Способ определения гликозамингликансульфатов в сыворотке крови

 

О П И С А Н И Е (»)yg()()gg

ИЗО6РЕТЕН ИЯ

Союз Советсиик

Социалистическик

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23. 10. 80 (21) 2998857/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 23. 09. 82. Бюллетень № 35 (5l ) М. Кл.

G 01 и 33/48 Ьеударатввиеый комитет

СССР ае делам кзебретеиий к етврытк» (5Ç) УДК 616. 72

- (088.8) Дата опубликования описания 23. 09 . 82, М.P.U)òåðí, О.П.Тимошенко, ф.С.Леонтьева и .ф.Клюева3,;. (72) Авторы изобретения

Харьковский научно-исследовательский инст Т ортопедии и травматологии им. M.È.Ñèòåíêo (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНСУЛЬФАТОВ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Изобретение относится к медицине, а и менно к биоло ги чески м способам диагностики, и предназначено для определения состояния обмена в соединительной ткани в норме и при .различ((ых заболеваниях с минималь. ным расходом биосубстрата. .Известен способ определения гликозаьинагликансульфатов в сыворотке крови путем осаждения этих веществ резохином с последующим измерением степени помутнения пробы (.1). .Однако известный способ имеет низкую чувствительность и поэтому для анализа требуется много сыворотки (1 млэ ), что приводит к необходимости производить забор крови из вени.

Целью изобретения является повы— шение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения гли коз аминогли кансул ьфатов в сыворотке крови путем осаждения этих

2 веществ резохнном с последующим из-. мерением степени помутнения пробы, в сыворотку крови добавляют дистиллированную воду в отношении 1:50, а затем вносят резохим до 10 мг на

1мл сыворотки.

Способ осуществляют следующим образом.

В одну пробирку (опыт) вносят

2,35 мп дистиллированной воды, 1О

0,05 мп сыворотки крови и 1 мл 0,53-но" го раствора резохима. Во вторую пробирку (контроль) вносят 2,45 мп дистиллированной воды и 0,05 мп сыворотки крови. Затем обе пробы тщатель15 но перемешивают. Через 30 мин измерлlQT интенсивность помутнения обеих проб на фотоэлектроколориметре при длине волны 400 нм в кювете с рабощ чей гранью 5 мм против воды. Вычисляют разность показателей оптической плотности между опытом и контролем, которая отражает общее содержание гликозаминогликансульфатов

О, l 3 0,013 0,33

0,25

0,025 .0,20

О, 15 0,015 О, 19

0,012 0,18

0,022 0,32

0,030 О, 12

0,004 0,41

0 0,71

0,12

0,22

0,30

0,04 затели оптической плотности, и увеличением этих показателей.

Таким образом, предлагаемый способ имеет более высокую чувствительность, что позволяет применять большое разведение и использовать меньшее количество сыворотки крови .

7 Х„=0,121 T Х =2,46

М =0,0151 М =0,307

m =10,00372 m = 0,0658

n„+n<-2=14 t =3,97 рс0,01

Представленные в таблице сравнительные данные свидетельствуют о достаточной работоспособности предлагаемого способа, о повышении чувствительности метода свидетельствуют статистически существенно различающиеся показатели (р < 0,01), повышение информативности подтверждается исключением вредного влияния ряда факторов, в т.ч. и резохина, занимавших в ряде случаев покаформула изобретения

Способ. определения гликоэаминои, гликансульфатов в сыворотке крови путем осаждения этих веществ с последующим измерением степени помутнения пробы, отли чающи й

960626 ф (ГАГС). Это содержание можно оце" Для определения второй фракции к нить в юде показателя оптической опытной и контрольной пробам добавплотности, умноженного на 100, либо ляют по 0,1 мп l М раствора хлорида с помощью какого-либо доступного натрия и тщательно перемешивают. Че представителя гликоэаминогликансуль- s рез 10 мин измеряют показатели опфатов, например, гепарина. тической плотности. Определяют раздля определения. первой фракции ность между опытом и контролем (вток опытной и контрольной пробам добав рая разность).йэ первой разницы выляют по О, 05 мл 1 М раствора хло" читают вторую разницу и получают знарида натрия. Пробы тщательно. пере- 10 чение второй фракции. мешивают. Через 10 мин измеряют показатели оптической плотности проб. При этом. содержание третьей фракОпределяют разность между опытом и ции соответствует второй разности, контролем, получая первую разность. уменьшают исходный результат на пер- И В таблице представлены сравнительвую разность и получают показатель, ные результаты определения ГАГС изотражающий содержание первой фрак" вестным и предлагаемым способации ° ми в единицах оптической плотности.

960626

S с я тем, что, с целью повышения чувст вител ьности способа, в сы воротку крови добавляют дистиллированную воду в отношении 1:50, а затем вносят резохим до 10 мг на 1 мл сыворотки.

Источники информации, принятые во вниман е при экспертизе

l. Фильчагин Н.М. Мылов Н.М., Агабабова Э.P. К изучению сульфополисахаридов синовиальной жидкости при инфекционном неспецифическом полиартрите для характеристики дис. труктивных. процессов в суставах.

"Вопросы ревматизма ". 1969, Н 30 с. 19 "22.

Составитель Л. Соловьев

Редактор Л.филиппова Техред 3. Палий Корректор В. Бутя га

Заказ 7253/50 Тираж 7 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1.13035, Москва, W-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал llflll Патент", i. Ужгород, ул. Проектная,