Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте



Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте
Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте
Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте
Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте
Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2503961:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (ГБОУ ВПО "РязГМУ Минздравсоцразвития России") (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к способу оценки функционального состояния эндотелия (ФСЭ) экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. Сущность способа состоит в том, что для оценки ФСЭ осуществляют исходный анализ биохимических показателей крови, таких как оксид азота (II), супероксиддисмутаза (СОД), малоновый диальдегид (МДА), проводят аллопластику брюшной аорты, затем осуществляют биохимический контроль через 6 месяцев, выводят животных из эксперимента, далее проводят гистологическое исследование зоны аллопластики аорты с помощью компьютерной морфометрии и осуществляют расчет корреляции. При увеличении уровня метаболитов NO считают развитие утолщения интимы менее выражено, что не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при уменьшении уровня метаболитов N0 развивается гиперплазия интимы, а при увеличении активности СОД и уровня МДА определяют активное развитие утолщение интимы артерии. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки ФСЭ у животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. 3 табл., 5 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при лечении облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей (ОААНК).

В настоящее время функциональному состоянию эндотелия придается большое значение в изучении этиологии, патогенеза облитерирующего атеросклероза, прогрессировании заболевания, развитии осложнений [1]. Основным активным метаболитом, определяющим функциональное состояние эндотелия, большинством авторов признается оксид азота (II) (NO), являющейся локальным тканевым гормоном с множественными эффектами - от противовоспалительного до сосудистых эффектов и стимуляции ангиогенеза [2]. Также в комплексной оценке ФСЭ целесообразно учитывать компоненты перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты [3, 4]. Одним из проявлений эндотелиальной дисфункции в послеоперационном периоде является гиперплазия неоинтимы в зоне реконструкции [1]. Актуальным представляется возможность интерпретации биохимических показателей, отражающих влияние изменений ФСЭ на артериальную стенку, в которой, по сути, и развиваются основные процессы. К сожалению, in vivo выполнить подобное исследование не представляется возможным по объективным причинам.

Цель изобретения - оценка функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивного хирургического вмешательства на брюшной аорте.

Способ заключается в следующем: экспериментальным животным (беспородные кошки, 20 животных массой от 3,0 до 4,5 кг) в соответствии с этическими нормами после оперативного вмешательства (аллопластика инфраренального отдела брюшной аорты) с лабораторным контролем биохимических показателей, оценкой клинических исходов и компьютерной морфометрией зоны реконструкции (анастомозов) при помощи стереометрического анализа. В процессе наблюдения в различные сроки (до операции, через 10 дней после, через 1 месяц и 6 месяцев после вмешательства) проводится лабораторный контроль биохимических показателей с целью оценки функционального состояния эндотелия (определение малонового диальдегида (МДА) колориметрическим методом по реакции 2-тиобарбитуровой кислотой [7]; определение активности супероксиддисмутазы (СОД) спектрофотометрическим (кверцитиновым) методом (Бурмистров C.O., 1997 в модификации); количественное определение стабильных конечных метаболитов оксида азота (II) (NO) [8]. Через шесть месяцев животные наркотизируются и выводятся из исследования, зона пластики изучается макро и микроскопически с применением стереометрического анализа, компьютерной морфометрии. Для гистологических исследований и стереометрии применяется: микроскоп Leica DM3000 с камерой Leica DFC360 FX и программным обеспечением, позволяющим архивировать и анализировать (в т.ч., проводить морфометрические исследования) изображения. Функции анализа изображений включают: измерения (расстояние, угол, периметр, площадь, точки, линии и области гистограммы со статистикой). Стандартная окраска препаратов (гематоксилином и эозином, пикрофуксином, фукселином). Для заключения препаратов под покровное стекло применяется монтирующая среда Био Маунт.

Схема способа: исходный анализ биохимических показателей крови (NO, СОД, МДА) → операция (аллопластика брюшной аорты) → биохимический контроль через 6 месяцев → выведение животных из эксперимента → гистологическое исследование зоны аллопластики аорты (компьютерная морфометрия) → расчет корреляции.

Таблица №1
Морфометрические показатели толщины оболочек сосудов артериального типа
Оболочка сосуда Размер (мкм)
Средняя толщина интимы 73,3±5,7
Средняя толщина средней оболочки 205,7±14,9
Средняя толщина адвентиции 123,6±28,4

По нашим данным показатели у неоперированных животных следующие: средняя толщина нормальной интимы 41,2±3,1 мкм, медии - 195,5±12,2 мкм, адвентиции - 103,7±24,1 мкм. Как видно из представленных данных определяется достоверное увеличение средней толщины интимы в группе оперированных животных. Как известно, основные изменения в стенки магистральных артерий, связанные с утолщением, изменением объема клеток развиваются именно в интиме сосуда [1].

Таблица №2
Значение исследуемых показателей в различные сроки.
До операции Через 10 дней Через 1 мес. Через 6 мес.
МДА ((уе) на MgHb) 19,8861±2,7753 34,5057±5,1141 21,11±1,5010 14,8498±6,1212
СОД (уе) на MgHb 0,1522±0,0267 0,2081±0,0225 0,968±0,0172 1,0092±0,0395
NO (ye) 13,8855±5,6775 24,9168±9,2995 9,423±4,641 8,7±6,783

Из таблицы №2 наглядно представлена тенденция биохимических изменений в различные сроки до и после оперативного лечения. Между результатами биохимических анализов в срок 6 месяцев от выполнения операции и показателями морфометрии проводится корреляционный анализ в различных вариантах по Пирсону, Кендаллу, Спирмену. Изучалась корреляционная связь между изучаемыми биохимическими показателями (МДА, СОД, NO) и средней толщиной интимы (СТИ), для оценки влияния биохимических показателей на реакцию сосудистой стенки. Получены следующие результаты:

Таблица №3
Коэффициенты корреляции по анализируемым показателям.
Коэффициент корреляции Пирсона Значимость ненулевой корреляции Коэффициент корреляции Кендалла Значимость ненулевой корреляции Коэффициент корреляции Спирмена Значимость ненулевой корреляции
NO/СТИ -0,89 Есть -0,87 Есть -0,83 Есть
СОД/СТИ 0,57 Есть 0,53 Есть 0,49 Есть
МДА/СТИ 0,75 Есть 0,69 Есть 0,65 Есть

Полученные результаты свидетельствуют об обратной зависимости между уровнем NO и СТИ, прямой зависимости между СОД и СТИ, МДА и СТИ. Корреляция значима. Таким образом, в случае высокого уровня метаболитов NO развитие утолщения интимы менее выражено и не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при низком уровне метаболитов NO -развивается гиперплазия интимы. Чем выше активность СОД и уровень МДА, тем активнее развивается утолщение интимы (гиперплазия).

Представленный способ позволяет реализовать интерпретацию биохимических изменений характеризующих ФСЭ на артериальную стенку, оценить влияние NO, СОД, МДА на послеоперационное утолщение интимы, прогнозировать развитие гиперплазии интимы in vivo путем анализа представленных показателей в крови лабораторных животных и определения тенденции биохимических изменений в соответствии с корреляционной зависимостью.

Приводим экспериментальное наблюдение.

До операции проводился забор крови из вен тыльной поверхности передней лапы. Были получены следующие результаты: NO=13,2 уе; СОД=0,151 (уе) на Mg Hb, МДА=18,3 (уе) на Mg Hb. Через 2 дня выполнялось оперативное вмешательство.

Под наркозом выполнялась полная срединная лапаротомия, выделялась брюшная аорта, продольная аортотомия, аллопластика брюшной аорты (Рис.1-3). Послойное ушивание раны.

Животные содержались в виварии с соблюдением необходимых условий содержания и пищевого рациона.

Через 10 дней после операции повторно произведен забор крови, получены следующие результаты: NO=8,68 уе; СОД=0,2 (уе) на Mg Hb, МДА=34,5 (уе) на Mg Hb.

Через 1 месяц после операции значение исследуемых показателей было следующим: NO=20,1 уе; СОД=0,962 (уе) на Mg Hb, МДА=21,7 (уе) на Mg Hb.

Через 6 месяцев проводился последний забор крови с целью оценки уровня биохимических показателей: NO=8,4 уе; СОД=0,96 (уе) на Mg Hb, МДА=13,8 (уе) на Mg Hb.

Затем животное наркотизировалось и выводилось из исследования, зона пластики изучалась макро и микроскопически с применением стереометрического анализа, компьютерной морфометрии. Были получены следующие результаты (рис.4): толщина интимы 72,7 мкм (толщина интимы не оперированного животного 41,2±3,1 мкм); средней оболочки 203,4 мкм; толщина адвентиции 122,1 мкм.

На обзорных срезах отчетливо видна гиперплазированная интима, лишенная или частично лишенная эндотелиальной выстилки (рис.4). Волокна в интиме рыхло расположены, внутренняя эластическая мембрана сформирована, местами утолщена. Волокна, ее образующие разнонаправленные, местами истончены (рис.5).

Обозначения: 1 - гиперплазированная неоинтима с воспалительной инфильтрацией.

Развитие неоинтимы физиологический послеоперационный процесс, определяемый взаимным влиянием биохимических показателей. Основными служат СОД, МДА и NO, которые отражают функциональное состояние эндотелия и изменения активности про- и антиоксидантных систем, нарушение баланса которых приводит к патологическому разрастанию неонтимы, т.е. ее гиперплазии. Представленное наблюдение служит иллюстрацией изменений изучаемых показателей в послеоперационном периоде. Выводы о прогностической значимости уровня СОД, МДА и NO сделаны на основании соотношения уровня определяемых показателей со средней толщиной интимы, а не их изолированном колебании в различные сроки после операции. Срок развития гиперплазии интимы различен, так по некоторым данным, формирование неоинтимы происходит в срок от одной недели до одного месяца (W. Van der Giessen, 2007). А.В. Протопоповым (2003) показано, что через 6 месяцев происходила дальнейшая организация неоинтимы и эндотелиального слоя внутренней оболочки сосуда, толщина неоинтимы уменьшалась вследствие стихания воспалительных и пролиферативных явлений. Поэтому образование гиперплазированной неоинтимы могло проходить в различные периоды наблюдения.

Согласно полученным данным уровень МДА через 10 дней после операции увеличился почти в 2 раза (34,5 (уе) на Mg Hb), что является предиктором развития гиперплазии интимы. Через 1 месяц уровень МДА оставался выше исходного значения (21,7 (уе) на Mg Hb). К 6 месяцу уровень МДА снизился ниже дооперационного уровня (13,8 (уе) на Mg Hb), однако, гиперплазия интимы уже развилась, что выявлено при морфометрии зоны реконструкции.

Источники информации

1) Киричук В.Ф., Глыбочко П.В., Пономарева А.И. Дисфункция эндотелия. - Саратов: Изд-во Саратовского мед. ун-та, 2008. - 129 с.

2) Ланкин В.З. Свободнорадикальные процессы при заболевании сердечно-сосудистой системы / В.З. Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Белен- ков // Кардиология.- 2000.- №7.- С.48-61.

3) Enhanced superoxide production in experimental venous bypass graft intimal hyperplasia: role of NAD (P)H oxidase / N. West [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2001.- Vol.21, №2.- P.189-194.

4) Клиническая ангиология: Руководство / Под ред. А.В. Покровского. В двух томах. - М: ОАО «Издательство «Медицина», 2004. - 1400 с: ил.

5) Napoli С, Ignarro LJ. Nitric oxide and atherosclerosis. Nitric Oxid - 2001 - Vol.5 - P.88-97.

6) Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor. Nature. 1987; Vol.327; 534-536.

7) Коробойникова Э.Н. Модификация определения продуктов ПОЛ в реакции с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. дело - 1989 - №7. - С.8-9.

8) Звягина В.И., Калинин Р.Е., Пшенников А.С., Сучков И.А., Матвеева И.В. Фотоколориметрический метод определения уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови.// Астраханский медицинский журнал. Астрахань - 2010. Т.5, №1. С.188-189.

9) Швальб П.Г. и др. Сравнительная оценка влияния открытых артериальных реконструкций и эндоваскулярных вмешательств на функциональное состояние эндотелия. // Кардиология и сердечнососудистая хирургия. 2008. №6. С.44-46.

Способ оценки функционального состояния эндотелия (ФСЭ) экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте, отличающийся тем, что для оценки ФСЭ осуществляют исходный анализ биохимических показателей крови, таких как оксид азота (II), супероксиддисмутаза (СОД), малоновый диальдегид (МДА), проводят аллопластику брюшной аорты, затем осуществляют биохимический контроль через 6 месяцев, выводят животных из эксперимента, далее проводят гистологическое исследование зоны аллопластики аорты с помощью компьютерной морфометрии и осуществляют расчет корреляции и при увеличении уровня метаболитов NO считают, развитие утолщения интимы менее выражено, что не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при уменьшении уровня метаболитов NO развивается гиперплазия интимы, а при увеличении активности СОД и уровня МДА развивается активное утолщение интимы.



 

Похожие патенты:
Предлагаются модели на насекомых, предназначенные отображать проницаемость гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) у млекопитающего, в частности, человека. Изобретение касается способа оценки транспорта химического соединения через ГЭБ, а также применения насекомых в скрининге веществ, обладающих биологическим действием на мозг или центральную нервную систему и/или действующих на заболевание или нарушение, затрагивающее мозг или центральную нервную систему.
Изобретение относится к педиатрии и онкогематологии и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) на разных этапах полихимиотерапии (ПХТ).

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к определению ферментов в костной и хрящевой тканях при изучении регенераторных процессов, и описывает способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях, включающий подготовку образцов исследуемых тканей и гистохимическое исследование срезов полученного материала, где образцы исследуемых костной и хрящевой тканей выдерживают в забуференном растворе нейтрального 10% формалина в течение 1 суток при температуре +4°C, затем обрабатывают в 0,1 М растворе фосфатного буфера сначала в 4 смены по 2 часа каждая, а после в 9 смен по часу с добавлением сахарозы постепенно возрастающей концентрации, после чего исследуемый материал погружают в реагент Tissue-Tek O.C.T.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада.
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной диагностике. Предложен способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ у пациентов с раком легкого в цитологическом опухолевом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи праймеров для выявления 8 делеций в 19 экзоне гена EGFR и замены L858R гена EGFR в 21 экзоне.

Изобретение относится к медицине и касается способа персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающего забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделение ее на пробы и введение в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов.

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Фибробласты кожи, взятые у пациента, культивируют и обрабатывают вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера. Осуществляют направленную дифференцировку фибробластов в клетки ретины. Из клеток ретины выделяют кодирующую РНК гена АВСА4. По наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4 диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Изобретение позволяет эффективно диагностировать предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта по наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4. 3 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к прогнозированию риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови больных хроническим простатитом молодой возрастной группы определяют уровень общего тестостерона, секссвязывающего глобулина с последующим расчетом индекса свободного тестостерона, а также определяют содержание липопротеидов высокой плотности, триацилглицеридов и рассчитывают коэффициент атерогенного риска по формуле. При значении коэффициента атерогенного риска <3,7 прогнозируют высокий риск раннего развития атеросклероза. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ выявления мутации c.-53-2A>G в гене SLC26A5, сопровождающийся развитием несиндромальной аутосомно-рецессивной глухоты. Способ включает выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции. Проводят полимеразную цепную реакцию с возможностью проведения анализа флуоресценции по конечной точке. Амплифицируют одновременно два участка гена SLC26A5 в смеси двух пар последовательностей олигонуклеотидов с флуоресцентной меткой: CACCACAAAGAAGAGATG, TCAGCATGATCCATAGTAC, FAM-agtgtCacTagGggaaaa-BHQ-1, VIC-agtgtCacCagGggaaaa-BHQ-2, фланкирующих область с возможным содержанием мутации c.-53-2A>G в гене SLC26A5. Предложенное изобретение позволяет получить точный, объективный клинический диагноз наследственной аутосомно-рецессивной потери слуха. 1 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области косметики и представляет собой способ определения водостойкости антиперспиранта, включающий: a) отбор участников исследования; b) выполнение требований участниками исследования о не использовании каких-либо продуктов или использовании продуктов, не содержащих антиперспирант, в подмышечных областях в течение требуемого периода; c) очистку подмышечных областей каждого участника исследования; d) нанесение необходимого количества антиперспирантного продукта на одну подмышечную область и плацебо на другую подмышечную область каждого участника исследования; e) выполнение стадии d) до достижения необходимого числа нанесений, если выбирается более одного нанесения; f) после выполнения последнего нанесения проводят водное испытание, включающее круговое движение участников исследования в бассейне и/или плавание в течение периода времени активности в бассейне с глубиной воды, достаточной для смачивания подмышечных областей; g) проведение оценки потоотделения; и h) определение того, проявляет ли антиперспирантный продукт по меньшей мере стандартную антиперспирантную эффективность. 8 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и при выявлении генотипов -308 АА или -308 GA TNFα прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма -308G/A гена фактора некроза опухоли α и при выявлении аллеля -308A TNFα прогнозируют повышенный риск развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития диабетической ангиопатии у больных сахарным диабетом 2-го типа. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарии и предназначено для диагностики вируса инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых. Осуществляют два раунда полимеразной цепной реакции с праймерами B37-B853r и B123-B320r для выявления фрагмента сегмента В, кодирующего РНК-зависимую РНК-полимеразу вируса инфекционного некроза поджелудочной железы с последующим электрофоретическим определением размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности. По наличию на электрофореграмме фрагментов длиной 860 и/или 240 пн в исследуемом образце диагностируют вирус инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых. Предлагаемое изобретение применимо в диагностических исследованиях в научно-исследовательских институтах, ветеринарных лабораториях, рыбоводческих хозяйствах. 2 ил., 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования in vitro способности популяции клеток, полученных из сустава, продуцировать стабильный гиалиновый хрящ in vivo. В популяции клеток определяют экспрессию ряда маркерных генов, включающих позитивный маркер FRZB (Frizzled-Подобный Белок 1). негативный маркер ALK1 (Рецептор Активина А, Типу II-Подобная Киназа) и один или более маркеров, выбранных из группы, состоящей из негативного маркера PEDF (Фактор, Выделенный из Пигментного Эпителия), позитивного маркера COL11 (Коллаген, Тип XI А1), позитивного маркера COL2 (Коллаген, Тип II, Альфа 1) и позитивного маркера FGFR3 (Рецептор Фактора Роста Фибробластов 3). Уровни экспрессии каждого индивидуального маркера представляют с помощью числового значения. Числовые значения комбинируют в кумулятивный показатель, где значение кумулятивного показателя указывает на способность к продукции стабильного хряща. Предлагаемое изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование способности популяции клеток, полученных из сустава, продуцировать стабильный гиалиновый хрящ in vivo. 5 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для прогнозирования сроков формирования абсцесса в фазу секвестрации острого панкреатита и, как следствие, неблагоприятного течения заболевания. Способ прогнозирования сроков формирования абсцесса в фазу секвестрации острого панкреатита включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма +250 A/G Ltα и при выявлении генотипов +250 GG или +250 AG Ltα прогнозируют риск раннего формирования абсцесса в фазу секвестрации острого панкреатита. 1 табл., 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу. Предложенное изобретение может быть использовано для проведения протеомного и фосфопротеомного анализа. Способ включает проведение двумерного электрофореза с последующей идентификацией пятен методами спектроскопии MALDI-TOF или фосфопротеомики. Проводят обессоливание клеточных гомогенатов методом гель-хроматографии или диализа клеточных гомогенатов. Подвергают клеточные гомогенаты дегликозилированию по принципу β-элиминирования в растворе 0,05 М NaOH, который содержит 38 мг/мл NaBH4, в течение 16 часов при +45°C с последующим добавлением цианинового красителя JC-1 в концентрации 10-6 М. Инкубируют клеточные гомогенаты в течение 15 мин при комнатной температуре. Концентрируют гомогенаты осаждением 50% ацетоном, подвергают двумерному электрофорезу с образованием электрофореграмм, анализируемых на флуоресценцию при облучении на трансиллюминаторе синего цвета со светофильтром янтарного цвета, визуально проявляющуюся в виде светящихся в темноте полос. Данные полосы экстрагируют из геля и используют для проведения протеомного или фосфопротеомного анализа. Дополнительный анализ интенсивности и расположения экстрагируемых полос выполняют за счет сравнения окрашенных азотнокислым серебром электрофореграмм гомогенатов до и после процедуры дегликозилирования. Предложенное изобретение позволяет идентифицировать белки, меняющие состав или степень своего O-гликозилирования в результате какого-либо физиологического воздействия на клетку. 5 ил.
Наверх