Способ отщепления галоидов от аминоацилполимеров

 

00777025

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 04.01.79 (21) 2726900/23-04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.11.80. Бюллетень № 41 (45) Дата опубликования описания 07.11.80 (51) M Кл з

С 07С 103/52

Государственный комитет

СССР (53) УДК 547.964.4..07 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

Г. А. Желтухина, Е. И. Филиппович и P. П. Евстигнеева (71) Заявитель Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им. М. В. Ломоносова (54) СПОСОБ ОТЩЕПЛЕНИЯ ГАЛОИДОВ

ОТ АМИНОАЦИЛПОЛИМЕРОВ

3 т

1 ь

Изобретение относится к способу отщепления галоидов от аминоацилполимеров— промежуточных продуктов в синтезе биологически активных пептидов, которые могут найти применение в биологии и медицине.

В настоящее время широко распространен синтез пептидов на твердой фазе (1), (2). В качестве якорной группы для присоединения первой аминокислоты к полимеру используют галоидалкильную группу.

Специфической проблемой такого метода пептидного синтеза является присутствие на полимере избыточных галоидалкильных групп, которые могут реагировать с незащищенными боковыми функциональными группами синтезируемого пептида с образованием побочных продуктов. Поэтому необходимо удалить остаточный галоид из полимера после присоединения к нему первой аминокислоты.

Известен способ отщепления остаточного хлора от аминоацилполимеров действием уксусной соли 1,5-диаза-бицикло (4,3,0) -нонена-5, причем достигается почти количественное отщепление галоида (3). Недостатком этого способа является проведение процесса при нагревании (50 С), что может привести к разложению защищенной аминокислоты на полимере, и трудонодоступность реагента.

Наиболее близким к заявляемому является способ отщепления галоида от аминоацилполимеров действием ацетатов калия или триэтиламина (4). Для улучшения ра5 створимости ацетата калия реакцию проводят в смеси диметилформамида с метанолом. Максимальная концентрация ацетата калия, достигаемая при этом, 0,25 ммол/мл.

Недостаток метода состоит в плохой растворимости этих реагентов в диметилформамиде. Добавка метанола ухудшает набухание полимера и снижает вследствие этого эффективность отщепления галоида.

15 Так, после обработки тетрапептидилполимеров (с исходным содержанием галоида

1,1 — 1,0 ммоль/г полимера) 23-кратным избытком упомянутых реагентов остаточный галоид составил 0,7 — 0,3 ммол/г поли20 мера.

Цель изобретения — повышение эффективности отщепления галоида и упрощение процесса.

Поставленная цель достигается описы25 ваемым способом отщепления галоидов от аминоацилполимеров действием на аминоацилполимеры солей уксусной кислоты в среде органического растворителя, заключающимся в том, что в качестве солей укЗ0 сусной кислоты используют избыток 0,75—

777025

0,8 М раствора ацетата цезия в диметилформамиде.

Предпочтительным вариантом способа является использование ацетата цезия в

13 — 15-кратном избытке по отношейию к хлору на пол и мере.

Ацетат цезия, в отличие от известных реагентов, хорошо растворим в диметил-. формамиде, без добавок спирта. Зто дает возможность применения более концентрированных его растворов без снижения набухания полимера, Так, после обработки аминоацилполимеров с содержанием хлора

1,3 — 1,4 /о (0,37 — 0,4 ммоль/г) 13 — 15кратным избытком ацетата цезия в.диметилформамиде остаточный хлор составил

0,2 — 0,5О/о (0,06 — 0,15 ммоль/г) без изменения степени посадки аминокислоты на полимер избытки ацетата цезия даны по отношению к остаточному хлору на полимере) . Концентрация отщепляющего реагента при этом была в 3 раза выше (около

0,75 ммоль/мл), чем в прототипе, а общий избыток . реагента примерно в 1,7 раза ниже. .... П р.и.м е..р.. 1. К. 3,57 г N-трет.-бутилоксикарбониллейцилполимера (I) c содержанием лейцина 0,5 ммоль/г и хлора

0,37 ммоль/г Вос-Leu-(Р)- прибавляют 3,78г (19,80 ммоль) ацетата цезия в 25 мл диметилформамида и оставляют на 80 ч, из них слабо перемешивают 40 ч. ((Р) — полимер

Меррифилда, хлорметилированный сополимер стирола с 2 /о дивинилбензола).

Смолу отделяют, промывают ЗХ20 мл диметилформамидом, ЗХ20 мл метанолом, 2Х15 мл эфиром, сушат. Содержание лейцина, определенное количественным аминокислотным анализом образца соединения (I), после обработки — 0,5 ммоль/г, хлора — 0,06 ммоль/г Вос-Leu-(>) .

Пример 2. К 3,53 г р-трет.-бутилового эфира N-трет.-бутилоксикарбониласпартилполимера (II) с содержанием аспарагиновой кислоты 0,45 ммоль/г, хлора

0,40 ммоль/г, Вос-Asp (Bu )-(в) прибавля15

30 зз

45 ют раствор 3,53 r (18,37 ммоль) ацетата цезия в 25 мл диметилформамида и оставляют на 72 ч, из них слабо перемешивают

35 ч. Смолу отделяют и промывают, как в предыдущем примере.

Содержание аспарагиновой кислоты в соединении (II) после обработки

0,452 ммоль/г, хлора 0,15 ммоль/г Вос-Asp (Лц ) — () .

Формула изобретения

1. Способ отщепления галоидов от аминоацилполимеров действием на аминоацилполимеры солей уксусной кислоты в среде органического растворителя, о т л и ч а ющий ся тем, что, с целью повышения эффективности отщепления галоида и упрощения процесса, в качестве солей уксусной кислоты используют избыток 0,75 — 0,8М раствора ацетата цезия в диметилформа миде.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ацетат цезия берут в 13 — 15кратном избытке по отноошению к хлору на полимере.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.

1. Мишин Г. П., Коршунова Г. А., Швачкин Ю. П. Успехи и проблемы твердофазного пептидного синтеза. Успехи химии, 1974, т. 43, вып. 2, с. 2014 — 2043.

2. Стюарт Дж., Янг Дж. Твердофазный синтез пептидов. Пер, с англ. Под ред.

Ю. П. Швачкина, М., Мир, 1971.

3. Suzuki К., Endo N., An improved a

tiochment of N-protected amino-acid and

peptide to chloromethylated polystyrenedivinylbenzene resin, cbem. Pharem Bull., 1977, 25, Хо 5, 1143 — 1146.

4. Haruaki yajuma, Hiroki kawatani, Hidehiro WatanaIe, studies on Peptides.

XXVII. Scpethesis of the Decapeptide, ACTH (5 — 14) as an Example of Peptide-fragment

condensation on the fobfmer support, Chem.

Pharem Bull,. 1970, 18, М 7, 1333 (прототип).