Способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада



G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2501015:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии человека Сибирского отделения Российской академии наук (ИЭЧ СО РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада. В буккальных эпителиоцитах определяют предрасполагающие и протективные генотипы: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Arg194Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glu185Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Asp1853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His. При преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий. При количественном преобладании протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий. Предложенный способ позволяет проводить оценку генетически детерминированной предрасположенности к формированию повышенного уровня микроядер и протрузий еще до воздействия радиационного фактора. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, генетики человека и может быть использовано для оценки индивидуальной радиочувствительности генома человека (в случаях проживания или работы в условиях воздействия повышенных доз радона).

Известны способы биологической индикации радиационных воздействий, позволяющие подтверждать факт облученности и степень ее тяжести, основанные на определении в лимфоцитах периферической крови обследуемого хромосомных аберраций (ХА) дицентрического типа и Е-37-розеткообразующих лимфоцитов (патент RU 2126156 C1, кл. G01N 33/53, опубл. 10.02.1999).

Известен также способ экспресс-выявления облученных пациентов с повышенными частотами ХА (патент RU 2141658 С1, кл. G01N 33/48, опубл. 20.11.1999). В качестве маркера для выявления пациентов с повышенными частотами ХА после радиационных воздействий используют аномалии ядер интерфазных лимфоцитов типа «хвостов» в мазках крови. По повышенной частоте встречаемости таких лимфоцитов (0,8% и выше) выявляют пациентов с повышенной частотой ХА. К недостаткам данного способа следует отнести отсутствие прогностической значимости, т.к. в данном способе речь идет не о риске накопления хромосомных нарушений, не об определении индивидуальной чувствительности генома до радиационного воздействия, а только об индикации - выявлении лиц с повышенными уровнями хромосомных мутаций после радиационного воздействия. Это существенно сужает область применения и информативность способа.

Наиболее близким способом оценки индивидуальной радиочувствительности может служить способ определения индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию радона в бытовых или производственных условиях по комплексу генетических маркеров (патент RU 2415427 С1, кл. G01N 33/48, опубл. 27.03.2011). Суть метода заключается в том, что у испытуемого из клеток крови выделяют ДНК и определяют предрасполагающие и протективные генотипы генов-кандидатов: маркер Arg280His гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Arg, протективный генотип Arg/His; маркер Argl94Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Arg, протективный генотип Arg/Tip; маркер Asnl48Glu гена АРЕ1 - предрасполагающий генотип Glu/Glu, протективные генотипы Asn/Asn, Asn/Glu; маркер A2455G гена CYP1A1 - предрасполагающий генотип A/G, протективные генотипы А/А и G/G; маркер делеция в гене GSTM1 - предрасполагающий генотип о/о, протективный +, и делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона при количественном преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов, а о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона - при количественном преобладании протективных генотипов.

К недостаткам данного способа следует отнести инвазивность метода (необходимо забирать кровь из локтевой вены). Кроме того, спектр генов, полиморфизмы которых использовались в данном способе, недостаточно широк и не включает многие важные системы ферментов, участвующих в репарации двунитевых разрывов ДНК. Это существенно сужает информативность способа.

Основной задачей предложенного изобретения является разработка способа оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию сверхнормативных доз излучений радона и продуктов его распада путем использования неинвазивных методов определения генотоксических эффектов и генетического полиморфизма, а также повышение прогностической значимости путем привлечения в систему прогноза дополнительных молекулярно-генетических маркеров (генов ферментов репарации ДНК).

Поставленная задача решается в предложенном способе оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада, включающем прогнозирование уровня микроядер и протрузий в буккальных эпителиоцитах путем определения предрасполагающих и протективных генотипов генов-кандидатов: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Argl94Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glul85Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Aspl853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His и делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона при количественном преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий, а о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона - при количественном преобладании протективных генотипов и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий.

При этом оценку индивидуальной чувствительности генома человека проводят при воздействии радона и продуктов его распада в дозах свыше 200 Бк/м3.

Развитие неинвазивных методов стало в последние годы важным направлением работы в цитогенетике человека. Разработаны нетравмирующие методы оценки уровня генетических нарушений. К ним в первую очередь относится метод учета микроядер (МЯ) в клетках буккального эпителия. МЯ может быть образовано фрагментом хромосомы в результате повреждения ДНК либо, в случае повреждения веретена деления, представлено одной или более целыми хромосомами, отставшими в анафазе и не вошедшими в основное ядро. Большое значение имеет также учет протрузий (Пр) типа «язык», «пузырек», «разбитое яйцо», которые возникают в результате различных нарушений генетического аппарата клетки [Сычева Л.П. Биологическое значение, критерии определения и пределы варьирования полного спектра кариологических показателей при оценке цитогенетического статуса человека // Медицинская генетика. - 2007. - 6 (11). - С.3-11]. Микроядерный тест на клетках буккального эпителия оказался высокоинформативным при тестировании генотоксических эффектов лучевой терапии [Tolbert Р.Е., Shy С.М., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development // Mut. Res. - 1992. - Vol.271. - P.69-77]. Однако практически ничего не известно о накоплении микроядер в эпителии при воздействии радона.

Нами было экспериментально установлено, что суммарная частота МЯ и Пр в эпителиоцитах детей, подвергающихся воздействию повышенных доз радона, значимо превышает фоновый региональный уровень. Это свидетельствует о выраженной генотоксичности действия повышенных доз радона на эпителий дыхательных путей. Также нами было показано, что существует широкая вариабельность индивидуальной чувствительности к действию радона (от полного отсутствия Мя и Пр до 25‰). Это может быть обусловлено генетической предрасположенностью.

В качестве маркеров предрасположенности были выбраны гены ферментов репарации ДНК, т.к. именно они отвечают за эффективность восстановления поврежденного генома. Среди широкого спектра данных полиморфных генов нами были найдены те, которые статистически значимо были связаны с индивидуальной повышенной или пониженной чувствительностью к действию высоких доз радона. Это оказались маркеры генов ферментов репарации двунитевых разрывов ДНК (NBS и ATM), эксцизионной репарации нуклеотидов (XPG) и эксцизионной репарации оснований (XRCC1). На основании полученных данных нами был разработан комплекс генетических характеристик, оценка совокупности которых необходима и достаточна для прогноза формирования у человека повышенного уровня клеток с микроядрами и протрузиями, т.е. для прогноза повышенной индивидуальной чувствительности к действию высоких доз радона.

Способ выполняют в следующей последовательности.

1. Формируют группы наблюдений. Для этого формируют две группы доноров с высоким (выше среднего) и низким уровнем МЯ и Пр, образующихся в условиях хронического высокого воздействия радона. В нашей работе были обследованы дети-подростки (318 человек), проживающие в школе-интернате. Было экспериментально установлено, что концентрация радона в воздухе помещений школы-интерната превышает допустимый уровень для эксплуатируемых зданий (до 200 Бк/м3) и составляет, в среднем, 334 Бк/м3 в весенний период и 583 Бк/м3 в зимний период (достигая в отдельных помещениях первого этажа 1000 Бк/м3).

Выбор детей-подростков обоснован тем, что в этом случае минимизируется воздействие таких факторов, как вредные привычки, хронические болезни, исключается влияние профессионального контакта с производственными вредностями. Помимо этого, компактное нахождение всех членов выборки (совместное проживание в школе-интернате не менее 3 месяцев до начала исследования) обеспечивает максимальную унификацию по параметрам питания и условиям проживания. Все доноры не имели хронических заболеваний, были некурящие. В обследование не включали детей, получающих медикаментозное лечение, а также проходивших рентгенологическое обследование в течение 3 мес до сбора материала. На каждого обследуемого был оформлен протокол информированного согласия, подписанный родителями либо лицами, осуществляющими опеку несовершеннолетних. Половозрастная характеристика групп представлена в таблице 1.

Приготовление препаратов буккального эпителия и идентификацию кариологических показателей осуществляли в соответствии с рекомендациями N.Holland [Holland N., Bolognesi С, Kirsch-Volders M., et al. The micronucleus assay in human buccal cells as a tool for biomonitoring DNA damage: The HUMN project perspective on current status andknowledge gaps // Mutat. Res. - 2008. - 659. - P.93-108] и Tolbert [Tolbert P.E., Shy С.М., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development // Mut. Res. 1992. - 271: P.69-77]. Перед взятием образцов буккального эпителия дети тщательно ополаскивали рот очищенной питьевой водой. Затем смоченным в буферном растворе (Tris НСl, EDTA, NaCl, рН 7) шпателем проводили несколько раз с внутренней стороны щеки, после чего шпатель ополаскивали в буферном растворе. Процедуру повторяли 4-5 раз с каждой стороны щеки до помутнения раствора. Клетки осаждали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин, надосадок отсасывали, осадок аспирировали и буферным раствором доводили объем до 10 мл. Промывку проводили 3 раза. После третьей промывки осадок объемом 1 мл раскапывали на предварительно отмытые и подогретые предметные стекла, используя покачивания из стороны в сторону для равномерного распределения клеток по стеклу. Высушенные на воздухе препараты фиксировали фиксатором Кларка в течение 15 мин, окрашивали 2.5% раствором ацетоорсеина при 37°C в течение 1 ч. Докрашивание цитоплазмы клеток проводили 1% спиртовым раствором светлого зеленого в течение 1-2 мин. Анализ препаратов проводили на микроскопе Nikon Е200 при увеличении 40×1.5×10 и 100×1.5×10.

На каждом препарате анализировали 1000 клеток. МЯ идентифицировали как хроматиновые округлые тела округлой или овальной формы с гладким непрерывным краем, размером не более 1/3 ядра, лежащие четко отдельно от основного ядра, не преломляющие свет, имеющие интенсивность окрашивания и рисунок хроматина, как у основного ядра, и находящиеся в одной плоскости с ядром [Tolbert P.Е., Shy С.М., Allen J.W. 1992. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: methods development. Mut. Res. 271: 69-77. Tolbert et al., 1992]. Параллельно с учетом МЯ проводилась регистрация ядерных протрузий типа «пузырек», «язык», «разбитое яйцо», а также таких аномалий, как двуядерность, сдвоенные ядра, ядра с перинуклеарными и ядерными вакуолями, конденсированный хроматин, пикноз, кариорексис, кариолизис, ядра атипичной формы и клетки с апоптозными телами [Юрченко В.В., Кривцова Е.К., Подольная М.А. и др. Использование микроядерного теста на эпителии слизистой оболочки щеки человека // Гиг. Санит. - 2008. - 6. - с.53-56]. Частоту клеток с МЯ, протрузиями ядра, ядром атипичной формы, с двумя ядрами, с круговой насечкой, перинуклеарными и ядерными вакуолями выражали в промилле (‰).

Выделение ДНК из буккального эпителия проводили следующим образом:

1. Для лизирования клеток в суспензию эпителиоцитов добавляли 125 мкл лизирующего буфера (0,1 М Tris-HCl, 0,1 М EDTA, 0,01 М NaCl, 1% SDS, рН 8,0) и осторожно перемешивали до полного смешивания (переворачивали).

2. Лизат подвергали действию протеиназы К (5 мкл - 10 мг/мл). Ставили в термостат на 2 часа при температуре 55°C либо на ночь при температуре 37°C.

3. Добавляли 125 мкл 4М NaCl и раствор перемешивали на вортексе.

4. Охлаждали раствор на льду 5-10 минут.

5. Центрифугировали при 12000 об/мин 15 мин. Охлаждали на льду 2 мин.

6. Если супернатант не чистый, то его переносили в новую пробирку и центрифугировали еще 15 мин.

7. Супернатант, содержащий ДНК, переносили в другую пробирку, добавляли 5 мкл ЛПААГ и равный объем изопропанола.

8. Центрифугировали раствор при 12000 об/мин 15 мин.

9. ДНК промывали 70% этанолом и высушивали при температуре 37°C в течение 15 мин.

10. Высушенную ДНК растворяли в 100 мкл ТЕ буфера (10 mM Tris-HCl, 0,5 mM EDTA, рН 8,0) на шейкере при 68°C 30 мин.

11. Хранили ДНК при -20°C.

Примечание: протеиназу К растворяли в 20 mM CH3COONa. В конечном растворе ее должно быть 150 мкг/мл.

Для генотипирования полиморфных маркеров Arg399Gln и Argl94Trp гена XRCC1, Glul85Gln гена NBS1, Ser326Cys гена hOGG1, Aspl853Asn гена ATM, Asp1104His гена XPG использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) и набор реактивов, разработанный НПФ «Литех» (г. Москва). Амплификацию проводили с использованием амплификатора «Терцик». Электрофоретическое разделение амплифицированных фрагментов проводили в 3% агарозе с последующей окраской бромистым этидием.

В среднем, суммарная частота МЯ и Пр у обследованных доноров всей выборки составила 4,7±0,2‰, что достоверно значимо превышает значения фонового уровня для региона (2,9±0,3‰). Это подтверждает факт генотоксического воздействия радона. Примечательным является то, что, несмотря на сходство воздействующих факторов: интенсивность воздействия радона, возраст, питание, состояние здоровья, 55% детей демонстрируют особенно высокие показатели МЯ и Пр. У 142 человек частота клеток с МЯ и Пр была выше среднего и составила, в среднем, 7,7±0,3‰. Очевидно, что причины подобной повышенной чувствительности генетически детерминированы. Из этих доноров и была сформирована опытная группа. В группу сравнения вошли 176 человек. Средняя частота клеток с МЯ и Пр в данной группе была ниже среднего и составила 2,2±0,1‰. Разница между этими группами была статистически достоверна (р<0,0001).

2. Формируют таблицу относительного риска.

Для статистически значимо отличающихся по критерию χ2 вариантов рассчитывают относительный риск и доверительный интервал по формуле:

R R = O R ( 1 − p D + p D ⋅ O R ) ,

где pD - частота встречаемости доноров с повышенным уровнем МЯ и Пр, OR - отношение шансов, которое рассчитывается по формуле:

O R = ( a + 0,5 ) × ( d + 0,5 ) ( b + 0,5 ) × ( c + 0,5 ) ,

где а+0,5 - количество носителей данного гена/генотипа с высоким уровнем МЯ и Пр; b+0,5 - количество носителей данного гена/генотипа с невысоким уровнем МЯ и Пр; с+0,5 - количество доноров с высоким уровнем МЯ и Пр без данного гена/генотипа; d+0,5 - количество доноров с низким уровнем МЯ и Пр без данного гена/генотипа (с поправкой на малое число наблюдений).

Для построения доверительного интервала берут величину L=lnOR, которую приближенно можно считать нормально распределенной со средним значением:

S = ln [ ( a + 0,5 ) ( d + 0,5 ) ( b + 0,5 ) ( c + 0,5 ) ]

и стандартным отклонением:

σ ( ln O R ) = ( a + b ) ( c + d ) ( a + b + c + d ) ( a + b + c + d − 1 ) .

Нижней и верхней доверительными границами показателя, между которыми его показатели находятся с вероятностью 1-α, соответственно являются величины:

L _ = S − t ∞ ( α ) ⋅ σ ( L )

L ¯ = S − t ∞ ( α ) ⋅ σ ( L )

где t∞(α) - значение критерия Стьюдента, соответствующее вероятности ошибки а; в частности, при построении 95% доверительного интервала α=0,05 и t∞(α)=1,96; при 99% доверительного интервала α=0,01 и t∞(α)=2,58; а при 99,9% доверительного интервала α=0,001 и t∞(α)=3,29.

В качестве нижней и верхней доверительных границ берут антилогарифмы от величин L _ и L ¯ :

e L _ ≤ O R ≤ e L ¯

где е=2,718.

Значения относительного риска для всех причинных генотипов приведены в таблице 2. При относительном риске более 1 делают заключение о предрасположенности, при относительном риске менее 0 - о генетической устойчивости от формирования высокого уровня МЯ и Пр.

3. Формируют таблицу протективных и предрасполагающих генотипов (табл.3).

4. Детальное описание способа.

Пример 1.

У обследуемой Т. 13 лет, проживающей в школе-интернате с повышенным уровнем радона внутри помещений, в среднем, 334 Бк/м3, был взят для анализа буккальный эпителий. Для этого смоченным в буферном растворе шпателем проводили несколько раз с внутренней стороны щеки, после чего шпатель ополаскивали в буферном растворе. Далее данный раствор, представляющий собой суспензию клеток, использовали для приготовления препаратов буккального эпителия и выделения ДНК.

Проводили процедуру подготовки и анализа препаратов буккальных эпителиоцитов. В результате проведенного кариологического анализа эпителия МЯ и ПР у обследованной Т. выявлено не было.

С использованием метода полимеразной цепной реакции и набора реактивов, разработанного НПФ «Литех» (г. Москва), проводили генотипирование нуклеотидных замен Arg399Gln и Argl94Trp гена XRCC1, Glu185Gln гена NBS1, Ser326Cys гена hOGG1, Asp1853Asn гена ATM, Asp1104His гена XPG. Полученные значения генотипов и аллелей представлены в таблице 4. Установлено наличие 1 предрасполагающего и 3 - протективных генотипов. Сделано заключение о генетически детерминированной устойчивости к формированию Мя и Пр в условиях воздействия радона. Это заключение подтвердилось тем, что при анализе эпителиоцитов обследуемой Т. МЯ и Пр выявлено не было.

Пример 2.

У обследуемого Т. 10 лет, проживающего в школе-интернате с уровнем радона внутри помещений, в среднем, 583 Бк/м3 на момент анализа, проводили типирование кариологических показателей и полиморфных маркеров генов. Процедуры выполняли так же, как описано в примере 1. Уровень Мя и Пр составил 4‰. Результаты генотипирования представлены в таблице 5. Выявлено преобладание предрасполагающих генотипов (4 предрасполагающих генотипа и 1 - протективный). Исходя из полученных результатов сделано заключение о существовании высокого риска генетически детерминированных МЯ и Пр при воздействии радона. Это заключение согласуется с результатами кариологического анализа, показавшего высокий уровень МЯ и Пр.

5. Эффективность способа.

Определяли полиморфные гены-кандидаты в группе сравнения у подростков, подвергающихся хроническому воздействию радона. Обнаружили, что из 176 человек с относительно небольшим уровнем МЯ и Пр (2,2±0,1‰) у 45 подростков имело место преобладание предрасполагающих генотипов или равное количество предрасполагающих и протективных генотипов. Это свидетельствует о том, что их индивидуальная чувствительность к воздействию радона повышена.

Мя и Пр у них оказалось больше (2,5±0,2‰), чем у других 131 из 176 подростков с преобладанием протективных генотипов и обладающих индивидуальной устойчивостью к действию радона (2,0±0,1‰, р<0,05). Очевидно, что с увеличением времени воздействия радона уровень Мя и Пр у 131 подростка с генетически детерминированной индивидуальной устойчивостью будет возрастать в меньшей степени, чем у 45 подростков с генетически детерминированной индивидуальной чувствительностью. Таким образом, группа с повышенной чувствительностью к действию радона (142 человека), сформированная с помощью известного метода анализа микроядер в буккальных эпителиоцитах, увеличилась на 45 человек за счет применения предлагаемого способа, включающего в себя определение полиморфных генов-кандидатов. То есть эффективность способа повысилась на 31,7%.

6. Вывод.

Оценка совокупности полиморфизмов генов ферментов репарации ДНК, использованная в предложенном способе, позволила с высокой эффективностью и точностью определять потенциальный риск формирования МЯ и Пр у лиц, подвергающихся воздействию природной радиации. Это может быть использовано для оценки индивидуальной чувствительности к действию радона как внутри жилых помещений, так и в промышленных условиях, например у шахтеров, работающих в условиях воздействия очень высоких доз радона. Предложенный способ обладает большей прогностической значимостью, т.к. позволяет проводить оценку генетически детерминированной предрасположенности к формированию повышенного уровня микроядер и протрузий еще до воздействия радиационного фактора.

Таблица 1
Половозрастная характеристика групп
Показатель Опытная группа (доноры с большим числом микроядер и протрузий) Группа сравнения (доноры с низким числом микроядер и протрузий)
Возраст, лет 12,70 13,19
Мальчики/ девочки 57,4%/48,6% 57,8%/42,3%
Всего человек 176 142
Таблица 2
Риск высокого уровня микроядер и протрузий, ассоциированный с генотипами основных генов-кандидатов
Полиморфный маркер Генотип Относительный риск (RR и 95% CI)
Arg399Gln гена-XRCC1 Arg/Arg 0.25 [0.09-0.66]
Arg/Gln 1.46 [1.01-3.87]
Gln/Gln  
Argl94Trp гена XRCC1 Arg/Arg  
Arg/Trp 2.22 [1.01-5.91]
Trp/Trp  
Glu185Gln NBS1 Gla/Glu 0.57 [0.21-0.92]
Glu/Gln 1.83 [1.09-4.85]
Ser326Cys гена hOGG1 Ser/Ser  
Ser/Cys 1.95 [1.03-5.19]
Cys/Cys  
AspJ853Asn гена ATM Asp/Asp 2.70 [1.02-7.15]
Asp/Asn 0.34 [0.13-0.91]
Asn/Asn  
Aspll04His гена XPG Asp/Asp  
Asp/His  
His/His 0.50 [0.18-0.95]
Таблица 3
Протективные и предрасполагающие генотипы высокого риска микроядер и протрузий у доноров, подвергающихся воздействию радона внутри помещений
Полиморфные маркеры Предрасполагающие генотипы Протективные генотипы
Arg399Gln гена XRCC1 Arg/Gln Arg/Arg
Argl94Trp гена XRCC1 Arg/Trp  
Glul85Gln гена NBSl Glu/Gln Glu/Glu
Ser326Cys гена hOGG1 Ser/Cys  
Asp1853Asn гена ATM Asp/Asp Asp/Asn
Asp1104His гена XPG   His/His
Таблица 4
Результаты генотипирования 1
Полиморфный маркер Генотип RR
Arg399Gln гена XRCC1 Arg/Arg 0.25
Arg194Trp гена XRCC1 Arg/Arg -
Glu185Gln гена NBS1 Glu/Glu 0.57
Ser326Cys гена hOGG1 Ser/Ser -
Asp1853Asn гена ATM Asp/ Asp 2.70
Asp1104His гена XPG His/His 0.50
Таблица 5
Результаты генотипирования 2
Полиморфный маркер Генотип RR
Arg399Gln гена XRCC1 Arg/Arg 0.25
Аге194Тгр гена XRCC1 Arg/Trp 2.22
Glu185Gln гена NBS1 Glu/Gln 1.83
Ser326Cys гена hOGG1 Ser/Cys 1.95
Asp1853Asn гена ATM Asp/Asp 2.70
Asp1104His гена XPG Asp/His -

1. Способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада, включающий прогнозирование уровня микроядер и протрузий в буккальных эпителиоцитах путем определения предрасполагающих и протективных генотипов генов-кандидатов: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Arg194Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glu185Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Asp1853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His и делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона при количественном преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий, а о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона - при количественном преобладании протективных генотипов и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что оценку индивидуальной чувствительности генома человека проводят при воздействии радона и продуктов его распада в дозах свыше 200 Бк/м3.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной диагностике. Предложен способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ у пациентов с раком легкого в цитологическом опухолевом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи праймеров для выявления 8 делеций в 19 экзоне гена EGFR и замены L858R гена EGFR в 21 экзоне.

Изобретение относится к медицине и касается способа персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающего забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделение ее на пробы и введение в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов.

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ).
Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 час при 75°С, последующее приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°С с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%: НNО3 35, Н2О2 5, HF 13,3, деионизированная вода - остальное.
Изобретение относится к медицине и касается способа лабораторной диагностики развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в состоянии индуцированной нейтропении.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к определению ферментов в костной и хрящевой тканях при изучении регенераторных процессов, и описывает способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях, включающий подготовку образцов исследуемых тканей и гистохимическое исследование срезов полученного материала, где образцы исследуемых костной и хрящевой тканей выдерживают в забуференном растворе нейтрального 10% формалина в течение 1 суток при температуре +4°C, затем обрабатывают в 0,1 М растворе фосфатного буфера сначала в 4 смены по 2 часа каждая, а после в 9 смен по часу с добавлением сахарозы постепенно возрастающей концентрации, после чего исследуемый материал погружают в реагент Tissue-Tek O.C.T. Compound, замораживают при -35°C, готовят срезы и визуально определяют наличие щелочной фосфатазы. Способ прост в исполнении, его возможно использовать для определении щелочной фосфатазы в образцах ткани в каждом учреждении медицинского профиля и научной лаборатории без использования специального оборудования. 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к педиатрии и онкогематологии и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) на разных этапах полихимиотерапии (ПХТ). Для чего проводят исследование в крови N-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида (NT-pro-BNP), прогормона предсердного натрийуретического пептида (pro-ANP), белка, связывающего жирные кислоты (БСЖК), ферритина, гепсидина, гомоцистеин, неоптерина до начала ПХТ и уровня ферритина 2 после проведения индукции ремиссии. Выявленные значения показателей вышеперечисленных параметров подставляют в уравнения для расчета изменения показателей ЭКГ, ИЖМ, В(Е-Еа), NT-pro-BNP, ФВ после окончания интенсивной ПХТ. Рассчитывают общий коэффициент К по следующей формуле: К=ЭКГ3×ИЖМ3×В(Е-Еа)3×NT-pro-BNP3×ФВ3. При значениях коэффициента К>0,17 прогнозируют развитие кардиальных осложнений. Изобретение позволяет выбрать тактику сопроводительной терапии для коррекции и предупреждения нарушений функции миокарда у детей острым лимфобластным лейкозом. 6 табл.
Предлагаются модели на насекомых, предназначенные отображать проницаемость гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) у млекопитающего, в частности, человека. Изобретение касается способа оценки транспорта химического соединения через ГЭБ, а также применения насекомых в скрининге веществ, обладающих биологическим действием на мозг или центральную нервную систему и/или действующих на заболевание или нарушение, затрагивающее мозг или центральную нервную систему. Способ включает: введение химического соединения насекомому, имеющему ГЭБ; выдерживание насекомых; препарирование мозга насекомых и измерение концентрации химического соединения в мозге. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу оценки функционального состояния эндотелия (ФСЭ) экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. Сущность способа состоит в том, что для оценки ФСЭ осуществляют исходный анализ биохимических показателей крови, таких как оксид азота (II), супероксиддисмутаза (СОД), малоновый диальдегид (МДА), проводят аллопластику брюшной аорты, затем осуществляют биохимический контроль через 6 месяцев, выводят животных из эксперимента, далее проводят гистологическое исследование зоны аллопластики аорты с помощью компьютерной морфометрии и осуществляют расчет корреляции. При увеличении уровня метаболитов NO считают развитие утолщения интимы менее выражено, что не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при уменьшении уровня метаболитов N0 развивается гиперплазия интимы, а при увеличении активности СОД и уровня МДА определяют активное развитие утолщение интимы артерии. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки ФСЭ у животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. 3 табл., 5 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Фибробласты кожи, взятые у пациента, культивируют и обрабатывают вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера. Осуществляют направленную дифференцировку фибробластов в клетки ретины. Из клеток ретины выделяют кодирующую РНК гена АВСА4. По наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4 диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Изобретение позволяет эффективно диагностировать предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта по наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4. 3 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к прогнозированию риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови больных хроническим простатитом молодой возрастной группы определяют уровень общего тестостерона, секссвязывающего глобулина с последующим расчетом индекса свободного тестостерона, а также определяют содержание липопротеидов высокой плотности, триацилглицеридов и рассчитывают коэффициент атерогенного риска по формуле. При значении коэффициента атерогенного риска <3,7 прогнозируют высокий риск раннего развития атеросклероза. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ выявления мутации c.-53-2A>G в гене SLC26A5, сопровождающийся развитием несиндромальной аутосомно-рецессивной глухоты. Способ включает выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции. Проводят полимеразную цепную реакцию с возможностью проведения анализа флуоресценции по конечной точке. Амплифицируют одновременно два участка гена SLC26A5 в смеси двух пар последовательностей олигонуклеотидов с флуоресцентной меткой: CACCACAAAGAAGAGATG, TCAGCATGATCCATAGTAC, FAM-agtgtCacTagGggaaaa-BHQ-1, VIC-agtgtCacCagGggaaaa-BHQ-2, фланкирующих область с возможным содержанием мутации c.-53-2A>G в гене SLC26A5. Предложенное изобретение позволяет получить точный, объективный клинический диагноз наследственной аутосомно-рецессивной потери слуха. 1 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области косметики и представляет собой способ определения водостойкости антиперспиранта, включающий: a) отбор участников исследования; b) выполнение требований участниками исследования о не использовании каких-либо продуктов или использовании продуктов, не содержащих антиперспирант, в подмышечных областях в течение требуемого периода; c) очистку подмышечных областей каждого участника исследования; d) нанесение необходимого количества антиперспирантного продукта на одну подмышечную область и плацебо на другую подмышечную область каждого участника исследования; e) выполнение стадии d) до достижения необходимого числа нанесений, если выбирается более одного нанесения; f) после выполнения последнего нанесения проводят водное испытание, включающее круговое движение участников исследования в бассейне и/или плавание в течение периода времени активности в бассейне с глубиной воды, достаточной для смачивания подмышечных областей; g) проведение оценки потоотделения; и h) определение того, проявляет ли антиперспирантный продукт по меньшей мере стандартную антиперспирантную эффективность. 8 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и при выявлении генотипов -308 АА или -308 GA TNFα прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма -308G/A гена фактора некроза опухоли α и при выявлении аллеля -308A TNFα прогнозируют повышенный риск развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития диабетической ангиопатии у больных сахарным диабетом 2-го типа. 1 ил., 1 табл., 1 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2013-12-10 2013-12-09T14:38:22
Наверх