Способ получения холинэстеразы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) Г43652 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 15.03.74 (21) 2008593/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.01.77. Бюллетень ¹ 3 (45) Дата опубликования описания 18.05.77 (51) М. Кл. С 07 а 7/02

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам иэооретений и открытий (53) УДК 615 77994 (088.8) (72) Авторы изобретения

Т. Д. Абрамович, А. П. Бресткин, Ю. Г. Жуковский, Л. П. Кузнецова и Г. М. Григорьева (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХОЛИНЭСТЕРАЗЫ

Изобретение относится к фермацевтической промышленности.

Известен способ получения ацетилхолинэстеразы из животной ткани, заключающийся в том, что ткань гомогенизируют, лиофильно высушивают, порошок обрабатывают смесью органического растворителя с детергентом, высушивают, суспендируют в воде, отделяют балластные белки, фермент осаждают сульфатом аммония, диализуют, фильтруют и лиофильно высушивают. Однако выход препарата незначителен, кроме того, препарат обладает малой удельной активностью.

С целью повышения удельной активности и увеличения выхода препарата, гомогенизацию биологической ткани проводят в растворе электролита, например хлористого магния, и вводят электролит в растворы фермента на последующих стадиях очистки.

Замороженную ткань электрического органа рыбы размораживают и гомогенизируют на холоде в 0,1 М растворе хлористого магния (2:1 по объему) и лиофилизируют.

К 10 г лиофилизированной ткани добавляют

200 мл смеси гексана и бутанола (2:3 по объему) .

Смесь перемешивают в течение 20 мин и фильтруют.

Осадок промывают трижды гексаном и высушивают. Высушенный порошок суспензируют в 250 мл

0,1 M раствора хлористого магния (рН 7,2), отделя5 ют ферментный раствор центрифугированием, добавляют к ферментному раствору сульфат аммония до 50% от насыщения и затем 1 М раствор едкого натра до рН 6,9. Отделяют выпавший ферментный осадок и растворяют его в 100 мл 0,1 М раствора

10 хлористого магния. Раствор ферментного осадка пропускают через колонку с гелем сефадекса Г-25, уравновешенного с 0,1 М раствором хлористого магния (для освобождения от сульфата амония) и затем раствор фермента лиофилизируют. Выход

15 фермента составляет 21%. Удельная активность лиофилизированного препарата фермента до 500 Е/мг белка.

В параллельно выполненных опытах без исполь20 зования хлористого магния выход фермента не превышает 4% при низкой удельной активности, так как происходит почти полная потеря каталитической активности на какой-либо стадии очистки, чаще всего при лиофилизации сырья, экстракции фер25 мента или высаливании.

543652

Составитель Т. Головин

Техред О. Луговая

Редактор О. Кузнецова

Корректор И. Гоксич

Заказ 6125/53

Тираж 578 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП " Патент ", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула из о бре тения

Способ получения холинэстеразы из животной ткани путем гомогенизации ткани, лиофилизации и обработки смесью органического растворителя с детергентом, экстракции водой, отделения фермента сульфатом аммония, обессоливания и лиофилизации раствора фермента, о т л и ч а ю щ и и ся тем, что, с целью повышения удельной активности и увеличения выхода, гомогенизацию биологической ткани проводят в растворе электролита, например, хлористого магния и вводят электролит в растворы фермента на последующих стадиях очистки.