Способ оценки биологической активности пептидов

 

Использование: в области медицинской промышленности для оценки биологической активности препарата. Сущность изобретения: получают гомогенат ткани сердца крысы, вносят препарат пептидов, выделенный из сердца в опытную пробу гомогената, инкубируют с препаратом, определяют активность сукцинатдегидрогеназы спектрофотометрическим методом в опытной и контрольной пробах и при снижении активности сукцинатдегидрогеназы в опытной пробе на 60% и более исходной активности в контроле препарат считают биологически активным. Способ позволяет упростить анализ биологической активности препарата пептидов, выделенных из сердца. 2 табл.

союз советских

СОЦИАЛ ИСТИЧ Е С К ИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4881465/14 (22) 11.11.90 (46) 07,04,93, Бюл. N 13 (71) Медико-биологический научно-производственный комплекс "Цитомед" (72) В. X. Хавинсон, Т, А. Евтихиева, С, T. Казанцева, О. И. Долинова и В. И. Ершов (56) Биохимия-медицине. Молекулярная механизация формирования патологических состояний, Тез, докл. научн. конф, Л.. 1988. с. 137 †1, (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ ПЕПТИДОВ (57) Использование: в области медицинской промышленности для оценки биологичеИзобретение относится к области медицинской промышленности, а именно к способам оценки биолегической активности препаратов.

Цель изобретения — упрощение методики, Цель достигается тем, что при оценке биологической активности пептидов, выделенных из сердца, в качестве препарата ткани используют гомогенат сердечной мышцы, активность сукцинатдегидрогенаэы регистрируют спектрофотометрически и при снижении оптической плотности на

60% и более по сравнению с контролем пептиды сердца считают биологически активными.

Пример 1; Белых беспородных крыссамцов весов 180-200 г под легким эфирным наркозом забивали и извлекали сердце в охлаждаемый на ледяной бане 0,1%-ный раствор КС(. Крупные сосуды удаляли, ткань сердца измельчали ножницами на фрагменты 2-3 мм, несколько раз промывали свежей Ы,, 1807399 А1 ской активности препарата. Сущность изобретения: получают гомогенат ткани сердца крысы, вносят препарат пептидов, выделенный из сердца в опытную пробу гомогената, инкубируют с препаратом. 0Ilределяют активность сукцинатдегидрогеназы спектрофотометрическим методом в опытной и контрольной пробах и при снижении активности сукцинатдегидрогенаэы в опытной пробе на 60% и более исходной активности в контроле препарат считают биологически активным. Способ позволяет упростить анализ биологической активности препарата пептидов, выделенных из сердца. 2 табл.

Г

> г порцией охлажденного раствора КС(от крови, Кусочки промытой ткани просушивали бумажным фильтром, быстро взвешивали и гомогенизировали в фарфоровой ступе с кварцевым песком на ледяной бане, суспензировали в среде определенного состава 00 (120мМ йаС(; 5,8 мМ КС(; 4,3 мМИаНСОЗ;1,4 C) мМ йа2РО4, 1,5 мМ MgS04; 3 мМ СаС!2) иэ 4 расчета на 1 г гомогената — 10 мм среды, (Ъ фильтровали через капроновый фильтр. Од- О нов ременно готовили раствор "кардиалина" в концентрации 10 мг/мл.

В две пробирки наливали по 0,9 мл суспензии гомогената, в одну из пробирок . (опытную) добавляли 0,1 мл раствора "кардиалина", в другую (контрольную) — 0.1 M/l воды. Инкубировали пробы в течение 1 часа на водяной бане при температуре 37 С, затем добавляли в каждую по 0,1 мл 2%-ного раствора тритона X-100, энергично встряхивали и центрифугировали при 1200 g в течение 10 мин температуре 4 С.

1807399 рО

ЛА, =100- — . 100

0" где D — оптическая плотность опытной пробы при длине волны 540 нм;

0 — оптическая плотность контрольной пробы при длине волны 540 нм;

Л А 7Π— снижение активности СДГ, выраженное в процентах.

Из данных табл.1 видно, что при инкубировании гомогената сердечной ткани с

"кардиалином" в концентрации 10 мг/мл происходит статистически достоверное

Таблица1

Влияние "кардиалина" различных партий на активность СДГ гомогената сердечной ткани

П римеча н ие: Для Р<

Для определения сукцинатдегидрогеназной (СДГ) активности гомогената готовили реакционную смесь следующего состава:

0,28 MM нитросиний тетразолий, 0,70 мМ

ЭДТА (натоиевая соль) 40 мМ сукцинат натрия, 0,1 М Na-Na фосфатный буфер рН 7,2, В две пробирки наливали по 1,5 мл реакционной смеси и добавляли по 0,2 мл супернатанта из опытной и контрольной проб.

Реакцию проводили в течение десяти минут на водяной бане при 37 С, останавливали реакцию охлаждением проб на льду, измеряли оптическую плотность против воды при длине волны 540 нм. Значение оптической плотности контрольной пробы должно находиться в интервале 0,6 — 0,8 о. е. Инкубирование гомогенэта с "кардиалином" приводило к снижению измеряемой

СДГ-активности. Активность "кардиалина" выражали в процентах снижения активности СДГ, определяя ее по следующей формуле: снижение активности СДГ более, чем на

507, что говорит о биологической активности препарата, Пример 2. Для оценки специфичности действия "кардиалина" нами исследовано также действие на СДà — активность сердечного гомогената пептидных биорегуляторов, выделенных из других тканей; тимуса ("тималина"), простаты ("простатилена") и

10 головного мозга ("кортексина"). Действие всех препаратов исследовали в соответствии с описанной выше методикой.

Как видно из данных, представленных в табл. 2, "кардиалин" обладает наибольшей

15 способностью снижать уровень СДГ-активности в гомогенате сердечной ткани по сравнению с остальными препаратами.

Формула изобретения

Способ оценки биологической активно 0 сти пептидов, включающий получение препарата ткани, инкубацию его с исследуемыми пептидами и регистрацию активности сукцинатдегидрогеназы по

НСТ вЂ” тесту в сравнении с контролем, о т л и25 ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, при оценке биологической активности пептидов, выделенных из сердца; в качестве препарата ткани используют гомогенат сердечной мышцы, активность сукци30 натдегидрогеназы регистрируют спектрофотометрически и при снижении оптической плотности на 60% и более по сравнению с контролем пептиды сердца считают биологически активными.

1807399

Таблицэ2

Влияние пептидов, выделенных из разных тканей, на активность СДГ гомогената сердечной ткани

Составитель Т.Евтихиева

Редактор С.Кулакова Техред M.Ìîðãeíòàë Корректор О,Кравцова

Заказ 1376 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина, 101