Способ получения экспериментальной модели пародонтита

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной стоматологии, и может быть использовано для получения экспериментальной модели пародонтита. Помещают половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м2 на особь. Перед помещением в клетку каждому животному под наркозом внутримышечно вводят линкомицина гидрохлорид дозой 30 мг на 100 г веса. Производят аппликацию суспензии пчелиного яда в области десен и преддверия рта в дозе 2 мг на 100 г веса животного. При этом для ускорения моделирования дополнительно к стандартному рациону питания крыс добавляют 2 мл подсолнечного масла на одного животного, которое нагревают в присутствии 2% сульфата меди в течение 24 часов до достижения перекисного числа выше 40 ед. Способ позволяет просто и надежно получить экспериментальную модель пародонтита, повысить достоверность создания патологического процесса воспаления пародонта, сходного по патоморфологическим проявлениям с пародонтитом у человека, за счет наиболее оптимального комплекса мероприятий. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности, экспериментальной медицины и стоматологии и может быть использовано для изучения этиологии и патогенеза пародонтита.

Воспалительные заболевания пародонта остаются одной из наиболее актуальных проблем современной стоматологии. В настоящее время наблюдается увеличение числа больных с воспалением тканей пародонта с преобладанием в их структуре генерализованных форм гингивита и пародонтита [1]. По данным ВОЗ более 80% населения в возрасте от 60 лет и старше страдают воспалительными и воспалительно-деструктивными заболеваниями пародонта, приводящими к потере зубов, появлению очагов хронической инфекции в полости рта, микробной сенсибилизации и другим расстройствам [2].

Заболевание особенно опасно в пожилом возрасте, на фоне снижения общего иммунитета и реактивности организма, зачастую при прогрессирующей потере плотности костной ткани.

Для практического использования новых передовых методов терапии и новых препаратов при лечении пародонтита требуется отработка всех параметров внедряемых средств в эксперименте на живых организмах.

Наиболее эффективными показали себя экспериментальные модели пародонтита, воспроизведенные на животных [3].

Известен способ моделирования пародонтита, согласно которому экспериментальным животным - крысам, вводят хлористый аммоний в дозе 3,5-4,5 мг на 1 г массы тела один раз в сутки в течение не менее 30 дней [4].

Преимущества способа: быстрое получение искомой модели пародонтита.

Недостатком известного способа является то, что пародонтит моделируется метаболическим ацидозом, что дает недостаточно полную морфологическую картину моделируемой патологии, в этиологии которого ведущее место занимает острое или хроническое воспаление. Кроме этого, процесс моделирования требует ежедневных введений в пищу строго дозированного количества хлористого аммония.

Известен способ получения модели воспаления пародонта у крыс, вызванного острой механической травмой мягких тканей десны, в котором авторы под легким эфирным наркозом вводили крысам металлический крючок так, чтобы животные не могли его уронить, с губной стороны параллельно зубному ряду на глубину 1,5 мм в зубодесневую борозду в области верхних резцов [5].

Преимущества метода: простота выполнения.

Недостатком известного способа является его ненадежность и повышенная травматичность, поскольку крепление крючка в десне ничем не фиксируется и может быть нарушено животным.

Известен способ получения модели пародонтита, принятый в качестве прототипа, включающий помещение половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м на особь, в котором перед помещением в клетку под эфирным наркозом, используя стоматологический цемент, создают искусственную зубную бляшку вокруг шейки верхних и нижних резцов с шероховатой поверхностью, заходящую под десну на 0,1-0,5 мм, при этом в процессе моделирования животные получают кашицеобразную пищу [6].

Преимущества метода: сочетанное воздействие эмоционального стресса, использование механического раздражителя (стоматологический цемент) и кашицеобразной пищи, способствующей, как известно, формированию микробной бляшки на поверхности зубов и десен, относительно короткий процесс моделирования пародонтита (не более месяца).

Недостатком способа получения модели пародонтита по методу прототипа является его высокая трудоемкость, операционная травма краевой десны, сложность, обусловленная использованием специального цемента и необходимостью формирования искусственных зубных бляшек в полости рта животных для создания модели воспалительного процесса. Проявления воспаления десен, полученное с помощью методики прототипа, не типичны по своим морфологическим свойствам для пародонтита у человека.

Поставлена задача: разработать простой и надежный способ получения модели хронического пародонтита у крыс, исключающий операционную травму пародонта, обеспечивающий повышение достоверности патологического процесса, путем моделирования у подопытных животных воспаления пародонта, сходного по патоморфологическим проявлениям с пародонтитом у человека.

Поставленная задача решена за счет сочетания воздействия местных и общих факторов на фоне изменения реактивности организма, что полностью соответствует современному взгляду на этиологию пародонтита.

В заявляемом способе получения экспериментальной модели пародонтита путем воздействия эмоциональным стрессом на экспериментальных животных, например, половозрелых крыс, за счет помещения 10-11 особей в клетку при площади 0,018 м2/особь, в отличие от прототипа перед помещением в клетку каждой экспериментальной особи под общей анестезией на фоне внутрибрюшинного тиопенталового наркоза из расчета 0,1 мл 5% тиопентала натрия на 100 грамм веса животного, создают дисбактериоз ротовой полости путем внутримышечного введения линкомицина гидрохлорида дозой 30 мг 100 грамм веса животного и локального поражения десен и тканей преддверия рта аппликацией суспензии пчелиного яда в дозе 2 мг на 100 грамм веса животного. Для ускорения моделирования дополнительно к стандартному рациону питания крыс добавляют подсолнечное масло (2 мл на одного животного), которое нагревают в присутствии 2% сульфата меди в течение 24 часов до достижения перекисного числа выше 40 ед.

Аппликации проводятся в двух участках преддверия рта между нижней губой и резцами нижней челюсти и между молярами верхней и нижней челюстей и щекой справа.

Заявляемый способ создания экспериментального пародонтита отличает простота выполнения, хорошая выживаемость подопытных животных, достоверность патологического воспалительного процесса тканей пародонта, сходного по патоморфологическим проявлениям с пародонтитом у человека.

Экспериментальные исследования выполнены на 140 белых половозрелых крысах массой 220-250 г, которые находились на стандартном пищевом и водном рационе в соответствии с санитарно-гигиеническими нормами. Опыты проводили с соблюдением Международных принципов Европейской конвенции о «Защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей» (Страсбург, 1986), «Общими этическими принципами экспериментов на животных» (Россия, 2011), в соответствии с принципами надлежащей лабораторной практики (Национальный стандарт «Принципы надлежащей лабораторной практики» ГОСТ Р 53434-2009) и положительным заключением этического комитета СтГМУ №32 от 12.02.2014. Исследование осуществлено в рамках Государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации для ГБОУ ВПО «Ставропольский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по осуществлению научных исследований и разработок по теме: «Стволовые клетки пульпы зуба в регенерации и иммуномодуляции» от 14.01.2014 №302/08 совместно с Всероссийским НИИ овцеводства и козоводства и Ставропольским государственным аграрным университетом (Ставрополь).

Все животные были разделены на 2 группы: основную и контрольную (по 70 животных в каждой группе).

В основной группе проводили моделирование экспериментального пародонтита по разработанному способу, в контрольной группе - по методу прототипа.

Пример 1 (основная группа): Брали 70 особей половозрелых крыс. Под внутрибрюшинным тиопенталовым наркозом из расчета 0,1 мл 5% тиопентала натрия на 100 грамм веса животного, создавали дисбактериоз ротовой полости путем внутримышечного введения линкомицина гидрохлорида дозой 30 мг 100 грамм веса животного. Затем проводили локальное поражение десен и тканей преддверия рта аппликацией суспензии пчелиного яда в дозе 2 мг на 100 грамм веса животного. Далее животных помещали в общую клетку при площади 0,018 м2 на особь. В течение всего времени моделирования к стандартному рациону питания крыс добавляли подсолнечное масло в количестве 2 мл на одного животного, которое нагревали в присутствии 2% сульфата меди в течение 24 часов до достижения перекисного числа выше 40 ед. Признаки воспаления десны в основной группе наблюдали на 3 день эксперимента. На 14-е сутки наблюдали отечность и цианоз десны, в области резцов наблюдали появление пародонтальных карманов глубиной до 2 мм, подвижность резцов 2-3 степени. На 21-е сутки рентгенологически определяли все признаки деструкции вершины межзубной перегородки, включая лизис последней.

При микроскопическом анализе гистологических препаратов визуально отмечено появление инфильтрата стадии установившегося воспаления на 14-е сутки, что соответствует острой фазе воспаления. Появление в поле зрения плазматических клеток выявлено также на 14-е сутки, а значительное их увеличение на 21-е сутки исследования.

На фиг. 1 изображен гистологический срез зубоальвеолярного сегмента экспериментального животного на 14-е сутки исследования, на котором в поле зрения видно большое количество плазматических клеток (до 40% от всех клеток экссудата), что подтверждает наличие острого воспалительного процесса.

На фиг. 2 изображен гистологический срез альвеолярного отростка экспериментального животного на 21-е сутки исследования, на котором видна фаза прогрессирующего воспаления, плазматические клетки составляют до 80% всех клеток экссудата.

Исследованная гистологическая картина свидетельствует о хронизации воспаления и активном вовлечении иммунных механизмов воспаления от 14-х к 21-м суткам эксперимента. Количество плазматических клеток нарастает пропорционально тяжести процесса и степени разрушения тканей. Глубокие поражения претерпевают сосуды пародонта, его кровоснабжение нарушается. Прогрессирует разрушение коллагеновых тканей элементов и активная резорбция кости.

Пример 2 (контрольная группа): Брали 70 особей половозрелых крыс.

Проводили формирование модели пародонтита по методу прототипа, включающее помещение половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м2 на особь, в котором перед помещением в клетку под эфирным наркозом, используя стоматологический цемент, создавали искусственную зубную бляшку вокруг шейки верхних и нижних резцов с шероховатой поверхностью, заходящую под десну на 0,1-0,5 мм. В течение всего времени моделирования животные получали кашицеобразную пищу, исключающую самоочищение зубов. Признаки начального воспаления десны (гингивита) в контрольной группе наблюдали на 20-30 день эксперимента. На 40-е сутки у части животных наблюдали отечность и цианоз десны, в области резцов наблюдали появление пародонтальных карманов глубиной 1-2 мм, появление подвижности резцов первой степени. Рентгенологических признаков деструкции вершины межзубной перегородки не установлено.

Поражение пародонта у животных контрольной группы (прототип) наблюдается лишь через 30-40 дней после начала эксперимента, однако воспалительный процесс носит характер гингивита (начальное воспаление десен) и не позволяет добиться полноценной картины пародонтита (воспаление всех тканей пародонта, подвижность зубов 2-3 степени, деструкция вершин межзубных перегородок).

Таким образом, при использовании разработанного способа моделирования экспериментального пародонтита создается изолированное поражение пародонта у каждого животного, не отягощенное какой-либо другой патологией и имеющее в своей основе как местные (локальное поражение десен, диета), так и общие (стресс) патогенетические факторы. По своим патоморфологическим проявлениям моделируемое у животных основной группы поражение аналогично картине пародонтита у человека и воспроизводится с высокой степенью надежности.

Разработанный способ позволяет изучать вопросы этиологии и патогенеза пародонтита, что является необходимым для разработки профилактических мероприятий и лечения указанной патологии.

Способ получения экспериментальной модели пародонтита, включающий помещение половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м2 на особь, отличающийся тем, что перед помещением в клетку каждому животному под наркозом внутримышечно вводят линкомицина гидрохлорид дозой 30 мг на 100 г веса, производят аппликацию суспензии пчелиного яда в области десен и преддверия рта в дозе 2 мг на 100 г веса животного, при этом для ускорения моделирования дополнительно к стандартному рациону питания крыс добавляют 2 мл подсолнечного масла на одного животного, которое нагревают в присутствии 2% сульфата меди в течение 24 часов до достижения перекисного числа выше 40 ед.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии и может быть использовано для стимуляции хронической болью злокачественного роста в легких крыс.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, онкологии, а именно к онкогинекологии, и может быть использовано для моделирования проканцерогенного действия синестрола на ткани яичника у потомства женского пола.

Изобретение относится к радиобиологии и экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования лучевого цистита. Для этого осуществляют анестезию животного, формирование области облучения свинцовым окном, с последующим облучением мочевого пузыря на линейном ускорителе.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и касается воздействия на микобактерии туберкулеза. Для этого в эксперименте in vitro используют полученную электрохимическим путем серебряную воду на негазированной минеральной воде «Красный ключ» с ионной концентрацией серебра 15%.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования гиперестезии твердых тканей зуба, и предназначено для использования в экспериментальной стоматологии, для создания и последующего изучения безопасности воздействия лекарственных препаратов на твердые ткани зубов.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования гиперестезии твердых тканей зуба, и предназначено для использования в экспериментальной стоматологии, для создания и последующего изучения безопасности воздействия лекарственных препаратов на твердые ткани зубов.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине, клеточной биологии. В качестве стимулятора веса плода в организм беременной крысы на 9 или 10 или 11 день беременности однократно вводят подкожно в область каждого из сосков молочной железы 100 мкл суспензии клеток-мононуклеаров пуповинной крови человека, содержащей 6.9 миллиона клеток.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии. Для моделирования хронической тромбоэмболической легочной гипертензии (ХТЛГ) крысе внутривенно вводят эмболизирующие частицы в виде аутологичных тромбов, инкапсулированные в альгинатные микрокапсулы диаметром 130-400 мкм с соотношением по объему тромбов и альгината натрия от 1:7 до 1:3 в количестве 200-250 мкл микрокапсул не менее 4 раз с интервалом не менее 2 дней.

Изобретение относится к биомедицинской технике и может быть использовано в физиологических, биологических, психофизиологических, фармакологических экспериментах с использованием лабораторных животных при исследовании процессов памяти, научения, принятия решений в норме и патологии, а также методов воздействия на них.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается прогнозирования развития нефрита в индуцированной модели системной красной волчанки (СКВ). Способ заключается в том, что здоровым самкам мышам-гибридам (C57BL/6хDBA2)F1 внутрибрюшинно вводят липополисахарид в дозе 0,5 мкг/кг.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-экспериментальной травматологии и ортопедии, и может быть использовано для моделирования посттравматического остеоартроза коленного сустава кролика. После послойного линейного разреза, проведенного перпендикулярно к суставной щели коленного сустава с медиальной стороны производят выделение и пересечение сухожилия поверхностной «гусиной лапки», подменисковую артротомию. В области медиального мыщелка большеберцовой кости проводят субпериостальную диссекцию. Выбивают долотом участок кости толщиной 5 мм и площадью 1 см2 с выходом на суставную поверхность. На середине длины данного участка проводят поперечную остеотомию и делят участок на проксимальный и дистальный сегменты. Дистальный сегмент удаляют. Проксимальный сегмент импактируют в дистальном направлении путем прямого вбивания его по оси большеберцовой кости и зажимания между браншами хирургического зажима. Рану послойно ушивают, не захватывая в шов сухожилие поверхностной «гусиной лапки». Способ обеспечивает повышение воспроизводимости патологического процесса за счет дестабилизации коленного сустава, нарушения питания суставного хряща и травматического воздействия на суставной гиалиновый хрящ. 6 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для создания экспериментальной модели остеопороза. Трехлетней овце Северо-Кавказской породы проводят двухстороннюю овариоэктомию. Со второго дня после операции осуществляют внутримышечное введение дексаметазона в течение 3 месяцев в дозе 12 мг на 1 кг массы по 6 инъекций в неделю. Способ обеспечивает создание экспериментальной модели остеопороза, позволяющей исключить летальность подопытных субъектов, получить полноценную и необратимую в течение всей жизни животного модель остеопороза с большим объемом тканей, доступных для исследования за счет использования трехлетней овцы Северо-Кавказской породы, проведения двухсторонней овариоэктомии и наиболее оптимального режима и дозировки дексаметазона. 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в лабораториях биологического и медицинского профиля, решающих вопросы по применению пробиотических препаратов в системе доставки эссенциальных элементов в организм животных. Способ повышения содержания железа в организме животных включает дачу корма за счет введения 1 раз в сутки per os биомассы инактивированных микроорганизмов, входящих в состав пробиотиков Ветом 1 (Bacillus subtilis 10641) и Бактисубтил (Bacillus cereus IP 5832), после их культивирования в жидкой питательной среде с добавлением FeSO4 в концентрации 0,05 М/мл, в количестве 0,5-1,5 мл на одну голову и скармливают крысам натощак в течение 7 дней. Изобретение обеспечивает повышение содержания железа в теле животных. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной стоматологии, и может быть использовано для получения экспериментальной модели пародонтита. Помещают половозрелых крыс в общую клетку площадью 0,018 м2 на особь. Перед помещением в клетку каждому животному под наркозом внутримышечно вводят линкомицина гидрохлорид дозой 30 мг на 100 г веса. Производят аппликацию суспензии пчелиного яда в области десен и преддверия рта в дозе 2 мг на 100 г веса животного. При этом для ускорения моделирования дополнительно к стандартному рациону питания крыс добавляют 2 мл подсолнечного масла на одного животного, которое нагревают в присутствии 2 сульфата меди в течение 24 часов до достижения перекисного числа выше 40 ед. Способ позволяет просто и надежно получить экспериментальную модель пародонтита, повысить достоверность создания патологического процесса воспаления пародонта, сходного по патоморфологическим проявлениям с пародонтитом у человека, за счет наиболее оптимального комплекса мероприятий. 2 ил., 2 пр.

Наверх