Способ выделения гликозаминогликанов из синовиальной жидкости и травматического экссудата

 

СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЛ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ СИНОВИАЛЬНОЙ ЖВДКОСТИ И ТРАЮтТИЧЕСЮГО ЭКССУДАТА, включающий осаясден1ю фосфорновольфршховой кислотой гликоз.аминогликанов, отличающий с я тем, что, с целью повшоенчя чистоты целевого продукта, после добавления фосфорноволь амовой кислоты к пробе добавляют 0,07-0,1 моль этилового спирта, затем пробу инкубируют при встряхивании в течш1ие 10-15 мин. §

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (50 6 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И.ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТ()РСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21). 3353851/28-13 (22) 11.11.81 (46) 15 ° 11 83. Бюл. 9 42 . (72) Ф,К.;Айелыанн, С.Н.Горбунов и В.A.ÑàæHH . (71) Волгоградский государственный медицинский институт (53) 616 ° 153.96 (088.8) (56) 1. Логинов A.C., Приваленко И.Н.

Скобелева Т.В. Скрининг-метод иссле- . дования ГАГ мочи в клинике хронических заболеваний печени.-"Лабораторное дело", 1981, В 2, с. 93-97.

2. Меркурьева Р.В, Электрофорети- ческое разделение сывороточных мукоцротеидов на фракции.- Лабораторное дело", 1966, 9 12, с. 712-716 (прототип).

„.яО„„1054785 A (54) (57) СпоСов вццялкния гликозлмиНОГЛИКЛНОВ ИЗ СИНОВШЛЬНОЯ аИДКОСтИ

И ТРАВИАТИЧЕСЕОГО ЭЕССУДАЪЪ Bxmoчаящий осалщение фосфорно-вольфрамовой кислотой гликозаминогликанов, о т л и ч а в шийся тем, .что, с целью повьваенчя чистоты целевого продукта, после добавления фосфорновольфрамовой кислоты к пробе добавляют 0,07-0,1 моль этилового спирта, затем пробу инкубирувт при встря« хивании в течение 10-15 мин.

1054785

Количество новокаина, моль

0,03

0 5

17,5 10

35.10

0,07

1t0

70 10.0,10

1 5

Филиал ППП "Патент", F,Óæãîðîä„óë.Ïðoåêòíàÿ,4

Изобретение относится к медицинской химии, а именно к методам выделения гликозаминогликанов из синовиальной жидкости и травматического экссудата, и может быть использовано в ревматологии, травматологии и 5 ортопедии для диагностики различных заболеваний.

Известен способ выделения гликозаминогликанов из сыворотки крови, включающий последовательное осаждение белков 6%-ной хлорной кислотой, отделение их и осаждение гликозаминогликанов 5%-ной фосфорновольфрамовой кислотой 1 I и 2 3.

Однако известный спосОб не обеспе- 5 чивает чистого выделения гликозаминогликанов суставной жидкости и травматического экссудата ввиду того, что взятие данных;сред у больных производится с применением 2Ъ-ного

pac" зора новокаина или других местных анестатиков, которые дают осадок с фосфорно-вольфрамовой кислотой, который при проведении следующих . этапов обработки согласно методике не отделяется от осадка гликозаминогликанов, Цель изобретения — повышение чистоты целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа ЗО выделения гликозаминогликанов из синовиальной жидкости и травматического экссудата, включающего осаждение фосфорно-вольфрамовой кислотой, после добавления фосфорно-вольфрамо- З5 вой кислоты к пробе добавляют 0,07

0,1 моль этилового спирта, далее пробу инкубируют при встряхивании в те. чение 10-15 мин.

Способ осуществляют следующим об- 4О разом.Для взятия у больных синовиальной жидкости и травматического экссудата проводится пунктирование коленного сустава и места перелома в асептических условиях с введением в полость сустава и место перелома 2Ъ раствора новокаина.

К 1 мл взятой синовиальной жид кости и травматического экссудата прибавляют 3 мл 6%-ного раствора хлорной кислоты, получившийся раствор фильтруют через фильтровальную бумагу. К полученному фильтрату добавляют 2,5 мп 5%-ного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н. 55 растворе соляной кислоты, тщательно перемешивают, выпавший белый хлопьевидный осадок оставляют в пробирке на 15 мин..Он представляет собой смесь осадка гликозаминогликанов и d0 соли новокаина, которые перед центрифугированием осадка должны быть

ВНИИПИ Заказ 9099/52 разделены. Для разделения осадков в каждую пробу вносят в среднем по

3-5 мл 968-ного этилового спирта и пробы встряхивают в течение 10

15 мин, В результате получается прозрачная жидкость с едва заметными хлопьями. Только после этого суспензию центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок является смесью гликозаминогликанов, которые после удаления надосадочной жидкости подсушивают и растворяют в 0,10,2 мл 0,.1 н,раствора едкого натра.

Для подтверждения полученной цели проводят электрофоретическое разделение гликозаминогликанов в поли » акриламидном геле. Полученный. осадок. растворяют в 0,1 н. растворе едкого натра и проводят электрофорез в

7Ъ-ном полиакриламидном геле в режимах 2,5 мЛ на трубку в течение 2,5 4.

После окраски альциановым синим и обесцвечивания в ЗВ-пой уксусной кислоте получают фракции хондроитин сульфатов и гиалуроновой кислоты.

Для определения оптимальных концентраций.,этилового спирта, необходимых и достаточных для осуществления способа, проведено испытание с чистым 23-ным раствором новокаина. При этом найдено количест во спирта, необходимое для полного растворения новокаина, образующегося при его реакции с фосфорно-вольфрамовой кислотой (см. таблицу).

Данные таблицы показывают, что если проба содержит максимадьное количество новокаина до 1 мп, а исследуемую жидкость в минимальных количествах, то для растворения осадка новокаина необходимо взять 0,1моль этилового спирта (б м 96% сюирта).

Таким образом, 4-6 мп являются необходимыми и достаточными для обработки гликозаминогликанов из 1 мл биологической пробы.

Способ позволяет повысить чистоту: выделения гликозаминогликанов из биологических сред, взятых с применением новокаина, по сравнению с известньж, что дает возможность использовать метод дискэлектрофореза в качестве клй- . нико-лабораторного теста в ревматологии, травматологии и ортопедии.

Тираж 873 Подписное