Способ фиксации и приготовления гистологических препаратов


 


Владельцы патента RU 2525436:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для приготовления гистологических препаратов. Способ включает взятие материала и его фиксацию в жидкости, обезвоживание и заливку в парафин, приготовление срезов. Перед фиксацией энуклированного глаза его склеру прошивают нитками на глубину порядка 1 мм как минимум в двух местах, например сверху или снизу, а также с боков, например с назальной или височной стороны. При этом используют нить из материала, инертного к материалам, используемым при подготовке среза, например льняную или синтетическую, кроме того, цвет ниток варьируют по участкам прошивания. После фиксации маркированного глаза в жидкости и его заливки в парафин глаз перед его делением на срезы располагают с учетом его исходной ориентации в пространстве, для чего ориентируются на вышеописанные нитяные метки. Техническим результатом изобретения является обеспечение сохранения исходного положения образца от момента энуклеации глаза до приготовления срезов, что позволяет сохранить его структуру, форму и целостность, а также значительно повысить информативность полученных срезов гистологических препаратов и повысить точность диагноза.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для приготовления гистологических препаратов энуклированного глаза.

Известен способ фиксации и приготовления гистологических препаратов, включающий фиксацию полученного биологического материала в 10%-ном растворе нейтрального формалина, его заливку в парафин, после чего изготавливают срезы на микротоме (см. RU №2446398, МПК G01N 33/48, 2009 г.).

Известны способы фиксации и приготовления гистологических препаратов (биоптатов), включающие:

- использование микрокассет с множеством нумерованных отделений, в каждое из которых укладывается образец. Затем кассету помещают в фиксирующий раствор (Use and rationale of a multicompartment microcassette for site-specific biopsies of the prostate in a consecutive cohort of men / M.E. Laniado, I. McMullen, M.M. Walker, A. Patel // Prostate Cancer and Prostatic Diseases. - 2003. - Vol.6. - P.50-52);

- укладку образца на сгиб бумажного контейнера между двумя слоями бумаги или другого пористого материала с последующим помещением бумажного контейнера в фиксирующий раствор (Усовершенствование методики исследования толстоигольных биоптатов предстательной железы / А.И. Урбанский, А.Б. Маркочев, А.Ю. Плеханов и др. // Архив патологии. - 2005. - №2. - С.50).

Названные способы предназначены для получения микрогистологических препаратов. Часто размеры биоптата очень малы, что вызывает сложности в процессе подготовки микропрепаратов, в частности, на этапе дегидратации тканевых объектов. Проблемы связаны с потерей микропрепарата еще до начала гистологической проводки, так, после фиксации биоптат помещают в марлевые мешочки, через широкие отверстия которых небольшие фрагменты биоптатов выпадают. Во время обезвоживания и обезжиривания биоптаты теряют свою форму, значительно уменьшаясь в размерах, сморщиваясь и распадаясь на отдельные клетки, что приводит к невозможности постановки диагноза или ложному диагнозу, то есть неинформативности столь малого по размерам биоптата.

Наиболее близким к предлагаемому решению является способ фиксации и приготовления гистологических препаратов энуклированного глаза, включающий взятие материала и его фиксацию в жидкости, обезвоживание и заливку в парафин, приготовление срезов (см. «Гистология», авторы Елисеев В.Г., Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А. и другие, М.: Медицина, 1983 г., с.9-10).

Недостаток этого решения в том, что при получении срезов глаза после его фиксации в жидкости невозможно установить его исходную топографию, например установить, где находится его назальная или височная часть, поэтому невозможно формирование срезов, точно сориентированных в соответствии с исходной ориентацией глаза в пространстве (в черепной коробке).

Задачей изобретения является обеспечение возможности формирования срезов, точно сориентированных в соответствии с исходной ориентацией глаза в пространстве.

Техническим результатом изобретения является обеспечение сохранения исходного положения образца от момента энуклиации глаза до приготовления срезов.

Поставленная задача решается тем, что в способе фиксации и приготовления гистологических препаратов энуклированного глаза, характеризующемся тем, что включает взятие материала и его фиксацию в жидкости, обезвоживание и заливку в парафин, приготовление срезов, перед фиксацией энуклированного глаза его склеру прошивают нитками на глубину порядка 1 мм как минимум в двух местах - сверху или снизу, а также с боков - с назальной или височной стороны, при этом используют нить из материала, инертного к материалам, используемым при подготовке среза, - льняную или синтетическую, при этом цвет ниток варьируют по участкам прошивания, кроме того, после фиксации маркированного глаза в жидкости и его заливки в парафин глаз перед его делением на срезы располагают с учетом его исходной ориентации в пространстве, для чего ориентируются на вышеописанные нитяные метки.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками прототипа и аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию "новизна".

При этом существенные признаки отличительной части формулы изобретения решают следующие функциональные задачи.

Признаки «…перед фиксацией энуклированного глаза его склеру прошивают нитками на глубину порядка 1 мм как минимум в двух местах…» обеспечивают возможность надежной фиксации на глазе маркеров, позволяющих надежно идентифицировать топографию глаза на всех этапах подготовки среза, при этом маркер легко убирается, когда необходимость в нем отпадает.

Признаки, указывающие, что склеру глаза прошивают «сверху или снизу, а также с боков - с назальной или височной стороны», обеспечивают возможность четкой топографической привязки глаза к его исходному положению перед его разделением на срезы.

Признаки, указывающие, что в качестве материала для маркеров «используют нить из материала, инертного к материалам, используемым при подготовке среза, - льняную или синтетическую», позволяют избежать участия маркеров в химических реакциях с реактивами, используемыми на различных этапах подготовки глаза к формированию срезов.

Признаки, указывающие, что «цвет ниток варьируют по участкам прошивания», упрощают процедуру топографической привязки глаза к его исходной ориентации в пространстве.

Признаки, указывающие, что «после фиксации маркированного глаза в жидкости и его заливки в парафин глаз перед его делением на срезы располагают с учетом его исходной ориентации в пространстве», обеспечивают возможность получения срезов точно «привязанных» к исходной ориентации глаза в пространстве.

Признаки, указывающие, что при расположении глаза в микротоме в соответствии с его исходной ориентацией в пространстве «ориентируются на вышеописанные нитяные метки», раскрывают процедуру пространственного ориентирования глаза.

В соответствии с заявленным способом осуществляют известным образом энуклиацию глаза, далее в энуклированном глазе формируют маркеры его пространственного положения - его склеру прошивают льняными или синтетическими нитками на глубину порядка 1 мм, оставляя «хвостики» длиной как минимум 5-10 мм в каждой метке. Метки достаточно проставить в двух местах - сверху или снизу, а также с боков - с назальной или височной стороны, хотя возможна маркировка четырех сторон глаза. При этом цвет ниток варьируют по участкам прошивания, например красный, синий, черный, зеленый и т.п.

Последующие операции заявленного способа не отличаются от известных: маркированный описанным образом глаз помещают в фиксирующий раствор (например, 10% раствор формалина) на 24 часа.

После фиксации глаз промывают проточной водой в течение нескольких часов, и в таком виде он проходит следующие этапы гистологической обработки:

обезвоживание - «проводят» по батарее растворов этилового спирта с возрастающей концентрацией: 70%, 80%, 96% и 100%;

заливка в парафин (уплотнение) - глаз помещают в ксилол-парафин, затем в жидкий парафин на 1 час при 56°C, после остывания и затвердевания парафина известным образом вырезают блок с заключенным в нем глазом и известным образом закрепляют на деревянном (пластмассовом) бруске, при этом блок располагают так, чтобы пространственное положение глаза соответствовало его исходной ориентации в пространстве, для чего парафиновый блок, содержащий глаз, ориентируют по вышеописанным нитяным меткам.

Приготовление срезов осуществляют известным образом с использованием микротома известной конструкции после закрепления брусков на объектодержателе. Затем с помощью подающего устройства объектодержатель вместе с бруском перемещается за каждый шаг на фиксированное расстояние 3-5 мкм. Микротомный нож срезает с парафинового блока слой - срез - заданной толщины. После чего срезы помещают на поверхность теплой воды для их расправления, а затем на предметное стекло.

Окрашивание - перед окраской срезов удаляют уплотняющую среду, освобождают от парафина (депарафинизация) с помощью спиртов (100%, 96%, 80%, 70% и 60%) и затем с помощью окраски гематоксилином и эозином достигают контрастности изучаемого гистологического препарата.

Таким образом, энуклированный глаз проходит все этапы стандартной гистологической обработки вплоть до изготовления срезов и окрашивания, полностью сохраняя исходное положение гистологического препарата, исключая возможность его потери, не вызывая сложностей при постановке диагноза.

Таким образом, использование заявленного способа позволяет сохранять биоптат в исходном положении, не повреждая его структуры и формы, не нарушая его целостности, что значительно повышает информативность полученных срезов гистологических препаратов энуклированного глаза и повышает точность установления диагноза.

Способ фиксации и приготовления гистологических препаратов энуклированного глаза, характеризующийся тем, что включает взятие материала и его фиксацию в жидкости, обезвоживание и заливку в парафин, приготовление срезов, при этом перед фиксацией энуклированного глаза его склеру прошивают нитками на глубину порядка 1 мм как минимум в двух местах - сверху или снизу, а также с боков - с назальной или височной стороны, при этом используют нить из материала, инертного к материалам, используемым при подготовке среза, - льняную или синтетическую, при этом цвет ниток варьируют по участкам прошивания, кроме того, после фиксации маркированного глаза в жидкости и его заливки в парафин глаз перед его делением на срезы располагают с учетом его исходной ориентации в пространстве, для чего ориентируются на вышеописанные нитяные метки.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и описывает способ прогнозирования эффективности защиты лимфоцитов от переокисления путем определения концентрации гидроксирадикалов, в котором при комплексном внесении в среду инкубации лимфоцитов 1,4-дитиоэритритола и аскорбиновой кислоты в конечной концентрации 2,5 мМ и 0,07 мМ соответственно защиту лимфоцитов от гидроксирадикалов оценивают как эффективную при росте в среде гидроксирадикалов до 7% и менее, а неэффективную при росте в среде гидроксирадикалов до 8% и более.

Заявленное изобретение относится к области диагностики и может быть использовано для раннего обнаружения беременности. Тестер на беременность содержит впитывающий наконечник (1), частично напрессованный на тестовую полоску (3) в корпусе оболочки, имеющем верхнюю оболочку (2.1) и нижнюю оболочку (2.2), и тестовую полоску (3) на стабилизирующей подложке (12), доходящую до окна проверки результата (4) с отметками контрольной и тестовой линий.

Изобретение касается способа образования 3-фенилимино-3H-фенотиазинового медиатора или 3-фенилимино-3H-феноксазинового медиатора, включающего предоставление первого реагента, содержащего фенотиазин или феноксазин; предоставление первого растворителя; предоставление второго реагента и предоставление второго растворителя.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для определения наличия у пациента повышенного риска обладания сердечно-сосудистым заболеванием или нарушением по полиморфным вариантам генов.

Группа изобретений относится к измерению объема или концентрации биологических веществ. Представлено измерительное устройство с кожухом и по меньшей мере одним дисплеем, интегрированным в кожух, при этом кожух содержит отсек, предназначенный для вставки картриджа в кожух с целью доставки в устройство предназначенного для измерения образца, и при этом отсек имеет отверстие на передней части кожуха, и первая часть кожуха для вставки картриджа выступает под углом ко второй части кожуха.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Способ диагностики AL-амилоидоза заключается в том, что каплю биологической жидкости с кристаллоиндуктором подвергают клиновидной дегидратации и затем полученную фацию анализируют под микроскопом с использованием количественных критериев.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, травматологии, трансплантологии, кумбостиологии, и представляет собой способ изготовления дермального матрикса (ДМ).
(57) Способ относится к области медицины и предназначено для ранней диагностики некротизирующего энтероколита у новорожденных. Способ включает определение трансферрина и свободного гемоглобина в кале.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для выбора тактики лечения местно-распространённого рака предстательной железы.
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и описывает способ прогнозирования динамики течения муковисцидоза, выявленного путем неонатального скрининга, основанный на учете пола, возраста, уровня гемоглобина, лейкоцитов, АлАТ, АсАТ, С-реактивного белка, вида бактериальной флоры в мазках из носа и в мазках из зева, уровня хлоридов пота, в котором определяют коэффициент прогноза динамики течения муковисцидоза (Кдм) с использованием регрессионного управления: Кдм=3,21946+0,526873*пол - 0,0488185*возраст - 0,0125638*гемоглобин+0,0302588*лейкоциты - 0,0418016*АлАТ+0,00832224*АсАТ+0,0736644*СРБ+; 0,238719* флора из носа+0,442044* флора из зева - 0,00669528*хлориды пота, где: пол - для мальчиков обозначают цифрой 1, для девочек цифрой 0; возраст - количество полных месяцев на момент обследования; гемоглобин - уровень гемоглобина в периферической крови в граммах на литр, лейкоциты - количество лейкоцитов в кубическом миллиметре периферической крови; АлАТ - уровень аланин-аминотрансферазы в венозной крови в единицах на литр; АсАТ - уровень аспартат-аминотрансферазы в венозной крови в единицах на литр; СРБ - уровень с-реактивного белка в миллиграммах на литр; флора из носа и флора из зева - вид бактериальной флоры в мазках из носа или из зева: 1 стрептококк, 2 синегнойная палочка; 3 стафилококк; 4 грибы; 5 рост флоры отсутствует (мазок стерилен); 6 энтерококк; 7 коринобактерии; 8 нейсерия; 9 ацинетобактер; 10 кишечная палочка; 11 цитробактер; 12 клебсиелла; 13 стернотофомонас; 14 гемофилийная палочка; 15 моракселла; 16 прочие виды флоры; хлориды пота - уровень хлоридов пота в ммоль/л; если величина коэффициента менее 2,3, прогнозируют течение заболевания без отрицательной динамики; если коэффициент 2,3 и более, прогнозируют течение муковисцидоза с ухудшением состояния.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, неонатологии и пульмонологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения пневмонии у новорожденных детей с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) при рождении. Для этого в динамике лечения проводят исследование биологического материала, то есть определение содержания альвеолоцитов в состоянии некробиоза/некроза в фарингеальном аспирате. При отсутствии изменения их количества или снижении содержания данных клеток относительно исходного уровня лечение оценивают как эффективное, а при повышении - как не эффективное. Способ позволяет провести своевременную коррекцию лечебных мероприятий, улучшить исход заболевания, а также избежать болезненных и травматичных процедур забора крови у новорожденных. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для управления биохимическими реакциями in vitro и in vivo. Управление осуществляется посредством воздействия на магнитную наносуспензию, содержащую биоактивную макромолекулу, прикрепленную непосредственно или через лиганд к однодоменным магнитным наночастицам, внешним низкоинтенсивным низкочастотным переменным магнитным полем, обеспечивающим деформацию и/или изменение конформации участвующих в реакции биоактивных макромолекул. Изобретение позволяет дозированно воздействовать на конкретное звено метаболизма, отвечающее за патологическое состояние. 12 з.п. ф-лы, 11 ил.

Группа изобретений относится к системе и методу для мониторинга соответствующего по меньшей мере одного параметра крови различных пациентов посредством устройств для обеспечения доступа, обеспечивающих соответствующий по меньшей мере один доступ к крови каждого пациента через кожу, отборных устройств для отбора образов для отбора соответствующего некоторого количества крови у каждого пациента с получением соответствующего по меньшей мере одного образца крови, аналитического устройства для анализа крови, выполненного с возможностью совместного анализа образцов крови, для анализа предварительно определенных параметров крови образца крови, общего вычислительного устройства для вычисления параметров медикаментов, которые необходимо ввести соответствующим пациентам, на основании записей данных, соответствующих определенным параметрам проанализированной крови, и подающих устройств для подачи соответствующих медикаментов с вычисленными параметрами медикаментов. Достигается упрощение и повышение надежности монитори-нга. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной морфометрической диагностики эритродермической формы грибовидного микоза и синдрома псевдолимфомы кожи. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата, дополнительные морфометрические исследования базальных кератиноцитов в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи. При этом при схожей гистологической картине, описываемой при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи как акантоз, гиперкератоз, паракератоз, отек и расширение сосудов дермы, лимфогистиоцитарные инфильтраты, расположенные в верхней трети дермы, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата при эритродермической форме грибовидного микоза и синдроме псевдолимфомы кожи, представленном CD2+, CD3+, CD4+, CD5+, CD43+, CD45RO+ лимфоцитами, проводят дополнительно морфометрические исследования всех клеток эпидермиса. Далее рассчитывают относительный объем эпидермиса и митотический индекс эпидермальных клеток. При увеличении относительного объема эпидермиса в 2,2 и более раза по сравнению с нормальной кожей и увеличении митотического индекса эпидермальных клеток в 2,7 и более раза по сравнению с нормальной кожей диагностируют эритродермическую форму грибовидного микоза, а при неизмененных по сравнению с нормальной кожей относительном объеме эпидермиса и митотическом индексе эпидермальных клеток диагностируют синдром псевдолимфомы кожи. Изобретение обеспечивает ускорение и точность дифференциальной диагностики указанных видов лимфом кожи, что позволяет выбрать тактику раннего адекватного рационального лечения пациента. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период. Пробу помещают в стакан, заливают флотационной жидкостью, размешивают, процеживают, дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов. После этого капли поверхностной пленки переносят на предметное стекло и осуществляют микроскопирование. Дополнительно перед добавлением флотационной жидкости, для растворения клеток жира добавляют водный раствор технического спирта и размешивают. Соотношение воды и спирта 1:1. Отстаивают в течение 3-5 минут. Способ позволяет одновременно обнаружить ооцисты простейших и яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта у животных в молочный период. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для автоматического анализа образцов кала. Автоматический анализатор образцов кала содержит автоматический контроллер, контейнер для образцов, разжижающее устройство, перемешивающее и смешивающее устройство, анализирующее устройство, устройство всасывания и очистки, соединенное трубопроводами с анализирующим устройством. Анализирующее устройство содержит модуль физического анализа и модуль химического анализа. Устройство всасывания и очистки содержит иглу всасывания пробы, приемник разжижителя и перистальтический насос всасывания пробы, подсоединенный между иглой всасывания пробы и приемником разжижителя. Анализирующее устройство подсоединено между иглой всасывания пробы и перистальтическим насосом всасывания пробы, причем когда игла всасывания пробы вставлена в контейнер для образцов и перистальтический насос всасывания пробы осуществляет положительное вращение, игла всасывания пробы всасывает образцы из контейнера для образцов и передает образцы кала на анализирующее устройство. Перистальтический насос всасывания пробы выполнен с возможностью обратного вращения и всасывания разжижителя из приемника разжижителя для очистки анализирующего устройства и соединительных трубопроводов после проведения анализа. Изобретение обеспечивает снижение загрязнения окружающей среды и лаборатории при проведении анализа, а также повышение производительности. 14 з.п ф-лы, 6 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения больных неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга. Для этого в периферической крови больных до лечения и перед каждым последующим курсом химиотерапии определяют объем и электрическую проводимость лимфоцитов, вычисляя коэффициент отношения первого показателя ко второму. При снижении значений коэффициента в сравнении с исходными прогнозируют положительную эффективность лечения и отсутствие симптомов генерализации заболевания. При отсутствии снижения или при повышении значений коэффициента - отсутствие или низкую эффективность лечения и наличие симптомов продолженного роста злокачественного процесса. Использование данного способа позволяет определить чувствительность больных неходжкинскими лимфомами к химиотерапии и осуществлять ближайший и отдаленный прогноз течения заболевания. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается диагностики функционального класса хронической сердечной недостаточности (ХСН). Диагностику осуществляют по разработанной формуле, учитывающей оценку значений изменения конечного диастолического объема левого желудочка сердца и толщины межжелудочковой перегородки в диастолу, определяемых при проведении эхокардиографии, а также изменения значений NT-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида. Верификация функционального класса ХСН проводится по соотношению расчетных значений и функционального класса ХСН NYHA. Способ обеспечивает возможность адекватной диагностики функционального класса ХСН, в том числе у пациентов с наличием противопоказаний к выполнению физических или фармакологических нагрузочных проб, а также при отсутствии необходимого технического оснащения для проведения стресс-тестов. 4пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации. Токсическую опасность растворов исследуемых АнХЭС определяют по различию их воздействия на активность ПХЭ в растворах малой и высокой концентрации. Если процент угнетения активности ПХЭ в растворе высокой концентрации падает до нуля или не превышает 5-10%, делают заключение о том, что анализируемый раствор содержит высокотоксичное АнХЭС 1 класса опасности. Если величина ингибирующего эффекта остается постоянной или падает не более чем на 10%, делают заключение о наличии малотоксичного АнХЭС. Использование заявленного способа позволяет в течение 30-60 минут оценить токсическую опасность АнХЭС в самых различных ситуациях, когда их состав не известен и они находятся в виде растворов неизвестной концентрации. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз. Изобретение позволяет повысить точность и упростить процедуру диагностики наружного генитального эндометриоза. 3 пр.
Наверх