Способ определения липидов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2513101:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский Томский политехнический университет" (RU)
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт кардиологии" СО РАМН (RU)

Изобретение относится к медицине. Сущность способа определения липидов заключается в том, что к 10 мл хлороформного экстракта липидов добавляют 25 мкл 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20°C и частоте колебаний платформы 120 в минуту в течение 30 минут получают прозрачный раствор липидов для ферментативного определения триацилглицеридов. Способ позволяет повысить эффективность и точность определения липидов тканей. 1 табл.

 

Известны способы определения липидов в печени и других тканях крыс методом экстракции с последующей тонкослойной хроматографией (Практикум по биохимии. С.Е. Северин, Т.А. Соловьева, М., МГУ, 1989, 509 с.). Для частичной делипидизации липопротеинов крови используется в низких концентрациях (0,1%) неионный детергент Тритон Х-100 (патенты RU 2413952 С1 от 10.03.2011 и RU 2428668 С1 от 10.09.2011 «Способ определения фракций модифицированных липопротеинов крови»; RU 2439580 С1 от 10.01.2012 «Способ определения фракций липопротеинов крови у больных ишемической болезнью сердца»; RU 2439575 С1 от 10.01.2012 и RU 2439581 С1 от 10.01.2012 «Способ оценки эффективности лечения ишемической болезни сердца»; RU 2439576 С1 от 10.01.2012 и RU 2439582 С1 от 10.01.2012 «Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца»)

Известен также способ выделения липидов по методу Фолча (Практикум по биохимии. С.Е. Северин, Т.А. Соловьева, М., МГУ, 1989, 509 с.). Данный способ является наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком данного способа является невозможность его использования для анализа конечного результата, а именно определения ферментативным методом концентрации триглицеридов в печени крыс.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности и точности способа.

Указанная цель достигается дополнительным добавлением к хлороформному экстракту липидов 25 мкл 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20°C и частоте колебаний 120 в минуту в течение 30 минут и получением прозрачного раствора липидов для ферментативного определения триглицеридов.

Новым в данном способе является получение прозрачного раствора липидов для ферментативного определения триглицеридов в печени крыс путем добавления к хлороформному экстракту липидов 25 мкл 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20°C и частоте колебаний 120 в минуту в течение 30 минут.

Следовательно, только комплексная модернизация способа прототипа позволяет получить желаемый результат.

Использование различных детергентов в эксперименте при изучении ишемической болезни сердца и развитии липидемии рекомендовано Всероссийским научным обществом кардиологов согласно положению рекомендаций Европейского общества по изучению атеросклероза «Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза» (г. Москва, 2005; Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008, с.21-32).

В настоящее время перспективными являются методы исследования липидов с неионными детергентами Тритон-Х100 и тезит для солюбилизации гидрофобных белков, липополисахаридов и других гидрофобных молекул. Наиболее часто используется Тритон-Х100. Его химическая формула C14H220(C2H40)n, где n=10. Это полиоксиэтилен-октил-фениловый эфир или полиэтиленгликоль n (1,1,3,3 тетраметил-бутил-фениловый эфир) с достаточно большой молекулярной массой. В настоящее время этот высокомолекулярный детергент заменяется на низкомолекулярный тезит с молекулярной формулой C30H62O10 молекулярной массой 582,81 г/моль. Применение 25 мкл 10% раствора тезита, добавленного к хлороформенному липидному экстракту при одновременном перемешивании смеси при 20°C и частоте колебаний шейкера 120 в минуту в течение 30 минут позволяет получить прозрачный раствор липидов для ферментативного определения триглицеридов. Поэтому для повышения точности способа экспериментальным путем была выбрана концентрация тезита 10% в объеме 25 мкл, позволяющая получить абсолютно прозрачный раствор липидов для дальнейшего исследования (табл.1). Меньшая концентрация тезита не позволяла получить абсолютно прозрачный раствор, а большая концентрация тезита не являлась оптимальной для проведения дальнейших ферментативных исследований липидов (триглицеридов, холестерол и др.). Одновременное добавление раствора тезита к хлороформному экстракту липидов, перемешивание смеси при 20°C и частоте колебаний шейкера 120 в минуту в течение 30 минут позволяет повысить точность способа и получить желаемый результат.

Предлагаемый способ позволяет получить абсолютно прозрачный хлороформный экстракт липидов для дальнейшего ферментативного определения триглицеридов печени крыс.

Каждый вновь введенный в формулу изобретения признак выполняет функцию повышения точности и эффективности способа: добавление к хлороформному экстракту липидов 25 мкл 10% раствора тезита, одновременное перемешивание смеси при 20°C и частоте колебаний шейкера 120 в минуту в течение 30 минут для получения прозрачного раствора липидов и последующего ферментативного определения триглицеридов.

В химической промышленности используются различные детергенты (при изготовлении стирального порошка, моющих средств и т.д.), но при работе с биологическим материалом используется преимущественно тезит. Режим обработки пробы тезитом подбирался на основе экспериментальных исследований эмпирическим путем. Для этого использовали различный разведения тезита, различную температуру и различную экспозицию в минутах. При использовании различных концентраций раствора тезита малые концентрации (а именно 1%) не позволяли получить абсолютно прозрачный раствор, а высокие концентрации (а именно 20%) не позволяли выполнить дальнейшее ферментативное исследование триглицеридов печени крыс.

Результат проведенного исследования представлен в таблице 1: «Исследование влияния детергента тезит на получение прозрачного раствора липидов для ферментативного определения триглицеридов печени крыс». Следовательно, оптимальными условиями обработки пробы хлороформного раствора липидов раствором тезита является концентрация 10% в объеме 25 мкл, при температуре 20°C в течение 30 минут с обработкой ее в шейкере с частотой колебаний 120 в минуту.

Экстракция липидов из биологического материала осуществляется общепринятым методом.

Липиды - вещества, имеющие различное химическое строение, но обладающие общим свойством: высокой растворимостью в неполярных растворителях. Имеют гидрофобный характер. Различают нейтральные липиды (свободные жирные кислоты и их эфиры, моно-, ди-, и триацилглицерины, стероиды, воски, углеводороды) и полярные липиды (глицерофосфолипиды, сфинго- и гликолипиды, цереброзиды).

При экстракции липидов принимают во внимание то, что они способны не только к гидрофобным взаимодействиям, но и к образованию водородных, электростатических и ковалентных связей (сложно-эфирных, амидных, гликозидных). Относительно неполярные растворители (хлороформ, бензол, диэтиловый эфир) разрушают комплексы, образованные гидрофобными взаимодействиями в жировой ткани, хиломикроны, комплексы альбумина с жирными кислотами. Полярные растворители (этанол, метанол) разрушают водородные и электростатические связи. Их применяют в смеси со слабополярными растворителями при экстракции липидов из плазматических мембран, митохондрий, эндоплазматического ретикулума печени. Липиды, находящиеся в комплексах, образованных ковалентными связями, растворителями не экстрагируются. Их можно выделить только после гидролиза с использованием органического растворителя.

Наиболее распространенным методом экстракции липидов является метод Фолча. Экстракцию проводят смесью хлороформ-метанол (2:1) из расчета 20 частей экстрагирующей смеси на одну часть ткани. Метод позволяет выделить 90-95% всех клеточных липидов. Смеси растворителей, содержащие спирт, экстрагируют также нелипидные вещества (сахара, аминокислоты, соли и т.д.) Для удаления нелипидных примесей экстракт липидов промывают водой или слабыми солевыми растворами. Однако это приводит к частичной потере кислых липидов.

Липиды легко подвергаются окислению и гидролитической деградации. Чтобы затормозить эти процессы, экстракцию липидов проводят при комнатной температуре, применяя растворители, из которых предварительно удален кислород. Извлеченные липиды не упаривают досуха и не оставляют в упаренном виде на долгое время, а сразу растворяют. Экстракты липидов следует хранить в плотно закрытой посуде при -20°C и ниже в присутствии инертных газов. Можно применять антиоксиданты, например 2,6-ди-трет-бутил-крезол, который в концентрации 0,005% эффективно предотвращает окислительное расщепление ненасыщенных липидов.

Некоторые растворители содержат или накапливают при хранении вещества, разрушающие липиды. Так, при хранении диэтилового и петролейного эфира накапливаются перекиси, окисляющие двойные связи. При хранении хлороформа и дихлорметана образуется фосген, реагирующий с окси- и аминогруппами. Небольшие количества альдегидов, содержащихся в первичных спиртах, также реагируют с окси- и аминогруппами и активированными метиленовыми группировками.

Чтобы удалить примеси, растворители подвергают специальной обработке. Свежий хлороформ перегоняют и хранят в темной склянке с добавлением 1% метанола или этанола Хлороформ после длительного хранения промывают водой, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Метанол и этанол (95 или 99%) перегоняют над гранулированной гидроокисью калия, хранят в темной склянке 1-2 мес.

Процедура экстракции липидов должна приводить к количественному извлечению клеточных липидов в неизмененном виде. Липидный экстракт не должен быть загрязнен нелипидными веществами, такими как сахара и аминокислоты. Эффективность экстракции липидов в значительной степени зависит от химической природы липидных компонентов и от вида комплексов, которые образуют липиды в клетке с другими классами природных соединений. Известны три основных типа взаимодействия липидов с другими веществами.

I-й тип взаимодействия это:

ван-дер-ваальсово гидрофобное взаимодействие «нейтральных» или неполярных липидов, таких как эфиры стеринов, глицериды, углеводороды, каротиноиды, которое связывает относительно слабыми нековалентными связями их углеводородные цепи с другими липидами или с гидрофобными участками белков. Такое взаимодействие осуществляется, в частности, в жировой ткани, хиломикронах, комплексах альбумина с жирными кислотами, жировых образованиях микробных клеток и т.п.

II-й тип взаимодействия это:

образование водородных связей - электростатическое или гидрофобное взаимодействие, при котором полярные липиды (фосфатиды, гликолипиды, холестерин) образуют связи с белками, как это имеет место в плазматических мембранах, митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме и липопротеинах сыворотки.

III-й тип взаимодействия это:

образование комплексов, в которых жирные кислоты (нормальные или разветвленные) и оксикислоты связаны ковалентными связями (сложноэфирными, амидными или гликозидными) с полисахаридами, как это имеет место в липополисахаридах клеточных стенок бактерий.

Из комплексов, образованных в результате ван-дер-ваальсового гидрофобного взаимодействия, липиды можно экстрагировать относительно неполярными растворителями, такими как этиловый эфир, хлороформ или бензол. Липиды, связанные в мембранах, экстрагируются полярными растворителями, такими как этанол или метанол, разрушающими водородные связи и нарушающими электростатическое взаимодействие белков с липидами. Ковалентно связанные липиды не экстрагируются никакими растворителями: их можно выделить лишь, расщепив комплекс с помощью кислотного или щелочного гидролиза.

При выборе метода экстракции необходимо принимать во внимание и химическую природу липидов. Обычно, чтобы предотвратить окисление двойных связей, непосредственно перед экстракцией растворители перегоняют и удаляют из них перекиси. Растворители, применяемые для извлечения высоконенасыщенных липидов, следует дезаэрировать, пропуская через них азот, и затем все операции проводить в атмосфере азота. Липидные экстракты не следует ни упаривать досуха, ни оставлять в упаренном виде на долгое время; извлеченные липиды надо как можно скорее растворять в подходящем растворителе (хлороформе). Температура, при которой проводится экстракция, должна быть не выше комнатной (или ниже, если это необходимо} для того, чтобы затормозить окисление и гидролитическое расщепление липидов. Старые способы экстракции кипящим растворителем в аппарате Сокслета должны быть исключены.

Другой фактор, который следует принимать во внимание, это ферментативная деградация липидов во время экстракции. Вообще, содержащие спирт смеси растворителей вызывают дезактивацию большинства фосфатидаз и липаз. Более стабильные ферменты разрушаются при 1-2 минутном контакте с кипящей водой или горячим спиртом.

Из вышесказанного следует, что спирт является необходимым компонентом всех смесей, употребляемых для экстракции липидов, так как он разрушает комплексы липидов с белками, растворяет липиды и дезактивирует ферменты, вызывающие расщепление липидов. Однако смесь растворителей, содержащих спирт, наряду с липидами экстрагирует содержащиеся в клетках нелипидные вещества, такие как сахара, аминокислоты, соли и т.д. Поэтому неочищенный липидный экстракт нужно обработать так, чтобы удалить все водорастворимые примеси. Наиболее распространенной процедурой такого рода является промывка экстракта водой, приводящая в некоторых случаях к образованию очень стабильных эмульсий. Освобождают липиды от нелипидных примесей, также пропуская неочищенные экстракты через колонки, заполненные целлюлозой или сефадексом, или проводя диализ через специальные мембраны.

Одним из наиболее часто применяемых и эффективных способов экстракции липидов является экстракция по Блайю и Дайэру - упрощенный вариант «классической» методики Фолча. При экстракции по этому методу используют однофазную систему растворителей хлороформ-метанол-вода (1:2:0,9 по объему), которая быстро и эффективно извлекает липиды. Экстракт разбавляют одним объемом воды и одним объемом хлороформа. В результате образуется двухфазная система, нижний слой которой состоит из хлороформа, а верхний - из смеси метанола и воды. Водорастворимые нелипидные примеси переходят в водно-метанольный слой, в то время как в хлороформном слое остаются липиды, практически свободные от загрязнений.

Дальнейшее исследование липидов проводится с помощью тонкослойной хроматографии и других химических методов. Существуют стандартные ферментативные методы исследования концентрации липидов в прозрачных средах. Для получения такой среды в хлороформ добавляют поверхностно-активные вещества, неполярные детергенты, такие как тезит.

В настоящее время тезит широко используется не только в биохимии, но и в фармации, где он добавляется к лекарственным препаратам для лечения нейродермита, дерматоза, экземы (http://medicalplanet.su/dermatology/142.html Medicaplanet) Тезит используется в биохимических наборах для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке крови (БИЛИРУБИН ОБЩИЙ «ДДС»)

Однако в клинической лабораторной практике наиболее значимо использование тезита для изучения концентрации липидов в липидных экстрактах. Все сказанное свидетельствует о крайней важности разработки способов лабораторных исследований высокоточных и чувствительных методов количественного исследования липидов разных тканей. В то же время популярность способа количественной оценки липидов тканей в хлороформных экстрактах с добавлением детергента обусловлена его высокой чувствительностью, простотой осуществления и достаточной адекватностью получаемых результатов (Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008, С 21-32.).

Существенные признаки, характеризующие изобретение, проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области, и не являются очевидными для специалиста.

Идентичной совокупности признаков не обнаружено при изучении патентной и научно-медицинской литературы.

Данное изобретение может быть использовано в медицинской практике для повышения точности изучения липидов тканей при ишемической болезни сердца и других заболеваниях. Таким образом, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности: «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Метод основан на экстракции липидов тканей смесью Фолча (Российский химико-аналитический портал, Folch, J.A simple method for the isdation and purification of total animal tissue/Folch, M Jees, Sloane Stanley g.H. // The Journal boil. Chemistry. - 1957. - №1. - p.497-509.)

Способ прототип осуществлялся следующим образом.

К 6 г печени крысы добавляют 3 мл воды и измельчают в гомогенизаторе Поттера-Эльвехейма (Potter-Elvehjem). Гомогенизат центрифугируют, супернатант декантируют и остаток реэстрагируют 38 мл смеси: хлороформ-метанол-вода (1:2:0,9 по объему) в гомогенизаторе в течение 2х минут. Ткань отделяют центрифугированием. Объединенный супернатант разбавляют 20 мл хлороформа и 20 мл воды. Водно-метанольную и хлороформную фазу разделяют центрифугированием. Нижний хлороформный слой концентрируют на роторном испарителе при 35°C. Для удаления воды добавляют бензол и упаривают его в вакууме. К упаренному остатку липидов добавляют 10 мл хлороформа с 25 мкл 20% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера ПЭ - 6300М при 20°C и частоте колебания платформы 120 в минуту в течение 30 минут с последующим определением триглицеридов ферментативным методом набором «триглицерол-ново» (жидкая форма) кат № В8322 фирмы «вектор» БЭСТ (г. Новосибирск) при длинне волны 500 нм спектрофотометрически при 25°C. Опытная и калибровочная проба составляют 10 мкг. Концентрацию триацилглицеридов рассчитывают по формуле С=Е/Екх2,29, где 2,29 концентрация триглицеридов в калибраторе, ммоль/л) делают перерасчет на 1,00 г сырого веса печени.

Исследование триглицеридов по способу-прототипу и предлагаемому способу выполнялось 20 раз. Результаты исследования обработаны статистически с использованием пакета программ StatSoft Statistica v6.0 с определением среднеарифметического (M) и его ошибки (m).

При проведении исследований по способу-прототипу уровень триглицеридов составил 5,8±0,6 мг на 1,0 г массы печени, а при исследовании по предлагаемому способу уровень триглицеридов составил 8,4±0,7 мг/1,0 г массы печени, что соответствует значениям нормы по данным литературы и современным результатам (г Томск, 20-22 апреля, 2009 г.)

Итак, при применении способа-прототипа был получен недостаточно точный результат, что связано с недостаточной прозрачностью исследуемого раствора, а наиболее эффективным и точным был предлагаемый способ.

При этом предлагаемый способ прост в исполнении и интерпретации полученных результатов.

Таблица 1
Исследование влияния детергента тезит на получение прозрачного раствора липидов для ферментативного исследования триглицеридов печени крыс
Детергент Концентрация Время инкубации Температура, °C Результат
Тезит 25 мкл 1% 20 мин 15 -
Тезит 25 мкл 1% 30 мин 20 -
Тезит 25 мкл 1% 40 мин 25 -
Тезит 25 мкл 10% 20 мин 15 -
Тезит 25 мкл 10% 30 мин 20 Раствор прозрачный
Тезит 25 мкл 10% 40 мин 25 -
Тезит 25 мкл 20% 20 мин 15 -
Тезит 25 мкл 20% 30 мин 20 -
Тезит 25 мкл 20% 40 мин 25 -

Способ определения липидов в печени крыс путем хлороформенной экстракции липидов печени по Фолчу, отличающийся тем, что дополнительно добавляют 25 мкл 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20° и частоте колебаний 120 в минуту в течение 30 минут и получают прозрачный раствор липидов для ферментативного определения триглицеридов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Представлен способ, основанный на измерении в вагинальных соскобах уровня экспрессии мРНК генов интерлейкинов IL1B, IL8, IL10 и IL18 относительно представленности мРНК референсных генов B2M, GUS, TBP или HPRT; на основании полученных уровней экспрессии вычисляется значение канонической линейной дискриминантной функции (КЛДФ) следующим образом: Y=1,09*IL1B-0,61*IL8+0,21*IL10-0,11*IL18-0,91 (формула 1), где IL1B - относительный уровень экспрессии IL1B, IL8 - относительный уровень экспрессии IL8, IL10 - относительный уровень экспрессии IL10, IL18 - относительный уровень экспрессии IL18; IL=2^(Cpmin-Cpil)/NF (формула 2), где IL - относительный уровень экспрессии гена интерлейкина, Cpmin - коэффициент минимального значения уровня экспрессии, для IL1B Cpmin=17,9; IL8 Cpmin=16,6; IL10 Cpmin=28,8; IL18 Cpmin=23,3; Cpil - значение порогового цикла соответствующего IL в образце, определяемого автоматически; NF - фактор нормировки, вычисляется по формуле 3: (формула 3), где NF - фактор нормировки, вычисляемый как среднее геометрическое 4 факторов нормировки для референсных генов (см.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития бронхиальной астмы. Осуществляют выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови больного.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики вариантов поражения проводящей системы миокарда при инфекционной кардиомиопатии у детей.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для определения адгезии золотистого стафилококка. Для этого исследуют чистую культуру золотистого стафилококка в концентрации 1 млрд/мл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для прогнозирования сроков формирования абсцесса в фазу секвестрации острого панкреатита и, как следствие, неблагоприятного течения заболевания.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования in vitro способности популяции клеток, полученных из сустава, продуцировать стабильный гиалиновый хрящ in vivo.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарии и предназначено для диагностики вируса инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма -308G/A гена фактора некроза опухоли α и при выявлении аллеля -308A TNFα прогнозируют повышенный риск развития ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2-го типа.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования сроков наступления реактивной фазы острого панкреатита. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизма гена фактора некроза опухоли α и при выявлении генотипов -308 АА или -308 GA TNFα прогнозируют риск позднего наступления реактивной фазы острого панкреатита.
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для выявления развития гиперплазии неоинтимы и рестеноза сонных артерий после ангиореконструктивных операций на них у больных с прогрессирующим церебральным атеросклерозом без использования ангиовизуализации. Больному с прогрессирующим церебральным атеросклерозом после проведения ангиореконструктивных операций на сонных артериях не более чем через 6 месяцев иммуноферментным методом определяют в сыворотке крови содержание биомаркера липопротеин-ассоциированной фосфолипазы A2 (Lp-PLA2) и при значении его уровня 360 нг/мл и более выявляют развитие гиперплазии неоинтимы и рестеноза в оперированной сонной артерии. Способ обеспечивает высокую точность выявления развития гиперплазии неоинтимы и рестеноза у больных с прогрессирующим церебральным атеросклерозом после ангиореконструктивных операций на сонных артериях.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики негативного воздействия формальдегида на нарушение конъюгационной и элиминационной функций глутатионовой системы у детей, проживающих на территории, характеризующейся повышенным содержанием данного соединения в атмосферном воздухе. Способ заключается в следующем: производят отбор пробы крови у детей, определяют в цельной крови содержание формальдегида, а также определяют в сыворотке крови активность следующих лабораторных показателей: глутатионпероксидазы, глутатион-S-трансферазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Затем устанавливают корреляционную зависимость между содержанием формальдегида в крови и указанными лабораторными показателями. При одновременном установлении достоверных зависимостей: повышенное содержание формальдегида - пониженная активность глутатионпероксидазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и повышенная активность глутатион-S-трансферазы - судят о негативном воздействии формальдегида на осуществление конъюгационной и элиминационной функции глутатионовой системы детского организма. Способ обеспечивает возможность на ранней стадии прогнозировать нарушение конъюгационной и элиминационной функции глутатионовой системы. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к мутеинам липокалина слезной жидкости человека, и может быть использовано в медицине. Мутеин липокалина слезной жидкости человека (hTLc) имеет обнаруживаемую аффинность связывания с рецепторной тирозинкиназой Met (c-Met) человека, или ее доменом, или фрагментом c-Met человека. Мутеин содержит от 6 до 18 аминокислотных замен относительно аминокислотной последовательности зрелого липокалина слезной жидкости человека (SWISSPROT DATABANK ENTRY P31025; SEQ ID NO:36), которые выбраны из группы, состоящей из Arg 26→Thr, Val, Pro, Ser, Gly; Glu 27→Gln, Gly, Val, Ser; Phe 28→Met, Asp; Pro 29→Leu, Ile, Ala, Trp; Glu 30→Leu, Gly, Arg, Phe; Met 31→Ser; Asn 32→Leu, Arg, Val, Gln; Leu 33→Tyr, Val, Ile, Thr, Phe; Glu 34→Val, Arg, Ala; Leu 56→Asn; Ile 57→Gln; Ser 58→Ile, Val; Asp 80→Tyr; Lys 83→Ala; Glu 104→Asp; Leu 105→Thr; His 106→Trp и Lys 108→Gly. Также мутеин может дополнительно содержать следующие замены: Cys 61→Ser; Cys 101→Ser; Cys 153→Ser; Arg 111→Pro; Lys 114→Trp; Thr 37→Ser; Met 39→Ile, Leu; Asn 48→Ser; Lys 52→Thr, Met; Met 55→Leu; Lys 65→Arg, Leu; Ala 79→Leu, Ser; Ala 86→Thr; Ile 89→Ser, Gln, Thr, His; Thr 40→Cys; Glu 73→Cys; Arg 90→Cys; Asp 95→Cys; Lys 121→Cys; Asn 123→Cys и Glu 131→Cys. Изобретение позволяет эффективно лечить патологические расстройства, в которые вовлечен путь HGF/c-Met, а также проводить идентификацию c-Met человека в образце. 12 н. и 38 з.п.ф-лы, 16 ил., 9 табл., 25 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики гепатита и цирроза печени. Сущность способа состоит в том, что у больного дополнительно в сыворотке крови определяют уровень IgG антител к ламинину-1. При значении этого показателя от 0 до 11,9 Ед/мл определяют гепатит, при от 12 до 17,9 Ед/мл - сомнительный результат, требующий через три месяца повторного исследования, а при уровне IgG антител к ламинину - 18 Ед/мл и более выявляют цирроз печени. Использование способа позволяет повысить достоверность диагностики, по сравнению с биопсийным методом, снизить травматичность исследования, упростить диагностику, сократить время дифференциальной диагностики и стоимость исследования, обеспечить более обоснованную тактику лечения. 4 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения чувствительности рака почки к иммунотерапии после проведения нефрэктомии, включающий верификацию диагноза, проведение нефрэктомии рака почки, забор опухолевой и нормальной ткани почки для определения уровня экспрессии цитокинов IL-4, IL-6, IL-10, TGFβ и расчет соотношения уровня экспрессии цитокинов в опухолевой и нормальной ткани почки. При превышении уровня экспрессии цитокинов в опухолевой ткани почки над нормальной терапию считают показанной. Изобретение позволяет эффективно определять чувствительность рака почки к иммунотерапии на основании данных экспрессии цитокинов в опухолевой ткани. 2 табл., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к биологии и медицине, а именно к области биохимических анализов, и позволяет определять качественно или количественно наличие лиганда в образце. Сущность изобретения заключается в способе определения содержания молекул, по крайней мере, одного типа лиганда в образце, в котором выбирают агент или носитель, имеющий блокируемый объект, не способный специфически взаимодействовать с определяемым лигандом и участвующий прямо или косвенно в произведении детектируемого сигнала, причем на изменение детектируемого сигнала, по которому определяют лиганд в образце, влияет пространственная или пространственно-электростатическая блокировка упомянутого блокируемого объекта. Технический результат при использовании изобретения состоит в повышении чувствительности метода к определяемому лиганду, сокращении времени проведения анализа, уменьшении количества требуемых реагентов для проведения анализа, повышении удобства проведения анализа, обеспечении возможности проведения анализа, в том числе в полевых условиях. 7 н. и 35 з.п. ф-лы, 10 пр., 7 ил.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования флотирующего тромбоза глубоких вен в системе нижней полой вены. Проводят клинико-лабораторные и инструментальные методы исследования и при наличии признаков, связанных с тромбозом глубоких вен, дополнительно проводят молекулярно-генетический анализ гена ингибитора активатора плазминогена первого типа (PAI-1). При выявлении полиморфного варианта -675 4G/4G гена PAI-1 прогнозируют наличие флотации тромба. Изобретение обеспечивает эффективный способ прогнозирования флотации тромба в системе нижней полой вены и позволяет целенаправленно использовать медикаментозную коррекцию фибринолиза. 2 табл., 5 пр.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии. Группа изобретений включает способ и систему для определения количества культивируемых микробных клеток, таких как E.coli, Ps.aeroginosa, или смеси микробных клеток (например, для определения суммарного количества микробов) в исследуемом образце. При этом указанный способ включает (i) приведение во взаимодействие исследуемого образца, который может содержать культивируемые микробные клетки, с по меньшей мере одним сигнальным агентом, способным связываться с мембраной микробной клетки, указанное приведение во взаимодействие производится в течение предварительно определенного первого периода времени (T1), достаточного для интернализации сигнального агента в микробную клетку до такого уровня, при котором сигнал, испускаемый образцом, по существу достигает плато; (ii) удаление из указанного исследуемого образца неинтернализованного сигнального агента; (iii) в течение второго периода времени (T2), следующего за указанным первым периодом времени (T1), на протяжении которого указанный сигнал по существу сохраняется на уровне указанного плато, обнаружение среди сигнальных объектов в указанном образце сигнальных культивируемых клеток, основанное на параметрах отбора, предварительно определенных для указанных культивируемых клеток; и (iv) определение на основании указанных выбранных сигнальных объектов количественного значения, указывающего на количество культивируемых клеток в исследуемом образце. Группа изобретений позволяет, практически в реальном времени, получить высокоточное количественное значение, отражающее содержание микробных клеток в образце, которое может быть эквивалентом КОЕ. 2 н. и 37 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, педиатрии, терапии, и может быть использовано для определения стадии дефицита железа как у беременных женщин и детей, так и у других групп населения. Способ состоит в том, что одномоментно определяют содержание сывороточного железа и ферритина и при значениях сывороточного железа менее 12,0 мкмоль/л и ферритина больше или равно 15 мкг/л определяют первую стадию дефицита железа, при содержании сывороточного железа больше или равно 12,0 мкмоль/л, а ферритина менее 15 мкг/л определяют вторую стадию дефицита железа, при значениях сывороточного железа менее 12,0 мкмоль/л и ферритина менее 15 мкг/л определяют третью стадию дефицита железа. Способ обеспечивает возможность оценить норму и дефицит железа на доклинической стадии для диагностических, терапевтических целей на ранних этапах заболевания, а также наблюдения за результатами лечения в динамике. Табл.1, пр.3.
Изобретение относится к медицине, точнее к профилактической медицине, гигиене, и может быть использовано для определения дермальной экспозиции при оценке риска вредного воздействия пестицидов на работающих при их применении в условиях сельскохозяйственного производства, фермерских и личных хозяйствах и других отраслях. Способ включает получение серии экспонированных смывов с различных участков кожи работающего в натурных условиях обработки препаратом с использованием рекомендованной смывающей жидкости, количественную идентификацию вещества в ходе химического анализа, расчет средней дермальной экспозиции (Дcр), при этом в качестве биологической модели для создания экспонированного смыва применяют подготовленную изолированную свиную кожу, выполняют не менее 10 нанесений дозированных количеств определяемого вещества, затем его смывов, устанавливают среднюю величину полноты смыва от нанесенного количества (К, %), которую включают в формулу расчета средней дермальной экспозиции (Дcр). Способ позволяет наиболее полно оценить выраженность загрязнения кожи, что является основным аргументом в обосновании мер индивидуальной первичной профилактики по защите кожных покровов и приоритетность дермального пути поступления токсиканта. 3 пр., 4 табл.
Наверх