Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (11) И1324 (r (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 07.06.74(21) 2032379/13 с присоединением заявки №(23) Приоритет(43) Опубликовано 25.04.76Бюллетень № 15 (45) Дата опубликования описания09.09.76 (51) М. Кл. С 07G 7/026
Государственный номнтет
Совета Инннстров СССР оо делам нэобретеннй н открытнй (53) УДК 615.739.6 (088.8) Н. И. Гельперин, Л <. Шагалов, B. П. Айнштейн, И. Г. Аносова, Б. П. Вайнберг и П. С. Кранц (72) Авторы изобретения
Институт биофизики (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОБОЙ КИСЛОТ1.
Изобретение относится к технологии получения биохимических препаратов.
Известен способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты из молок рыб, по которому молоки последовательно гомогенизируют в присутствии цитратно-солевого раствора и детергента, прогревают при 60 -70оС в течение 1-4 час, охлаждают до 0-4оС; очистку осуществляют сорбцией реакционной массы на кизельгуре с последующей 10
Элюцией целевого продукта, Однако способ является трудоемким и позволяет получить ДНК с мол, в. 15 106 дальтонов.
С целью упрощения способа, очистку 15 осуществляют пропусканием реакционной массы через колонну, заполненную твердым зернистым материалом, например стеклянными или шамотными шариками, причем твер дый зернистый материал в колонне может 2О быть неподвижен или двигаться сверху вниз.
Пример. 10 r молок, очищенных от жира и соединительной ткани, измельчают в гомогенизаторе в течение 1 мин при
4000 об/мин со 150 мл цитратно-солевого раствора, Получены. и гомогенат центриф гируют при температуре 0- С и 2600
«о об/мин в течение 20 мин, Осадок вновь гомогенизируют в течение
10 сек при 4000 об/мин со 150 мл циэратносолевого раствора. К гомогенату добавляют 50 мл спиртового раствора до децилсульфата натрия, смесь ставят на водяную баню, где ее нагревают до 60оС при работающей мешалке и выдерживают при втой температуре в течение 1,5 час.
B горячую реакционьую смесь добавляют 200 мл 5 М раствора хлористого на рия. Полученную реакционную смесь вновь нагревают до 60 С и выдерживают в тео чение 1,5 час. По истечении указанного времени в горячую смесь добавляют
400 мл 2,5 М раствора хлористого натрия
Массу перемешивают 10-15 мин и ох лаждают до 03 С.
Охлажденную смесь подают снизу вверх в стеклянную цилиндрическую колонну диаметром 25 мм, заполненную неподвижным зернистым материалом (например стеклян
511324
Составитель
1 . Смирнова
Редактор
P А р "е" ред И.1 арандашова Корректор Л.Орлова
Заказ 5 873
Изд. Рй J53f Тираж 5Q j
Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, 113035, Раушская наб., 4
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ные или шамотные шарики) до высоты
1000 мм со скоростью 200 мл/час. Частицы белка при этом медленно заполняют слой зернистого материала, распределяясь по его высоте. Из верхней части колонны вы« 5 водится в сборник прозрачный раствор ДНК.
После заполнения примерно половины высоты колонны белком (контроль легко осуществляется визуально) твердую фазу выгружают снизу колонны, отмывают от белка, сушат и вновь 1Î возвращают в работу. о
Из прозрачного раствора действием 96 этилового спирта в соотношении 1:1 по объему высаживают ДНК.
Выход ДНК при этом составляет 4% от 15 веса взятых молок.
Характеристика ДНК: мол. в, 23 ° 10
6 содержание белка 0,5%; гипохромный эффект 40%; интервал плавления 6,4%.
Формула изобретения
Способ получения дезоксирибонуклеиновой кислоты путем гомогенизации молок рыб, обработки детергентом и цитратно солевым раствором, выделения и очистки целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и получения высокомолекулярного препарата, очистку осуществляют пропусканием реакционной массы через колонну, заполненную твердым зернистым материалом.
