Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro)



Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro)
Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro)

 


Владельцы патента RU 2516341:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный университет" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, где в качестве эксплантов используют фрагменты цветоложа и цветоножки из цветов земляники, взятых в фазе бутонизации, которые промывают под проточной водой в течение 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду. Изобретение позволяет получить увеличенное количество растений-регенерантов от одного экспланта. 1 табл., 2 ил.

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для массового получения качественного посадочного материала ценных сортов и гибридов земляники в питомниководстве и селекционных работах.

Известен способ получения растений-регенерантов земляники (патент СССР №1658929 А1, МПК5 А01Н 4/00, Бюл. №24 - М., 1991), согласно которому эксплантами являлись верхушечные и латеральные почки. Растения подвергают суховоздушной терапии, а затем освобождают от патогенной микрофлоры путем обработки побегов горячей водой.

Недостатком данного способа (аналога) является сложность проведения стерилизации растительного материала. Земляника является почвопокровным растением, поэтому получение стерильного и жизнеспособного материала при введении в культуру in vitro почек вегетативного побега представляет большую трудность. Согласно данному способу гибель эксплантов после обработки составляет 23,5%.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения растений-регенерантов земляники методом дифференциации почек в ткани экспланта, где в качестве эксплантов используют листовые диски, полученные от растений, размножаемых in vitro (Sorvari S., Ulvinen S., Hietaranta Т., Hiirsalmi Н. Preculture medium promotes direct choot regeneration from mikropropagatied strawberry leaf disks// Hort Science, 1993, V.28, N.1, P.55-57). Данный способ позволяет исключить этап стерилизации эксплантов, так как исходные растения размножаются микроклонально. Для увеличения выхода регенерантов у земляники проводят предкультивирование на питательной среде, содержащей 6-бензиламинопурин (БАП) 0,5 мг/л, 3-индолилмасляную кислоту (ИМК) 0,5 мг/л. Это ускоряет морфогенез на листовых дисках и увеличивает количество сформировавшихся побегов от 1,5 до 9,9 на один эксплант.

Недостатками данного способа (прототипа) является низкий процент эксплантов (56,3-75%), регенерировавших побеги. При этом способе необходимо иметь введенные в культуру in vitro исходные растения.

Заявляемый способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, за счет ускорения получения регенерантов, методом дифференциации почек в ткани экспланта, где в качестве эксплантов используются фрагменты цветоложа и цветоножки;

- упрощает этап стерилизации и увеличивает процент жизнеспособности эксплантов;

- увеличивает эффективность процесса, тиражируемость, высокая приживаемость, низкая инфицируемость эксплантов;

- увеличивает коэффициент размножения, что позволяет применять в промышленном размножении.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе получения растений-регенерантов земляники in vitro используют в качестве эксплантов фрагменты цветоложа и цветоножки, взятых из цветов земляники, в фазе бутонизации, промывают 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм, затем фрагменты помещают срезом на питательную среду.

Способ реализуют следующим образом:

Цветки земляники берут в фазе бутонизации. Перед стерилизацией промывают под проточной водой в течение 15-25 минут. Стерилизацию проводят в условиях ламинар-бокса 0,1% раствором сулемы 10 минут. Затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой. Этот способ стерилизации позволяет получить 95% эксплантов «стерильными» и жизнеспособными. Цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду. Цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду. Питательные среды готовят по прописи Мурасиге-Скуга, содержащей 20 мкМ БАП и 1 мкМ ИМК. Через 20-30 суток на месте среза у эксплантов цветоножки появляются побеги (Фиг.1, Геммогенез у эксплантов цветоножки земляники). Побеги фрагментов регенерируют из завязей и тканей цветоложа (Фиг.2, Геммогенез у эксплантов цветоложа земляники). Образовавшийся конгломерат легко делится на одиночные побеги, которые пересаживают на среды размножения, содержащие 0,5-1 мкМ БАП. Укореняют побеги на безгормональной среде Мурасиге-Скуга. Число побегов на один эксплант составляет от 10 до 15 штук.

В результате использования данного способа получения растений-регенерантов земляники от одного экспланта за 3 месяца культивирования получают около 200 штук растений-регенерантов, морфологически идентичных материнским экземплярам.

Состав питательной среды на основе MS, мкМ Тип экспланта
цветоложе цветоножка чашелистики лепестки
10,0 БАП нет нет нет нет
15,0 БАП сл. регенерация сл. регенерация нет нет
17,0 БАП каллус каллус каллус каллус
20,0 БАП+1ИМК активная регенерация активная регенерация слабая регенерация нет
Регенерационная способность различных типов эксплантов фрагментов цветка земляники сорта Лидия Норвежская в зависимости от состава питательных сред

Способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, отличающийся тем, что в качестве эксплантов используют фрагменты цветоложа и цветоножки из цветов земляники, взятые в фазе бутонизации, которые промывают под проточной водой в течение 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области биотехнологии растений, в частности к микроклональному размножению in vitro. В способе культивируют каллусные культуры из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение каллуса на питательной среде Мурасиге-Скуга, доведенной до 1 литра водой, в течение одного пассажа, где в питательную среду добавляют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту с концентрациями 4-8 мг/л, культивируют семена льна многолетнего, в питательную среду Гамборга добавляют 6-бензиламинопурин с концентрацией 1-2 мг/л и α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и затем на питательную среду Гамборга пересаживают полученные каллусы для регенерации и культивируют в течение 2-4 пассажей, в жидкую питательную среду Мурасиге-Скуга с концентрацией всех компонентов 50% добавляют α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и на нее пересаживают растения-регенеранты и культивируют их в течение 2-4 пассажей.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro.
Изобретение относится к способу укоренения черенков сенполии узамбарской и может быть использовано для цветочной рассады. .
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, семеноводству картофеля, картофелеводству. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе клонального микроразмножения яблони и груши на этапе собственно микроразмножения. .
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой питательную среду для укоренения побегов яблони и груши in vitro. .
Изобретение относится к адаптации растений к нестерильным условиям. .
Изобретение относится к цветоводству и биотехнологии, может быть использовано для массового размножения ценных декоративных сортов и гибридов ириса сибирского, освобождения их от системных патогенов, а также в селекционной практике для создания новых улучшенных сортов.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к семеноводству картофеля при подготовке оздоровленного посадочного материала. .
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает микроразмножение пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов. При этом на основе субстрата Мурасиге-Скуга исключают активированный уголь, снижают содержание солей и кислот в 2-4 раза и добавляют Гумат+7B в количестве 5-10 мл/л. Способ позволяет повысить эффективность и ускорить размножение оздоровленных от вирусной инфекции перспективных сортов винограда. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ хранения растений осины в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов осины на питательной среде WPM с добавлением сахарозы 10-20 г/л, агар-агара 9 г/л и витаминов MS 1 мл/л, сорбитола 5-10 г/л и маннитола 5-10 г/л, причем хранение растений осуществляют при температуре +4°С в режиме освещения 8 ч день/16 ч ночь с интенсивностью 2000 люкс. Изобретение позволяет повысить сохранность in vitro культур ценных селекционных генотипов и генетически модифицированных клонов осины. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения подвоев яблони, где на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения в среду Мурасиге-Скуга в качестве стимулятора роста добавляется препарат фуролан в концентрации 0,004 мг/л. Изобретение позволяет повысить ряд показателей качества эксплантов подвоев яблони. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения цимбидиума in vitro включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, где после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условия ex vitro в грунте с добавлением мха и древесной коры. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб, при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.3 табл.
(57) Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Листовые экспланты, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой определенного состава и прединкубируют, кокультивируют и культивируют на питательных средах определенного состава. При появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду определенного состава. Проводят первый этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, путем культивирования срезанных регенерантов на среде МС с 50 мл/л канамицина сульфата в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде с последующим отбором укоренившихся регенерантов картофеля с зелеными листьями и стеблями. Проводят второй этап отбора форм, устойчивых к возбудитялям фитофтороза и альтернариоза, включающий проверку укоренившихся растений методом ПЦР на наличие целевой ДНК и размножение регенерантов с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК микрочеренкованием. Использование заявленного способа позволяет получить устойчивые к возбудителям фитофтороза и альтернариоза формы картофеля. 5 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro, включающий отделение вегетативных почек от корневища, стерилизацию, высаживание на питательные среды, микроразмножение побегов, укоренение побегов, адаптацию растений-регенерантов к нестерильным условиям. Использование заявленного способа позволяет получить более 150 тысяч саженцев в год от одного экспланта. 5 ил., 1 табл.
Способ регенерации адвентивных микропобегов Hyssopus officinalis L. в условиях in vitro включает отделение листьевых дисков от микропобегов после 4-5 пассажа, полученных в культуре in vitro, дальнейшее культивирование их на модифицированной питательной среде Мурасиге и Скуга с половинной концентрацией макроэлементов и дополненной веществом цитокининового типа действия, а именно тидиазуроном, при этом культивирование проводят при пониженной интенсивности освещения. 4 табл.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к селекции. Изобретение представляет собой способ повышения коэффициента размножения капусты белокочанной в условиях in vitro, включающий выращивание эксплантов, культирование их на питательной среде Мурасиге-Скуга, внесение в нее регуляторов роста тидиазурон в концентрации 1 мг/л в сочетании с индолил-3-уксусной кислотой - 0,5 мг/л, при использовании цветолож размером 0,2-0,3 мм, изолированных из бутонов длиной 0,5-0,7 мм, где цветоложе используют за 1-2 дня до распускания цветков и после выращивания их на питательных средах культивируют до образования почек в течение 14-21 суток. Способ позволяет получить большое количество растений-регенерантов с признаками ЦМС и получить генетически стабильный урожай селекционных образцов. 3 табл.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения гречихи in vitro, включающий размножение гречихи из асептических проростков семян. Семена предварительно стерилизуют концентрированной серной кислотой и культивируют на среде Мурасиге и Скуга без фитогормонов. Субкультивируют, используя верхнюю часть побега проростка с пазушной почкой с получением микрорастений на питательной среде Мурасиге и Скуга с фитогормонами с содержанием сернокислой меди в количестве от 9,2 до 23,0 мг/л, которые делят на черенки, культивируют, субкультивируют и укореняют на этой среде. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность процесса размножения микрорастений гречихи в условиях in vitro за счет его упрощения, ускорения, снижения затрат и увеличения выхода пробирочных растений. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на питательную среду в присутствии ростовых веществ и культивирование, где высадку и культивирование осуществляют на твердой питательной среде Мурасиге и Скуга, содержащей в качестве росторегулирующего вещества препарат Мелафен в концентрации 10-7-10-11%. Заявляемый способ позволяет увеличить выход растений за счет эффективной приживаемости микрочеренков, хорошей регенерации, улучшения качественных показателей растений. 6 табл.
Наверх