Способ диагностики аспириновой бронхиальной астмы

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике аспириновой бронхиальной астмы. Целью изобретения является повышение специфичности за счет использования более патогенетически обоснованного показателя -регистрации лейкотриенов и ускорение способа. Для этого выделяют из периферической крови больного лейкоциты подсчитывают число клеток, отмывают их центрифугированием в растворе Тироде, затем суспензию лейкоцитов инкубируют с 0,01%- ным раствором индометацина в течение 30 мин. при 37°С со встряхиванием. После инкубации лейкоциты осаждают центрифугированием, а из надосадочной жидкости экстрагируют органическую фазу добавлением изопропанола, муравьиной кислоты и спустя 5 мин. этилового эфира, к органической фазе добавляют 25%-ный раствор аммиака и высушивают под вакуумом. Осадок после высушивания растворяют в смеси ацетонитрил-вода -уксусная кислота (50:50:0,1 по объему). Лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрилвода -уксусная кислота (50:50:0,1, PH 3,7) со скоростью потока 1,5 мл/ мин на колонках 4,6х 250мм с сорбентом ОДС С<SB POS="POST">1</SB>8 по оптической плотности при длине волны 280 нм. При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С<SB POS="POST">4</SB> определяется на 8-й мин, а ЛТД<SB POS="POST">4</SB> -на 22-й мин. При наличии лейкотриенов диагностируют аспириновую бронхиальную астму. Способ позволяет установить диагноз в 100% случаев, а также сократить время исследования в 2 раза.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (II) A t (aI) 4 С 01 " 33/92

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H Д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4102905/28-14 (22) 26.05.86 (46) 30.05.89. Бюл. Р 20 (71) YiocKQBcKHH научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии (72) Б.И.Круглый, И.В.Сулаквелидзе, О.Б.Святкина, С.Ю.Каганов, Л.В.Ковальчук, А.ГаЧучалин и Ю.Е.Вельтищев (53) 616.07(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 233209, кл. А 61 В 10/00, 1979. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АСПИРИНОВОЙ

БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике аспириновой бронхиальной астмы. Целью изобретения является повышение специфичности за счет использования более патогенетически обоснованного показателя-регистрации лейкотриенов и ускорение способа. Для этого выделяют из периферической крови больного лейкоциты, подсчитывают число клеток, отмывают, их центрифугированием в растворе Тироде, затем суспензию лейкоИзобретение относится к медицине, а именно к диагностике аспириновой бронхиальной астмы.

Целью изобретения является повышение специфичности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования берут 3,0 мл гепаринизированной венозной крови, до2 цитов инкубируют с 0,01%-ным раствором индометацина в течение 30 мин при

37 С со встряхиванием. После инкубации лейкоциты осаждают центрифугированием, а из надосадочной жидкости экстрагируют органическую фазу добавлением изопропанола, муравьиной кислоты и спустя 5 мин этилового эфира, к органической фазе добавляют 25%ный раствор аммиака и высушивают под вакуумом. Осадок после высушивания растворяют в смеси ацетонитрил-водауксусная кислота (50:50:0,1 по объему). Лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил — вода — ук- с сусная кислота (50:50:0,1, рН 3,7) со скоростью патока 1,5 мл/мнн на колон- (Д ках 4,6 х 250 мм с сорбентом ОДС С по оптической плотности при длине ( волны 280 нм. При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С4 определяется на 8-й мин, а ЛТД вЂ” на 22-й мин. При наличии лейкотриенов диагностируют аспириновую бронхиальную астму. Способ рр позволяет установить диагноз в 100% е случаев, а также сократить время исследования в 2 раза. бавляют 0,3 мл 10%-ного раствора желатины, инкубируют 45 мин, отбирают плазму, центрифугируют 10 мин (g=

=300), затем сливают надосадочную жидкость, ресуспендируют лейкоциты в 3,0 мл раствора Тироде (ЯаС1 8 г/л, КС1 0,2 г/л, СаС1 0,2 г/л, MgClg

0,01 r/л, .NaHgP04 0,005 г/л, ИаНСО

1,0 г/л, глюкоза 1,0 г/л/ рН 7,4), вновь центрифугируют 10.ìèí, слива1483379 ют надосадочную жидкость, осадок ресуспендируют в 1,0 мл укаэанного раст вора. После этого 0,02 мл полученной суспензии растворяют в 0,4 мл 3 -ной уксусной кислоты и производят подсчет клеток в камере Горяева. К 1,0 мл исследуемой суспензии лейкоцитов добавляют 0,01 мл 0 Ol -ного раствора индометацина, Инкубируют, встряхивая 10

30 мин при 37 С. После этого центрифугируют 10 мин (g=900) надосадочную

)кидкость сливают и к ней добавляют

0,5 мл изопропанола, 0,03 мл муравьиной кислоты, через 5 мин — 1,5 мл эти-15 лового эфира, Верхнюю (органическую) фазу отбирают, к ней добавляют

0,022 мл 25 .-ного раствора аммиака и высушивают под вакуумом. Экстракцию лейкотриенов проводят по Clansy- 20

Hugly. Осадок растворяют в 0,025 мл раствора ацетонитрил — вода — уксусная кислота (50:50:0,1 по объему); лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил — вода — уксусная кислота (50:50:0,1, рН 3,7) со скоростью потока 1,5 мл/мин на колонках 4,6 х 250 мм с сорбентом ОДС С;,, размер частиц 5 мкм. Чувствительность 30

УФ детектора 0,02 ед, на шкалу при длине волны 280 нм (Peters с соавт.). . При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С » определяется на 8-й мин, ЛТ Д,» — на

22-й мин. Расчет количества ЛТ про- 35 водят относительно определенного количества простагландина В>, используемого в качестве внутреннего стандарта. Появление этих пиков на хроматограмме свидетельствует о неперено- 40 симости больными нестероидных противовоспалительных препаратов и наличие у них. аспириновой бронхиальной астмы. В норме указанные пики в исследуемом материале отсутствуют. 45

Пример 1, Больная К., 4 года, поступила с диагнозом бронхиальная астма, атопическая, средне-тяжелое течение, межприступный период.

За год до поступления в клинику при 50 респираторной инфекции родители давали ребенку амидопирин, анальгин, реакции не отмечалось. При аллергологическом обследовании в отделении отмечена высокая степень .сенсибили- 55 зации к аллергену из домашней пыли, начата специфическая гипосенсибилизация. Во время пребывания ребенка в отделении для снятия зубной боли были применены местно анальгин и аспирин, после чего появилась сыпь, сухие свистящие хрипы. Стал вопрос о наличии у ребенка аспириновой аст" мы на фоне атопии, причем проведение провокационного теста было признано нецелесообразным иэ-за опасности развития приступа удушья. При инкубации

1,5 х 10 лейкоцитов с 0,0l -ным раствором индометацина в супернатанте выявлено 3,46 х 10 г/мл лейкотриена

С4/С4 (2,3 х 10 на 10 лейкоцитов), что свидетельствует о непереносимости больной препаратов иэ группы НСПП и подтверждает наличие у.нее аспириновой бронхиальной астмы. Таким образом, полученные данные позволили дать рекомендации о необходимости избегать назначения для больной препаратов из группы HCILI и пищевых п»одуктов, в которых они содержатся, что позволит избежать дальнейшего обострения заболевания. !

Положительный эффект предлагаемого способа состоит в том, что он позволяет повысить специфичность диагностики путем использования более пато-. гномичного показателя, значение которого у больных в среднем в 28 раз выше, по сравнению с контролем. Ускорение диагностики в 2 раза достигается путем сокращения времени анализа с 6 ч в прототипе до 3 ч предлагаемым способом.

Формула изобретения

Способ диагностики аспириновой бронхиальной астмы путем высокоэффективной жидкостной хроматографии, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения специфичности и ускорения способа, в надосадочной жидкости отмытых лейкоцитов периферической крови, обрабстанных 0,01 -ным раствором индометацина, определяют содержание лейкотриенов С, ДА, Е,» и при их наличии диагностируют аспириновую бронхиальную астму.