Способ производства биомассы

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ

Сьюэ Советских

Социалистических

Республик (11) 500767

° 1

1" ( (61) Дополнительный к патенту(22) Заявлено 23.08.72 (21) 1823587/28-13 (51) М. Кл.С 12С 11/00 (23) Приоритет -- (32) 24.08.71 (31) 38599 (33) Великобритания (43) Опубликовано 25.01.766толлетень № 3 (45) Дата опубликования описания 15.06.76

Гасударственный наинтат

Сааата Мнннстраа СССР аа лаааи нэабратаннй н атнрытнй (53) УДК - 663.18 (088.8) (72) Авторы

Иностранцы

ЯЗобретец Hg Фрэнсиз Моран (Ирландия ) и Филип . Аль 6epr йерс (Великобр ания) Иностранная фирма

Бритиш Петролеум Компани (Великобритания) - (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОМАССЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен способ производства биомассы путем вырашивания микроорганизмов в культуральной жидкости,содержашей метан и вод-. 0

1 . ную среду с питательными солями, в состав ! которых входят ионы аммония и другие-не !обходные для роста мине+ -и. соли.

-Ъ .- Я

Известный способ не обеспечивает доста- 1п ! точной скорости роста микроорганизмов, используюших метан, и приводит к их вымыванию.

С целью интенсификации процесса, по

1предложенному: способу скорость вырашива- 15, ния микроорганизмов поддерживают в пре делах 0,81-5,0 г/л в 1 час, осушествляя

tt одновД менно регулировку рН культурной жидкости до 4,5-.8,0 путем введения в нее ионов аммония .: для поддержания их кон-. 20 центрации от 2,0 до 100 мг/л.

Ионы аммония вводят в виде аммиака

; или гидроокиси аммония.

Процесс вырашивания осушествляют при температуре, преимущественно равной 42- 25

48"С и используют бактерии dNethylncoccus сарзмЫ1иа.

Способ осушествляют следующим образом.

Для производства биомассы используют

МейуЬсьссМ сархиЬ1ия путем выращива,ния их в культуральной жидкости,содержашей метан и водную среду с питательными солями, в состав которых входят ионы аммония и другие необходимые для роста мине э: ральные соли.

Процесс;, проводят прн нормальном давлении, а также применяют и избыточное давление до 3,5 кг/см2 при температуре преимущественно 30-48оС.

В качестве азотного субстрата используют аммиак или гидроокись аммония, ограничивая рН водной питательной среды,добав ленной к культуральйзй жидкости, и регулиpys рН путем добавления ионов аммония, при этом рН добавляемой водной среды должно рация составляла не более 100 мг ионов

,аммония на 1 а, или поддерживают концент; рацию ионов аммония в культуральной жид ,кости в пределах 2-100 мг/л. рН жидкости

50076 7

КН РО4

335,0

277,5

1193,8

160,0

З О 7"го

Мпво Н О

ИаМоо 2Н О

0,34

Ка HPO 12НгО

2 а НО3

Му 80 7Н0 (ЯQ ) ° 4Н О

0,30

0,24

1180,0

МР8О4 7Н О

90,0

80,0

Среде также содержит до 1000 мл умяюяенной воды; pH - 6,2. В;ферментере поддерживают температуру 45 С; скорость разбавления 0,084 час 1; мешалка работает при 1000 об/мин; рН поддерживают

Ферментацию продолжают до поучения клеточной плотности примерно 5,0 г/л (сухой вео), Затем ореду заменяют на следующую, N мг/л:

3 4 регулируют в пределах 4,5-8,0 добавлени- . добавлением 0,5 н. едкого натрия. Га; оную ем гидроокиси щелочного металла, например смесь, состоящую из (o6. 96): 33 метана, едкого натра, или серной или фосфорной 64 воздуха, 3 углекислоты, подают в феркислоты, ментер со скоростью 20 об./об. в 1 час.

Концентрацию ионов аммония в культу- и ральной жидкости поддерживают не abwe Популяциям . бактерий, использующих

80 мг/л (предпочтительно в пределах :- метан, дают расти естественным образом, 2 50 мг/л). При содержании менее при этих селективных условиях.

2 мг/л рост ограничивается из-за недоста1 Через 7 дней клеточная плотность попука аммонийного азота. Большая часть ионов 10 ляции бактерий достигает 1,0 г (сухой вес) аммония, добавленная к водйой среде, ио- на 1 л.

Родвзуется микроорганизмами немедлеино. Н3 этой популяции выделен однц штамм

Оставшаяся часть ионов аммония регулиру- бактерий; использующих метан. ется э необходимый пределах Количественное отношение метаниспольэуПрактически концеитрацик ионов аммо- i 15 ющих бактерий к другим типам равно ния и культуральной жидкости поддер кива- . 90:95%. юТ в пределах 10-30;: мг/л, рН питатеш Бактерией, использующей метан, явпяег ной среды, добавляемой к культуральной жид- ся кокк, имеющий диаметр 1,1-1,4 мкм, кости, поддерживают не менее 7,5 и более,,капсулообразующийи способный использовать йизким, чем . pH культуральной жидкости,, 20 метан и метанол, но не глюкозу.

Водную среду выбирают на основе среды. применяемой при ферментации метана, в ко На твердом субстратте, сделанном путем торой часть или весь источник азота от- добавления 1,0 вес, % иа 1 об. агара кy

r rÜ. сутствует. Количество каждого питательногс. ч"ч ь еитационной среде о"иса""ой. выш ВОси9 о вещества регулируют так, чтобы микроор Зб 3-4 дневной инкубации при 45 С под атмосганизмы рости с желаемой скоростью, (:ко- ферой метан -,возд "х (50:50 по объему), рость выращивания микроорганизмов под- колонии имеют следующую морфологию; дидерживают в пределах 0,81-5,0,г/л s чес..аметР - 1-2 мм, гдадкие, кРУглые, белого

Пример. Стадия А - получение. культуры бактерий, использующих метан, 30 Эти хауактеРистики согласУютсЯ с =ха500 мл взвеси метаисодержашей грязи рактеристиками штамма eNethgtOQocCLi8 стоячих луж добавляют через интервалы в Cupsutatus

5 дней в 3 л фермеитвр,t, содержащий Стадия Б - промежуточная для накоплеводную среду следующего состава, мг/л;

ЗЬ ния клеточной плотности необходимой для

KH P0 1600 устойчивой работы.

2 4

3,0 л культуральной среды, содержащей ца HPО4

2928 популяцию использующих метан бактерий, 2 4 полученнро согласно стадии А, используют

Fe8O4 7Н О 14 4 для пуска йепрерывно действующего фермев4 тера с рабочим обьемом 3 л, в который

Са(NO ) ° 4Н О 25 .непрерывно подают водную среду состава, 3 2 2 мгlл:

CIL8O 5Н 0 4

500767

3 4

Ф

Мg 8О 7Н О

722,5

375,0

256,0

КС4, 7eSO 7Н О

Сас В

СиВО 5Н О

75,0 Та блица 1, 15, 0

2,25

Время, Избытонное содержание И Н в

+ среде, мг/л

Клеточная

IIAOTBocть г/л

МВО 7Н 0

Nrl SO ° Н О

Иа2МоО4 2Н20.0,75

4,0

16,2

7,5

СЪСФФ 6Н2О

0,55

12,3

10,9

250,0

5,0 9,2

20,3

5,2.60

31,7

5,0

25,5

18,4

Си 8О,- 5Н 0

Fe брО, 7Н О

14,5

О4 7HãO

Мю 8О Н О

0,6

0,8

CoC4 6Н О

Иа МоО ° 2Н О

0,03

0,3

Н 8О, (36)

Н И О (13,6н) 0,34 мл/а

3,1 мл/л

КН РО

335,9;

Ma2НРО4 12H2О

277,5

Среда также с держит,до 1000 мл умягченной воды, рН вЂ” 3,0, Стадия В. Использование гидроокиси ам

: мония в качестве источника азота и для регулирования рН культуральной жидкости. рН поддерживают 6„0 добавлением 1,1к. гидроокиси аммония s i соответствии с изме нением рН в культуральной среде состава, мг/л:

ЗВ

Умягченная вода - до 1000 мл рН вЂ” 1,3. о

Ферментер поддерживают при 45 С s скорости разбавления 0,18 час 1 и 1500

36 об/мин мешалки. Скорость подачи газа составляет 30 об/об в час. Газ аостоит из 20 об. % метана и 80 об. % воздуха.

После нескольких минут, когда рН регулируют 1н. КаОН, рН поддерживают 6,0 добавлением 1н. Н 8. О4 и 1 í. ИаОН с помошью автоматического титратора. Ферментацию проводят в постоянных условиях в течение не менее 7 дней, при этом кл точ-й0 ная жидкость стабилизируется на 5,0 г/л, .б давая скорость роста клеток 0,9 г/л в

1 час (сухой вес).

Выход по метану составляет 0,66 а цо кислороду — 0,21 (на единицу веса метана или кислорода, израсходованных в про цессе ферментации).

Данные опытов приведены в табл, 1, Ж Подача среды 510 мл/час.

Избыток ионов аммония определяют в

:,10 мл образца калрриметрическим методом. . Из таблицы видно> что при применении среды с точным рН при ферментации в постоянных условиях избыток кислотиости фзрмзитзиионной жидкости ограничивается уровнем, который требует лишь ограниченной нейтрализации гидроокисью аммония. Это коли» . чество гндроокиси аммония вызывает избыточное содержание ионов аммония в жидкости, нормально составляюшее от 7,5 до 3,7 мг/л.

Главная масса гидроокиси аммония до-! бавленная при ферментации, используется как источник азота для роста бактериальной культуры, используюшей метен.

П р н м е р 2. 3 л культуральной жид кости,:содержаший популяцию бактерий. ислользуюших метан, полученную в соответст- вии с выделением и клеточной плотностью с..гадий А и Б в примере 1 используют для пуска непрерывно действуюшего ферментера рабочим обьемом 3,0 л, в который пода ют водную среду состава, мг/л:

500767

) O 7Н2О

СаС1

200,0

50,0;

И а S О (безводный) 500,0;

2 4

Ел$О ° 7Н 0

4 2

NA,ÇÎ Н О

ЙаМоО ° 2Н О

5,0

0,2;

3,0; э

0э01 t

-.СоС(, ° 6Н О

Fe8О -7Н О

4 2

Н 8О.

5,0;

2,3 мэзй1л jiiq

/,- 20

Умягченная вода до 1000 мл, рн-3,1, Стадия В.

Ферментер поддержифают при 45 С, скорость разбавления 0,18 час 1 и

1500 об/мин мешалки.

Газ, состощиий из 20 об.Ъ метана и

80 об.% воздуха,.подают со скоростью

30 об/об. в 1 час, рН поддерживают 6,0 добавлением 1,1н гидроокисн, аммония.

Ферментацию пповодят при постоянных условиях 7 дней, прн этом клеточная просп ность составляет 4,5 г/л (сухой sec) н скорость роста - 081 гlл в 1 час (сухой вес).

Выход по метану, т. е. вес полученных клеток составляет (сухой вес) на единицу метана, поданного в ферментер - 0,66,,а ввн,4ц по кислороду 0,21.

46

При добавлении к культуральной жидкости, питательной среды с рН - 13,1, содержащей 2,3 мекв/л Н gO прн скорости раз»

«1 бавления 0,18 час, получающаяся в одной 4 фазе концентрации ионов водорода была такой, что для поддержания рН 6,0 при устойчивом непрерывном процессе количество комов аммония, требуемой. в водной фазе каждый данный момент, изменялось от р

5 0 до 50,0 мг/л.

Прн этом гидроокись аммония служит как источник азота.

Пример 3. Стадия Б. 5,0 л куш туральной жидкости, содержащей популяцию щ, бактерий, использующих метан, полученную в соответствии со стадией А примера 1, используют для пуска непрерывно действующего с перемешиваннем ферментера с раба чим обьемом 5,0 л. 60

В ферментер подают непрерывно питательную среду состава, мг/л;

732,0;

647,2;

2785,5;

КН РО

И а г НРО4 ° 2Н20

ИаИО

Ng SO ° 7Н О

373i0it

Са (03 2 4Н2О

Си 80 ° SH О

Уе 3О4 ° 7Н20

21©,0;

10,6;

33,8;

1t3t

1,8;

>АВЭО 7Н О

Nn8O Н О

СоСФ . 6Н 0

0,06;

Иа МО4 2Н О

0,75;

Н 3 О (36н) 0,8 мл/л

787,5;

Йа НРО4 12Н20

562ебе 3 04 7"20

Уе 804 7Н20

50,6;

112,S;

20,5;

Сас(, Сн 10 5Н О

Zn3O ° 7Н О

2,5;

Н ИО (13н) 7,3 мл/л о

Умягченная вода - до 1000 мл

pH - 1,3. о

Ферментер действует ири 45 С, скор(i о с Фи разбавления - 0,18 час и 3000 об/мин мешалки.

Скорость подачи газа 68 об/об. н,, 1 час.

Газ состоит as 18,2 об. % метана и

81,8 об. ф воздуха, устанавливают рй - 6,1 и поддерживают aa,ýòîì уровне добавлением

1н. Н ®О или 1н. ФаОИ иэ автоматического тнтратора. При этих услоиаих клеточная плотность постепенно увеличивается до 14 г (сухой sac) на 1 л.

На этой стадии среду наценка ив среду . следующего состава, мг/л: с

КН РО4 937 5.

800767

647,5;

Яа НРО 12Н О

1,7

Ме 3О Н О

Ма фо

МУ 804 7Н20

Са(МО ) ° 4Н О

2785,6;

373,8;

210,0;

10,6;

Иа МоО 2Н О

СоС1 6Н О

Na 8О

1,5;

0,5;

225,0;

Н фо (36н,) 0,2 млlл.

4 10

Умягчейная вода — до 1000-мл PH-6,6.

Стадия В.. рН жидкости регулируют ири 6,1 добавлением 1,1н ЙН4ОН иэ. автоматического титратора. 35

В этих условиях клеточная плотность стабилизируется на уровне 14 г (сухого веса) на 1 и,.

Фермвнтацию проводят в устойчивых уо», ловиях не менее 7 дней. 20

Скорость прбдуцирования бактерий составляет, примерно, 2,5 г (сухой вес) ко» ток на 1 л/час. Избыток ионов аммония определяют по методике примера 2.

Результаты испытаний приведены в.табл,2,фй . :Т а б л и ц а 2.

33,8; -.

1,3;

1 8

0,06;

Иа МОО ° 2H 0

0,75

Н g О (36н)

Н NO (13,6 н) 0,8 мл/л

7,3 млlл.

Умягченная вода до 1000 мл рН - 1,3.

Ферментер действует при 45оС, степени, скорость мешад раэбавлвния - 0,10 час 1 кн - 3000 об/мин. Скорость подачи газа составляет:

66 об/об в 1 час. Газ состоит иэ 18,2 об. % метана и 81,8 об.Ъ воздуха. рН устанавливают 6,1 и затем поддерживают

:на этом уровне добавлением ls. Н 80

35 илиlн. AtaOH иэ автоматического титратора, При этих условиях клеточная плотность возрастает до 2S гlл (по сухому весу). мф Н а этой стадии среду заменяют на среду состава {мг/л) .

КН РО4

1875 03

Время, Клеточная Избыточное содер» час плотность r/ë жанне К Н+ в Э среде, мг/л

14,4

14,1

14,0

9,2

14,1 .

14,0

10,4

14,б

18,3

14,1

17,6, 72

14;2

20,4

14,0

21,2

16,5

Ъ

Яа НР04 12Н20

4 2

NgS0 . 7Н 0

Fe 80 ° 7Н О

Сас1

1575,0>

14,0

112S 0;

101,4;

225,0

П р и ме р 4, Стадия Б. Используют S,Î л культу, ральной жидкости, содержащей популяпню бактерий, использующих метан, полученной в сотствии со стадией. А удмерЕ lgM..Å пуска непрерывнЬ действующего ферментера ,с рабочим объемом 5 л при перемешивании.

В ферментвр подают питательную среду состава (мг/л):

Си 80 SH0

41,0;

5,0;

ЗФД04 7Н20

X g0 Н О

3,4;

2,9; а2мо04 2Н2

CoCf 6Н О

1,0;

782,0;

KH„I" 4 с

М Подача среды 820 мл/час

Ск оо ° 5H О

Fe 80 7Н20

Zia8O 7Н20

М ъ 50 ° Н О L ° 6H 0

500767

12

См МО4 5Н2О

450,0;

Ща 3О

4,0;

XngO 7Н Î 0 34

Мв8О H О о,ао;

Ма Моо, 2Н О 0,24;

Умягченная вода до 1000 мл рН -6,25.

1 1 f

Фермеитатор поддерживают при 45оС, . скорости разбавления 0,084 час 1„и скорости мешалки - 1000 об./миИ; рН поддержи . вают на уровне 8 75 добавлением 0,5 н. едкого катре.

Газовую смесь из 33 об. % метана, 64

"об. % воздуха и 3 об, % углекислртьв подам ют со скоростью 20 об,/об час.

Популяция бактерий, использующих метан, свободно размножается и через 7 дней достигает клеточной-плотности в 1,10 г/л (сухой вес). На атой популяции выделяют один штамм метаниспользуюших бактерий,, а другие типы бактерий не способны к использованию метана, при этом отношение их равно 90: 95%., Метанисиользующий бактерией были коки с диаметром 1,1-1,4 мкм,. капсулообразуюшие и способные использовать метан и метанол, но не глкжозу.

На твердом субстрате, приготовленнри путем добавления 1,0 вес. % arapa к ферс . ментационной среде после 3-4 дневной ннкубации при 45РС под атмосферой метанЗа воздух, йолонии имеют следуюшую морфоло гию» диаметр 1-2 мм, гладкие, круглые, белого цвета. Эти характеристики во всех отношениях согласованы с характеристиками штамма е »ЙЮЬУ(ОСОССиа ааРЗи (ЫИФ, гитратора.

В этих же условиях клеточная плотность стабилизируется на уровне 25 г/л (сухой М .ввс).

Ф ерментацию проводят в устойчивом режиме не менее 7 дней.

Скорость продуцирования бактерий, пвимерно, 2,5 г/л в 1 час (сухой вес}. N

Избыток ионов аммония определяют калориметрическим методом.

Данные испытаний цривейеты в ьтабл. 3; " х

Таблица3.

Время, Клеточная Избыточное содерчас плотность, г/л жанне НН в сре-1 де, мг/л . )Ж

21,6

25,0

25,0

22,0

24,5

18,0

19,5

17,2

25,0

25,5

25,0

22,0

25,0

24,5

30,2

24,5

25,0

30,0 Подача среды 415 мл/час.

П рим,е р 5. Стадия-А-. 500 мл метансодержащей грязи стоячих луж добавля45 ют через интервалы в 5 дней в аэрируемый с перемешиванием ферментатор рабочим обьемом 5 л и содержанием 5 л водной ° среды состава, мг/л;

КН PO

KH РО

937,5;

1 600;

2928,0;

78,5;

Иа HPO ° 12H О г

М МО .7Н О

Н а НРО 12Н20

Иа МО3 О4 7Н О

Р 8О4 7Н О

Са(О 2 4Н О я 2 2

562,5;

1180,0;

706,0;

80,0;

Н 5О (безводный) 2

Fe 8O ° 7Н О

14,0;

25,0,"

112,5;

42,7;

Н Я О {36и.) 0,4 мл/л.

Умягченная вода до 1000 мл рН - 2 3.

Стадия В. рН поддерживают 6,1 добавле" нием 1,1 н. ЩН OH из автоматического в

Стадия Б. 5,0 культуральной жидкости, содержащей популяцию метаннспользующих бактерий, полученную нредыдущим способом,. используют для пуска непрерывно действую"щего фермента объвмом 5,0 л.

В ферментвр подают водную среду состава, мг/л;

500 76 7

Ц а 3 О (безводный)

Си О .5H O

Ег О4 ° 7 Н2О

Ма, МоО 2Н О

223;

20,5;

2,5;

1,5;

Myl ЗО Н О с

СоС(, 6Н О

Вода до 1000 мл рН » «2,6.

1,7;

Пример 6. Стадия Ь. 3,0 л куль»

I туральной жидкости, содержашей популяцию

: метаниспользукжих бактерий, полученную в б оФерментер действует -при 45 С, скоросф разбавления 0,18 час 1 и скорости мешал,«и 3000 об/мин, Газ, состоящий иэ 18,2 об.% метана и 81,8 об.% воздух подают со скоростью . 66 об/об ;час. рН устанавливают 6,5 едким натром и пар-! держивают на этом уровне добавлением 1н

NaOH автоматическим титратором.Ж

Азот добавляют в виде 1,1н гидрооки, си аммония, которую подают ьасоСом с пбег. ./ степенно увеличивающейся скоростью для йа1, Ф 1 растания клеточной плотности до 14 r . (сухой вес). 1Избыток ионов. аммония в . З> .. к щьтуральной жидкости определяют путем ,отбора каждые 10 мин образца в 10 мл и

4 @атем калометрическим методом или аммиач ным зондом в комбинации с рН-метром и поддерживают от 5 до 190 мгlл с ручным

; реГулированием скорости подачи насосом.

Стадия B. При достижении клеточной плотности 13,4 г/л на стадии Б" избыток ,Х ионов аммония поддерживают 5-1О мг/л путем подачи гидроокиси аммония в ферме итер, Ферментацию прово в устойчивых ус. ловиях 17 дней. Клеточная плотность составляет 13,5 г/л при скорости продуциро-.. вания клеток 3 5 х 0,18 г/л в час (сухой вес).

Выход по метану 0,63, по кислороду

0,23.

КН РО

Й а2НРО ° 12Н О

335,0, ;. 277,5>

М ЗО 7Н О

We $O ° 7H 0

СаС 1

Си. 8 О 5H О

160,0;

14,5;

) 40,0;

4,55;

О,85;

ЖвЯО4 ° 7Н О

Nn.3О Н О

0,75;

Иа МоО ° 2H О 0932it

СоСЪ 6Н О

Н $ О, (36н)

Ф I

Умягченная вода до 1000 мл рН - 2,6. о

Ферментер поддерживают при 45 С, ! скорости разбавления 0,18 час-1 и скорости мешалки 1500 об/мин.

0,023;

0,125 мл/л.

Гаэ, состоящий!из 20 об. % метана и

0 об.% воздуха, подают со скоростью

30 o6;/об. час, .

Стадия B, pH поддерживают прн 6,6 доч бавлением 1н. едкоГо натра иэ автоматиче ского титратора, 1,1 н раствора гидрооки си аммония подают насосом со скоростью, соответствующей концентрации ионов аммония, в жйдкости, zm орую,определяют калориметрическюл методом, как в стадии Б примера 5 °

Фермейтацию проводят в течение 7 днеь.

В этих условиях клеточная плотность составляет 6 г/л, что соответстует скорости продуцирования бактериальных клеток в

0,9 г/л в 1 час (сухой вес). соответствии со стадией А примера 1, используют для пуска непрерывно действующего ферментера с рабочим объемом 3,0 л, г :;"В ферментер подают среду состава, мг/л:

500767

Ф

Таблица4.

° 15

Расход 1н. И аОН Клеточная Избыток М Н

+ при титровайии, мл/чая плОтнОсть, г/л

Ф.

Время; час .

4,9

15,0

3,0

8,0

24

5,0

4,9

7,5

2,9

3,0

10,0

12,5

15,б

3,1

2,9

4,948

5,0

17;5

5,0

72

84

3,0.

3,0

2,9

16,0

15,0

5,0

0,8;

Mrl ЗО Н О

1,5;

Иа Моо, 2Н О

0,5.

1098,0;

3 4

Мс SO 7Н О

825,0;

210,0;

210,0;

54,4;

КСФ йа2 8 О4

Fe SO 7Н О

СаС 3

75,0;, фф

Си 8О 5Н О

20,6

Ф

Подача среды 500 мл/час. а

Из таблицы видно, что путем подачи на- сосом гидроокиси аммония в соответствик с избытком ИОНОВ ДН4. в, жидкости возможно проведение устойчивой фермента ции. рН в культуральной жидкости поддерживают добавлением едкого иатра, р

Пример 7. 5,0 л культуральной жидкости в соответствии со стадией А . примера 1, содержащую популяцию, метан использующих бактерий, используют для пу-;35 сиа =йепрерывно действующега ферментера с рабочим объемом 5,0 л. .:В ферментер подают среду состава, мг/л:

7Нао ч. ,"езультаты исследований, приведены в табл.4 6Н2О

Умягченная вода до 1000 мЛ

pH - 2,25. о ферментер поддерживают gpss 4 5 С, скорости разбавления Ь,18 час 1, и скорости мешалки 3000 9ф://мин.

Газ состава 18,2 об.% метана и 81,2 об.% воздухаГ подают со скоростью 66 об,/Об„в 1 час, P

В ферментер насосом робавляют 1,1 н. раствор гидроокиси аммония и скорость подачи регулируют в соответствии с концентв рацией ионов аммония по методике приме ра 5, рН поддерживают 6,2 добавлением 1н раствора ЙаОН автоматическим титрато=ром.

"Стадия В. „.B этих услсвиях,клеточная плотность стабилизируется на уровне, примерно 14г/л (сухой вес).

Ферментацию проводят 7 дней.

Скорость продуцирования бактерий—

2,5 г/л (сухой вес).

Данные испытаний приведены в табл. 5..)(. 1 (/Я.

Таблица 5.

Расход 1н. NaOH при титровании, мл/час

Время, час

13,9

l5,0

14,0

12,5

10,0

5,7

5,8

14,4

9,5

14,0

10,0

8,0

7,5

=48

5 5

14,1

14,3 5,1

7,8

14 0

14,7 .

9,5

Составитель А яражникоща

ТехредЕ.Подурушина Корректор Т,Галазова и

Т.Добровольская.Редактор A. p

Заказ5558 .. Изд, M ф+ Тираж Я . Подписное

ЦН. 4ИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР но делам изобретений н открытий

Москва, I13035, Раушская наб., 4

Филиал ППП Патент r, Ужгород, ул. Проектная, 4

84 5,6

96 5,7

Подача среды 815 мл/час.

Формула изобретений, 1. Способ производства биомассы путем вырашивания микроорганизмов в культураль ной жидкости, содержащей метан и водную

% среду:. с минеральными солями, о т л ич а ю ш и и с я тем, что, с целью интен» сификации. процесса, скорость выращивания микроорганизмов поДдерживают в пределах

0,81 5,0 г/л в 1 час, ооуйествляя одноЪ временно регулировку рН укультуральной жидкости до значения 4, 5-8,0 путем введе;+

Клеточная Избыток Й H в плотность, г/л жидкости м -/л ния в нее ионов аммония для поддержания их концентрации 2,0-100 мг/л, t

2. Способ по и. l о т л и ч а юУ ш и и с я тем, что ионы аммония вводят в виде аммиака или гидроокиси аммония.

3. Способпоп. 1, отличаюший с я тем, что используют бактерии,;/ИИЬуtococcus сарзайа1иs.

4. Способ по пп=. 1-3, о т л и ч а ю— ш и и с я тем, что процесс выращивания осушествляют при температуре преимущест венно равной 42-48 С, о