Способ получения полистирольного латекса для биохимических исследований

 

Изобретение относится к области химии полимеров и может быть использовано в медицине для определения холестерина в мембранах клеток. Изобретение позволяет непосредственно определять холестерин в мембранах клеток с помощью полистирольного латекса для биохимических исследований , который получают радикальной сополимеризацией стирола с 5-12% от массы стирола дигитонина в водной .среде. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4142313/23-05 (22) 30.10.86 (46) 15.02.89. Бюл, N0 6 (71) Московский институт тонкой химической технологии им.M.Â.Ëîìîíîñoâà и Научно-исследовательский институт физико-химической медицины (72) М.Е.Григорьева, Е.Б.Малюкова, И.А.Грицкова, С.А.Гусев, Т.M.Ïîâàëèé, Е.Г.Попова и Т.Ю.Чиликова (53) 678.244.13 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1182055, кл..С 08 F 220/10, 1985.

Авторское свидетельство СССР

Ф 1268592, кл. С 08 F 212/08, 1986.

Изобретение относится к химии полимеров, а именно к способам получения полистирольного латекса для биохимических исследований, и может быть использовано в медицине для определения холестерина в мембранах клеток.

Цель изобретения — получение полимеров для регистрации холестерина в мембранах клеток и упрощение.процесса.

Пример 1: 0,025 r дигитонина растворяют в 100,мл воды, затем добавляют 0,34 мл (0,31 г) стирола. Полимеризацию проводят при непрерывном перемешивании и температуре 60 С в о присутствии радикального инициатораперсульфата калия, взятого в количестве 0,0003 r в течение 4,5 ч.

Конечная конверсия мономера 99, Я.

Готовый полимер представляет собой. водную дисперсию полимера, которую можно использовать далее в биомеди„.SU„„1458360 А1 (gg 4 С 08 F 112/08, А 61 К 31/00 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСТИРОЛЬНОГО ЛАТЕКСА ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ (57) Изобретение относится к области химии полимеров и может быть использовано в медицине для определения холестерина в мембранах клеток. Изобретение позволяет непосредственно определять холестерин в мембранах клеток с помощью полистирольного латекса для биохимических исследований, который получают радикальной сополимеризацией стирола с 5-12Х от массы стирола дигитонина в водной среде. 1 табл.

- цинских исследованиях, с содержанием . дигитонина 8 мас.X.

Пример 2. 0,025 г пигитонина растворяют в 100 мл воды, затем до бавляют 0,23 мл (0,21 r) стирола.

Далее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии

0,0001 г персульфата калия. Время полимеризации 4,5 ч. Конечная конверсия 99,87, содержание дигитонина 12 мас.X.

Пример 3. 0,025 г дигитонина растворяют в 100 мл воды, затем добавляют 0,55 мл (0,5 r) стирола. Да-лее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии 0,0004 г . персульфата калия. Время полимеризации 6,0 ч. Конечная конверсия

99,77. Содержание дигитонина 5мас.X.

Пример 4 (контрольный).

0,025 r дигитонина растворяют в

100 мл воды, затем добавляют 0,21мл

1458360

10

20

45

55 (0,19 r) стирола. Далее полимеризацию проводят аналогично примеру 1 в присутствии 0,0001 г персульфата калия. Время полимеризации 5,0 ч.

Конечная конверсия 98,5. Содержание дигитонина 13 мас.%.

Пример 5 (контрольный).

0,025 г .дигитонина растворяют в

100 мл воды, затеи добавляют 0,68мл (0,62 r) стирола. Далее полимеризацню проводят аналогично примеру 1 в.присутствии 0,0004 г персульфата калия. Время полимеризации 9 ч. Конечная конверсия 98,0. Содержание дигитонина 4 мас.%.

Свойства.дигитонинсодержащих полистирольных латексов приведены в таблице.

Пример 6 (использование дигитоииисодержащего латекса).

1. 3 ил исходного латекса промывают 3 раза десятикратным объемом дистиллированной воды в фильтрационной ячейке (фильтр Matinan, диаметр пор 0,.1 мкм).

2. К 3 мл промытого латекса добавляют 3 мл 0,3 M раствора сахарозы.

Латекс готов к использованию.

3. Подготовка клеток к инкубации, (эндотелиальные клетки аорты): а) фрагмент аорты кролика помеща.ют в 2,5%-ный раствор глютарового альдегида, приготовленном на 0,1 И фосфатном буфере (рН 7,4), на 12 ч; б) фрагмент аорты промывают три раза по 15 мин в 0,1 И фосфатном буфере; в) фрагмент аорты помещают в 0„1 М раствор глицерина на 1 ч;

r) 3 раза промывают О, 15 M раствором сахарозы; д) фрагменты аорты разрезают на два кусочка; е) один из. кусочков помещают в

0,4%-ный раствор дигитонина, приготовленный на 0,15 М растворе сахарозы, на 1 ч.

4. Оба кусочка аорты (один из которых является контрольным) помещают в приготовленный латекс (см. пп.1 и 2) на 1 ч при 20 С и постоянном встряхивании.

5. Кусочки аорты промывают в

0,15 М растворе сахарозы три раза, интенсивно встряхивая. Помещают в

1%-ный раствор OSO< приготовленный на 0,1 М фосфатном буфере, на 1,5 ч.

Затем промывают дважды в дистиллированной воде, обезвоживают в этаноле, высушивают методом перехода критической точки в HCP-2, покрывают в золотом в диодном спуттере EIKO-1в-3 и исследуют в сканирующем электронном микроскопе Hitachi-570. На контрольном образце, который был обработан раствором дигитонина перед инкубацией с латексом с целью связывания холестерина мембран, латексных частиц нет. В то же время на препарате, необработанном ДГТ, имеется большое количество микросфер.

В среднем с 1 мкм плазматической мембраны эндотелиальной клетки аорты. в норме (т.е. в отсутствие гиперхолестериноза) связывается 5 латексных частиц (5,62 + 0,84). Таким образом, дигитонин, содержащий латекс, является специфическим маркером на холестерин мембран клеток. При экспериментальном атеросклерозе, когда количество холестерина в мембранах клеток значительно увеличено, число латексных частиц, связывающихся с 1 мкм поверхности мембраны, возрастает до

10 (10,0 + 1,06). Следовательно, синтезированный дигитонинсодержащий латекс можно применять для диагностики атеросклероза. Для оценки специфич- . ности связывания латекса с холестерином клеточной мембраны инкубировали

1 дигитонинсодержащие латексы с эндотелием аорты, предварительно обработанньи свободным дигитонином для бло« кирования имеющегося холестерина и без предварительной обработки. Плотность распределения дигитонинсодержащих микросфер на 1.мкм поверхности эндотелиоцитов в первом случае равна 0,5 + 0,1, во втором - 7,7 ф„

+ 0,5 частиц, что свидетельствует о высокой специфичности связывания дигитонинсодержащего латекса - маркера с холестерином клеточных мембран.

Формула изобретения

Способ получения полистирольного латекса для биохимических исследова-, ний путем эмульсионной полимеризации стирола в присутствии радикального инициатора, поверхностно-активного вещества и биодобавки, отличающийся тем, что, с целью получения полимеров для регистрации холестерина в мембранах клеток и упро; 5 14

; щения процесса, в качестве биодобав ки и одновременно поверхностно-акСрфастза дкмтеннмсодераири юлмстиролвимк латаксов

0 0 0

0 O

1 8,0 . 99,3

2 12,0 99,8

0 0

3 50 99,?

0 0

98,3 0 01 1906 0

0 . 0

1,3 100

98,0 0,30 t,ое

0 Oi j

88,0 0,60 1,02 0,03 0,03 0,03 1,0 13,0

Составитель В.Цолякова

Редактор А.Огар Техред М.яндык .. Корректор И.Муска

Заказ 323/27 Тирам 411 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород,. ул. Проектная, 4

6 (матрОпй»

laa) 13 0 (коат- .

ЗЫ) . Ф,Е

6 (eразамй) 0

0,20 1,018

0,13 1,026 .0,23 t,029

1 тивного вещества используют 5-127 от массы стирола дигитонина.

0 0

0 ° 0