Способ получения липидов, содержащих @ -линоленовую кислоту

 

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к микробному синтезу физиологически активных веществ, в частности липидов, содержащих у-линоленовую кислоту . Целью изобретения является увеличение содержания у -линоленовой кислоты в липидах. Это достигается путем выращивания гриба Mucor lusitanicus ВКМР306-Д при глубинном культивировании в условиях непрерывной аэрации на питательной среде, содержащей углеводородный источник углерода и неорганический источник азота, среда дополнительно содержит солодовый экстракт в количестве 0,05-0,1 г/л, источник азота подают дробно по схеме: 50% при посеве, 25-50% в конце первых суток, остальное в конце вторых суток. В течение трех суток на 100 г использованного источника углерода синтезируется до 3,8 г у-линоленовой кислоты. 2 табл. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4854362/13 (22) 24.07,90 (46) 30.07.92, Бюл. М 28 (71) Институт микробиологии АН СССР (72)H. С. Фунтикова, А. А, Катомйн.а и И. С. Мысякина (53) 577.115(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1585331, кл. С 12 P 7/64, 1988. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ у-flNHOJlEHOBYlO КИСЛОТУ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробному синтезу физиологически активных веществ, в частности липидов, содержащих у-линоленовую кисИзобретение относится к биотехнологии, а именно к микробному синтезу физиологически активных веществ. Известен способ получения липидов, содержащих у-линоленовую кислоту, путем выращивания гриба Mucor lusltanlcus

ИНМИ BKM F-306D на среде следующего состава, г/л: глюкоза 30; мочевина 1;

К2НРО41; NaCl 0,5; MgS04 7Hz0 0,5; FezS04

7Н20 0,01; CaClz 0,02; ZnS04 7Н20 0,01; дрожжевой экстракт 0;5; витамин Вб 0,002; биотин 0,02 мг; при 20-300, рН 4,5-6,5 в течение трех суток при аэрации 1,8 Ог/л/ч.

Получают липиды, содержащие 29-32;(, улиноленовой кислоты от суммы жирных кислот. На 100 л использованной глюкозы получают 2,77 r у-линоленовой кислоты. Недостатком этого способа является недостаточно высокое содержание у-линоленовой, кислоты в липидах.

Цель изобретения — увеличение содержания у-линоленовой кислоты в липидах.

ЬЦ,, 1751212 А) (si)s С 12 Р 7/64, С 12 N 1/14 //

//(С 12 N 1/14, С 12 и 1;785) 2 лоту. Целью изобретения является увеличение содержания у-линолейовой кислоты в липидах, Это достигается путем выращивания гриба Mucor lusltanicus ВКМР306-Д при глубинном культивировании в условиях непрерывной аэрации на питательной среде, содержащей углеводородный источник углерода и неорганический источник азота ; среда"дополнительно содержйт солодовый экстракт в количестве 0,05 — 0,1 г/л, источник азота подают дробно rio схеме: 50 / при посеве, 25-50 / в конце первых суток, остальное в конце вторых суток. В течение трех суток на 100 г использованного источника углерода синтезируется до 3,8 г у-ли-. ноленовой кислоты, 2 табл.

Указанная цель достигается тем, что гриб Mucor1usltanicus ВКМ F 3060 выращивают на среде следующего-; г/л; глюкоза 30 — 60 г; мочевина 1 — 2; К2НРО4 1 — 2;

NaC! 05+0,01; MgS04 7Й20 0;5+0,01;

FeS04 . 7Hz0 0,01-0,02; СаС12 0,02+0,001;

ZnS04 7Hz0 0,01+0,001; Мп0. 0,01+0,001; дрожжевой экстракт 0,3 — 0,5; солодовый экстракт 0,05 — 0,1; витамин Bs 0,002; биотин

0,02 мг, при 20 — 30, интенсивности аэрации

1,6-1,8 02/л/ч, рН среды перед посевом 6,3—

6,8. Выращивание проводят в течение 66—

72 ч, Концентрацию азота в среде на протяжении выращивания поддерживают в определенном интервале — 0,25 — 0,7 г/л. Для этого азот добавляют дробно — при посеве

50 g, мочевины, в конце первых суток 25—

50 Д, в конце вторых суток — остальное. Мицелий отделяют от культуральной жидкости фильтрованием. Липиды экстрагируют из влажной биомассы смесью хлороформ-метанол-вода = 1:2:0,8, Жйрнокислотный со1751212 лоты — 3,8 r

30

55 став липидов определяют методом газожидкостной хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, которые получают кислотным метанолизом, В результате получаютлипиды, содержащие40 — 45 j< у-линоленовой кислоты от суммы жирных кислот, Пример 1. Культуру выращивают в течение 72 часов в колбах на 2 л, содержащих 300 мл .среды при 28 С на качалке.

Состав среды, г/л:

Глюкоза 30

Мочевина 1

К2НР04 1

NaCl 0 Г, MgSOp - 7К20 . 0,5

FeS04 7Н20 001

ZnS04 7Н20, 0,01 .

CaCb О 02

Мп0 О 01

Дрожжевой экстракт 0,3

Солодовый экстракт 0,05

Витамин Be 0,002

6иотин 0,02 мг

Мочевину при посеве добавляют в количестве 0,5 г, через 24 ч — 0 5 r на 1 л среды. В качестве инокулята используют суспензию спор плотностью 106 кл/мл. Споровый материал выращивают на пшеничных отрубях.

Биомассу отделяют от культурэльной жидкости, экстрагируют липиды смесью хлороформ-метанол-вода =1:2 0,8, Полученные липиды содержат 40 g, у-линоленовой кислоты от суммы жирных кислот. Выход биомассы на 100 г глюкозы — 36, липидов—

10,5 r, сумма жирных кислот — 7,93, из них у-пиноленовая кислота — 3,21 г.

В табл. 1 представлен состав жирных кислот липидов гриба Mucor lusitanlcus ИНМИ.

Пример 2, Культуру выращивают в течение 66 ч в 2-литровых колбах, содержащих 300 мл среды при 28 С и интенсивности ээрацйи 1,8 r 0 /л/ч.

Состав среды, г/л:

Глюкоза 60

Мочевина 2 . К2НР04 . 2

МаС1 О 5

М9504 7Н20 0,5

FeS0< 7Н20 0,02

ZnS04 7Н20 0,01

Дрожжевой экстракт 0,5

Солодовый экстракт 0,1

Витамин Be 0,002

Биотин 0,02 мг

Мочевину при посеве добавляют в количестве 1 г, через 27 ч — 0 5 г, через 42 ч — 0,5

r. Биомассу отделяют от культуральной жидкости, липиды экстрагируют как в примере

1. Полученные липиды содержат 45/о у-линоленовой кислоты от суммы жирных кислот, Выход биомассы на 100 г использованной глюкозы — 36,6 r, липидов — 11,2 r, жирных кислот — 8,4 r, y-линоленовой кисВ табл, 2 представлен состав жирных кислот липидов гриба Mucor lusltanlcus ИНМИ, Используя предложенный метод, получают жирные кислоты, содержащие 4045 у -линоленовой кислоты, при этом на

100 r использованного источника углерода получают до 3,80 r y-линоленовой кислоты, в то время как в предложенном ранее способе получают липиды, содержащие 2932 у --линоленовой кислоты от суммы жирных кислот, и на 100 г использованной глюкозы выход g-линоленовой кислоты составляют 2,77 r..

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа получения у -линоленовой кислоты по сравнению с ранее предложенным является повышение выхода у-линоленовой кислоты на 100 r использованного источника углерода в 1,4 раза за счет повышения содержания у -линоленовой кислоты в липидах, Повышение содержания в липидах у -линоленовой кислоты удешевляет получение ее чистого препарата, также повышает ценность липидов как основы для получения лекарственных препаратов. Увеличение выхода целевого продукта достигается путем изменения режима азотного питания продуцента. Время ферментации сокращается до 66 ч.

Формула изобретения

Способ получения липидов, содержащих у-линоленовую кислоту, путем выращивания гриба Mucor lvsitanlcus ВКМ F-3060 на питательной среде, содержащей мочевину 1-2 r/ë, глюкозу — 30-60 г/л, минеральные соли, микроэлементы, дрожжевой экстракт и витамины, при 20 — 30 С, рН 4,56,5, аэрации 1,6-1,8 Oz л/ч в течение 2,6-3,0 сут., отличающийся тем, что, с целью увеличения содержания р-линоленовой кислоты в липидах, процесс ведут на питательной среде, дополнительно содержащей солодовый экстракт в количестве 0,05-0,1 г/л, в мочевину подают дробно по схеме:

50% при посеве, 25-50), в конце первых суток, а при наличии остатка его вводят в конце вторых суток.

1751212

Таблица 1

Таблица 2

С16:0

C16:1

C18:2 "

С18:З

Жирные кислоты

С18:1

С18:O

С14;0 от суммы жирных. кислот

19,8

1,0

45;0

0,5

19,2

5,1

Составитель Н.Фунтикова

Редактор H.Øâûäêàÿ Техред М.Моргентал Корректор С.Пекарь

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2665 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5