Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани
COIQ3 СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (! I) ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1В С) 4 фь. О К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4881840/14 (22) 11.11.90 (46) 07.04.93. Бюл. М 13 (71) Кемеровский государственный медицинский институт (72) А. Г. Михеев. Ю, Н. Чернявский и Г. И. Лукьянова (56) Волкова О. В. и др. Основы гистологии с гистологической техникой, M.: Медицина, 1982, с. 242-243. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПАРАФИНОВЫХ СРЕЗОВ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ВЫЯВЛЕНИЯ КЛЕТОК КРОВИ И СОЕДИНИТЕЛЬЬ НОЙ ТКАНИ (57) Использование: в области медицины, в частности в гистологической технике. Сущность изобретения: проводят депарафинирование .исследуемого материала, проведение по батарее спиртов от 100 до 70 и затем в воде, окраску смесью основного и кислого красителей, дифференцировку Изобретение относится к области медицины, в частности к гистологической технике и может быть использовано при проведении научных морфологических исследований; а также в патологоанатомической практике. Кроме того оно может быть использовано в ветеринарии для этих же целей. Цель изобретения — повышение экономичности (обеспечение надежности и воспроизводимости результатов, повышение устойчивости рабочего раствора красителя и многократного его использования) и. ускорение способа. Поставленная цель достигается тем, что окраску срезов проводят смесью стандартного раствора красителя Мая-Грюнвальда и в 960-ном спирте до появления красной окраски эритроцитов с последующим обезвоживанием, просветлением и заключением в бальзам или полистирол, при этом окраску проводят в смеси стандартного раствора красителя-фиксатора Мая-Грюнвальда и ацетатного буфера при следующих соотношениях компонентов, об. (,: стандартный раствор красителя-фиксатора Мая-Грюнвальда 10-25; буферная смесь, состоящая из 0.05-0,1 M растворов ацетата натрия и уксусной кислоты, в объемных соотношениях 10:1-30:1 75-90, Способ позволяет выявлять в парафиновых срезах различные типы гранулоцитов (нейтрофильных, псевдозозинофильных, гетерофильных, эозинофильных) и эритроцитов на всех стадиях созревания, все клеточные элементы соединительной ткани. Способ позволяет многократно испольэовать красящую смесь. Время окраски сокращается до 0,5-1,5 ч вместо 12-24 ч в прототипе, 1 табл. ацетатного буфера при следующих соотношениях компонентов, об. (,:. Стандартный раствор красителя, Мая-Грюнвальда 10-25 Ацетатный буфер 75-90 при этом ацетатный буфер содержит 0,050,1 М раствор ацетата натрия и 0,05-0,1 М раствор уксусной кислоты, взятых в соотношении 10:1-30:1. Существенными отличиями предлагаемого способа от существующих являются. а) использование стандартного красителя Мая-Грюнвальда для приготовления ра-. бочего раствора красителя; б) использование ацетатного буфера для приготовления красящей смеси; 1807400 в) объемные соотношения стандартного красителя и ацетатного буфера, используемых дпя приготовления рабочего раствора красителя; г) объемные соотношения ацетата натрия и уксусной кислоты в буферной смеси. Ни стандартный краситель Мая-Грюнвальда, ни ацетатный буфер в предлагаемых соотношениях никогда и никем не применялись для выявления клеток крови и соединительной ткани в парафиновых срезах, поэтому предлагаемый способ обладает новизной, Сущность предлагаемого способа отражена в схеме гистологической отработки, 1). Депарафинирование и проведение по батарее спиртов от 100 С до 70 проводится точно так же, как в известном способе. 2). Дистиллированная вода не менее 2 20 минут, 3). Окраска рабочим раствором красителя от 30 мин до 1,5 ч в термостате при температуре 45 — 55 С, 4), Дифференцировка в 96 спирте от 2 до 5 мин, 5). Обезвоживание в ацетоне 1,5 — 2 мин. 6). Просветление в двух порциях ксилола 3 — 5 мин в каждой. 7). Заключение в полистироя, 30 Составы различных вариантов рабочих растворов красителей приведены в таблице, Для работы пригоден любой вариант, Проведенные испытания на парафиновых срезах красного костного мозга кролика показали, что очень четко выявляются псевдоэозинофильные и эозинофильные гранулоциты на различных стадиях созревания, лимфоциты, плазматические клетки, фибробласты, макрофаги, зндотелиальные клет- 40 ки, гладкомышечные и жировые клетки, базофильные, полихроматофипьные и оксифильные нормоциты (нормобпасты), Коллагеновые волокна и эритроциты окрашивались в розовый цвет, 45 Проведенными испытаниями было установлено, что красящие свойства рабочих красителей N. 2 и N. 4 с различной молярной концентрацией ацетатного буфера (0,1 М и 0,05 M) одинаковы, поэтому они одинаково 50 пригодны. Изменение соотношения ацетата натрия и уксусной кислоты от 30:1 до 10:1 (№2, 5, 6 и 7, 8, 9),не приводило к существенным изменениям качества окраски препаратов, значит все эти варианты применимы, Испытания рабочих растворов красителей ¹ 1, 2, 3 с различной концентрацией красителя Мая-Грюнвальда показали, что качество окраски одинаково, однако оптимальное время окраски отличается: оно короче у раствора ¹ 3 и продолжительнее у раствора № 1, однако, как правило, у всех трех растворов колеблется в пределах 0,5 — 1,5 ч, что гораздо меньше,,чем в известном способе (12 — 24 ч). По сравнению с прототипом, заявляемый способ имеет следующие преимущества; обеспечение надежности и воспроизводимости результатов, повышение устойчивости рабочего раствора красителя и многократного его использования и ускорение процесса окраски. Использование рабочего красителя, содержащего водно-метанольную смесь с наличием ацетатного буфера обеспечивает резкое повышение устойчивости рабочего раствора красителя после приготовления, обеспечивающее возможность его многократного использования в течение 2 — 4 недель. В прототипе краситель используется лишь однократно, причем нередко хлопьевидный осадок образуется в момент его приготовления, что требует повторного его приготовления. В отличие от "капризного" по мнению гистологов прототипа, предлагаемый способ надежный, дает воспроизводимые результаты и не требует черезвычайно чистой посуды иэ стекла особого качества. Время окраски в предлагаемом способе в 8-24 раза меньше по сравнению с прототипом. Формула изобретения Способ подготовки парафиновых срезов для гистологического выявления клеток крови и соединительной ткани, включающий его депарафинирование, проведение побатарееспиртовот100 Сдо70 Сизатем в воде, окраску смесью растворов основного и кислого красителей, дифференцировку о в 96 спирте до появления красной окраски эритроцитов с последующим обезвоживанием, просветлением и заключением в бальзам или полистирол, отл и ч а ю щи и ся тем, что, с целью повышения экономичности и ускорения способа, окраску среза проводят смесью стандартного раствора красителя Мая-Грюнвальда и ацетатного буфера при следующем соотношении компонентов, об. 7ь: Стандартный раствор красителя Мая-Грюнвальда 10-25 Ацетатный буфер 75-90 при этом ацетатный буфер содержит 0,050,1 М раствор ацетата натрия и 0,05-0,1 М раствор уксусной кислоты, взятых в.соотно шении 10;1-30:1. 1807400 Компоненты Стандартный раствор красителя-фиксатора Мэя-Грюнвальа 20 20 10 Смесь 0,1 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных соотношениях 20:1 90 Смесь 0,05 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных соотношениях 20:1 Смесь 0,1 M растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных со отношениях 30:1 80 Смесь 0,1 М растворов ацетата натрия и уксусной к-ты в объемных соотношениях 10:1 80 Составитель А.Михеев Редактор С. Кулакова Техред М.Моргентал, Корректор О,Кравцова Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 1376 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5
