Питательная среда для культивирования базидиальных грибов

Изобретение относится к биотехнологии и микологии. Питательная среда содержит в своем составе пивное сусло, глюкозу, калий хлористый, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, аммоний азотнокислый, магния сульфат семиводный, гумат аммония при следующем соотношении компонентов, г/л: K₂HPO₄·3Н₂О - 0,3-1,2; MgSO₄·7H₂O - 0,3-0,6; NH₄NO₃ - 0,1-4,0; KCl - 0,3-0,6; глюкоза - 10,0-35,0; пивное сусло - 4,0-7,2 (по сухому весу); гумат аммония - 0,001-0,1; вода - до 1 л. Использование предлагаемой среды позволяет увеличить выход биомассы мицелия и ускорить процесс его наращивания. 1 табл.

 

Изобретение относится к биотехнологии и к микологии и может быть использовано, в частности, в качестве питательной среды при культивировании базидиальных грибов.

Известна питательная среда для культивирования высших базидиальных грибов на основе пивного сусла (Александрова Е.А., Завьялова Л.А., Терешина в.М., Гарибова Л.В., Феофилова Е.П. Получение плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes (Berk.) Sing. [Lentinula edodes (Berk.) Pegler] // Микробиология, 1998. Т.67. №5. С.649-654).

Недостатком этой среды является небольшой выход биомассы базидиальных грибов, очевидно, из-за отсутствия в ней минеральных веществ.

Известна питательная среда для культивирования съедобных базидиальных грибов, содержащая отходы древесины хвойных деревьев (хвою, кору, опилки, щепу, стружку и т.п.) - 60-75%, питательную добавку - смесь крахмала с гидроокисью кальция, смешанную в равных пропорциях, - 0,8-2,2%, торф - 10-15% и воду (п. РФ №2140731, A01G 1/04, 1998).

Однако указанная питательная среда не подходит для глубинного наращивания биомассы мицелия.

Наиболее близкой к заявляемому техническому решению является питательная среда на основе солодово-росткового экстракта, которая включает глюкозу и минеральные вещества (Матиссон Н.Л., Фалина Н.Н., Якимов П.А., Маслова Р.А. Протеолитическая активность древоразрушающих грибов в связи с синтезом белка и биомассы. / Сб.: Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М. - Л.: изд-во «Наука», 1965. - С.33-38).

Однако известная питательная среда не является универсальной и многие базидиальные грибы имеют низкую ростовую способность на этой среде.

При создании изобретения - питательная среда для культивирования базидиальных грибов - ставилась задача - увеличение выхода биомассы базидиальных грибов.

Задача решается за счет того, что питательная среда для культивирования базидиальных грибов, содержащая пивное сусло, глюкозу, калий хлористый, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, аммоний азотнокислый, магния сульфат семиводный и воду, дополнительно содержит гумат аммония при следующем соотношении компонентов, г/л:

K2HPO4·3Н2О	0,3-1,2
MgSO4·7H2О	0,3-0,6
NH4NO3	0,1-4,0
KCl	0,3-0,6
Глюкоза	10,0-35,0
Пивное сусло	4,0-7,2 (по сухому весу)
Гумат аммония	0,001-0,1
Вода	до 1 л.

Заявленный технический результат выражается в увеличении скорости наращивания биомассы.

Технический результат достигается за счет включения в питательную среду гумата аммония.

Использование гумата аммония позволяет наращивать биомассу мицелия базидиальных грибов без изменения их биологических свойств и способствует увеличению скорости его накопления.

Применение гумата аммония обеспечивает питательной среде необходимое для роста биомассы базидиальных грибов количество органических, минеральных веществ, а также определенный набор витаминов, что способствует увеличению биомассы и решает поставленную задачу.

Кроме того, гумат аммония в силу своей структуры легко гидролизуется и его наличие в питательной среде улучшает поступление в клетку элементов минерального питания и способствует активизации ферментов, что увеличивает скорость наращивания биомассы, а следовательно, способствует достижению заявленного технического результата.

Количественное содержание гумата аммония в предлагаемой питательной среде обуславливает увеличение ее ростовых характеристик, и выход за пределы заявленных значений приводит либо к перерасходу гумата аммония, либо к снижению ростовых свойств питательной среды.

Так, при содержании в питательной среде гумата аммония в количестве 0,001 г/л (пример 1) выход биомассы мицелия составляет 8,3 г/л, увеличение количества гумата аммония до 0,01 г/л почти в 1,5 раза увеличивает выход биомассы (пример 2), однако дальнейшее увеличение количества гумата аммония - 0,1 г/л (пример 3,4) приводит к снижению ростовых свойств питательной среды.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1.

Для приготовления 1 л питательной среды берут компоненты в следующем количестве:

K2HPO4·3Н2O	1,0 г
MgSO4·7H2O	0,5 г
NH4NO3	0,1 г
KCl	0,5 г
Глюкоза	20,0 г
Пивное сусло	5,0 (по сухому весу)
Гумат аммония	0,001 г
Вода	до 1 л.

Все смешивают при нагревании, автоклавируют при 0,8-1 атм в течение 20 мин для стерилизации, затем охлаждают. Полученная питательная среда темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 5,5. Приготовленную среду инокулируют одним стандартным блоком посевного материала диаметром 5 мм, вырезанным из зоны роста колонии штамма на сусло-агаре. За 3 суток культивирования количество мицелия составило 8,3 г/л.

Пример 2 аналогичен примеру 1, а компоненты берут в следующих соотношениях:

K2HPO4·3Н2O	1,2 г
MgSO4·7H2O	0,6 г
NH4NO3	4,0 г
KCl	0,6 г
Глюкоза	35,0 г
Пивное сусло	7,2 (по сухому весу)
Гумат аммония	0,01 г
Вода	до 1 л.

Полученная питательная среда темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 5,5. Приготовленную среду инокулируют одним стандартным блоком посевного материала диаметром 5 мм, вырезанным из зоны роста колонии штамма на сусло-агаре. За 3 суток культивирования количество мицелия составило 12,0 г/л.

Пример 3 аналогичен примеру 1, а компоненты берут в следующих соотношениях:

K2HPO4·3Н2O	0,3 г
MgSO4·7H2О	0,3 г
NH4NO3	0,1 г
KCl	0,3 г
Глюкоза	10,0 г
Пивное сусло	4,0 (по сухому весу)
Гумат аммония	0,1 г
Вода	до 1 л.

Полученная питательная среда темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 5,5. Приготовленную среду инокулируют одним стандартным блоком посевного материала диаметром 5 мм, вырезанным из зоны роста колонии штамма на сусло-агаре. За 3 суток культивирования количество мицелия составило 9,2 г/л.

Пример 4. Аналогичен примеру 1, но гумат аммония берут в количестве 0,1 г.

Полученная питательная среда темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 5,5. Приготовленную среду инокулируют одним стандартным блоком посевного материала диаметром 5 мм, вырезанным из зоны роста колонии штамма на сусло-агаре. За 3 суток культивирования количество мицелия составило 9,0 г/л.

Данные по всем примерам представлены в таблице.

Таблица
Среда	Количество гумата аммония, г/л	Биомасса, г/л
Пример 1	0,001	8,3
Пример 2	0,01	12,0
Пример 3	0,1	9,2
Пример 4	0,1	9,0
Солодово-ростковый экстракт (прототип)	-	5,1
Пивное сусло (контроль)	-	3,5

В контроле питательной средой для культивирования служили среда на основе пивного сусла (Александрова и др., 1998) и среда на основе солодово-росткового экстракта (Матиссон и др., 1965).

Приведенные примеры показывают, что предлагаемая питательная среда по своим ростовым свойствам не уступает прототипу, а превосходит их. Преимущества предлагаемой среды выражаются в способности более активного и ускоренного наращивания биомассы мицелия базидиальных грибов.

Использование предлагаемой среды для культивирования базидиальных грибов в микологических и биохимических исследованиях позволяет увеличить выход биомассы мицелия.

Питательная среда для культивирования базидиальных грибов, содержащая пивное сусло, глюкозу, калий хлористый, калий фосфорно-кислый двузамещенный трехводный, аммоний азотно-кислый, магния сульфат семиводный и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит гумат аммония при следующем соотношении компонентов, г/л:

К2HPO4·3Н2O	0,3-1,2
MgSO4·7H2O	0,3-0,6
КН4NO3	0,1-4,0
KCl	0,3-0,6
глюкоза	10,0-35,0
пивное сусло	4,0-7,2 (по сухому весу)
гумат аммония	0,001-0,1
вода	До 1 л