Способ выделения рибомононуклеотидов

 

ОПИСАНИЕ йЗОЬРЕ ЕН S (и1 437766

Союз Советских

- Социалистических

Респубпик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства . (22) Заявлено 07.07.72 (21) 1807002 23-4 (51) М. Кл. С 07с1 51/50 с присоединением заявки №

Государственный комитет

Совета Министров СССРоо делам изобретений и открытий (32) Приоритет

Опубликовано 30,07.74. Бюллетень № 28 (53) УДК 547.963:32.07 (088.8) Дата опубликования описания 02.01.75 (72) Авторы изобретения И. И. Брод, М. А. Гайлум и С. М. Мовшович (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РИБОМОНОНУКЛЕОТИДОВ

Изобретение относится к улучшенному способу выделения рибомононуклеотидов, которые широко применяют в биологии, медицине, пищевой промышленности и в качестве исходного сырья для получения биологически активных веществ.

Известен способ выделения рибомононуклеотидов путем ступенчатого хроматографического разделения щелочного или ферментативного гидролизата РНК на анионите, где в качестве элюирующей системы используют уксусную кислоту нарастающей концентрации.

Однако при известном способе имеет место нечеткое разделение компонентов, в особенности уридиловой и гуаниловой кислот, что приводит к значительному уменьшению выхода и снижению степени чистоты целевых продуктов.

Цель изобретения — увеличение четкости разделения продуктов гидролиза РНК и увеличение выхода каждого рибомононуклеотида. Это достигается хроматографическим разделением гидролизатов РНК элюирующей системой — уксусная кислота нарастающей концентрации для цитидиловой и адсниловой кислот, уксусная кислота нарастающей (до

III степени) концентрации с добавкой ацетата натрия или ацетата аммония нарастающей концентрации для уридиловой и гуаниловой кислот.

Каждый определенный состав элюирующей системы обеспечивает элюирование определенного рибонуклеотида.

Предлагаемый способ заключается в сле5 дующем: щелочной или ферментативный гидролизат РНК (рН 9 — 10) сорбируют на анионите в ацетатной форме и проводят ступенчатое хроматографическое разделение.

1 ступень: 0,5 — 1 М СНзСООН элюируют

10 цитидиловые кислоты.

2 ступень: 1,2 — 1,4 М СНзСООН элюируют адениловые кислоты.

3 ступень: 1,3 — 2 М СНзСООН (содержа15 щая 0,07 — 0,09 моль ацетата натрия или ацетата аммония) элюируют уридиловые кислоты.

4 ступень: 1,3 — 2 М СОзСООН (содержащая 0,3 — 0,6 моль ацетата натрия или аммо20 ния) элюируют гуаниловые кислоты.

Отдельные фракции концентрируют и выделяют нуклеотиды известными способами.

Пример 1. 85 л щелочного гидролизата

25 (рН 9,0), содержащего гидролизат 200 г

РНК, сорбируют на ионообменную колонку с анионитом в ацетатной форме со скоростью

110 мл/час на 1 см поперечного сечения.

Элюцию рибомононуклеотидов проводят сту30 пенчато со скоростью 30 мл/час на 1 см поперечного сечения.

437766

Составитель Е. Соколова

Техред А. Камышннкова Корректор В. Кочкарева

Редактор Т. Никольская

Заказ 3516(11 Изд No 1884 Тираж 606 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Цитидиловую кислосту элюируют 30 л 1 М уксусной кислоты; аденозин 2 и аденозин 3, монофосфорные кислоты элюируют 140 л

1,25 М уксусной кислоты; уридиловую кислоту элюируют 90 л 1,5 М уксусной кислоты, содержащей 0,075 моль ацетата натрия, а гуаниловую кислоту 60 л 1,5 М уксусной кислоты, содержащей 0,5 моль ацетата натрия.

Элюируется около 98% сорбированных нуклеотидов. Из отдельных фракций выделяют известными способами конечные продукты с содержанием основного вещества 97 — 100%.

Предмет изобретения

1. Способ выделения рибомононуклеотидов из гидролизатов РНК путем ступенчатого хроматографического разделения на анионите с помощью уксусной кислоты, о т л и ч а ющ и и ся тем, что, с целью увеличения четкости разделения продуктов гидролиза РНК, увеличения выхода рибомононуклеотидов на двух последних ступенях, элюирование на этих стадиях проводят в присутствии ацетата натрия или ацетата аммония нарастающей концентрации.

10 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что уридиловую кислоту элюируют 1,3 — 2 М уксусной кислотой, содержащей 0,07—

0,09 моль ацетата натрия или ацетата аммония; гуаниловую кислоту 1,3 — 2 М уксусной

15 кислотой, содержащей 0,3 — 0,6 моль ацетата натрия или ацетата аммония.