Способ моделирования немедленной аллергии

 

Изобретение относится к области биологии и медицины и может быть использовано для отбора и апробации противоаллергических средств и разработки новых способов профилактики и лечения аллергических заболеваний, а также для изучения механизмов формирования аллергического процесса. Цель - повышение адекватности модели за счет стимуляции IgE - антигелообразования. Для этого аллерген закапывают в носовые ходы на фоне предварительного введения 0,1%-ного раствора полиглюкина, являющегося дегранулятором тканевых безофилов и вызывающего выделение из них большого количества биологически активных веществ , что приводит к достоверному повышению образования IgE - антител в трахее и легких. Это позволяет получить модель немедленной аллергии, адекватной аллергическому процессу, развивающемуся у больных аллергическими заболеваниями, которую возможно использовать для тестирования эффективности и дозозависимости противоаллергических средств. СП с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4860948/14 (22) 20.08.90 (46) 30.10.92. Бюл. N 40 (71) Киевский научно-исследовательский институт отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко (72) Л.А. Дюговская, О,Ф. Мельников, M.Á, Самбур и Т.В. Сидоренко (56) Авт. св. СССР N 843345, 1981 г. (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ НЕМЕДЛЕННОЙ АЛЛЕРГИИ (57) Изобретение относится к области биологии и медицины и может быть использовано для отбора и апробации противоаллергических средств и разработки новых способов профилактики и лечения аллергических заболеваний, а также для изучения механизмов формирования аллерИзобретение относится к области медицины, в частности к аллергологии и может быть использовано для отбора и апробации противоаллергических средств и разработки новых способов профилактики и лечения аллергических заболеваний.

Известны способы моделирования немедленной аллергии.

Указанные способы длительны в осуществлении, т.к, предусматривают длительную иммунизацию и сложные манипуляции при введении антигенов.

Наиболее близок к заявленному способ моделирования немедленной аллергии, включающий последовательное введение в дыхательные пути 0,1% раствора гистэмина и аллергена амброзии.

„„5U„„1771743 А1 (51)5 А 61 К 31/715, G 09 В 23/28 гического процесса. Цель — повышение адекватности модели за счет стимуляции

IgE — энтителообразовэния, Для этого аллерген закапывают в носовые ходы на фоне предварительного введения 0,1 g,— Hoão раствора полиглюкина, являющегося дегранулятором тканевых безофилов и вызывающего выделение из них большого количества биологически активных веществ, что приводит к достоверному повышению образования igE — антител в трахее и легких. Это позволяет получить модель немедленной аллергии, адекватной аллергическому процессу, развивающемуся у больных аллергическими заболеваниями, которую возможно использовать для тестирования эффективности и дозозависимости противоаллергических средств, Недостатком указанного способа явля- а ется получение низких титров реагинов 09Еантител) в гомогенатах трахеи и легких, что затрудняет оценку влияния различных противоаллергических средств на развитие немедленной аллергии, не позволяет выявить дозозависимость эффекта.

Целью изобретения является повыше- (д ние адекватности модели за счет стимуляции IgE-антителообразования.

Поставленная цель достигается тем, что вместо одного медиатора немедленной аллергии — гистамина перед введением аллергена вводят полиглюкин (декстран мол.м.

60000+. 10000 Д), вызывающий массивную дегрануляцию тканевых безофилов в большом количестве расплагающихся по ходу

1771743

10

20 ния

50

55 дыхательного тракта и способствующий т.о. высвобождению из них помимо гистамина большого количества различных биологически активных веществ.(серотонин, гепарин, прастагландины и др.) разносторонние действия которых индуцируют выраженные проявления немедленной аллергии, Такое техническое решение позволяет получить модель немедленной аллергии, аналогичной аллергическому процессу, развива ощемуся у больных аллергическими заболеваниями, что дает возможность изучать механизмы формирования различных форм аллергии немедленного типа в эксперименте и на основе этого разрабатывать физиологически адекватные способы направленнои коррекции этого патологичеСКОГО СОСТОЯНИЯ, Способ поясняется примером выполнеКрыс линии Вистар обоего пола, массой

150 — 250 г., 3-4-х месячного возраста иммунизировали аллергеном амброзии, который закапывали в оба носовых хода в количестве

0.03-0,5 мл на фоне предварительного (за 25

30-50 мин) закапывания 0,1% раствора полилюкина. Контрольным крысам аллерген вводили на фоне закапывания 0,1% раствора гистамина. Содержание IgE-антител в гомогенатах трахеи и легких определяли через.48 ч после введения антигена в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток.

Показано, что (табл.1) предшествующее введение антигена закапывание 0,1% раствора полигл окина вызывает достоверно более выраженное образование IgE-антител в трахее и легких, чем закапывание 0,1% раствора гистамина.

Таким образом, получена модель немедленной аллергии, отличающаяся высоким содер>канием IgE-антител в органах дыхания, что позволяет использовать ее для тестирования эффективности и дозозависимости противоаллергических средств и изучать конкретные механизмы их действия. 45

Эксперименты проведены на 30 крысах (тридцати) л инии В иста р, 3-4 "месячного возраста. Животным закапывали в оба носовых хода по 0,03-0,05 мл 0,1% раствора полиглюкина. Через 30 — 40 мин после чего в носовые ходы инстиллировали аналогичное количество аллергена амброзии (Ставропольский НИИ вакцин и сывороток). Контрольным животным вместо полиглюкина аналогичным образом вводили 0,1% раствор гистамина, через 48 ч определяли содержание igE-антител в гомогенатах трахеи и легких опытных и контрольных животных, Показано, что образование lgE-антител у крыс, получивших 0,1% раствор полиглюкина, значительно и достоверно превышает таковое у контрольных животных. Выявленные антитела относились именно к Ig E, поскольку прогревание гомогенатов при 56 С полностью снимало их способность вызывать дегрануляцию интактных тканевых базофилов при добавлении аллергена амброзия. Принадлежность полученных антител к!ОЕ подтверждена также в реакции пассивной кожной анафилаксии.

С помощью прототипа возмо>кно определить подавляет ли исследуемое на наличие противоаллергической активности вещество образование ig E-антител в органах дыхания, а также обладает ли оно антигистаминным действием.

С помощью предложснного способа возможно тестирование веществ, облада ощих не только антигистаминным действием, но и веществ, блокирующих эффект серотанина, ингибиторов простагландинов, а также, что особен но Bc)>l(lla вещество, стабилизирующих мембраны Гучных клеток.

Как видно из данных, представленных в табл,2, гистаминовая модель аллергии для этой цели не приемлема.

Кроме того, введение полиглюкина позволяет стимулировать Е-антителогенез в трахее и легких, индуцирул Образование достоверно более высокого уровня антител по сравнению с введением гистамина, что в сво о очередь повышает то IHQGTb исследования противоаллергической активности веществ и повышает порог определения возможной дозы препарата.

В качестве примера приводим данные по влиянию левамизола на .образование

tg E-антител в трахее и легких крыс при использовании гистаминовой и полиглюкиновой модели аллергии.

Как видно из данных, представленных в табл,З, из-за недостаточно высокого исходного содержания lg E-антител п ри "гистаминовой .аллергии" удается выявить подавляющий эффект левамизола только при использовании его в дозе 500 мкгlмл. В то же время при использовании "полиглюкиновой модели аллергии" выявляется супрессорное в отношении IgE-антител влияние левамизола уже в дозе 100 мкг/мл.

Заявляемое изобретение мо:кет. быть использовано для скрининга противоаллергических средств, определения фармакологически адекватных дозировок для проявленич их действия, а также для изучения механизмов их противоаллергического эффекта и механизмов формирования немедленной аллергии, 1771743

Формула изобретения

Способ моделирования немедленной аллергии, включающий введение аллергена в носовые ходы, отличающийся тем, что, Таблица 1

Содержание Ig Е-антител в трахее и легких крыс, иммунизированных аллергеном амброзии на фоне предварительного введения 0,1 раствора полиглюкина (опыт) или раствора гистамина (контроль) Таблица 2

Влияние интала (стабилизатор мембраны тучных клеток) на образование tgE-антител в органах дыхания крыс

Количество тучных клеток, дегранулировавших в результате взаимодейс (gE-антител. содержащихся в гомогенатах трахей и легких и аллергена ам зии

Статистические показатели

Гистаминовая модель алле гии

ЛЕГКИЕ

Контроль (закапывание изиологического аст.

Закапывание интала соде жащий 1 мг/мл (р-р со 100 мкг/м) 12,6

15,8

15,7

12 — 26

> 0,05

> 0,05

Пол иглюкиновая модель алле гии

Легкие

Т ахея Легкие Т ахея

Трахея Легкие

Закапывание интала

Контроль (закапывание физиологического раствора) 1 мг/мл

100 мкг/мл

12,5

8.7

9,0

10,4

30,4

32,8

4 — 12

3 — 15

4 — 19

19 — 50.

17 — 62

<О 05

<001

<001

Среднее значен.

Пределы колебан.

Количество крыс

Достоверность

Среднее значен.

Пределы колебан.

Количество кры.с

Достоверность с целью повышения адекватности модели за счет стимуляции ig Е-антителообразовани.-., за 30-60 мин до введения аллергена закапывают 0,1 g,-íûé раствор полиглюкина.

1771743

Таблица 3

Влияние левамизола на образование IgE-антител в органах дыхания

Количество тучных клеток (в $) дегранулироваваих в результате взаимоействия Г Е-антител, со е жа ихся в гомогенатах, и алле гена амб озии

Статистические показатели

Гистаминовая мо ель алле гии

Левамизол

Физ. р-р

500 мкг/мл

100 мкг/мл т ахея легкие т ахея легкие т ахея легкие

19,8

20,5

14 — 29

6,1

7,1

18,9

20,7

3 — 15 12 — 25

4" 12

14 — 25

15-28

10

<О 05

<0,05

>0,05

> 0,05

Поли глюкиновая мо ель алле гии

Левамизол

Физ. р-р

500 мкг/мл

100 мкг/мл т ахея легкие т ахея легкие легкие

17,7

19,9

10,4

32,4

9,2

4 — 18

15-65

2 — 15

9-23

19 — 23

< 0,05

<0.01

<0,01

< 0,05

Редактор

Заказ 3794 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Среднее значение

Пределы колебаний

Количество животных

Достоверность

Среднее значение

Пределы колебаний

Количество животных . Достоверность т ахея

35,8

18 — 54

Составитель Л.Столярова

- Техред M.Mîðãåíòàë Корректор Л.Филь