@ -никотиноиламинокислоты, обладающие противогипоксической и антиамнестической активностью

 

N-никотиноиламинокислоты общей формулы TSf , . R - ОН, Вг; S 1(Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

R CoO-COB

R — 0H, Sr

R -ОН; при R - DL-NH-CH-(СН ) СООН

СООН

R — ОН,. при R — NH(CH ) СООН

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3700251/23-04 (22) 22.02.84 (46) 23,01.88. Бюл. Ф 3 (71) Научно-исследовательский институт фармакологии АМН СССР (72) Л, Д. Смирнов, Т. А. Воронина, Л. Г. Столярова, Т. Л. Гарибова, P. А, Ахундов, Е. А. Кузнецова, К. М. Дюмаев, А. В. Вальдман и Г. М. Руденко (53) 547.822(088.8) (56) 1 ° Гиургеа К. Дифференциальное экспериментальное определение ноотропных лекарств. В кн.: Клиническое значение препарата ноотропил.

М., 1976, с. 9-20. где при R - L-NH-CH-(СН ) СООН

СООН обладающие противогипоксической и

ÄÄSUÄÄ 1368314 А1

<5Р 4 С 07 D 213/82, А 61 K 31/455

2. МашковскийМ. Д. Ноотропы — новый класс психотропных препаратов.

В кн.: Достижения современной нейрофармакологии. M., 1982, с. 107.-111.

3. Авторское свидетельство СССР

11 1140431, 29.11.83. (54) N-НИКОТИНОИЛАМИНОКИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВОГИПОКСИЧЕСКОИ И АНТИАМНЕСТИЧЕСКОИ АКТИВНОСТЬЮ (57) Ы-никотиноиламинокислоты общей формулы антиамнестической активностью.

-1368314 к N-никотиноиламинокислотам общей формулы

C0R

N где при R = L-NH-CH-(СН,), СООН

СООН

R = ОН (Ia); при R = DL-NH-СН- (СН, ), СООН

С00Н

R = ОН (Хг), Предлагаемые соединения оказывают выраженный противогипоксический и антиамнестический эффект с минимальным побочным действием. В опытах на мышах и крысах показано, что соединения обладают способностью

25 устранять неблагоприятное действие на память воздействий, вызывающих стирание памятного следа, Другим проявлением действия испытуемых соединений является защита животных от дО гибели при гипоксии различного генеза, Пример 1. N-Никотиноиламинокислоты.

К раствору 0,01 М L-глутаминовой или DL-глутаминовой кислоты или гам35 ма-аминомасляной кислоты в 100 мл

0,1 H. NaOH добавляют 0,01 M азида

5-замещенной никотиновой кислоты.

Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч, затем раствор упаривают на 2/3 объема и нейтрализуют конц. НС1 до рН 5.

Выпавший продукт перекристаллизовывают из воды с добавлением угля, Получают аминокислотные производные

5-замещенной никотиновой кислоты.

Физико-химические данные и ре« зультаты анализов приведены в табл. 1.

Пример 2. Изучение противо"

50 гипоксического действия.

Противогипоксическую активность соединений изучают на 3-х моделях гипоксии: гиперкапнической, гипобари" ческой и гемической, обычно применя" емых для оценки антигипоксантов.

Исследования проводят на беспо" родных мышах-самцах массой 18-20 г (при гипобарической гипоксии массой

25-28 г), Каждую дозу вещества изуИзобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно при R = ИН(СН ) СООН обладающим противогипоксической и антиамнестической активностью.

Указанные свойства позволяют пред" полагать возможность применения их в медицине для профилактической защиты людей от последствий кислородной недостаточности-и как средство, улучшающее процессы памяти при ее различных нарушениях..

Известно средство пирацетам (ноотропил), который повышает умствен" ную работоспособность человека и животных, оказывает противогипоксический эффект Е17, 522.

Однако действие пирацетама проявляется в высоких дозах (300600 мг/кг) и наступает после длительного курсового лечения.

Наиболее близким к изобретению является N-никотиноил-DL-глутаминовая кислота, обладающая фибринолитической активностью (3), Целью изобретения является поиск веществ, обладающих противогипоксической и антиамнестической активностью в ряду никотиноиламинокислот.

Поставленная цель достигается

N-никотиноиламинокислотами вышеуказанной формулы, обладающими противогипоксической и антиамнестической активностью.

Названные соединения получают при действии глутаминовой кислоты или гамма-аминомасляной кислоты на азид 5-эамещенной никотиновой кислоты в присутствии едкого натра в водной среде при 20-23 С.

Соединения представляют собой белые кристаллические вещества с т, пл. 200 С, растворимые в воде и спирте.

R = ОН (Ia), Br (Тб);

1368314

45 чают на 10 животных; вещества вводят внутрибрюшинно за 40 мин до начала эксперимента.

Гипобарическую гипоксию воспроиз5 водят в герметически плотно закрывающихся банках объемом 200 см

Острую гипобарическую гипоксию моделируют в проточно-вытяжной барокамере, давление регистрируют высотоме- 1.0 ром, скорость подъема — вариометром, Животных "поднимают" со скоростью

50 -м/с до "высоты" 10,5-1! км. Гемическую гипоксию исследуют при под" кожном введении раствора нитрата 15 натрия в дозе 200-300 мг/кг. Сравнение проводят с аналогом по назна" чению — пирацетамом, При изучении противогипоксической активности устанавливают, что все 20 вещества la - 1г обладают способностью существенно увеличивать длительность жизни мышей в условиях острой кислородной недостаточности в барокамере, превосходя по этому 25 показателю пирацетам в 2-3 раза.

Существенным является то, что эффект испытуемого соединения реализовывается в 5 раз меньших дозах, чем у пирацетама и проявляется в до- 30 эе 20-50 мг/кг (табл. 2) °

Высокую эффективность испытуемые соединения проявляют и по другим противогипоксическим тестам. Например, введение веществ в дозе 100 мг/кг приводит к увеличению продолжительности жизни мышей в условиях гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме на

20-70Х по сравнению с контролем.

Пирацетам при этом. виде гипоксии

40 оказывает аналогичный эффект в значительно .большей (500 мг/Kr) дозе.

В условиях "жесткой" гемической (метгемоглобиновой) гипоксии предлагаемые вещества также оказываются эффективными, пирацетам независимо от вариации доз при этом виде гипоксии активность не проявляет (табл. 2).

Пример 3. Изучение антиамнестического действия соединений.

Исследования проводят на белых беспородных мышах-самцах массой 17-.

20 г по методике пассивного избегания Буреша и соавторов в модифицированном варианте, которая используется обычно для изучения действия ноотропных препаратов (1976). Экспериментальная камера состоит из 2"х отсеков: темного (небольшого) с элек1 тродным полом и освещенного (больmoro), куда помещают животное. В течение 2-х минут регистрируют время пребывания животного в светлом и темном отсеках. Затем в темном отсеке животное получает однократный удар током (0,4 мА) через электродный пол (облучение). Для получения амнезии используют максимальный электросудорожный припадок (максимальный электрошок, 50 Гц, 0,2 с).

Проведение электрошока непосредственно после обучения вызывает стирание памятного следа. Тест на вос" произведение осуществляют через

24 ч после обучения: животное помещают в светлый отсек камеры и как и прежде регистрируют время пребывания в темном и светлом отсеках в течение 2-х минут. При воспроизведении рефлекса пассивного избегания без действия электрошока контрольные животные предпочитают нахо-. диться в светлой части камеры большую часть двухминутного, периода.

Стирание обучения при помощи электрошока вызывает у животных амнезию, в результате чего животные с коротким латентным временем заходят в темную камеру и остаются там больЪ шую часть времени, Вещество вводят внутрибрюшинно за 40 мин до начала обучения, каждую дозу изучают на 6 животных, Данные антиамнестического эффекта представлены в табл. 3.

Как.видно из табл. 3, все соединения обладают выраженным антиамнестическим эффектом, что характеризуется способностью этих веществ устранять неблагоприятное действие на память электрошока, в результате чего время нахождения животных по сравнению с контролем в светлой камере существенно увеличивается, а в темной уменьшается. Данный эффект веществ носит дозозависимый характер.

При сравнении действия испытуемых соединений с пирацетамом по тестам вхождения и нахождения животных в темной камере (основной критерий опыта) была показана лучшая сохранность памятного следа после применения указанных соединений, чем пирацетама.

Положительной особенностью новых соединений является также их более

1368314 высокая активность по дозам: антиамнестический эффект этих соединений выявляется в дозах в 6 раз меньших, чем у пирацетама.

Пример 4. Изучение побочных эффектов и острой токсичности. Побочные эффекты и острую токсичность

I соединений изучают на беспородных белых мышах-самцах (масса 17-20 г) 10 при внутрибрюшинном введении веществ в возрастающих дозах: 25-100-400-800-1200 мг/кг.

Оценивают миорелаксантное действие по нарушению координации движений на 15 вращающемся стержне и гибель животных. Острую токсичность изучают при постоянной температуре (22 С) окру" жающей среды у индивидуально содержащихся животных при постоянном дос- 20 тупе к воде и пище. С этой целью мьппей помещают в клетки-ячейки 8х8х х8 см по одному животному в каждой. клетке. Гибель животных регистрируют через 24 ч после введения вещества, учитывают число погибших и выживших мышей.

Результаты исследования представлены в табл, 4.

Соединение

1а 68,2 222-223 -14,8 49,37 4,59, 10,25

49,20 4,48 10,48

С„Н,,Î,Ы, -8,6

ltt 73,2 185-186

1в 74, 7 2 19-220

1г 89 220-221

39,89 3, 32 8,46 24, 15.

39,71 3,)l 8,23

49,28 4,36 1О, l9

24,36 С„Н„вто,и, 49 20 4ь48 10,48

53 57 5, 36 12,50.73,56 5>39 12, 18

С„Н„0,8,, Таблица 2

В

Продолжительность .выживания мышей, 7, по отношению к контролю, принятому за 1007.

Соединение, мг/кг

Гемическая гипоксия

Гипоксия с ги- Гипобарическая перкапническим гипоксия компонентом

98+7,8

103+9,6

101+11 8

133 39 9

Пирацетам 250

500 . 130+30, 2

С 5,82-ная соляная кислота.

Опыты выявляют, что введение испытуемых веществ животным в дозах

25-200 мг/кг никаких видимых измене" ний в состоянии и проведении животных не вызывает. Соединения в этих дозах и выше не вызывают миорелаксантного действия, не нарушают координации движений ° Токсические эффекты у животных наблюдаются, начиная с доз 800-900 мг/кг, а при введении

1000-1300 мг/кг часть мышей погибает, Таким образом, предложенные в качестве средств с противогипоксической и антиамнестической активностью соединения в опытах на животных обладают способностью защищать мышей от гибели при острой кислородной недостаточ" ности, при парцнальном дефиците кислорода и метгемоглобиновой форме гипоксии ° Испытуемые вещества также проявляют активность по сохранности кратковременной памяти, т.е. обладают антиамнестическим эффектом.

По сравнению с пирацетамом превосходят его как по видам и количественной характеристике противогипоксического действия, так и по глубине антиамнестического эффекта.

1368314

Продолжение табл.2 родолжительность выживания мышей, Х, по тношению к контролю, принятому за 100Х

Соединение, мг/кг

Гип пер комп

Гемическая гипоксия ипобарическая гипоксия

138 4,19

450+4,9

421 8,2

lа

120+21,6

127+16,1

142+14,7

50 105+11,8

100 121+6,6

200 134 »13,6

lб

100

lв

1 27,5+ 1 7, 7

134+ 19,9

lг

100 175+10,9

Таблица 3

Эффект

Соединение, мг/кг

Время, проведенное мышами при воспроизведении, с в темной камере в светлой камере

Контроль без амнезии

7,2(5-12) 112,8 (108-120) Контроль с амнезией

74,3(55-85) 81,8(61-93) 300

Пирацетам

94,4 (75-110)

) 06, 6 (95-120)

82,3(63,5-101,1) 25

1а

25

91,3(80,1- 102,5}

lб

101,4(93,8-109) 50

lв

400+10,7

480+10,1

106+ 12,9

406+4, 5

45,7(30-75)

38,2(27-49)

25, 6 (15" 35 )

13,4 (5-25)

37,7 (18,9-56, S)

28,7 (16, 7-40, 7)

18,6 (10,6-28,6) 10

1368314

Таблица 4

Нарушение коор Суточная токдинации движе- сичность, ний ЕД, мг/кг ЛД,, мг/кг

Вещество

2200/2000-2420

800

1г

500

1500

lб

500

1500

2000

lв

700

Составитель В. Борисова

Редактор Г. Волкова Техред М.Дидык

Корректор Л. Патай

Заказ 185/23 Тираж 370

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4