Способ определения активности ферментов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ путем измерения скорости изменения диэлектрической проницаемости исследуемой и эталонной сред, отлич айщийся тем, что, с целью повьшения его точности, дополнительно определяют изменение удельной электропроводности исследуемой и эталонной сред, измерение осуществляют на критической частоте низкочастотной релаксации исследуемой и эталонной сред, а активность А ферментов определяют по формуле. о где AQ - активность фермента эталонного образца; 4& и изменение скорости диэлектрической проницаемости соответственно исследуемой и эталонной сред; дЕ и - изменение удельной (Л электропроводности соответственно исследуемой и эталонной сред4

СОО3 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

O% (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4 „-44 %

И °

ЪИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПЪЙ (21) 3544540/28-13 (22) 25.01.83 (46) 07.02.85. Бюл. У 5 .(72) Н.В.Кузьминова, А.К.Кузнецов и Н.В.Седых (71) Ленинградский ветеринарный институт (53) 612.015.!(088.8) (56) 1 ° Седых Н.В. Диэлектрический контроль.ферментативных препаратов—

"Химико-фармацевтический журнал", 1979, N- ll, с.107-111. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ путем измерения скорости изменения диэлектрической проницаемости исследуемой и эталонной сред, о т л и ч а fo шийся тем, что, с целью повышения его точности, дополнительно определяют изменение удельной электропроводности исследуемой и

4(51 G 01 N 27 02 С 12 N 9/00 эталонной сред, измерение осуществля-. ют на критической частоте низкочастотной релаксации исследуемой и эталонной сред, а активность А ферментов определяют по формуле.

Э где А - активность фермента эталонного образца;

66 и Ьф - изменение скорости диэлектрической проницаемости соответственно исследуемой и эталонной сред; Щ

hE и 4Ео — изменение удельной электропроводности соответственно исследуемой и эталонной сред

1138

50 1

А = 47 "— — — — = 28 ЕА.

83,4

Составитель Е.Житникова

Техред Л. Мартяшова Корректор О. Билак

Редактор П.Коссей

Заказ 10680/34 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðoä» ул.Проектная, 4

Предполагаемое изобретение относится к физико-химическим способам анализа в пищевой, микробиологической и медицинской промьппленностях, а также в медицине и ветеринарии.

Известен способ определения активности ферментов путем измерения скорости изменения диэлектрической проницаемости исследуемой и эталонной среды jl1.

Однако известный способ имеет недостаточную точность в случае слабой полярности компонент среды, в случае сильнопроводящих сред, дисперсных сред. 15

Целью изобретения является повыше" ние точности способа.

Поставленная цель достигается тем,-что согласно способу определения активности ферментов путем измерения скорости изменения диэлектрической проницаемости исследуемой и эталонной сред, дополнительно определяют изменение удельной электропроводности исследуемой и эталонной сред, из- 25 мерение осуществляют на критической частоте низкочастотной релаксации исследуемой и эталонной сред, а активность ферментов определяют по

Фор уле З -а - ЗО а а д д где А — активность фермента эталона ного образца; й6„ и й6а- изменение скорости

35 диэлектрической проницаемости соответственно исследуемой и эталонной сред;

hK и йŠ— изменение удельной электропроводности соответственно и исследуемой эталонной сред.

724 2

Пример. Определение активности липазы. 5 смЗ эмульсии субстрата (оливкового масла и 2%-ный раствор поливинилового спирта) и 4 см. бу3 фера (фосфатно-цитратный буфер с рН 7,0) помещают в колбу Эрленмейера на 100 см . Смесь выдерживают на водяной бане при a=37 С 10 мин. В колбу помещают цилиндрический двухэлектродный емкостной датчик погружного типа с постоянной IIQ с емкости

2,8 пФ. Датчик. изготовляется из черненой платины и подсоединяется к измерительному прибору (измерителю полных проводимостей типа ВМ 508 фирмы

"Тесла" ). Затем к смеси добавляют

1 см раствора панкреатической липазы (эталонного препарата) Олайненского завода химреактивов с концентрацией Аэт=47 ЕА в концентрации 1 мг/мл.

Датчик полностью погружается в смесь и измеряются ее частотные зависимос/ ти диэлектрической проницаемости () и электропроводности () . Из зависимости находится превалирующая критическая частота релаксации смеси (f « )» которая равна 58 мГц, Затем на этой частоте измеряются величины а и ба и делается отметка времени („). Спустя 30 мин снова измеряются величины Е и 6„ и определяют активность частично инактивированной липазы по вьппеприведенной формуле

Таким образом, активность липазы оказалась равной 28 ЕА.

Предлагаемый способ в три раза точнее известного, что позволяет повысить контроль ферментативной активности на 300 .