Способ дзержинской и.и.дифференциальной диагностики острых и хронических воспалительных процессов

 

Способ дифференциальной диагностики острыхи хронических воспалительных процессов путем цитологического исследования костного мозга ,отличающий с я тем, что, с целью повьшения точности способа при диагностике урологических заболеваний, пунктат костного мозга разделяют в градиенте фикол-уротраста , вь деляют фракцию с плотностью 1,060-1,065 г/л, центрифут гируют 20-40 мин со скоростью 10001500 обУмин, далее инкубируют с 2,5%-ньм раствором эритроцитов барана , микроскопически определяют число спонтанных розеткробразукщих клеток и по снижению этого числа в 5-7 раз относительно нормы диагносцируют хронический воспалительный процесс;, а при увеличении этого числа в 5-9 раз относительно нормы диагнбсцируют острый воспалительный процесс.

СОЮЗ ССИЕТСНИХ

ИРВИН

РЕСПУБЛИК (1cI (11)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАН ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н kB TOPCNOMV СВИДВтВЪСтвм (2l) . 3471980/28-13 (22) 13. 08. 82 (46) 15. 12.83. Бюл. 9 46 (72) И.И.Дзержинская и П.A.Ùåïëåâ (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И.Пирогова (53) 616. 07 (088. 8) (56) 1. Абрамов М.Г. Гематологический атлас, M 1979, с. 29-90 (прототнп) . (54) СПОСОБ Д3ЕРЖИНСКОИ И. Н. ДИФФЕ.- .

РЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ И ХРО,НИЧЕСКИХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ. (57) Способ дифференциальной диагностики острых н хронических воспалительных процессов путем цитологического исследования костного моэга, отличающийся тем, что, с целью повнаения точности способа при диагностике . урологических заболеваний, пунктат костного мозга разделяют в градиенте фикол-уротраста, выделяют фракцию с плотностью 1,060-1,065 г/л, центрифу= гируют 20-40 мин со скоростью 10001500 об/мин, далее инкубируют с

2,5%-нъм раствором эритроцитов барана, микроскопически определяют число спонтанных розеткробраэукв1их клеток и по снижению этого числа в 5-7 раэ относительно нормы диагносцируют хронический воспалительййй процесс, а при увеличении этого числа в 5-9 раэ.. относительно нормы диагносцнруют (в острый воспалительный йроцесс.

1060171

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической биохимии для диагностики острых и хронических воспалительных уролог ическ их за болева ний.

Известен способ дифференциальной диагностики острых и хронических воспалительных заболеваний путем цитологического исследования костного мозга $1) .

Однако известный способ недостаточ-1 но специфичен и точен для дифференциаль ной диаг нос тики урологическ их заболеваний, поскольку проводят общее цитологическое исследование клеток гранулоцитарного ряда, под- . 15 счет их по морфологическим признакам. Известный способ не позволяет с достаточной достоверностью и точностью определить переход острой формы заболевания в хроническую. 20

Пелью изобретения является повышение точности способа при диагностике урологических заболеваний.

Поставленная цель - достигается тем, что согласно способу дифферен- 25 циальной диагностики и хронических воспалительных процессов путем цитологического исследования костного мозга пунктат костного мозга разделяют в градиенте фикол-vpoTP>c- 30 та, выделяют. фракцию с плотностью

1,060-1,065 г/л, центрифугируют

20-40 мин со скоростью 1000-1500 об/мин, далее инкубируют с

2,5%-ным раствором эритроцитов барана (ЭБ), микроскопически определяют число спонтанных розеткообразую-. щих клеток и по снижению этого числа в 5-7 раз относительно нормы диагносцируют хронический воспалительный процесс, а при увеличении этого числа в 5 — 9 раз относительно нормы диагносцируют острый воспалительный процесс.

Способ осуществляют следующим образом. 45

У пациента берут пунктат костного мозга.

Полученную костно-мозговую жидкость наносят на градиент фикол-уротраста с плотностью 1,090-1,095 г/л, 50 .далее производят отстаивание в течение 30-60 мин, при этом в осадок садятся эритроидные элементы, надо;садочную взвесь с нейтрофильными элементами пеРеносят на четырехсту- 55 пенчатый градиент фикол-уротраста

1,060-1,065; 1,070-1,075; 1,0801,085; 1,090-1,095 г/л, центрифугируют 20-4.0 мин при 0 С со скоростью

1000-1500 об/мин. 60

Получают четыре взвеси клеток: промиелоциты образуют кольцо между раствором 1,060-1,065 г/л и костно,мозговой жидкостью, миелоциты — меж, ду растворами 1,070-1,075 и 1,060- 65

Г,065 г/л, юные и палочкоядерные нефтрофилы — между растворами 1,0801,085 и 1,060-1, 075 г/л, нейтрофилы сегментоядерные — между растворами с плотностью 1,090-1,095 и 1,0801,085 г/л.

Соединяют взвесь клеток с плотностью градиента 1,060-1,065 г/л с

2,5%-ным раствором эритроцитов барана и инкубацию производят при

0-4 С в течение 10-20 мин, далее осаждают центрифугированием при 0-4 С.

Пример 1. Пациент А. Берут пробу костного мозга.

В силиконизированную пробирку на 3 мл смеси фикол-уротраста плотностью 1,093 г/л наслаивают 3 мл костно-мозговой жидкости, остаивают 4 мин на льду. Полученную взвесь с нейтрофильными элементами переносят на градиент с плотностью

1,063 г/л, центрифугируют 15 мин при 4 С и 1000 об/мин. Взвесь клеток соединяют с 0,1 мл 2,5%-ного раствора ЭБ.

Инкубацию осуществляют при 4 С в течение 15 мин, осаждают розеткообразующие клетки центрифугированием:

4 С. Фиксируют 3%-ным раствором глутарового альдегида, центрифугируют, осадок наносят на предметное стекло, сумат, фиксируют метанолом

4 мин, красят азур-эозином 3 мин,. считают в 6-7 разных полях зрения в иммерсионной системе микроскопа

300 клеток, присоединивших не менее

3 ЭБ. Абсолютное содержание розеткообразующих клеток рассчитывают по формуле

1 ,«„е

C0O <ОО где L — количество костно-мозговых клеток гранулоцитарного ряда

% промиелоцитов, миелоцитов, юных палочкоядерных и сегментоядерных нейрофилов в формуле костного мозга;

Р— процент розеткообразующих. клеток;

100 100 — показатели, приводящие результаты к объему 1 мкл, Пример расчета.

В иммерсионной системе микроскопа в 7 разных полях получено 88,0% роэеткообразующих промиелоцитов.

Содержание клеточного состава костного мозга в 1 мкл 14300, процентное содержание нейтрофильных элементов костного мозга: промиелоцитовы 0,5%.

Поставив в формулу цифровые, значения, получают

14300 ° B8 о од 5 оо оо

10601 7l

11700 ° 5 0% 84%

491 4 в lмкл, 100 100

4100 в78 ° 0,3

9,59 в 1 мкл, 100 100

Составитель Н.Хрусталева

Редактор Т.Веселова Техред Т.Маточка Корректор И.Эрдейи

Заказ 9899/3 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по де лам изобретений и открытий

113 03 5, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная,4

В примере 1 определяли содеря:ание розеткообраэующих клеток у практически здорового человека.

Пример 2. Больной Х, история болезни Р 2382, поступил в клинику по поводу фибропластической индурации 5 полового члена. Сопутствующие заболевания — церебральный атеросклероз.

Исследование проводят аналогично пример 1; берут градиент фикол-уротраста 1,060 г/л после отстаивания в 10 градиенте 4095 г/л.

В исследуемом клеточном составе костного мозга содержание розеткообраэующих клеток следующее:

Высокое содержание розеткообразующих клеток говорит об остром воспалительном процессе. Клиническое исследование подтверждает диагноз.

Пример 3. Больной Н, история болезни Р 2056. Поступил в клинику по поводу болезни Пейрони.

Показатели крови: (в 1 мкл): лейкоциты 8400, в 1 мкл сегментоядерные . нейтрофилы 4032 (48%), палочкоядерные нейтрофилы 252 (3%), эозинофилы, 924 (11%), лимфоциты 2268 (27%), моноциты 924 {11%) . В анализе мочи: белок О, 099%, лейкоциты 20-30 в поле зрения, оксалаты и много слизи.

Пунктаты костного мозга наслаивали на 3 мл смеси фикол-уротраста с плотностью 1, 095 г/л в течение

- 60 мин на льду.

Дальнейшее исследование проводят как описано в примере 1, только градиент фикол-уротраста берут

1,065 г/л. 40

В исследованном содержимом костного мозга содержание розеткообраэующих клеток следующее:

Низкое содержание розеткообраэующих клеток говорит о наличии хроничес кого воспалительного процесса. 50

Способ подвергался тщательной проверке. Отработан метод количественного определения спонтанных розеткообразуюших клеток в сравнении с другими способами. Проведен сравнительный анализ на 40 пробах крови клннически здоровых людей и 440 у больных с урологическими заболеваниями.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет дифференцировать острые и хронические воспалительные процессы. При хронических заболеваниях, не поддающихся антибактериальному лечению, количество розеткообразующих спойтанных клеток нейтрофиль ного ряда в 5-7 раз ниже нормы, при острых — в 5-9 раз выше.

Впервые разработанная методика выделения костно-мозговых предшественников гранулоцитарного ряда может служить для диагностики воспалительных процессов, а также для излучения характера изменений данной популяции в организме человека при ряде других патологических состояний, в котором участвуют клетки нейтрофильного ряда, а также изменения, связанные с воздействием на организм человека различных экстремальных воздействий (космические, океанологические исследования), а также изучение профессиональных вредностей в различных областях народного хозяйства.

Способ найдет широкое применение в гематологической практике, так как гематопатологические изменения, затрагивающие росток гранулоцитарных клеток, в первую очередь отражаются на популяции клеток, несущих на своей поверхности рецепторы к ЭБ.

Впервые получены достоверные показатели розеткообразующих предшественников гранулоцитарного ряда.

Полученные данные меняют представ. ление не только о существующих нормах, но и о роли рецепторного аппарата предшественников гранулоцитарного ряда в организме человека.

Способ диагностировать наличие хронического и острого воспалительного процесса при урологических заболеваниях позволяет . выбрать или провести коррекцию терапии, Правильно подобранная терапия приводит к более быстрому восстановлению трудоспособности больного за счет сокращения сроков лечения.