
Уровень техники
Сегодня фармацевтическая промышленность предлагает множество лекарственных средств для лечения животных, зараженных гельминтами, которые в качестве активного начала используют различные по своей природе и механизму действия химические соединения, в частности такие, как празиквантел, фенбендазол (профенбендазол), оксантел, бензимидазолы и их производные, пирантел и его соли, нитросканат, макролиды (макроциклические лактоны), соли пиперазина и другие.
Одним из наиболее часто используемых активных компонентов антигельминтных составов является празиквантел (2-(циклогексилкарбонил)-1,2,3,6,7,11b-гексагидро-4Н-пиразино[2,1-а] изохинолин-4-он). Празиквантел (ПР) известен как высоко эффективное антигельминтное средство, механизм действия которого состоит в повышении проницаемости мембран клеток гельминтов для ионов кальция, вызывающем генерализованное сокращение мускулатуры паразита, переходящее в стойкий паралич с последующей гибелью гельминта. После приема внутрь соединение быстро и полно всасывается из ЖКТ, в крови связывается с белками плазмы на 80%, далее подвергается биотрансформации в печени с образованием неактивных моно- и полигидроксилированных метаболитов. Время полужизни в организме составляет 0,8-1,5 ч (для празиквантела) и 4-6 ч (для метаболитов); выведение (80% - в виде метаболитов) осуществляется преимущественно почками и в небольшом количестве - с фекалиями. Празиквантел эффективен при лечении трематодозов (клонорхоза, метагонимоза, описторхоза, парагонимоза, фасциолеза, фасциолопсидоза, шистосомоза), цестодозов (гименолепидоза, дифиллоботриоза, тениаринхоза, тениоза), цистицеркоза и нейроцистицеркоза. По результатам многочисленных исследований празиквантел признается сравнительно малотоксичным препаратом (терапевтический индекс равен 40), не обладающим эмбриотропным и мутагенным свойствами и не влияющим на постнатальное развитие.
Однако при всех неоспоримых достоинствах празиквантела, он имеет ряд недостатков, к которым относят: а) отсутствие необходимой активности в отношении класса круглых червей (нематод), б) низкую растворимость в воде и, соответственно, не оптимальную биодоступность для организма в составе жидких композиций; и в) резко выраженный горький вкус, являющийся существенным препятствием при создании препаратов для орального приема, и особенно жидких форм, предназначенных для кошек и собак.
Вопрос расширения спектра действия антигельминтных композиций с празиквантелом достаточно успешно решается путем комбинирования его с различными агентами, обладающими высокой активностью в отношении нематод.
Для решения проблемы повышения водорастворимости и биодоступности празиквантела в последние годы успешно используются циклодекстрины, которые представляют собой циклические олигосахариды, содержащие 6 (α-циклодекстрин), 7 (β-циклодекстрин) или 8 (γ-циклодекстрин) глюкопиранозных единиц. Структурная организация молекулы циклодекстрина такова, что в ней различаются гидрофильная внешняя часть, которая повышает водорастворимость и способность соединения проникать в клетки организма, и гидрофобная внутренняя часть, которая образует полость. В водной среде гидрофобные участки многих молекул способны занимать гидрофобную полость циклодекстрина, образуя т.н. «соединения включения» (клатратные комплексы). Сегодня экпериментально подтверждено, что использование циклодекстринов и их производных во многих случаях существенно повышает водорастворимость и биодоступность многих лекарственных препаратов. При этом установлено, что указанный феномен достигается не только в результате образования «клатратов», но и за счет других типов взаимодействия между циклодекстринами и некоторыми слабо растворимыми в воде субстанциями, входящими в состав композиций и при этом не образующих с ЦД истинных комплексов (см., например, WO 2010008995, 21.01.2010).
Празиквантел известен специалистам как типичное соединение, формирующее с ЦД классические клатратные комплексы (Becket G. et al., Int J Pharm. 1999 Mar 1; 179(1):65-71; de Jesus MB. et al., J Pharm Biomed Anal. 2006 Jun 16; 41(4):1428-32: Maragos S. et al., AAPS PharmSciTech. 2009; 10(4):1444-51). Это свойство ПР сегодня используется для повышения его растворимости и биодоступности в составе водных антигельминтных композиций (de Jesus et al., J Drug Target. 2010 Jan; 18(1):21-26; CN 1557318 (A), 29.12.2004), оно также лежит в основе снижения концентрации празиквантела в лекарственных препаратах без изменения терапевтической активности последних, что в целом позволяет говорить о повышении эффективности лекарственного средства. Кроме того, сообщается, что комплексообразование между ЦД и ПР имеет результатом, по меньшей мере, частичное улучшение (подавление горького) вкуса.
Однако на сегодняшний день известны лишь единичные примеры разработок, которые связаны с составами, включающими комбинации празиквантела с противонематодными агентами, и при этом представленными в форме водных суспензий благодаря введению в систему с циклодекстрином (CN 1232253 (С), 21.12.2005; WO 2009062939 (А1), 22.05.2009).
В частности, в международной заявке WO 2009062939 (22.05.2009), поданной фирмой Novartis AG, описано противогельминтное средство в виде водной суспензии, антипаразитарный эффект которого определяется использованием в качестве активного начала комбинации празиквантела с макроциклическим лактоном, в частности оксимом мибельмицина, ивермектином и др., где растворимость ПР в воде определяется наличием в данном составе циклодекстрина β-циклодекстрина). Дополнительно предлагаемый состав может содержать до 10% наполнителей (предпочтительно поливинилпирролидон и/или микрокристаллическую целлюлозу и/или ксантановую камедь), включаемых в значительных количествах для получения пастообразного состояния продукта (с плотностью до 1,15), и при необходимости - другие используемые в ветеринарии ингредиенты, в частности хумектанты, стабилизаторы, диспергирующие агенты и вкусовые добавки. Предложенный состав позиционируется авторами как эффективное антигельминтное средство с широким спектром действия. В качестве основных преимуществ данного состава авторы отмечают удобство применения (в основном как результат стабильной пастообразной консистенции) и приемлемый для животных вкус (благодаря отсутствию «растекаемости» препарата в ротовой полости и частичной маскировке горечи связыванием с ЦД), которые обеспечивают возможность доставки в организм необходимой терапевтической дозы основных компонентов, что особенно важно при лечении в домашних условиях таких животных, как кошки и собаки.
Однако следует отметить, что раскрытая в WO 2009062939 композиция, которая может рассматриваться как ближайший аналог настоящего изобретения, имеет ряд существенных недостатков.
Во-первых, предлагаемая разработка не использует особенностей химических свойств празиквантела и преимуществ ЦД-системы, позволяющих существенно уменьшить терапевтически эффективную дозу действующего вещества (ДВ). Фактически прототип раскрывает результаты применения предлагаемого состава, исходя из традиционно используемой в большинстве препаратов дозы празиквантела - 5 мг/кг веса животного.
Во-вторых, в составе композиции предлагается использовать в качестве второго (кроме празиквантела) антигельминтика макроциклический лактон, в частности ивермектин или оксим мильбемицина (в дозе порядка 1-2 мг/кг), сведения о токсичности которых носят весьма противоречивый характер. Большинство исследователей, по меньшей мере, сходится во мнении, что токсичность этих соединений существенно зависит от вида обрабатываемого животного и от вида заболевания. Так, хорошо известно, что ивермектин ограниченно применим для собак, т.к. у некоторых пород (колли, шелти, австралийская и старая английская овчарки, а также их помеси) он вызывает тяжелые побочные эффекты, являясь нейротоксичным для них даже при однократном применением в дозе 0,1-0,5 мг/кг. Кроме того, сравнительно недавно в литературе появились также сообщения, что и у некоторых других видов животных применение ивермектина может иметь неблагоприятные отдаленные последствия (Семеряк Е.В. Патоморфологические признаки токсичности и отдаленные эффекты действия ивермектина на организм животных, канд. Диссертация, Омск, 2009). Что касается мильбемицина, то хотя он признан остро токсичным только для рыб и других гидробионтов, а для большинства теплокровных - малотоксичным соединением, тем не менее, дегельминтизации препаратами с этим лактоном согласно прилагаемым инструкциям не подлежат собаки породы колли, мелкие породы собак (до 5 кг) и щенки до 2-3-недельного возраста. По мнению некоторых специалистов, из-за достаточно высокой и при этом трудно просчитываемой опасности побочных явлений лечение кошек и особенно собак ивермектином и/или мибельмицином желательно начинать в условиях стационара или назначать эти препараты совместно с гамавитом, понижающим их токсичность.
В-третьих, из представленных в прототипе результатов по исследованию индивидуального ответа животных на дозу предлагаемой пасты следует, что легко потребляли ее лишь немногим более ¼ животных (28%), тогда как почти треть кошек, использованных в эксперименте, потребляли средство либо крайне неохотно (24%), либо вовсе оказывались (5%) от него (см. табл. 5 на стр. 16 прототипа). Это означает, что задача улучшения потребляемости животными, если и была решена, то лишь частично, причиной чего может быть сохранение присущего празиквантелу горького вкуса.
В-четвертых, данный препарат мало пригоден для лечения котят и щенков, а также старых или ослабленных животных, не только в силу возможных побочных эффектов (см. выше), но и по причине отсутствия в нем необходимых в этих случаях вспомогательных добавок с гепатопротекторным эффектом и способностью восстанавливать утраченную после обработки антигельминтиками полезную микрофлору.
При создании настоящего изобретения ставилась задача получения эффективной антигельминтной композиции широкого спектра действия в отношении уничтожаемых паразитов, включающей комплекс празиквантела с циклодекстрином и второй основной (противонематодный) агент, которая была бы лишена недостатков ближайшего аналога и характеризовалась большей, чем в прототипе, эффективностью, безопасностью, отсутствием горького вкуса и расширением круга хозяев за счет включения в него котят и щенков, мелких животных, а также возрастных и/или ослабленных особей.
Раскрытие изобретения.
Достижение поставленной при создании настоящего изобретения цели предполагало решение следующих конкретных задач:
а) использование особенностей химической структуры празиквантела и возможностей циклодекстриновой системы для снижения эффективной дозы ДВ;
б) поиск возможностей для полного устранения горького вкуса антигельминтика и улучшения его потребления животными;
в) подбор и включение в состав композиции полностью безопасного для всех видов теплокровных соединения, которое не уступало бы макроциклическим лактонам в плане эффективности противо-нематодного действия;
б) поиск возможностей для полного устранения горького вкуса антигельминтика и улучшения его потребления животными;
г) при необходимости - введение вспомогательных добавок, обеспечивающих дополнительную возможность расширения круга хозяев, который включал бы возрастных и/или ослабленных животных.
Первое. Основным достижением при создании нового препарата следует считать решение задачи снижения терапевтически эффективной дозы ДВ путем применения в нем активного энантиомера празиквантела (R(-)-празиквантела, Ievo-празиквантела, R-PZQ) вместо традиционно применяемой в антигельминтных препаратах коммерческой субстанции, представляющей рацемическую смесь его оптических изомеров ((rac)-празиквантел). Несмотря на то, что факт существования празиквантела в виде рацемической смеси установлен достаточно давно, только в последние годы он привлек пристальное внимание фармацевтов и медиков, особенно педиатров. Это связано с тем, что в целом ряде недавних разработок были определены особые свойства одного из двух оптических изомеров празиквантела - R-энантиомера, который, как выяснилось, определяет основную часть противопаразитарной активности рацемической смеси, тогда как второй компонент (S(+)-празиквантел), являясь по существу «балластом» в плане активности, в основном ответственен за горький вкус рацемата (Meyer Т. et al., PLoS Negl. Trop. Dis., 2009, 3, №1, e357; Olliaro P. et al., J. Antimicrob. Chemother., 2014, 69(4), 863-870). Открытие этого факта позволило многим авторам рассматривать R-празиквантел как один из наилучших кандидатов для лечения гельминтозов, и особенно шистозоматоза, который широко распространен в некоторых африканских странах, причем у детей раннего возраста, лекарства для которых заведомо предполагают использование малых доз активного компонента с приемлемым вкусом. Несмотря на повышенный интерес исследователей к R-празиквантелу, на сегодняшний день нами не найдено публикаций, касающихся реальных предложений с конкретными составами противогельминтных средств, для которых показана возможность применения для лечения животных. Отчасти это может объясняться тем, что коммерческий препарат R-празиквантела пока недостаточно широко представлен на рынке и является весьма дорогостоящим.
R-празиквантел, используемый в настоящем изобретении, был получен нами самостоятельно по методу, описанному Woelfle М. et al. в PLoS, 2011, v. 5, №9, е1260 с некоторыми модификациями.
Полученный энантиомер празиквантела при смешивании с бета-циклодекстрином и водой образовывал комплекс, аналогичный тому, который наблюдается для рацемата.
Существенно, что применение в качестве активного компонента R(-)-празиквантела, благодаря показанной нами возможности уменьшить в среднем в 2-5 раз (до 1,0-2,5 мг/кг) терапевтическую дозу ДВ за счет удаления малоактивного S-дистомера, позволило решить не только задачу повышения эффективности антигельминтика, но и существенно повысить показатель потребления лекарственного средства животными (см. пример 6) в результате значительного снижения горького вкуса, за который ответственен, главным образом, неактивный изомер.
Второе. По результатам проведенного анализа литературы и собственных экспериментальных исследований было установлено, что наилучшим кандидатом на роль второго основного компонента композиции, сочетающим в себе все необходимые качества, в этом случае является пирантел (пирантела памоат).
Пирантел - нетоксичное для организма хозяина соединение, эффективно действующее на нематод в ранней фазе их развития и на зрелые формы паразитов, он обладает широким спектром действия в рамках класса нематод: активен в отношении Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylos orientalis, Trichostrongylos colubriformis; практически не абсорбируется в желудочно-кишечном тракте и характеризуется пролонгированным действием в организме хозяина. Благодаря низкой токсичности, высокой переносимости и отсутствию неприятного вкуса допускает многократное (повторное) применение обработки, которое проходит без неблагоприятных последствий для организма. (Справочник Машковского on-line, Д.А. Авданина и др., Российский ветеринарный журнал, №1, 2006 г., с. 46-47; http://www.micro-plus.ru/publ53.htm, Санин А.В., Выбор антгельминтных средств и основы дегельминтизации).
Пирантел в комбинации с празиквантелом достаточно активно используется в ветеринарной практике. Известные препараты на основе такой комбинации («Празител» (СКиФФ, Россия), «Празицид» (Апи-Сан, Россия), «Дронтал» (Bayer, Германия), «Прател» (Lek Pharmaceuticals, Словения), и др.) демонстрируют широкий спектр действия, низкую токсичность для хозяина и при этом высокую эффективность в отношении паразитов. Более того, существует мнение, что два названных ингредиента демонстрируют синергетический эффект, который позволяет использовать их в более низких концентрациях, чем при раздельном применении.
Следует, однако, отметить, что использование пирантела, обычно выпускаемого и используемого в форме памоата (реже эмбоната), в жидких антигельминтных композициях обычно сопровождается введением в их состав токсичных органических растворителей таких, как диметилсульфоксид или диметилформамид, поскольку пирантел памоат практически не растворим в воде, а также в большинстве спиртов. Из соображений обеспечения безопасности препарата для животных нами было сознательно исключено применение любых токсичных растворителей. Что касается исследования «взаимоотношений» пирантела с ЦД и возможности повышения его растворимости в воде путем введения в систему с циклодекстрином, то в уровне техники такая информация отсутствует.
Вопрос о поведении пирантела в циклодекстриновой системе был исследован нами опытным путем. При этом было установлено, что при использовании пирантела в форме памоата растворимость его в воде меняется в присутствии ЦД незначительно. Однако нами впервые было показано, что в случае перевода этой обычно используемой коммерческой субстанции собственно в основание пирантела (например, в результате проведения реакции с бикарбонатом натрия) может быть достигнуто практически полное растворение пирантела в водно-циклодекстриновой системе. Это позволяет при необходимости дополнительно снижать концентрации данного соединения в препарате, хотя следует иметь в виду, что предварительное получение пирантела из памоата в виде отдельной стадии усложняет и удорожает процесс получения лекарственного препарата, а высокие концентрации бикарбоната, введенного непосредственно в состав препарата, ухудшают его органолептические свойства.
Вместе с тем, при определении нами эффективной терапевтической дозы для предлагаемой композиции в опытах на кошках и собаках было показано (см. пример 4), что биодоступность пирантела памоата в предлагаемом составе, не содержащем никаких органических растворителей, тем не менее, является достаточной для использования его в зоне самых низких из известных эффективных доз (10-15 мг/1 кг веса животного). Тот факт, что при изучении стабильности суспензии ни в одном случае не обнаруживалось отделения фракции, содержащей преимущественно пирантела памоат (см. пример 2) позволяет предположить, что с высокой степенью вероятности имеет место, по меньшей мере, частичная адсорбция его на комплексе празиквантел-ЦД.
Третье. Вопрос об улучшении потребления животными лекарства решался не только за счет устранения горького вкуса в результате применения R-энантиомера празиквантела, но и в направлении поддержания вязкости суспензии, необходимой для того, чтобы предотвратить растекание лекарства в ротовой полости и сократить площадь его контакта со вкусовыми рецепторами. Для этого в нашем случае, в отличие от ближайшего аналога, где применялись высокие концентрации (до 10%) наполнителей, было использовано растительное масло (предпочтительно тыквенное или соевое), которое, помимо проявления им свойств мягкого слабительного, часто обладает прямым антигельминтным действием (тыквенное масло используется для избавления от круглых и ленточных гельминтов, соевое в комбинации с силимарином - для лечения описторхозов). Приемлемое содержание масла варьировало от 22 до 4% в зависимости от общего содержания базовых компонентов (см. составы в примере 2).
Четвертое. Известно, что проводимая обработка хозяина антигельминтиком, как правило, сопровождается нарушением нормального баланса микрофлоры в ЖКТ, а повторные процедуры могут неблагоприятным образом отразиться на состоянии печени, что особенно важно при проведении лечения пациентов детского и пожилого возраста. С целью исключения или максимально быстрого восстановления указанных последствий обработки антигельминтиком в конкретных вариантах предлагаемой суспензии дополнительно использовали добавки с гепатопротекторным и восстанавливающим микрофлору ЖКТ действием, предпочтительно инулин и/или экстракт расторопши (с 80% силимарина).
Предлагаемая композиция для лечения и профилактики гельминтозов теплокровных животных характеризуется следующим составом компонентов в мас.%:
| R - празиквантел | 0.1-0,5 |
| пирантела памоат | 1, 0-3,0 |
| бета-циклодекстрин | 1,5-5,0 |
| наполнители и вспомо- | 1,2-5,3 |
| гательные добавки | |
| растительное масло | 4,0-22,0 |
| вода | остальное |
В качестве наполнителей могут быть использованы поливинилпирролидон, аэросил, МКЦ и др., в число вспомогательных добавок могут входить стабилизаторы, диспергирующие агенты, вкусовые добавки, традиционно применяемые в данной области.
Таким образом, сущность настоящего изобретения состоит в создании новой антигельминтной композиции в форме суспензии, содержащей комбинацию активного энантиомера празиквантела (R(-)- празиквантела) с пирантела памоатом в качестве активного начала, бета-циклодекстрин, водно-масляную смесь, нейтральные наполнители и другие используемые в ветеринарии вспомогательные ингредиенты, при определенном соотношении компонентов. Предлагаемая антигельминтная водно-масляная суспензия характеризуется широким спектром антигельминтного действия, стабильностью при хранении, удобством в применении, приемлемыми для животных консистенцией и вкусом и отличается от ближайшего аналога более высокой эффективностью, практически полным отсутствием горького вкуса и улучшением показателей потребления животными (основные технические результаты), расширением круга хозяев за счет включения в него любых (без ограничения) пород собак, котят и щенков, а также возрастных и/или ослабленных животных (дополнительный технический результат).
Принимая во внимание, что все вышеперечисленные преимущества заявляемой композиции, а также то, что все соединения, входящие в предлагаемые составы, используются не только в ветеринарии, но и в фармацевтике, и являются безопасными для человека, есть все основания полагать, что данный лекарственный препарат после необходимых дополнительных испытаний и соответствующей доработки лекарственной формы может быть использован также и в медицинской практике.
Осуществление изобретения.
Осуществление изобретения с достижением технического результата подтверждается нижеследующими конкретными примерами, которые не должны рассматриваться как ограничивающие его объем.
R(-) - празиквантел был получен по методу, описанному Woelfle М. et al. в PLoS, 2011, v. 5, №9, е1260 с некоторыми модификациями. Очищенная субстанция представляла собой белый кристаллический порошок с Тплав.=109-111°С, характеризующийся высокой гигроскопичностью, растворимостью в большинстве органических растворителей и низкой растворимостью в воде.
Пример 1. Способ приготовления суспензии.
В сосуд заливают воду, нагревают ее до температуры 55°С и прибавляют сухую смесь, состоящую из расчетных количеств R-празиквантела и бета-циклодекстрина, перемешивают компоненты при поддержании указанной температуры до полного их растворения. После охлаждения смеси до комнатной температуры образуется осадок комплекса R-празиквантела с циклодекстрином. К суспензии комплекса в воде при постоянном перемешивании последовательно добавляют водорастворимые компоненты (такие, как лимонная кислота, аспасвит, при необходимости - экстракт расторопши и инулин) и продолжают перемешивание еще 5 минут после их растворения. Затем вводят масло, пирантел и наполнители (например, твин, аэросил и др.). Полученный полный состав перемешивают в течение 30-40 минут.
Пример 2. Способ определения стабильности препарата при его хранении.
Оценку стабильности препарата проводили по двум направлениям: визуально - на седиментационную устойчивость суспензии и методами количественного анализа - на сохранение концентрации ДВ в составе композиции.
Для определения седиментационной устойчивости суспензии полученный состав помещали в стеклянный флакон и хранили при комнатной температуре, через определенные промежутки времени (примерно 12 часов) визуально оценивая степень расслоения суспензии в обоих случаях. При этом было установлено, что первые признаки расслоения препарата отмечаются не ранее, чем через 10-14 дней от начала хранения.
Количественный анализ проводился в отношении концентрации празиквантела и пирантела до и после хранения препарата при 5°С и 30°С в течение 6 месяцев. Содержание ДВ в препаратах определяли методом ВЭЖХ. В результате проведенных исследований было установлено, что в пределах указанного периода времени сколько-нибудь существенных изменений в содержании ДВ не наблюдалось вне зависимости от температуры хранения.
Пример 3. Составы с различным содержанием ДВ.
Способом, описанным в примере 1, были получены водно-масляные антигельминтные суспензии следующих составов:
Состав №1
| R-празиквантел | 0,25 |
| пирантела памоат | 1,0 |
| бета-циклодекстрин | 2,0 |
| лимонная кислота | 0,35 |
| аспасвит | 0,5 |
| аэросил | 1,0 |
| твин | 0,5 |
| шаромикс | 0,05 |
| инулин | 2,5 |
| экстракт расторопши | |
| (80% силимарина) | 0,4 |
| соевое масло | 22,0 |
| вода | остальное |
Состав №2
| R-празиквантел | 0,5 |
| пирантела памоат | 3,0 |
| бета-циклодекстрин | 5,0 |
| лимонная кислота | 0,40 |
| аспасвит | 0,45 |
| аэросил | 0,80 |
| твин | 0,5 |
| шаромикс | 0,05 |
| тыквенное масло | 20,0 |
| вода | остальное |
Состав №3
| R-празиквантел | 0,1 |
| пирантела памоат | 1,5 |
| бета-циклодекстрин | 1,5 |
| лимонная кислота | 0,30 |
| аспасвит | 0,45 |
| аэросил | 0,80 |
| твин | 0,5 |
| шаромикс | 0,05 |
| соевое масло | 22,0 |
| вода | остальное |
Составы №1-№3 ориентированы на использование их в объеме (дозировке) 1 мл/1 кг или 1 мл/2 кг.
С целью удобства использования и обеспечения разумного объема вводимого животному препарата композиция может готовиться так, чтобы содержать в 1 мл большее количество эффективных доз ДВ. Такие концентрированные составы содержат значительные количества циклодекстрина и пирантела и нуждаются в увеличении содержания воды, что может быть без ущерба для свойств препарата, в частности для сохранения активности и достаточной вязкости, достигнуто путем снижения содержания масла до 4-5%, а также наполнителей и добавок до минимального значения, соответствующего примерно 1,2%. Ниже приведены 3 состава, рассчитанные на применение в дозировке 1 мл/5 кг массы животного, которые особенно удобно использовать при лечении собак средних и крупных пород.
Состав №4
| R-празиквантел | 0,25 |
| пирантела памоат | 1,0 |
| бета-циклодекстрин | 2,0 |
| лимонная кислота | 0,25 |
| аспасвит | 0,30 |
| аэросил | 0,40 |
| твин | 0,20 |
| шаромикс | 0,05 |
| инулин | 2,5 |
| экстракт расторопши | |
| (80% силимарина) | 0,4 |
| соевое масло | 4,0 |
| вода | остальное |
Состав №5
| R - празиквантел | 0,5 |
| пирантела памоат | 3,0 |
| бета-циклодекстрин | 5,0 |
| лимонная кислота | 0,25 |
| аспасвит | 0,25 |
| аэросил | 0,50 |
| твин | 0,25 |
| шаромикс | 0,03 |
| тыквенное масло | 5,0 |
| вода | остальное |
Состав №6
| R - празиквантел | 0,1 |
| пирантела памоат | 1,5 |
| бета-циклодекстрин | 1,5 |
| лимонная кислота | 0,25 |
| аспасвит | 0,25 |
| аэросил | 0,40 |
| твин | 0,25 |
| шаромикс | 0,05 |
| соевое масло | 4,50 |
| вода | остальное |
Пример 4. Мониторинг терапевтически эффективных доз ДВ
Оценка эффективности действия исследуемых составов с различными дозами ДВ проводилась на кошках и собаках, содержащихся в приюте для бездомных животных.
Предлагаемые составы задавали животным однократно из полимерного шприца в ротовую полость до утреннего кормления. Специальной диеты при дегельминтизации не назначали. Животных в опыт подбирали после предварительных копроскопических исследований, в ходе которых пробы фекалий исследовали методом флотации с использованием в качестве флотационной жидкости раствора сульфата цинка и проводили подсчет количества яиц гельминтов в грамме фекалий животных с помощью счетной камеры ВИГИС до и через 10 дней после дегельминтизации. Все полученные данные подвергались статистической обработке.
Для дегельминтизации кошкам задавали составы №1-№3 в дозе 1 мл/2 кг массы тела животного; собакам - составы №4-№6 в дозе 1 мл/5 кг веса.
Кошки.
а) Для титрации терапевтической дозы R-празиквантела при лечении дипилидиоза в опыт отобрали 15 кошек разных пород, спонтанно инвазированных Dipylidium caninum, и разделили их на 3 группы, где 1-я группа кошек получала состав №1, 2-я группа - состав №2, 3-я группа - состав №3, приготовленных согласно примеру 3.
Результаты исследований представлены в таблице 1. Из приведенных данных следует, что все животные, получавшие титруемые составы, полностью освободились от дипилидиумов. Исходя из полученных результатов, можно заключить, что все испытанные дозы R-празиквантела, в том числе и минимальная из них (1,0 мг/кг, состав №3), обеспечивают 100%-ную интенсэффективность при дипилидиозе. Титруемые составы не вызывали у животных признаков токсикоза или других побочных действий после обработки.
б) Для установления эффективной терапевтической дозы пирантела памоата при лечении токсокароза в опыт было отобрано 15 кошек разных пород, спонтанно инвазированных Toxocara cati, которые были разделены на 3 группы для испытания каждого из составов №1-№3.
Полученные результаты (таблица 2) показывают, что все животные, получавшие титруемые составы, полностью освободились от токсокар. Из этого следует, что при токсокарозе кошек пирантел памоат в дозе от 10 до 30 мг/кг демонстрирует одинаковую 100%-ную интенсэффективность. Признаков токсикоза или других побочных действий после обработки ни у одного животного не наблюдалось.
в) При оценке эффективности терапевтической дозы пирантела памоата в лечении токсаскариоза использовали 12 кошек разных пород, спонтанно инвазированных Toxascaris leonina (3 группы по 4 животных).
Из данных, приведенных в таблице 3, следует, что все животные во всех трех опытных группах полностью освободились от токсаскарисов. Исходя из полученных результатов, дозировка пирантела памоата в интервале 10-30 мг/кг показывает одинаковую (100%-ную) интенсэффективность при токсаскариозе кошек. Титруемые составы не вызывали у животных признаков токсикоза или других побочных эффектов после обработки.
Собаки
а) Для установления эффективной терапевтической дозы R-празиквантела при лечении эхинококкоза в опыт было отобрано 15 собак различных пород, спонтанно инвазированных Echinococcus spp., которые были разделены на 3 группы для испытания составов №4-№6.
В таблице 4 представлены полученные результаты, из которых следует, что все животные, получавшие титруемые составы, полностью освободились от эхинококков. Как и в испытаниях, проведенных на кошках, минимальная дозировка R-празиквантела (1,0 мг/кг, состав №6) показала 100%-ную эффективность в уничтожении цестод. Признаков токсикоза или других побочных эффектов после обработки тестируемыми препаратами ни у одного животного не наблюдали.
б) Для оценки терапевтической эффективности дозы пирантела памоата при лечении токсокароза в опыт отобрали 18 собак разных пород, спонтанно инвазированных Тохосага canis (3 группы по 6 животных).
Полученные результаты представлены в таблице 5. Очевидно, что все животные, получавшие титруемые составы, полностью освободились от токсокар. Исходя из полученных результатов, можно заключить, что пирантела памоат в дозе 10-30 мг/кг демонстрирует 100%-ную интенсэффективность при токсокарозе собак. Титруемые составы не вызывали у животных признаков токсикоза или других неблагоприятных эффектов.
в) Для установления терапевтически эффективной дозы пирантела памоата при лечении токсаскариоза использовали 15 собак разных пород, спонтанно инвазированных Toxascaris leonina (3 группы по 5 животных).
В таблице 6 представлены полученные результаты, которые показывают, что все животные, получавшие титруемые составы, полностью освободились от токсаскарисов. Из этого следует, что при токсаскариозе собак дозировка пирантела памоата в интервале 10-30 мг/кг демонстрирует 100%-ную интенсэффективность. Титруемые составы не вызывали у животных признаков токсикоза или других побочных действий после обработки.
На основании проведенных исследований было сделано заключение, что: а) минимальной терапевтически эффективной дозой R-празиквантела, обеспечивающей в составе предлагаемых композиций 100%-ное освобождение животных от инвазии цестодами, является доза 1,0 мг/кг массы животного; б) для пирантела памоата полная дегельминтизация в отношении нематод достигается, начиная с дозы 10 мг/кг.
Пример 5. Клинические исследования лечебного эффекта и их результаты.
Клинические испытания предлагаемых в настоящем изобретении антигельминтных композиций проводили на базе трех ветеринарных клиник г.Москвы.
При этом исследования и оценку результатов в целом осуществляли согласно схеме, описанной в примере 4, за исключением того, что а) в каждый опыт включали от 30 до 50 животных с установленным ветеринарными врачами диагнозом; б) оценку эффективности лечения проводили в сравнении с препаратом по прототипу (WO 2009062939, пример 1), который готовили с учетом применения в объеме 1 мл/2 кг веса (аналогично составам №№1-3) или 1 мл/5 кг веса (аналогично составам №№4-6), где доза празиквантела (рацемата) составляет 2,5 мг/1 кг веса животного (контроль 1, К-1); в) формировали дополнительную контрольную группу животных (контроль 2, К-2), которым вместо антигельминтика вводили соответствующий объем физраствора; г) дополнительно проводили исследования по индивидуальному потреблению («поедаемости») препаратов животными (кошками).
В таблице 7 представлены результаты исследования эффективности действия составов №№1-3 у кошек с диагнозами дипилидиоз, токсокароз и токсаскариоз.
В таблице 8 приводятся результаты лечения составами №№4-6 собак с эхинококкозом, токсокарозом и токсаскариозом.
Анализ результатов клинических исследований, как в случае лечения кошек, так и в случае лечения собак, убедительно свидетельствует о том, что снижение рекомендуемой авторами дозы препарата-прототипа (в расчете на празиквантел 5 мг/кг веса) в 2 раза (до 2,5 мг/кг) приводит к резкому падению цестоцидной активности, что практически делает нецелесообразным его применение при инвазировании животных плоскими гельминтами.
В случае предлагаемой нами композиции даже при 5-кратном уменьшении дозы ДВ по сравнению с используемой в прототипе (до 1,0 мг/кг празиквантела в составах №3 и №6) препарат обеспечивает 100%-ное избавление животных от инвазирования как круглыми, так и плоскими гельминтами.
Пример 6. Оценка (индивидуального) потребления препарата животными.
Для определения потребления животными предлагаемых антигельминтных композиций в ходе клинических испытаний (см. пример 5) дополнительно вели наблюдение за поведением кошек (30) во время и после введения им состава №1 (в дозе, содержавшей 2,5 мг празиквантела (R-энантиомера) на кг веса животного) с записью показателей, позволяющих оценить вкусовые качества препарата. Для этого, во-первых, использовали шкалу (в баллах), в соответствии с которой 1 балл означает невозможность применения, 2 балла - затрудненное применение, 3 балла - применение при умеренном сопротивлении, 4 балла - легкое (беспрепятственное) применение, а во-вторых, показатель наличия обильного слюноотделения после введения лекарственного средства.
В этом исследовании использовали в качестве контроля 30 клинически здоровых кошек, получавших контрольный препарат по прототипу, который был составлен согласно примеру 1 в WO 2009062939, исходя из введения его животному в объеме 1 мл/2 кг (аналогично составу №1) и рекомендуемой авторами дозы празиквантела 5 мг на кг веса, поскольку, как показали результаты наших исследований (см. пример 5), снижение дозировки для препарата-прототипа не представляется возможным из-за существенного уменьшения его цестодоцидной активности. Результаты испытания по определению потребления кошками антигельминтной композиции в сравнении с прототипом представлены в таблице 9.
На основании результатов наблюдения за потреблением кошками композиции по изобретению и композиции по прототипу можно заключить, что новый препарат демонстрирует существенно лучшие показатели, чем известный. Основной причиной доказанного экспериментальным путем улучшения вкусовых качеств предлагаемой композиции следует считать замену рацемата празиквантела R-энантиомером, которая позволила в два-пять раз по сравнению с прототипом снизить дозировку препарата (при сохраненном уровне цестодоцидной активности), а также исключить из состава наиболее горькую составляющую рацемической смеси - S(+)-празиквантел.
1. Композиция для лечения и профилактики гельминтозов у теплокровных, представляющая собой суспензию, которая содержит празиквантел и второй антигельминтик в качестве активных компонентов, циклодекстрин, наполнители, вспомогательные добавки и воду, и отличается тем, что в качестве активного начала содержит комбинацию R-энантиомера празиквантела (R-празиквантела) и пирантела памоата, дополнительно включает растительное масло и характеризуется следующим составом компонентов (мас. %):
| R-празиквантел | 0.10-0,50 |
| пирантела памоат | 1,0-3,0 |
| бета-циклодекстрин | 1,5-5,0 |
| наполнители и вспомо | |
| гательные добавки | 1,2-5,3 |
| растительное масло | 4,0-22,0 |
| вода | остальное |
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что растительное масло представлено тыквенным или соевым маслом.
3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит вкусовые добавки.
4. Композиция по п. 3, отличающаяся тем, что в качестве вкусовых добавок использованы лимонная кислота и аспасвит.
5. Композиция по пп. 1-4, отличающаяся тем, что в число вспомогательных добавок входят соединения со свойствами гепатопротектора и/или восстановителя микрофлоры ЖКТ.
6. Композиция по п. 5, отличающаяся тем, что в качестве гепатопротектора и восстановителя микробиоза содержит инулин и/или экстракт расторопши.
