Способ микроинъекционной трансплантации по в.а. черешневу

Изобретение относится к офтальмологии и может быть использовано при пересадке биологических тканей в орган зрения. Биоматериал измельчают до получения микрочастиц с размерами 5-50 мк в условиях замораживания ниже -50°С. После этого приливают к полученному порошкообразному трансплантату равное количество раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры. Смешивают до образования геля гомогенной консистенции. Набирают гель в шприц и под контролем ультразвукового микроскопа вводят посредством многократных инъекций по 0,01-0,02 мл так, чтобы расстояние между центрами микроинфильтратов было 2 мм, вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всего избранного участка. Способ обеспечивает повышение безопасности и снижение травматичности трансплантации за счет уменьшения повреждающего действия на орган зрения - уменьшения внутреннего напряжения внутри инфильтрата, исключения всасывания трансплантата в кровь и повышение площади соприкосновения инфильтратов друг с другом.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и трансплантологии, и может быть использовано при пересадке биологических тканей в орган зрения.

Известен способ аллопластики, включающий местную анестезию, промывание конъюнктивальной полости раствором фурациллина 1:5000, разрез конъюнктивы в верхней половине глазного яблока в 3 мм от лимба и концентрично ему, отсепаровывание конъюнктивы от склеры, производство разметки резецируемого участка склеры, выкраивание П-образного эписклерального лоскута 6 мм на 6 мм основанием к заднему полюсу глаза на 2/3 глубины склеры, откидывание лоскута и выкраивание из глубоких слоев склеры в области раны от одного до четырех «окошек» глубиной до сосудистой оболочки, размерами 2 мм на 2 мм каждое, выкраивание аллотрансплантата из пуповинного амниона с вартоновым студнем по размерам наружного лоскута склеры, укладывание аллотрансплантата на глубокие слои склеры и накрывание его снаружи наружным лоскутом склеры с последующим ушиванием разрезов (Корепанов А.В. Аллопластика и цитокинотерапия в комбинированном лечении сениальной макулодистрофии. Автореф. дисс.канд. мед. (Ижевск, 2000. - С.6).

Недостатком аллопластики глазного яблока лоскутом, приготовленным из пуповинного амниона с вартоновым студнем по размерам П-образного наружного лоскута склеры размером 6×6 мм и укладываемым на глубокие слои склеры с дополнительно вырезанными в них углублениями размерами по 2×2 мм вплоть до сосудистой оболочки, с последующим накрыванием его снаружи лоскутом склеры и ушиванием хирургических разрезов склеры и конъюнктивы являются травматичность и трудоемкость исполнения вследствие необходимости при реализации оперативной подготовки ложа сложной конструкции для трансплантата. Травматичность тканей органа зрения обусловлена хирургическими разрезами конъюнктивы и склеры и отслойкой лоскутов. Помимо этого, способ опасен вероятностью травмирования артериальных сосудов в сосудистой оболочке глубоких слоев склеры при формировании углублений, что может завершиться тромбозом сосудов и ухудшением кровоснабжения отдельных участков склеры и роговицы, а это может вызвать в них ишемическое повреждение и даже некроз. Кроме этого, пересадка биологической ткани осуществляется при трудоемкой хирургической подготовке ложа для трансплантата сложной конструкции. При этом в подготовленное ложе укладывается крупный изолированный биологический объект размерами 6×6 мм, который из-за своих крупных размеров в процессе пересадки и последующего приживления сам оказывает дополнительное чрезмерное повреждающее действие на ткани органа зрения. Все это может привести к помутнению роговой оболочки в области лимба из-за локальной эпителиально-эндотелиальной дистрофии.

Цель изобретения - повышение безопасности и снижение травматичности способа за счет уменьшения повреждающего действия на орган зрения и ускорения трансплантации.

Сущность предложенного способа микроинъекционной трансплантации, включающего подготовку органа зрения по общим правилам локальной анестезии и асептики, выбор участка для трансплантации, измельчение консервированного биоматериала, определение его количества, контролируемое введение в выбранный участок склеры, заключается в том, что измельчение биоматериала производят при замораживании ниже -50°С вплоть до формирования микрочастиц с размерами 5-50 мк, после чего к порошкообразному трансплантату приливают равное количество раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры, смешивают до образования геля гомогенной консистенции, набирают его в шприц, а затем под контролем ультразвукового микроскопа вводят посредством многократных инъекций по 0,01-0,02 мл на расстоянии 2 мм центров микроинфильтратов друг от друга вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всего избранного участка.

Измельчение биоматериала до образования порошка повышает безопасность последующей трансплантации за счет уменьшения травмирующего действия биоматериала на окружающие ткани, поскольку исключает пересадку цельного сегмента с сохраненной прочностью ткани, лишая биоматериал таким образом возможности приобретения агрессивных свойств, которые присущи только целым, неразрушенным сегментам. Замораживание биоматериала ниже -50°С обеспечивает процесс его измельчения вплоть до формирования порошкообразного биоматериала, состоящего из микрочастиц с размерами от 5 до 50 мк, поскольку лишает биоматериал вязкости и исключает его чрезмерное нагревание в процессе измельчения. Измельчение до размера микрочастиц 5-50 мк обеспечивает гомогенизацию микрочастиц в растворе 0,9% натрия хлорида до формирования геля и обеспечивает перемещение геля в шприц и из него через инъекционную иглу в ткань при инъекции, но исключает всасывание микрочастиц в кровь из постинъекционного инфильтрата, что способствует локальному приживлению ткани. Приливание к порошкообразному биоматериалу равного количества раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры и смешивание их до гомогенного геля обеспечивает оптимальное разведение порошка с образованием геля оптимальной консистенции и с оптимальной текучестью. Многократные инъекции геля с помощью шприца по 0,01-0,02 мл в избранный участок органа зрения на расстоянии 2 мм друг от друга обеспечивают его оптимальное мультимикроинфильтрирование. Диапазон величины объема микроинъекции от 0,01 до 0,02 мл обусловлен техническими пределами разрешенных к клиническому применению современных микрошприцов (в частности, инсулиновых шприцов), минимальными дозируемыми величинами которых являются 0,01 и 0,02 мл. Образование множества отдельных постинъекционных микроинфильтратов из гелевого трансплантата на расстоянии 2 мм их центров друг от друга обеспечивает оптимальную (эффективную и безопасную) их плотность в инфильтрированной области. Использование ультразвукового микроскопа обеспечивает визуализацию процесса микроинфильтрирования ткани, необходимую для контролируемых микроинъекций гелеобразного трансплантата «в нужное место», а также для управляемого инфильтрирования выбранной области до «нужных форм и размеров».

Инфильтрирование тканей гелем, состоящим на 50% из раствора 0,9% натрия хлорида, обеспечивает быстрое (на протяжении 1 минуты) уменьшение внутреннего напряжения внутри постинъекционного инфильтрата за счет уменьшения величины объема введенного трансплантата из-за всасывания в кровь раствора 0,9% натрия хлорида. Наличие биоматериала в геле в виде микрочастиц с размерами от 5 до 50 мк исключает всасывание трансплантата в кровь из инфильтрированной области и обеспечивает его дальнейшее приживление в месте инъекции. При этом минимальный размер соизмерим с величиной диаметра эритроцитов (5-10 мк), а максимальный размер определен техническими возможностями современных мельниц, используемых для измельчения биоматериала в условиях замораживания.

Введение биоматериала в ткань в виде множества изолированных микрообъемов повышает общую площадь их соприкосновения друг с другом, что оптимизирует приживление.

Способ осуществляют следующим образом. Биоматериал (аллотрансплантат) из пуповинного амниона с вартоновым студнем или из плаценты измельчают при замораживании ниже -50°С вплоть до формирования микрочастиц с размерами 5-50 мк, после чего к порошкообразному трансплантату приливают равное количество раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры, смешивают до образования геля гомогенной консистенции, набирают его в шприц, а затем под контролем ультразвукового микроскопа вводят посредством многократных инъекций по 0,01-0,02 мл на расстоянии 2 мм центров микроинфильтратов друг от друга вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всего избранного участка.

Пример 1. Пациентка К. 65 лет поступила в офтальмологическую клинику с диагнозом «Сенильная катаракта левого глаза» для планового хирургического лечения. Произведено хирургическое лечение в виде экстракапсулярной экстракции катаракты с имплантацией искусственного хрусталика. В конце операции после наложения всех хирургических швов для профилактики помутнения роговой оболочки в области лимба из-за возможной локальной эпителиально-эндотелиальной дистрофии вследствие хирургической травмы тканей органа зрения решено было применить способ микроинъекционной трансплантации аллотрансплантата из консервированного пуповинного амниона с вартоновым студнем.

Для этого непосредственно перед операцией произвели измельчение кусочка консервированного пуповинного амниона с вартоновым студнем массой 1,2 г с помощью мельницы марки ММ-6-Д при замораживании в жидком азоте ниже -50°С вплоть до формирования микрочастиц с размерами 5-50 мк. К полученному порошкообразному трансплантату массой 1,0 г прилили равное количество раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры и смешали за счет магнитострикции с помощью ультразвукового аппарата Pieson Master 400 при частоте 20-30 кГц до образования геля гомогенной консистенции. После этого набрали 1 мл полученного геля в одноразовый инсулиновый шприц марки БУ КВАНГ МЕДИКАЛ ИНК. с ценой делений 0,01 мл и с иглой 13 мм и наружным диаметром 0,40 мм.

После завершения хирургической операции под контролем ультразвукового биомикроскопа марки Р60УБМ с помощью инсулинового шприца, заполненного гелеобразным трансплантатом, произвели обкалывание травмированной области органа зрения. Для этого ввели гель в ткани конъюнктивы и склеры посредством 30 микроинъекций по 0,01 мл на расстоянии 2 мм центров микроинфильтратов друг от друга вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всей травмированной области.

Послеоперационный период протекал без осложнений. Пациентка была выписана на 5-е сутки в удовлетворительном состоянии. Ежемесячное наблюдение за состоянием оперированного органа зрения на протяжении полугода подтвердило его удовлетворительное состояние и полную прозрачность роговой оболочки без симптомов локальной эпителиально-эндотелиальной дистрофии.

Пример 2. Пациентка П. 67 лет поступила в офтальмологическую клинику с диагнозом «Сенильная катаракта правого глаза» для планового хирургического лечения. Произведено хирургическое лечение в виде экстракапсулярной экстракции катаракты с имплантацией искусственного хрусталика. В конце операции после наложения всех хирургических швов для профилактики помутнения роговой оболочки в области лимба из-за возможной локальной эпителиально-эндотелиальной дистрофии вследствие хирургической травмы тканей органа зрения решено было применить способ микроинъекционной трансплантации аллотрансплантата из консервированной плаценты.

Для этого непосредственно перед операцией произвели измельчение кусочка консервированной плаценты массой 1,5 г с помощью мельницы марки ММ-6-Д при замораживании в жидком азоте ниже -50°С вплоть до формирования микрочастиц с размерами 5-50 мк. К полученному порошкообразному трансплантату массой 1,0 г прилили равное количество раствора 0,9% натрия хлорида комнатной температуры и смешали за счет магнитострикции с помощью ультразвукового аппарата Pieson Master 400 при частоте 20-30 кГц до образования геля гомогенной консистенции. После этого набрали 1 мл полученного геля в одноразовый инсулиновый шприц марки U-100 INSULIN (SFM Hospital Product GmbH) с ценой делений 0,02 мл и с инъекционной иглой 12,7 мм.

После завершения хирургической операции под контролем ультразвукового биомикроскопа марки Р60УБМ с помощью инсулинового шприца, заполненного гелеобразным трансплантатом, произвели обкалывание травмированной области органа зрения. Для этого ввели гель в ткани конъюнктивы и склеры посредством 20 микроинъекций по 0,02 мл на расстоянии 2 мм центров микроинфильтратов друг от друга вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всей травмированной области.

Послеоперационный период протекал без осложнений. Пациентка была выписана на 5-е сутки в удовлетворительном состоянии. Ежемесячное наблюдение за состоянием оперированного органа зрения на протяжении полугода подтвердило его удовлетворительное состояние и полную прозрачность роговой оболочки без симптомов локальной эпителиально-эндотелиальной дистрофии.

Таким образом, предложенный способ за счет уменьшения трудоемкости и повреждающего действия на орган зрения позволяет снизить травматичность, повысить безопасность и ускорить трансплантацию в орган зрения такого биоматериала, как консервированный аллотрансплантат из пуповинного амниона с вартоновым студнем.

Способ микроинъекционной трансплантации, включающий подготовку органа зрения по общим правилам локальной анестезии и асептики, выбор участка для трансплантации, измельчение консервированного биоматериала, расчет его количества, контролируемое введение в выбранный участок склеры, отличающийся тем, что измельчение биоматериала производят при замораживании ниже -50°С вплоть до формирования микрочастиц с размерами 5-50 мк, после чего к порошкообразному трансплантату приливают равное количество раствора 0,9%-ного натрия хлорида комнатной температуры, смешивают до образования геля гомогенной консистенции, набирают его в шприц, а затем под контролем ультразвукового микроскопа вводят посредством многократных инъекций по 0,01-0,02 мл на расстоянии 2 мм центров микроинфильтратов друг от друга вплоть до заполнения трансплантационными микроинфильтратами всего избранного участка.