Способ определения свободно-радикального окисления в модельной системе

Изобретение относится к диагностике, а именно способу получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления. Способ получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления по концентрации малонового диальдегида, включающий получение 10% спиртового раствора лецитина, из 0,25 мл полученного раствора лецитина и 5 мл дистиллированной воды инжекционным способом готовят суспензию липосом, в полученную суспензию липосом добавляют 0,2 мл 0,05 н соляной кислоты и впрыскивают 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода, нагревают при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Вышеописанный способ позволяет повысить точность определения свободнорадикального окисления. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к лабораторным способам определения скорости перекисного окисления липидов, и может быть использовано для оценки антиоксидантной активности растительного сырья, в частности, для разработки способов лечения окислительного стресса у животных.

В настоящее время считается, что целый ряд патологий и патологических состояний сопровождается развитием окислительного стресса, характеризующегося патологически высоким уровнем свободнорадикального окисления и снижением ниже нормы антиоксидантной защиты.

Для изыскания средств и разработки способов антиоксидантной защиты на их основе необходимо убедиться в их антиоксидантной активности, для чего используются модельные системы перекисного окисления липидов.

Известны модельные системы перекисного окисления липидов (ПОЛ), уровень свободнорадикального окисления в которых определяют по показателю малонового диальдегида (МДА). Изучение антиоксидантной активности химических соединений проводят с использованием в качестве субстрата ПОЛ липосомальных дисперсий, приготовленных инжекторным способом. Для получения липосом в основном используют яичный лецитин [Зайцев В.Г. Модельные системы перекисного окисления липидов и их применение для оценки антиоксидантного действия лекарственных препаратов. Дисс. к-та биол. наук. - Волгоград. - 2001. - С. 104] и соевый лецитин [Ярован Н.И., Комиссарова Н.А. Разработка препаратов с антиоксидантной защитой для птиц на основе сабельника болотного (Comarum palustre L.), Вестник ОрелГАУ - 2014. - С. 36-40].

Наиболее близким техническим решением к заявляемому решению является способ оценки антиоксидантной активности растительного сырья из сабельника болотного (Comarum palustre L.), заключающийся в определении антиоксидантной активности в водных настоях сабельника болотного по снижению уровня свободнорадикального окисления, который определяют по уровню малонового диальдегида (МДА) методом взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой в модельной системе перекисного окисления липидов, представленной полученными из лецитина липосомами (патент РФ №2535139) [1].

В основе метода лежит реакция между малоновым диальдегидом (МДА) и тиобарбитуровой кислотой, которая при высокой температуре и кислом значении рН протекает с образованием окрашенного триметинового комплекса, содержащего одну молекулу МДА и две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Максимум поглощения комплекса приходится на 532 нм.

Недостатком использования известных модельных систем являются длительность окисления липосом и недостаточная точность определения уровня свободнорадикально окисления по концентрации малонового диальдегида (МДА).

Кроме того, недостаточно изученным остается вопрос о возможности использования лецитинов различного происхождения в системе перекисного окисления липидов.

Образцы лецитина сои содержат большее количество триглицеридов, свободных жирных кислот и фосфатидилэтаноламина, однако меньшее количество фосфатидных кислот и фосфатидилхолина, чем лецитин подсолнечника, играющего определяющую роль в перекисном окислении липидов (НИИ медико-биологических проблем ГУ «ДМА» МОЗ Украины. Днепропетровск ГУ «Институт пищевой биотехнологии и геномики НАН Украины», Киев BIOTECHNOLOGIA ACTA, V. 7, No 1, 2014) [2].

Жирные кислоты триацилглицеринов нейтрального масла, содержащегося в соевых лецитинах, более ненасыщенны по сравнению с жирными кислотами триацилглицеринов нейтрального масла, содержащегося в подсолнечных лецитинах, а жирные кислоты, содержащиеся в фосфолипидах соевых лецитинов, более насыщенны по сравнению с жирными кислотами, содержащимися в фосфолипидах подсолнечных лецитинов (Корнена Е.П. Химический состав, строение и свойства фосфолипидов подсолнечных и соевых масел. Дис. … д-ра техн. наук. Краснодар, 1987. 386 с. ) [3].

Задачей предлагаемого способа является уменьшение времени окисления липосом и повышение точности определения свободнорадикально окисления по концентрации малонового диальдегида (МДА) за счет уточнения условий проведения основных этапов анализа и использования лецитина из подсолнечника.

Техническим результатом изобретения является повышение чувствительности и точности определения концентрации малонового диальдегида.

Поставленная задача и указанный технический результат достигаются благодаря тому, что в способе получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободнорадикального окисления по концентрации малонового диальдегида (МДА), включающем получение 10% спиртового раствора лецитина, из 0,25 мл полученного раствора лецитина и 5 мл дистиллированной воды инжекционным способом готовят суспензию липосом, в полученную суспензию липосом добавляют 0,2 мл 0,05 н. соляной кислоты и впрыскивают 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода, нагревают при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Дополнительное введение кислоты в суспензию липосом объясняется необходимостью подкисления среды, поскольку процессы окисления в липосомах наиболее активно протекают в более кислой среде, что способствует большему образованию свободных радикалов и позволит сократить на 30 часов (по сравнению с прототипом) проведение анализа.

Окисление суспензии липосом проводят при температуре 38°C с целью повышения скорости протекания процесса.

Перед проведением исследования на фотоэлектроколориметре пробы подвергают центрифугированию для получения прозрачных растворов с целью повышения точности анализа.

Данная система позволяет проводить широкомасштабные исследования растительного сырья на антиоксидантную активность и повышает точность определения.

Реализация способа состоит в следующем: готовят 2 модельные системы перекисного окисления липидов: контрольную (1) - на основе соевого лецитина и опытную (2) - на основе лецитина из подсолнечника.

Пример

Экспериментальные исследования проводились в химических лабораториях ФГБОУ ВО «Орловский государственный аграрный Университет».

Готовились 2 модельные системы перекисного окисления липидов: 1 - на основе соевого лецитина и 2 - на основе лецитина из подсолнечника (с добавлением кислоты, проведением окисления суспензии липосом при повышении температуры до 38°C с одновременным перемешиванием и центрифугированием перед фотоэлектроколориметрированием).

1 система - на основе соевого лецитина.

1 этап. Приготовление липосом. Для приготовления 10% раствора лецитина вводили лецитина в 5 мл 96%-го спирта, нагревали до 30-40°С и интенсивно перемешивали до однородного состояния. Липосомы готовили инжекционным способом: в 5 мл дистиллированной воды при постоянном интенсивном помешивании шприцом с тонкой иглой быстро впрыскивали 0,25 мл раствора 10%-ного раствора лецитина.

Окисление липосом. В приготовленную суспензию липосом впрыскивали 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода (Н2О2) и нагревали при температуре 37°С в течение 6 часов. Далее 2 суток выдерживали при комнатной температуре.

2 этап. Определение концентрации МДА в модельной системе. В модельную систему к 0,5 мл суспензии липосом добавляли 0,5 мл 0,92 М раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 49 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Нагревали 15 минут на кипящей водяной бане, после чего исследовали полученный раствор на фотоколориметре при длине волны 532 нм против дистиллированной воды.

В модельной системе перекисного окисления липидов исследовали уровень свободнорадикального окисления липидов по показателю МДА, МДА определяли по реакции с ТБК.

2 система - на основе соевого лецитина.

1 этап. Приготовление липосом. Для приготовления 10% раствора лецитина вводили лецитин в 5 мл 96%-го спирта, нагревали до 30-40°С и интенсивно перемешивали до однородного состояния. Липосомы готовили инжекционным способом: в 5 мл дистиллированной воды при постоянном интенсивном помешивании шприцом с тонкой иглой быстро впрыскивали 0,25 мл раствора 10%-го раствора лецитина. Далее в суспензию липосом добавляли 0,2 мл 0,05 и соляной кислоты с целью достижения оптимальной для протекания реакции пероксидации кислотности (рН).

Окисление липосом. В приготовленную суспензию липосом модельной системы впрыскивали 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода (Н2О2) и нагревали при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном интенсивном перемешивании.

2 этап. Определение концентрации МДА в модельной системе. В контрольную модельную систему к 0,5 мл суспензии липосом добавляли 0,5 мл 0,92 М раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 49 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Нагревали 5 минут на кипящей водяной бане с последующим охлаждением в ледяной воде в течение 5 мин, после чего пробы подвергали центрифугированию в течение 5 мин при 9000 об/мин и исследовали полученный раствор на фотоколориметре. Оптическую плотность измеряли при 532 нм против дистиллированной воды с использованием кюветы с толщиной рабочего слоя 5 мм.

Результаты определения уровня перекисного окисления липидов в известной и предложенной модельных системах представлены в таблице.

Полученные результаты показали, что в предлагаемом способе уменьшается время окисления липосом и повышается точность определения уровня свободнорадикально окисления по концентрации малонового диальдегида (МДА) за счет уточнения условий проведения основных этапов анализа.

Способ получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободнорадикального окисления по концентрации малонового диальдегида (МДА), включающий получение 10% спиртового раствора лецитина, из 0,25 мл полученного раствора лецитина и 5 мл дистиллированной воды инжекционным способом готовят суспензию липосом, в полученную суспензию липосом добавляют 0,2 мл 0,05 н. соляной кислоты и впрыскивают 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода, нагревают при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Предложены способы зондирования множественных мишеней в биологическом образце, включающие использование фотоактивируемого химического обесцвечивания для обнаружения множественных мишеней в биологическом образце.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики гипоксии плода в родах, включающий определение концентрации лактата в амниотической жидкости, отличающийся тем, что образец амниотической жидкости забирают в первом периоде родов вагинальной амниотомией при раскрытии шейки матки 4-5 см посредством иглы для пункции заднего свода влагалища, определяют в амниотической жидкости концентрацию лактата энзиматическим колориметрическим методом и при концентрации лактата в амниотической жидкости менее 5,0 ммоль/л или более 9,5 ммоль/л диагностируют гипоксию плода в родах.

Изобретение относится к области аналитической химии, и касается способа определения O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-метилкарбамата и O-(2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил)-N-(дибутиламиносульфенил)-N-метилкарбамата в биологическом материале.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа определения феназепама. Сущность способа заключается в том, что готовят растворы определяемого вещества в концентрации 0,02 мг/мл и образца сравнения.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа количественного определения флуоресцеина натрия. Сущность способа заключается в том, что прозрачную полиметакрилатную матрицу выдерживают в анализируемом растворе при встряхивании в течение 15 минут, при этом в анализируемый раствор добавляют раствор NaOH для создания среды кислотностью pH 9.

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения длительности болезни при лихорадке Ку у лиц в возрасте до 50 лет. Способ определения длительности болезни при лихорадке Ку, заключающийся в том, что в сыворотке крови больных в возрасте до 50 лет определяют активность каталазы на 1 или 2 неделях болезни, затем, решая регрессионные уравнения зависимости между активностью каталазы, длительностью эндотоксикоза и продолжительностью заболевания, определяют длительность болезни при лихорадке Ку в днях, при этом при определении активности каталазы сыворотки крови на 1 неделе болезни определяют длительность болезни с точностью до 1-2 дней, а при определении активности каталазы сыворотки крови на 2 неделе болезни - с точностью до 1-3 дней.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа идентификации и раздельного количественного определения танина и галловой кислоты при совместном присутствии в растительном сырье и фитопрепаратах без предварительного разделения.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гинекологии, и предназначено для прогнозирования спонтанного наступления беременности в течение года после проведения хирургического лечения бесплодия у женщин с I и II стадиями наружного генитального эндометриоза.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к диагностике. Способ идентификации и количественного определения специфической молекулы-мишени в образце, включающий: тестирование и выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; или выбор первого лиганда или множества первых лигандов и второго лиганда или множества вторых лигандов, соединенных с детектируемой меткой, в отношении связывания с молекулой-мишенью; скрининг образца, содержащего специфическую молекулу-мишень, в высокопроизводительном скрининговом анализе, включающий добавление первого и второго лиганда, каждый из которых имеет первую и вторую детектируемую метку, связывание каждого из первого и второго лигандов с отдельными и специфическими сайтами на специфической молекуле-мишени, где скрининговый анализ не требует стадии промывания; обнаружение излучения света, когда первый и второй лиганды специфически связываются со специфической молекулой-мишенью; измерение интенсивности излучаемого света и по интенсивности света проводят идентификацию и количественное определение специфической молекулы-мишени в образце.

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и представляет собой способ флуоресцентного гистологического выявления амилоида, включающий фиксирование срезов ткани органов в 10%-ном формалине, окрашивание флуоресцентным красителем, промывку водой, обезвоживание, заделку в прозрачные нефлуоресцирующие среды и микроскопирование на флуоресцентном микроскопе, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного красителя используют производные 4-N-арил-3,5-диоксо-1-формил-10-окса-4-азатрицикло[5.2.11.7.02.6]дец-8-енов формулы где Y=2-NO2, 3-NO2, 4-NO2, 3-СООН, 4-СООН,а окрашивание осуществляют 1,5% спиртовым раствором красителя, смешанным с 1% водным раствором гидроксида натрия в соотношении 1:1.

Изобретение относится к области навигационного приборостроения и может найти применение в системах комплексного мониторинга состояния макрообъектов. Технический результат – расширение функциональных возможностей.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования инвалидности у детей с ишемическим инсультом. Определяют 28 параметров: оценка по шкале Апгар, тромботические события у кровных родственников в возрасте до 50 лет, диспансерное наблюдение у невролога в течение первого года жизни, инфекционное заболевание до инсульта, «часто болеющий ребенок, первоначально диагноз «инсульт» не был установлен, в течение первых 6 часов имелись признаки парезов или параличей конечностей, при проведении нейровизуализации очаг инфаркта зафиксирован в течение первых суток, инсульт локализуется в бассейне задней мозговой артерии, внутривенная инфузия включала раствор MgSO4, применение антибактериальной терапии, гемотрансфузионной терапии, признаки комы сохраняются на 7-е сутки пребывания в стационаре, судорожный синдром сохраняется или появился на 7-е сутки пребывания в стационаре, признаки пареза или паралича конечностей сохраняются на 7-е сутки пребывания в стационаре, признаки бульбарного паралича сохраняются на 7-е сутки пребывания в стационаре, признаки пареза глазодвигательной группы черепных нервов сохраняются на 7-е сутки пребывания в стационаре, потребность в искусственной вентиляции легких сохраняется на 7-е сутки пребывания в стационаре, антитромботическая и антиэпилептическая терапия рекомендована при выписке из стационара, количество эритроцитов, количество лейкоцитов, количество тромбоцитов, тромбоцитопения, СОЭ, лейкоцитарная формула, фибриноген в общем анализе крови в остром периоде болезни, в остром периоде болезни зафиксирована патология строения сердца по результатам эхокардиографии.

Изобретение относится к животноводству, а именно к способу оценки состояния здоровья молодняка крупного рогатого скота. Способ предусматривает использование в качестве диагностической биосреды шерсти животного, исследование образцов шерсти по 25 химическим элементам и оценку результатов исследования элементного статуса шерсти по центильной шкале.

Изобретение относится к фармацевтике, а именно к количественному определению производных имидазола, незамещенного в 5-положении, а именно гистидина гидрохлорида, гистамина дигидрохлорида, клотримазола, тиамазола, озагреля, бифоназола в субстанциях лекарственных препаратов.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогноза течения умереннодифференцированных эндометриоидных карцином тела матки T1N0M0.

Изобретение относится к методам определения состава и количества компонентов, входящих как в природные минералы, так и соединения, полученные в различных химических реакциях, при действии температуры и давления.

Изобретение относится к области аналитической химии для определения аминов в безводных средах. Для этого анализируемую пробу, содержащую амины, растворяют в ацетонитриле с добавкой от 0,01 до 1 моль/л инертной соли, погружают электрод с предварительно нанесенным на него покрытием толщиной от 10 нм до 10 мкм, состоящим из полимерных комплексов переходных металлов с основаниями Шиффа, и регистрируют вольтамперограмму в диапазоне потенциалов, включающем потенциалы от -0,2 до 1,2 В, со скоростью развертки в пределах 5-1000 мВ/с, которую сравнивают с эталонными вольтамперограммами известных аминов и по ним идентифицируют аналогичные эталонному образцу амины в анализируемой пробе хроноамперометрическим методом с использованием калибровочных кривых.

Изобретение относится к области обработки воздуха. Способ калибровки датчика воздуха устройства обработки воздуха включает в себя этапы, на которых: i) - очищают воздух, используя устройство обработки воздуха; ii) - измеряют первое количество воздуха, используя датчик воздуха для получения первого значения для калибровки датчика воздуха, причем первое количество воздуха представляет собой смесь окружающего воздуха и очищенного воздуха, причем устройство обработки воздуха расположено в воздухонепроницаемом пространстве, а этап 2 дополнительно включает в себя этапы, на которых: определяют, удовлетворяет ли качество первого количества воздуха в воздухонепроницаемом пространстве заданному критерию; и если качество первого количества воздуха удовлетворяет заданному критерию, измеряют первое количество воздуха, используя датчик воздуха, для получения первого значения.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения диоктилфталата в равновесной газовой фазе над изделиями из ПФХ-пластизоля. Для этого применяют способ идентификации и полуколичественного определения диоктилфталата в смеси соединений, выделяющихся из ПВХ-пластизоля.

Изобретение относится к измерению качества различных видовых комплексов трав и травянистых растений на пробах, преимущественно на пойменных лугах, и может быть использовано в экологическом мониторинге территорий с травяным покровом.

Изобретение относится к области технологии мониторинга, а конкретнее к способу и устройству для получения данных о качестве воздуха. Технический результат – повышение точности измеренного качества воздуха. Способ для получения данных о качестве воздуха применяется в бытовом приборе, включающем в себя вентилятор и устройство обнаружения качества воздуха, и включает в себя управление вращением вентилятора, обнаружение качества воздуха с помощью устройства обнаружения качества воздуха и формирование информации о качестве воздуха в соответствии с результатом обнаружения от устройства обнаружения качества воздуха. Таким образом, качество воздуха обнаруживается, когда воздух циркулирует в окружающей среде, что позволяет точно измерить содержание частиц пыли и, следовательно, повысить точность измеренного качества воздуха. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 10 ил.

Изобретение относится к диагностике, а именно способу получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления. Способ получения модельной системы на основе лецитина из подсолнечника для определения свободно-радикального окисления по концентрации малонового диальдегида, включающий получение 10 спиртового раствора лецитина, из 0,25 мл полученного раствора лецитина и 5 мл дистиллированной воды инжекционным способом готовят суспензию липосом, в полученную суспензию липосом добавляют 0,2 мл 0,05 н соляной кислоты и впрыскивают 0,125 мл 3 мМ перекиси водорода, нагревают при температуре 38°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Вышеописанный способ позволяет повысить точность определения свободнорадикального окисления. 1 табл., 1 пр.

Наверх