Способ получения 6,6-дифтор-11 , 16 ,17 -триокси -4 прегнен- 3, 20-диона

 

@ у Я

О П И СА Н И Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ (ii) 438I8I

Союй Советских

С оциалистииесаи

Республик (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 27.01.72 (21) 1742287/23-4 (32) Приоритет 01.02.71 (31) 111615 (ЗЗ) США

Опубликовано 30.07.74. Бюллетень № 28 (51) М. Кл. С 07с 169/30

Государственный комитет

Совета Министров СССР

А0 делам изобретений, и открытий (53) УДК 547.689.6.07 (088.8) Дата опубликования описания 02.01.75 (72) Автор изобретения

Иностранец

Вильям Чарльз Рипка (США) Иностранная фирма

«Е. И. Дю Пои де Немур энд Компани» (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6,6-ДИФТОР-11а, 16а, 17аТРИОКС И-4-П РЕГН Е Н-3,20-ДИОНА

Изобретение относится к области получения нового соединения 6,6-дифтор- l l а, l ба, 17а-триокси-4-прегнен-3,20-диона, обладающего биологической активностью, а также являющегося промежуточным в синтезе высокоактивных противовоспалительных и глюкокортикоидных стероидов.

Известен способ микробиологического гидроксилирования в l l а-положение 6-фторстероидов.

Применив известную реакцию микробиологического гидроксилирования к 6,6-дифтор16а,17а-диокси-4-прегнен-3,20-диону, получают новое соединение, обладающее высокой физиологической активностью.

В соответствии с изобретением описывается способ получения 6-6-дифтор-11а,16а,17атриокси-4-прегнен-3,20-диона, заключающийся в том, что 6,6-дифтор-lба,17а-диокси-4-прегнен-3,20-дион подвергают микробиологическому гидроксилированию в l l а-положение.

По предлагаемому способу микробилогическое гидроксилирование проводят предпочтительно действием грибка рода Aspergillus или Rhizopus nigricaris. Микроорганизм, как обычно, выращивают на скошенном агаре, затем вводят в жидкую среду, содержащуюся в колбах; в колбах культура перемешивается в течение нескольких дней вместе со стероидом, после чего стероид экстрагируется из смеси.

Пример.

5 А. Раствор 31З-ацетокси-5,16-прегнадиен-20она (I) (75 г; 0,211 моль) в хлористом метилене (600 мл) обрабатывают фтористым нитрозилом (25 г; 0,51 моль) при 0 С, перемешивают в течение 3 час при 0 С, затем тща10 тельно промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом. Органическую фазу сушат над MgSO4 и растворитель выпаривают, в результате получают вязкое зеленое масло. Это масло растворяют в бен15 золе и подают в колонну, наполненную гексаном, с насадкой, состоящей из окиси алюминия III степени активности (3 кг). После элюирования бензолом получают продукт (45 г; выход 55%), который кристаллизуют

20 из метанола, получая 5а-фтор-Зр-ацетокси-16прегнен-6,20-дион (I I) (38,1; 46,5% ); т. пл.

199 †2 С.

Согласно другому, предпочитаемому способу, тот же стероид (I) (125 r; 0,35 моль), 2S растворенный в хлористом метилене (500 мл), добавляют к раствору тетрафторбората нитрозила (40 г; 0,342 моль) в ramie (500 мл) при 0 С с одновременной подачей фтористого

4381

3 йитрозила (40 r; 0,815 моль) в смесь в течение 1 час. Смесь перемешивают 4 час при

0 С, затем выливают в холодный рассол. Органическую фазу промывают два раза рассолом, затем подвергают выпариванию в токс азота, в результате получают вязкое зеленое масло (— 300 мл), которое смешиват с окисью алюминия (III степень активности, 3 кг) в гексане (1 л). После перемешивания в течение 4 час продукт элюируют бензолом (8 л) из смеси окиси алюминия, получают неочищенное вещество (99 г) . После иерекристаллизации этого вещества из метанола получают стероид II (82,3 г). Путем хроматографии маточных растворов на флоризиле по 1учают добавочные 8,0 г продукта, т. е. общее количество 90,3 г (бб /о) стероида II.

После перекристаллизации из смеси ацетона с гексаном точка плавления образца этого стероида 196 — 197,5 С.

Найдено, /о. С 70,41; 70,70; Н 7,58; 8,05;

Е 4,81; 4,85.

Вычислено для СззНз 04Е, /О . С 70,74;

Н 7,99; F 4,86.

УФ-.спектр: 303 ммк (К 0,29, е 190), 237 ммк (К 22,8, е 8,580), ИК-спектр (КВг): 3,25 мк (=СН); 5,79 мк (ацетат и Cp — — О); 6,0 мк (Cip — — Сд).

Б. Раствор стероида II (25 r; 0,642 моль) в хлористом метилене (150 мл) и воде (6,3 мл;

0,35 моль) подвергают взаимодействию с четырехфтористой серой (115 r; 1,065 моль) в течение 18 час при 10 С в запаянной трубке из сплава «хейстэллой», затем смесь выливают в воду. Отделившийся органический слой промывают водным раствором бикарбоната натрия, водой и рассолом, затем его сушат (над MgSO4) и выпаривают растворитель. Остаток подвергают хроматографии на флоризиле (400 г) с последующим вымыванием смесью ацетона с гексаном (3 — 5 /о).

После перекристализации из смеси ацетона с гексаном получают 5а,б,б-трифтор-3р-ацетокси-16-прегнен-20-он (II) (24,0 г; 91 /о). Образец этого стероида после двухкратной перекристализации из смеси ацетона с гексаном имеет т. пл. 177 — 178 С.

Найдено, о/о. С 66,76; Н 7,65; F 13,77.

Вычислено для СззН3 0зРз, /в . С 66,96;

Н 7,58; F 13,82.

УФ-спектр: 322 ммк (К 0,129, в 53); 237 ммк (К 23,6, е 9,720) .

ИК-спектр (КВг): 5,77 мк (С=О ацетата);

6,0 мк (С2 — — О); 6,30 мк (Си=С ).

В. Раствор гидроокиси калия (8,2 r;

0,147 моль) в воде (20 мл) добавили к смеси тетрагидрофурана (800 мл) и метанола (250 мл), затем смесь охлаждают до 0 С и продувают азотом. После этого добавляют раствор стероида ГП (57 г; 0,139 моль) в тетрагидрофуране (350 мл). Раствор перемешивают 1 час при 0 — 5 С, затем выливают в воду и энергично размешивают. Полученное твердое вещество отфильтровывают и сушат в вакууме, в результате получают 5а,б,б-три5

81

4 фтор-3 3-окси-16-ирегнен-20-îí (IV) (50,2 г;

98,5О/о). Образсц этого стероида подвергли хроматографии на флоризиле (употребляя смесь ацетона и гексана с концентрацией 15 /о в качестве растворителя для элюирования); после перекристаллизации из смеси ацетона и гексана, получают образец для анализа, т. пл, 182 — 183 С.

Найдено, /р, С 68,32, 68,46; Н 7,74, 7,82;

F 15,45, 15,40.

Вычислено для Cg(HggFgOg, /О. С 68,07;

Н 7,89; F 15,38.

УФ-спектр: 322 ммк (К 0,147, е 54); 237 ммк (К 25,9, е 9,580) .

ИК-спектр (КВг): 2,99 мк (ОН); 6,00 и

6,01 мк (С2Π—— О); 6,31 мк (C p — — С ), Г. Раствор стероида IV (18,7r; 0,0505 моль) в ацетоне (300 мл) обрабатывают при 0 С реактивом Джонса до устойчивой красной окраски. Одновременно следят за исчезновением исходного материала путем хроматографии в тонком слое (употребляя 5 /о-ную смесь этилацетата и хлороформа и пластинки из силикагеля). К смеси добавляют метанол для разложения избыточного количества реактива. Смесь затем фильтруют и фильтрат концентрируют, затем разбавляют водой. Путем экстракции хлористым метиленом получают полутвердый остаток (5а,б,б-трифтор-16-прегнен-3,20-дион), который подвергают хроматографии на окиси алюминия III степени активности (500 г). После элюирования бензолом получают б,б-дифтор-4,16-прегнадиен-3, 20-дион (VI) (14,0 r; 79,5О/о ) . Его образец после двухкратной кристаллизации из смеси ацетона и гексана имеет т. пл. 118,5 — 119 С.

Найдено, /о. С 72,46; Н 7,64; F 11,13.

Вычислено для Сз1Н 602Р2, /о .. С 72,39;

Н 7,52; F 10,91.

УФ-спектр: 325 ммк (К 0,23, с 80), 234 ммк (К 62,3, в 21,700) .

ИК-спектр (КВг): 3,35 мк (=СН); 5,90 мк (Сз — — 0); 6,02 мк (Cgp=O); 6,29 мк (C>p=C< ), Д. Раствор стероида VI (9,10 г; 0,026моль) в ацетоне (253 мл) и ледяной уксусной кислоте (3,1 мл) охлаждают льдом до 3 С. К раствору добавляют сразу раствор перманганата калия (4,1 г) в 85 /о-ном водном растворе ацетона (195 мл; охлажденный до 3 С) .

Через 4 мин смесь обрабатывают насыщенным водным сульфитом натрия (42 мл), фильтруют через «силайт», а фильтрат экстрагируют хлористым метиленом. Органический экстракт промывают водой и рассолом и сушат над MgS04. Растворитель выпаривают, затем остаток превращают в порошок в присутствии ацетона, в результате получают неочищенный продукт (6 г) . После перекристаллизации из смеси ацетона и гексана получают б,б-дифтор-16а,17а-диокси-4-прегнен3,20-дион (VII) (4 г; 40,5 p); т. пл. 202—

207 С; т. пл. образца, полученного трехкратной перекристаллизацией из смеси ацетона и гексана, 213 †2 С (в запаянной трубке).

438181

Предмет изобретения

Составитель Т. Илюхина

Редактор Л. Герасимова Техред А. Камышникова

Корректор В. Кочкарева

Заказ 3516/17 Изд. № 1884 Тираж 506 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, Найдено, %. С 66,17, 66,59, 65,97; Н 7,43, 7,47, 7,45; F 9,53.

Вычислено для C iH O4Fz, %. С 66,951

H 7,38; F 9,94.

УФ-спектр: 303 ммк (К 0,187, в 71), 227 ммк (К 32,8, е 12,500) .

ИК-спектр (КВг): 2,94 мк (ОН); 3,25 мк (=СН); 5,88 мк (С о — — О); 5,98 мк (Сз — — О), E. В каждую из шести колб (емкостью

250 мл) заливают питательный бульон, включающий соевую муку (0,5 г), декстрозу (2 г), дрожжевой экстракт (0,5 r) хлористый натрий (0,5 r), вторичный кислый фосфат калия (0,5 г) и дистиллированную воду (100 мл) (рН бульона отрегулирован на 6,5 мл концентрированной соляной кислотой). Смеси засеивают микроорганизмом Aspergillus ochraceus АТСС 18500. Колбы ставят на вращающийся аппарат для взбалтывания и сильно взбалтывают в течение 48 час при 29 С. 3атем смеси разливают в шесть двухлитровых колб, каждая из которых содержит по 400 мл вышеописанного питательного бульона, и выращивание плесени продолжают еще 24 час при 29 С и взбалтывании смеси. После этого раствор стероида VII (1,0 г; 2,62 моль) в диметилформамиде (6 мл) равномерно распределяют по шести колбам и взбалтывание продолжают в течение 96 час. Комбинированные бульоны с культурами фильтруют сначала через фильтр из спекшегося стекла, затем через фильтровальный материал «силайт».

Фильтрат экстрагируют этилацетатом (-6 л). Органический экстракт промывают сперва водой, потом рассолом, а затем его высушивают (над Мд804) и выпаривают в

5 атмосфере азота. Полученный остаток превращают в порошок с помощью этилацетата, в результате получают коричневый порошок (630 мг); путем хроматографии маточных растворов на силикагеле (употребляя этил10 ацетат в качестве растворителя для элюирования) получают добавочные 133 мг продукта. Образец продукта кристаллизуют два раза из смеси ацетона и гексана, получая

6,6-дифтор- l l а, 1 ба,17а — триокси — 4 - прегнен15 3,20-дион (VIII); т. пл. 203 — 208 С.

ИК-спектр (КВг): 2,89 и 3,02 мк (ОН);

3,25 мк (=СН); 5,87; 5,92 и 6,0 мк, связанные с С2о — — О, Сз — — О и С4 — — Сз.

1. Способ получения 6,6-дифтор-l l а,16а, 17а-триокси-4-прегнен-3,20-диона, о т л и ч а юшийся тем, что 6,6-дифтор- 1 ба,17а-диокси25 4-прегнен-3,20-дион подвергают микробиологическому гидроксилированию в llа-положение, и целевой продукт выделяют известными приемами.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, 30 что микробиологическое гидроксилирование осуществляют с помощью грибка рода

Aspergillus или Rhizopus nigricans.