Производные триокситретбутиламида 4-ди (2-хлорэтил) аминобензилциануксусной кислоты, обладающие противоопухолевой активностью

Авторы патента:

C07C255/42 - углеродного скелета, замещенного атомами азота с простыми связями, не связанными с другими гетероатомами

A61P35 - Противоопухолевые средства

A61K31/165 - имеющие ароматические кольца, например колхицин, атенолол, прогабид

! Янт;,.„ ,"к..@„„

<»>707173

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 12.01.78 (21) 2568442/23-04 (51)М. Кл.з с присоединением заявки ¹

С 07 С 121/80

А 61 К 31/16

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 07.1080. Бюллетень № 37

Дата опубликования описания 071080 (53) УДК 547,239, .2.(088.8) (72) Авторы изобретения

В.В. Белогородский, Н.P. Мюллер, Б.А. Ивин и В.A. Фклов

Ордена Трудового Красного Зйамени научноисследовательский институт онкологии (71) Заявитель (54 ) ПРОИЗВОДНЬП ТРИОКСИТРЕТ вЂ” БУТИЛИ1ИДА

4-ДИ(2-ХЛОРЭТИЛ)АМИНОБЕНЗИЛЦИАНУКСУСНОЙ

КИСЛОТИ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ

АКТИВНОСТЬЮ

Указанная цель достигается производными триокситрет-бутиламида 4-ди (?-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты общей формулы 3 сн ок, / вЂ” C вЂ” МН- С вЂ” СН OH г

О Сн окр

20 где R, R и -. означают водород или

3 радикалы R и R> означают групПУ С(СЯ а Пз - водород, обладающими противо0-! пухолевой активностью. 25

Способ получения соединений формулы (состоит в том, что триокситрет-бутиламид 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилиденциануксусной кислоты восстанавливают борогидридом натрия в среде безводного тетрагидрофурана при 20-27 С и выделяют тр,. окситретбутиламид 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусиой кислоты в свободном виде или в виде его циклических апет алей.

Циклические производные триокситрет-бутиламида 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты полу30

Данное изобретение относится к новым производным триокситрет-бутиламида 4-ди(2-хлорэтил)аминобенэилциануксусной кислоты, обладающим биологически активными свойствами.

Указанные производные проявляют в частности противоопухолевую активность.

Известно большое число производных 4-ди(2-хлорэтил)аминофени)талкано вых кислот, в частности пептидных производных, которые можно рассматривать как замещенные амиды (1j, (С Ск, нд,м -« " -Сн,Однако такие производные в большинстве своем токсичны. В медицинской практике нашел применение лофе нол-(n-ди(2-хлорэтил)аминофенацетил-Й,1-фенилаланин) (2(.

Целью изобретения является расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

707173 чают в результате обработки соединения укаэанной общей Формулы, где R<, НКИ 23 - водород. ацет я кето ов или альдегидов в присутствии кислотных катализаторов.

Синтезированные соединения триокситрет-. бутиламид 4-ди(2-хлорэтил) аминобензилциануксусной кислоты и его циклические 0,0" вЂ” алкилпроизводные представляют собой устойчивые бесцветные кристаллические вещества, которые хорошо растворимы в тетрагидрофура- О не,"умеренно растворимы в хлороформе, бензоле, эфире, низших спиртах, .трудно растворимы в гексане, воде.

Состав и строейие полученных. соединений доказаны элементныМ (C,H,CB, 1S

N) аналиэовл, УФ, ИК и ЯМР 1 Н и 4ЪСспектрами.

УФ-спектры предлагаемых соединений в спирте (спектрофотометр CC-8 )

)характеризуются наличием двух абсорб- Я} ционных полос: 26".нм,,Eg& 4,3-4,4 и 302 н>л, 3g E3,2-3,6, в ИК-спектрах суспенэий веществ в вазелиновом масле (спектрофотометр UR-10 ) обнаружены для соответствующих соединений полосы поглощения, характеризующие группы ОН и NH (3200-3500 см "), С-О и С-О-С (1000-1290 см " ), полосы паразамещенного бензольного кольца (в области

1530 см ") а также полосы амид-7 30 и амид- tl (1650-1680 и 1580-1620 см )

В спектрах ПМР заявляемых соединений в (СД ) 80 и /Ойдо) z CO спектрсмЕтр РЕГК1П- ERrner R-12,60 МГц, относительно ГМДС, шкала <Р,(наблюда- 35 ются следующие общие сигналы: синглет группы NH (7,27 м,д.), исчезающий при добавлении Д О в раствор), квартет протонов пара.-замещенного бензольного кольца (7,0-8,6 м.д.), 40 сложный мультиплет протонов группы

-СН -СН- в области 3,76-3,92 м.д., в которой резонируют также протоны группы и(сй CН,СЕ) и

CH20Ri

С вЂ” аНе ОК яе ОК, В спектрах ЯРМ С заявляемых сое50 динений обнаружены сигналы всех неэквивалентных атомов углерода.

Пример 1 . Триокситрет-бутиламид 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты.

К суспензии 3, 10 r (О, 0074 г-моль) триокситрет-бутиламида 4-ди(2-хлорэтил)амииобензилиденциануксусной кислоты в 26 мл безводного тетрагидро- фурана добавляют порциями при интен- 60 сивном перемешивании и температуре

20-27 С 0,34 г (0,009 г-моль) борогидрида натрия. Реакционную массу пе ремешивают еще ? ч при комнатной температуре. На следующие сутки рас; 65 г твор фильтруют, фильтрат вливают в

80 мл охлажденной воды, к которой предварительно добавляют 0,7 мл концентрированной НЫ и ставят в холодильник. Через 2 ч отфильтровывают белый осадок, промывают водой до нейтральной реакции н сушат в вакуумэксикаторе на КОН. Вес осадка 2,69 r.

После кристаллизации с углем из 30 нл этанола получают 1,99 r (63,7% от теоретического) искомого вещества с т,пл. 141-142 С

Найдено Ъ:ç С 52,14; Н 6,19; HCP.

16,00; и., 9,14; С,8н„сев о

Вычислено, Ъ: С 51,69; Н 5,97;

СИ 16,90, N 10,00.

Пример 2 . (5-0ксиметнл-2,2-пентаметилен-1,3-диоксан-5-ил) -амид

4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты.

Смесь 1,25 r (0,003 r-моль)триокситрет-бутиламида 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты, 0,57 г (0,0033 г- лоль) диэтилацеталя циклогексанона и 100 мг пара- толуолсульфокислоты в 15 мл безводного бен зола кипятят до растворения (но не . я, нее 1, 5-2 ч) . Реакционную массу подщелачивают спиртовым раствором

КОН до рН 8, профильтровывают через бумажную пульпу с углем, промывают водой до нейтральной реакции, и после сушки бензольного раствора сульфатом натрия, упаривают в вакууме досуха. Кристаллизуют из смеси бензол-гексин (1:1), затем из изопропилового спирта. Получают 0,74 г (52% от теоретического) бесцветных крис-. таллов с т.пл.123-124 С °

Найдено, Ъ: С 57,68; Н 7,12;

СЕ 14,51; и 0,20. С .Н СЕУ,О, .

Вычислено, Ъ: С 57,831 Н 6,68;.

CE 14,23у N 8;43.

Молекулу противоопухолевого алкилирующего препарата принято делить на цитотоксические группы и их носитель, 3а счет первых осуществляется химическое взаимодействие с биополимерами клетки, а носитель способствует транспорту препарата через клеточную оболочку.

Во многих работах по созданию алкилирующих агентов основное внимание уделяют принципу подобия носителя алкилирующей функции -ому или иному метаболиту. Например, лофенал-(n-ди (2-хлорэтил)-аминофенацетил -d -фениланин), сарколизин-(л-ди(?-хлорэтил) амино-d, 8 --фенилаланин-хлоргидрат) содержат в качестве носителя аминокислотные остатки, которые, как считают, являются подходящими проводниками цитотоксической группы в Опухолевую ткань. В то же время нельзя не заметить исключительной важности изменения растворимости агентов в липидной и водной фазах для реализации их биологического действия. Иными словами, транспортные свойства

707173

Результаты биологического тестирова

ЛЦ, мг/кг Суточная доза при % торможения роста опухолей, мг/кг (10введений) Соединение для мышей для к.рыс для мышей саркома сарко- PK

45 ма

180 для крыс аркома

37 асцитная on холь

Эрлиха

R1 R2. Вз

250 550 25-40 50

30 72

Н Н Н

850 1000 210

91 48 43

300 100 72

« «»»»

«« Мышам с асцитной опухолью Эрлиха препараты в суточной дозе вводили восемь раз.

Плоскоклеточный рак кожи на мышах СС 7 (сингенная опухоль) .

" 0,1 > Р Ъ 0,05, остальные показатели торможения роста опухолей достоверны.

Таблица 2

Влияние предлагаемых соединений на содержание лейкоцитов в периферической крови здоровых мышей

1 реднее количество лейкоцитов в 1 мм

Я ериферической крови после лечения, Ъ к исходному через 1 сутки через 20 суток

Доза Mr/êr

Соединение

109

Н Н Н

Н С (СН ) -цикло

Н «С (СН ) -цикло

210 носителя стали связывать с балансом гидрофобно-гидрофильных свойств, находяцихся в прямой зависимости от структуры молекулы препарата. В то время как гидрофобные участки последней способствуют связыванию с липидными.фрагментами клетки "(эа счет так называемых гидрофобных взаимодействий),полярные группы придают всей молекуле в целом большую или меньшую степень гидрофильности.Липофильность облегчает препарату преодоление клеточной мембраны даже при отсутствии активного транспорта. Гидрофильность затрудняет этот процесс, но зато обес- . печивает дальнейшее продвижение препарата в цнтоплаэматическом слое и внутри ядра до точки приложения его действия. Таким образом, оптимальное сочетание обоих укаэанных свойств не только благоприятствует транспорту препарата, но и может решаюшим обра- 20 зом влиять на избирательность его действия вследствие различий в мембранах нормальных опухолевых клеток.

К числу препаратов, обладаюших выгодным для реализации биологическогс действия балансом гидрофобно-гидрофильных свойств, Могут быть отнесены предлагаемые производные амиды 4-ди (2-хлорэтил)-аминобензилциануксусной кислоты с незамешенной и замещенной различными радикалами триокситрет-бутилами группой. В молекулах этих соединений наряду с гидрофобными ароматическим фрагментом 4-ди(2-хлорэтил) аминобензильным остатком имеются и резко выраленные гидрофильные участки вЂ” незамеценная триокситретбутильная группа и 1,3-ацетальные циклы. Последние ссдержат наряду с неполярными (С вЂ” С), полярные (С - 0) связи, тоже придаюцие соединению определенную степень гидрофильности.

Результаты изучень я биологической активности триокситрет-бутиламида

4-ди(2-хлорэтил)аминобенэилциануксусной кислоты и его производных приведены в табл. 1 и 2.

Таблица 1 ния предлагаемых соединений

707173

Формула изобретения (С!СН2СН2)рХ Ц Щ2

Составитель М М ркулова

Редактор L",Ìåñðîïoâà Техред Н. Бабурка

Корректор Ю.Макаренко

Заказ 8674/73 Тираж 495

ВНИИПИ ГосударственНого комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )(-35, Раушская наб,, д. 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г..ужгород ул. Проектная, 4

Результаты испытаний свидетельствуют о том, что все изученные соединения обладают выраженно биЬлогической активностью, проявляют способность полностью подавлять развитие асцитной опухоли Эрлиха (при этом

5 наблюдается незначительное падение веса подопытных животных) и тормозить рост ряда плотных перевиваемых опухолей у мышей и крыс, (см. табл.1)

Лофенал, например, тормозит рост асцитной опухоли Эрлиха на 60,9% plj.

Особый интерес представляет действие заявляемых соединений на линейных мышей СС >Н с сингенной для этой линии опухолью ПРК (плоскоклеточный рак кожи). Данная опухоль от- 15 личается крайне низкой чувствительностью к известным противоопухолевым препаратам, поэтому получение на такой модели высокодостоверного и хорошо воспроизводимого эффекта (с л. 2О табл. 1) значительно повышает ценность заявляемых соединений как противоопу30 где R и и Н. означают водород или (где,1, д радикалы,R„ и R означают группу С(СИ ) т а Ц - водород обладаюцие противоопу=

1 холевой активностью.

Источники информации, 35 принятые во внимание при экспертизе

1. Кеблас С.С. Сравнительные экспериментальные данные по токсичности холевых агентов и, кроме того, служит .свидетельством, что подавление ими роста други:с перевиваемых опухолей не является артефактом, связанным с трансплантационным иммунитетом.

Заявленные соединения вызывают у животных временную лейкопению; к

20-му дню после прекрацения их применения уровень лейкоцитов периферической крови мышей восстанавливается (табл. 2).

В опыте на мышах с саркомой 37 через одни сутки после прекрашения применения, например, препарата обшей формулы с В,,Н, К + Р -,.С <СН ),„, где

n = 5, количество лейкоцитов крови составляло 63% исходного, но.уже через пять суток оно достигло нормы, Производные триокситрет-бутиламида 4-ди(2-хлорэтил)аминобензилциануксусной кислоты обШей формулы

С = вЂ” N сная

< вЂ” H-Ñ- н ок ц г

О сн оя и противоопухолевой активности лофенола, препаратов К-82 и К-96. Материалы научной конференции 1965, г.Виль нюс. Онкологический научно-исследовательский институт, С, 84-86 °

?. Ларионов Л,Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей. М.,„Медицинская литература, 196?, с. 250.