Способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсиик

Сецивлистичесиик

Республик »i 969628 (61) Дополнительное к авт. свид-ву-1 (22) Заявлено 18. 06. 81 (21) 3302316/28-13 (51)М. Кл.

G 01 N 33/48 с присоединением заявки М

9еуаврвтваве4 квивтвт

СССР ав двлвм ювбувтвик1 и открытий (23) Приоритет

Опубликоваио 2 3 . 09. 82 ° Бюллетень .,% 35

Дата опубликования описания 23. 09 . 82 (53) УДКьб16.12 (088.8) (72) Авторь) изобретения

А. Г.Иеликянц и В.В.Матвеев

Научно-исследовательский институт по испытаниям химических соединений (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАНЦЕРОГЕННЫХ

ДЛЯ КИШЕЧНИКА ХИИИЧЕСКИХ

ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к медицине, а именно, к способам первичной оценки канцерогенной активности при массовых биологических испытаниях химических соединений.

Известен способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ путем введения испытуемого .вещества опытной группе животных с последующим исследованием области ки-, шечника 11).

Однако при использовании известного способа для определения канцерогенной активности химических веществ требуется от 1 до 3 лет и 300400 животных, а также большое количество испытуемого химического вещества, при этом способ трудоемок, дорог и не может применяться при массовых испытаниях химических веществ. 20

Целью изобретения является ускорение способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу определения канцерогенных для кишечника химических веществ путем введения испытуемого вещества опытной группе животных и последующим исследованием области кишечника, после введения испытуемого вещества исследуют участок ки- . шечника, при этом надевают его на цилиндрический стержень и вращают в физиологическом растворе в течение 59-61 с со скоростью 29503050 об/мин, далее подсчитывают число выделенных при вращении стержня эпителиальных клеток и по снижению их числа в опытной группе по сравнению с контролем определяют н нцерогенные для кишечника химические вещества.

Способ осуществляют следующим образом.

Раствор канцерогена и его растворитель вводят подкожно однократно двум группам мышей - опытной и контрольной, соответственно. Спустя

8-12 дней извлекают участок кишечника, выворачивают его эпителием нару*у, одевают на цилиндрический стержень диаметром 2,95-3,05 мм, стержень с тканью приводят во вращение в течение 59-61 с со скоростью 29503050 об/мин внутри кюветы с внутренним диаметром 6,59-6,6 1 мм и объемом 1,45-1,55 мм, наполненной 0,9,1,1 мл физиологического раствора, так, что осуществляют выделение кле- 1в ток только из зоны слущивания, подсчитывают выделение при вращении стержня с тканью клетки и о канцерогенности вещества судят по снижению числа выделенных клеток в опыт- 13 ной группе мышей по сравнению с контрольной. Увеличение скорости вращения, уменьшение диаметра кюветы и уменьшение ее объема приводит к отрыву клеток иэ тех зон, которые не характеризуют клеточные потери в эпителии кишечника, что приводит к ошибочным результатам о канцерогенной активности химического вещества, а увеличение указанных параметров снижает чувствительность способа.

Пример. Выделение клеток при действии кишечного канцерогена 1,2-диметилгидраэина (ДМГ), его структурных неканцерогенных аналоговфенилгидразина (фГ) и гидразинсуль30 фата (ГС), и сильных канцерогенов,. не вызывающих опухолей в кишечнике— уретана, орто-аминоазотолуола ОААТ„

7, 12-диметилбенз (а) антрацена (ДМБА) .

ДИГ выбирается по следующим признакам: ДИГ индуцирует опухоли при введении в малых дозах, не требует специальной схемы введения, вызывает опухоли у 1003 животных, не требует специальных сенсибилизирующих воэдей- В ствий на экспериментальных животных.

Из всех групп кишечных канцерогенов человек наиболее часто сталкивается с этой группой канцерогеноЬ. Структурные неканцерогенные аналоги Ьерут в той же дозе, что и ДМГ. Другие сильные канцерогены, не вызывающие опухолей в кишечнике, но индуцирующие опухоли в других тканях: уретан (в легких), ОААТ (в печени), ДИБА (в Я месте введения - под кожей) в концентрациях, при которых они вызывают опухоли - 200 мг/кг веса тела и 50 мг/кг веса тела, соответственно. SS

Мышей линии BAL В/с, самок в возрасте 15 недель делят на две группы.

Опытной группе вводят подкожно ДМГ, 35

3 960628 4 растворенный в физиологическом растворе (рН доводят 1и йаОН до 7,4), в дозе 16 мг/кг веса тела мыши. Второй группе, контрольной вводят физиологический раствор с рН=7,4 иэ расчета О, 1 мл на 10 r веса тела мыши.

Спустя 10 дней после введения ДИГ и физиологического раствора, обе группы мышей забивают, извлекают кишечник и определяют число выделяющихся клеток при принудительном отрыве.

Принудительный отрыв клеток осуществляют в измерительной ячейке следующим образом.

Промытый участок кишечника длиной

0,9-1,1 см выварачивают эпителием наружу, одевают на стальной стержень диаметром 2,96-3,06 мм, закрепляют на нем двумя лигатурами сверху и снизу, отступя 1 мм от края отрезка к его середине, и приводят во вращение в течение 59-6 1 с со скоростью 2950-3050 об/мин внутри кюветы с внутренним диаметром 6,59-6,61 мм и объемом 1,45-1,55 см, наполненной 0,9-1,1 мл физиологического раствора. Вращение осуществляется в течение 59-61 с с указанным числом оборотов, время разгона и остановки двигателя не учитывается. Выделенные . клетки попадают в раствор, где под-. считываются с помощью камеры Горяева. Перечисленные операции повторяют для всех указанных веществ. Результаты показывают, что только ДИГ вызывает длительное снижение выделения клеток из прямой кишки. Длительное устойчивое снижение выделения клеток наблюдается только в отрезке прямой кишки, т.е ° там, где отмечается наибольшая частота опухолей, возникающих под действием этого канцерогена. В нисходящем отделе толстой кишки и в тонкой кише выделение клеток достоверно не отличимо от контроля и частота опухолей в толстой кишке резко снижена по сравнению с прямой кишкой. Неканцерогенные структурные аналоги ДИГ, ФГ и ГС достоверно не. влияют на выделение клеток иэ отрезка прямой кишки и не вызывают опухолей в кишечнике. Канцерогены, не вызывающие опухолей в кишечнике, не снижают выделение клеток из,отрезка прямой кишки. Таким оЬразом, обнаружено,,что ДИГ может вызывать снижение клеточных потерь что само по себе достаточно для роста новообразований в кишечнике. Дей960628 d ющим исследованием области кишечника, о т л и чающий с я тем, что, с целью ускорения;способа, пос" ле введения испытуемого вещества исследуют участок кишечника, при этом надевают его на цилиндрический стержень и вращают в Физиологическом растворе в течение 59-61 с со скоростью 2950-3050 об/мин, далее подtO считывают число выделенных при вращении стержня эпителиальных клеток и по снижению их числа в опытной группе по сравнению с контролем определяют канцерогенные для кишечни1 ка химические вещества.

Формула изобретения

Способ определения канцерогенных для кишечника химических веществ рр путем введения испытуемого вещества опытной группе животных с последуСоставитель l0.Алмазов

Редактор Л.Филиппова Техред З.Палий корректор.В.Бутяга

Заказ 7253/50 Тираж 7 Подписное

ВНИИПИ ГосударстВенного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, .Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 5 ствие ДМГ специфично: оно проявляется только в том участке кишечника, где ДМГ индуцирует опухоли.

Другие вещества, не являющиеся кишечными канцерогенами, таким эффектом не обладают.

Предлагаемый способ позволяет ускорить определение канцерогенных для кишечника химических веществ до

8-12 дней, при этом для испытаний требуется около 15-20 животных.

Предлагаемый способ повышает надежность получаемых результатов и более экономичен.

Источники информации,принятые во внимание при экспертизе

1. Шабад Л,М.Методы определения и изучения бластомогенности химических веществ. M., "Медицина", с. 3, 1970.