Способ определения структурного состояния мембраны эритроцитов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2528909:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии. Способ осуществляют следующим образом. Из пробы крови эритроциты отмывают физиологическим раствором, после чего центрифугируют, затем экстрагируют смесью хлороформ-метанол, взятых в соотношении 1:2, при этом периодически встряхивают, а соотношение проба:экстрагент составляет 0,1:2,0. Далее экстракт эритроцитов и стандарты фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина наносят на хроматографическую пластинку с сорбентом сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ, которую помещают в хроматографическую камеру с элюентом состава - хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота:вода, взятых в соотношении 60:50:1:4. Через 10-15 минут хроматографическую пластинку извлекают, высушивают и затем проявляют в парах йода. По длине пробега пятен пробы в сравнении с длиной пробега пятен стандартов идентифицируют фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин в пробе. При превышении размера пятна фосфатидилэтаноламина по сравнению с пятном фосфатидилхолина устанавливают нарушение структуры мембраны эритроцитов. Способ позволяет установить нарушение структуры мембраны эритроцита, что дает возможность улучшить диагностику заболевания на клеточном уровне и осуществлять контроль за эффективностью проводимого лечения. 3 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии, и может быть использовано в практическом здравоохранении для определения функциональной активности эритроцитов и для контроля за эффективностью проводимого лечения, а также в фундаментальных медицинских исследованиях.

Известно, что плазматическая мембрана эритроцита - важнейшая составляющая клетки, координирующая ее работу в зависимости от поступающих физических и химических сигналов (A.M. Казеннов, М.Н. Маслова. Структурно-биохимические свойства безъядерных эритроцитов. // Физиол. ж. СССР им. И.М. Сеченова. - 1987. - Т 73, №12 - с.1587-1594).

Известны различные способы определения структурного состояния мембраны клетки.

Так, известен способ определения состояния мембраны эритроцитов по количеству гликопротеидов, формирующих примембранный слой клетки. Данный способ включает окраску мазков крови паральдегид-фуксином с последующим определением оптической плотности окрашенного комплекса при длине волны 580 нм (Ю.В. Постнов, К.А. Фофанова. Гетерогенность эритроцитов по данным гистохимического выявления гликопротеидов, особенности ее при гипертонической болезни и экспериментальных гипертензиях. // Тер. архив. - 1979, №6, с.29-33). Уменьшение величины оптической плотности свидетельствует о снижении содержания гликопротеидов и тем самым характеризует повреждение примембранного слоя клетки.

К существенному недостатку данного способа следует отнести то, что он не позволяет оценить структурное состояние мембраны эритроцитов, а оценивает только состояние внешнего примембранного слоя.

Также к недостаткам данного способа следует отнести длительность его осуществления, т.к. для получения устойчивого окрашенного комплекса требуется более суток.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ определения структурного состояния мембраны эритроцитов, включающий взятие пробы крови, отделение эритроцитов трехкратными отмыванием и центрифугированием, получение суспензии эритроцитов и определение фосфорсодержащих компонентов в них методом ЯМР-спектрометрии на водородных ядрах.

Известный способ осуществляют следующим образом. Проводят взятие пробы крови в пробирку с 3,8% цитрата натрия. Плазму от форменных элементов отделяют цетрифугированием. Эритроциты трижды отмывают фосфатным буфером, каждый раз центрифугируя по 5 мин при 3000 оборотов в минуту. Полученную суспензию эритроцитов вносят в ампулу и регистрируют спектр на ЯМР-спектрометре. Полученные спектры с помощью компьютерной программы интерпретируют (М.В. Кручинина, С.А. Курилович, И.В. Поруликова, И.И. Шакиров. ЯМР-спектроскопия эритроцитов у больных с патологией печени. Ж. «Клиническия и экспериментальная гастроэнтерология», приложение Гепатология, 2003. - №2. - с.28-33).

К недостаткам известного способа, выбранного в качестве прототипа, следует отнести то, что он позволяет качественно идентифицировать только фосфадитилхолин (ФХ) - основного фосфолипида мембраны и требует обязательного подтверждения его содержания другими химическими методами.

Хотя известно, что в эритроцитарной мембране внутренний монослой липидной компоненты содержит около 20% фосфатидилэтанолина, а внешний с содержанием 23% фосфатидилхолина, которые должны отвечать постоянному их соотношению для сохранения поверхностной архитектоники мембраны и для обеспечения полноценной функциональной активности эритроцита (Э. Сим. Биохимия мембран. Москва, Мир, - 1983, - с.35).

Также к недостаткам данного способа следует отнести и то, что определение других фосфолипидов мембраны эритроцита требует дополнительного увеличения количества анализируемого образца и времени накопления его сигнала на спектре. Следовательно, только по определению фосфатидилхолина невозможно оценить структурное состояние мембраны.

Кроме этого, недостаток ЯМР определения состоит и в том, что по своей чувствительности он значительно уступает методам оптической спектроскопии и хроматографии (Т.Н. Колополова, Н.М. Сергеев, А.Ю. Корольков. Количественное определение концентрации метаболитов в моче человека методом спектроскопии ЯМРН. Биомедицинская химия, 2008, т.54, вып.2, с.223-235). Поэтому для повышения чувствительности ЯМР-метода используют прием накопления спектра, что, в свою очередь, увеличивает время анализа до суток.

Также к недостаткам известного способа следует отнести высокую стоимость ЯМР анализа, т.к. используется дорогостоящее оборудование, специально обустроенное помещение и привлечение подготовленного специалиста для интерпретации спектров.

Задачей заявляемого технического решения является разработка способа определения структурного состояния мембраны эритроцитов.

Техническим результатом предлагаемого способа является оценка состояния мембраны эритроцитов, за счет определения количественного содержания основных липидных компонентов эритроцитарной мембраны - фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина, а также сокращение времени анализа.

Технический результат достигается тем, что способ определения структурного состояния мембраны эритроцитов включает взятие пробы крови, отделение эритроцитов трехкратными отмыванием и центрифугированием, получение суспензии эритроцитов и определение фосфорсодержащих компонентов в них.

Отличия предлагаемого способа заключаются в том, что эритроциты отмывают физиологическим раствором и центрифугируют, затем экстрагируют смесью хлороформ-метанол, взятых в соотношении 1:2, при этом смесь периодически встряхивают, а соотношение проба:экстрагент составляет 0,1:2. Далее экстракт эритроцитов и стандарты фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина наносят на хроматографическую пластинку с сорбентом сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ, которую помещают в хроматографическую камеру с элюентом состава - хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота:вода, взятых в соотношении 60:50:1:4. Через 10-15 минут хроматографическую пластинку извлекают, высушивают, проявляют в парах йода. По длине пробега (Rf) пятен пробы в сравнении с длиной пробега пятен стандартов идентифицируют фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин в пробе.

К отличительным приемам заявляемого способа также относят и то, что проводят сравнение размера пятна фосфатидилэтаноламина пробы с размером пятна фосфатидилхолина пробы и, если размер пятна фосфатидилэтаноламина превышает размер пятна фосфатидилхолина, устанавливают нарушение структуры мембраны эритроцита.

Проведенный сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемый способ отличается от известного вышеперечисленными приемами и, следовательно, соответствует критерию изобретения «новизна».

Из проведенного анализа патентной и специальной литературы установлено, что предлагаемый способ имеет признаки, отличающие его не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных областях медицины. В доступной литературе авторами предлагаемого технического решения не выявлено способа определения структурного состояния мембраны эритроцитов с использованием приемов заявляемого способа.

Отмывание эритроцитов физиологическим раствором позволяет удалить другие форменные элементы крови и сохранить исходную pH среды.

Авторами предлагаемого способа экспериментальным путем определено, что экстракция смесью хлороформ-метанол, взятых в соотношении 1:2, при периодическом встряхивании и соотношении проба:экстрагент 0,1:2,0 позволяет эффективно извлечь фосфолипиды ФХ и ФЭ из мембраны эритроцитов.

Также авторами заявляемого способа установлено, что проведение тонкослойной хроматографии с элюентом хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота:вода, взятых в соотношении 60:5:1:4,с последующим проявлением в прах йода, создает условия для эффективного разделения по длинам пробега ФХ и ФЭ на хроматографической пластинке.

Сравнение Rf ФХ и ФЭ с Rf пятен стандартов позволяет точно идентифицировать их в пробе, а по превышению размера пятна ФЭ пробы по сравнению с размером пятна ФХ пробы устанавливают нарушение структурного состояния мембраны эритроцитов.

Клинические исследования авторов заявляемого способа свидетельствуют о том, что использование предлагаемого технического решения позволяет определить количественное содержание основных липидных компонентов эритроцитарной мембраны - фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина, а также сократить время выполнения анализа до 30-40 минут.

Изложенное позволяет сделать вывод о соответствии технического решения критерию «изобретательный уровень».

Способ, составляющий заявляемое изобретение, предназначен для использования в медицине, а именно в биохимии. Возможность его осуществления подтверждена описанными в заявке приемами, и, следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию изобретения «промышленная применимость».

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Утром (натощак) у пациента из локтевой вены забирают кровь в пробирку, содержащую 3,8% раствор цитрата натрия. Плазму от форменных элементов отделяют центрифугированием. Эритроциты отмывают физиологическим раствором с трехкратным центрифугированием по 5 мин каждое при 3000 об/мин. К 100 мкл суспензии эритроцитов прибавляют 2 мл смеси хлороформ-метанол (1:2 по объему), проводят экстракцию при периодическом встряхивании. При этом соотношение проба:экстрагент составляет 0,1:2,0.

Экстракт эритроцитов микропипеткой наносят на хроматографическую пластинку (сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ), которую помещают в стеклянную хроматографическую камеру с элюентом состава - хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота:вода, взятых в соотношении 60:50:1:4 (по объему). На пластинку также наносят стандарты фосфолипидов ФХ и ФЭ. Через 10-15 мин пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и затем проявляют в парах йода. Появившиеся коричневые пятна на пластинке сравнивают по длинам пробега (Rf) пятен образцов фосфолипидов, по которым и идентифицируют фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин. При превышении размера пятна фосфатидилэтаноламина в пробе по сравнению с пятном фосфатидилхолина в этой же пробе устанавливают нарушение структуры мембраны эритроцита.

Предложенный способ поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример №1. Больной А., история болезни №34126, поступил в проктологическое отделение ФГБУ «НЦ РВХ» СО РАМН с диагнозом: болезнь Крона. При поступлении было проведено клиническое и лабораторное обследование. Выявлено: снижение количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита; из биохимических показателей: отмечено уменьшение содержания общего белка, альбумина, увеличение индекса эндогенной интоксикации, процентного содержания мембрансвязанного гемоглобина, сорбционной способности эритроцитов. Также было установлено изменение содержания макроэргических соединений в мембране и показателя устойчивости эритроцитов. Все это сопровождалось выраженной гистологической активностью воспалительного процесса в слизистой оболочке толстой кишки.

При осуществлении заявляемого способа в крови пациента установлено содержание ФХ - 14,15 и ФЭ - 22,0. Повышенное содержание фосфатидилэтаноламина (ФЭ) свидетельствовало о нарушении структурного состояния мембраны эритроцитов.

Проведенное стандартное лечение с привлечением антицитокиновой терапии (инфликсимаб) значительно улучшило клиническое состояние больного и сопровождалось положительной динамикой большинства лабораторных показателей, за исключением показателя устойчивости эритроцитов и содержания фосфолипидов. Уровень ФЭ составил 20,0; ФХ - 18,0. Это указывало на то, что эффективного восстановления мембраны эритроцита не произошло и потребовало включения в комплекс лечения мембранотропных препаратов.

Пример №2. Больная П., история болезни №24117,поступила в стационар клиники ФГБУ «НЦ РВХ» СО РАМН с диагнозом - распространенный гнойный перитонит. Состояние больной при поступлении тяжелое. Лабораторные показатели подтвердили выраженность тяжести эндогенной интоксикации: высокий лейкоцитоз, высокое содержание белков острой фазы, резкое снижение общего белка, альбумина и его эффективной концентрации, увеличение содержания печеночных ферментов.

Заявляемым способом в крови больной определено содержание ФЭ - 22,7; ФХ - 14,0. Это указывало на нарушение структуры мембраны эритроцита и коррелировало с высоким содержанием метаболического пула сыворотки крови и эритроцитов, а также с выраженной полиорганной недостаточностью.

Хирургическое пособие, многократная санация брюшной полости и активная лекарственная терапия сопровождались улучшением клинического состояния больной, реологических и биохимических показателей крови. После проведенного лечения содержание ФЭ - 21,0; ФХ - 17,5. Полученные показатели ФЭ и ФХ свидетельствовали о сохраняющемся нарушении структуры липидного бислоя мембраны эритроцита, что коррелировало с сохраняющимися нарушениями функционального состояния основных органов детоксикации (печени и почек).

Пример №3. Волонтер К. Содержание ФХ и ФЭ в пробе крови составило: ФХ - 22,5, ФЭ - 19,0. Основные биохимические и реологические показатели крови не превышали референтных значений. Субъективно и объективно состояние волонтера не указывало на наличие какой-либо патологии. Показатели исследованных фосфолипидов также были в пределах нормы и не выявили нарушений на клеточном уровне.

В лаборатории биохимии ФБГУ «НЦ РВХ» СО РАМН были исследованы образцы крови 30 человек, из них: 18 - проктологические больные (болезнь Крона и язвенный колит); 5 - с распространенным гнойным перитонитом; 7 - гематологические больные (лимфома, железодефицитная анемия).

Полученные данные о содержании фосфолипидов в мембране эритроцитов этих больных представлены в нижеприведенной таблице.

Таблица
Обследуемые Содержание фосфатидилхолина в % Содержание фосфатидилэтаноламина в %
Проктологические больные n=18 14,12±0,03 21,8±0,18
Перитонит n=5 14,23±0,02 22,84±0,02
Гематологические больные n=7 13,79±0,012 23,7±0,01
Волонтеры n=15 22,8±0,15 19,85±0,16

Авторами установлено, что у обследуемых больных количество фосфатидилэтаноламина превышало содержание фосфатидилхолина в крови. Это свидетельствует о нарушении структуры липидного бислоя, что приводит к изменению формы эритроцита и снижению его функциональной активности. В то е время у практически здоровых людей - волонтеров показатели этих фосфолипидов были в пределах нормы, что подтверждало отсутствие нарушений на клеточном уровне.

Таким образом, заявляемый способ позволяет установить нарушение структуры мембраны эритроцита и тем самым дает возможность улучшить диагностику заболевания на клеточном уровне, а также осуществлять контроль эффективности проводимого лечения и обоснованно дополнять комплекс лечения мембранотропными препаратами.

Способ определения структурного состояния мембраны эритроцитов, включающий взятие пробы крови, отделение эритроцитов трехкратными отмыванием и центрифугированием, получение суспензии эритроцитов и определение фосфорсодержащих компонентов в них, отличающийся тем, что эритроциты отмывают физиологическим раствором и центрифугируют, затем экстрагируют смесью хлороформ-метанол, взятых в соотношении 1:2, при этом периодически встряхивают, а соотношение проба:экстрагент составляет 0,1:2,0, далее экстракт эритроцитов и стандарты фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина наносят на хроматографическую пластинку с сорбентом сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ, которую помещают в хроматографическую камеру с элюентом состава - хлороформ:метанол:ледяная уксусная кислота:вода, взятых в соотношении 60:50:1:4, через 10-15 минут хроматографическую пластинку извлекают, высушивают, проявляют в парах йода и по длине пробега пятен пробы в сравнении с длиной пробега пятен стандартов идентифицируют фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин пробы, а по превышению размера пятна фосфатидилэтаноламина по сравнению с пятном фосфатидилхолина устанавливают нарушение структуры мембраны эритроцитов.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано при лечении больных с разлитым перитонитом. Сущность изобретения заключается в том, что выполняют лапаротомию при перитоните, берут экссудат из брюшной полости, определяют pH этого экссудата.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для повышения эффективности лечения пациентов с синдромом диспепсии в сочетании с избыточной массой тела.
Изобретение относится к медицине и касается диагностики острого токсического повреждения печени крыс. Способ заключается в выделении липидов, а именно в том, что добавляют 25 мкг 10% раствора тезита при одновременном перемешивании смеси с помощью шейкера при 20°C и частоте колебаний 120 в минуту в течение 30 минут с последующим определением в растворе общих фосфолипидов и триглицеридов.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для исследования всасывания аминокислот из пищеварительного тракта. Для этого проводят исследование крови утром натощак и после приема аминокислотной смеси.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для лечения некротического энтероколита у новорожденных и детей младшего грудного возраста.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и описывает способ оценки эффективности тромболитической терапии у больных острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой способ прогнозирования развития пороговой стадии ретинопатии недоношенных у детей без офтальмоскопических признаков заболевания, отличающийся тем, что на сроке по 33 неделю гестационного возраста в сыворотке крови определяют содержание фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и при уровне VEGF, равном или превышающем 1300 пг/мл, прогнозируют развитие пороговой стадии ретинопатии недоношенных.
Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и представляет собой способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень липопротеинов высокой плотности и при величине 0,77 ммоль/л и выше диагностируют наружный генитальный эндометриоз.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения биологического возраста у беременных женщин. Сущность способа состоит в том, что используют данные общего и биохимического анализов крови, показателей коагулограммы крови, массы тела, окружности живота (ОЖ) по формуле для I, II, III триместра беременности, затем определяют должный биологический возраст по формуле для I, II, III триместра беременности.
Изобретение относится к медицине. Способ прогнозирования риска возникновения переломов заключается в том, что выделяют ДНК из лейкоцитов периферической венозной крови, методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией, генотипируют 3 полиморфных варианта -1997G>T (g.3011T>G, rs1107946), -1663IndelT (g.3344_3345delTT, rs2412298) и +1245G>T (c.104-441G>T (rs1800012), расположенных в регуляторном регионе гена COLIA1.
Изобретение относится к медицине, а именно дерматологии, и может быть использовано для выбора лечения акне у женщин путем исследования биологических жидкостей и назначения препаратов в зависимости от результатов обследования. При этом в качестве биологических жидкостей используют кровь и мочу, осуществляют лабораторное определение гормонов сыворотки крови, стероидного профиля мочи и осуществляют сравнение полученных показателей с предварительно заданными стандартными, характерными для отсутствия акне, а назначение препаратов осуществляют по результатам сравнения. Так, при повышении в крови уровня лютеинизирующего гормона до 16 мМЕ/мл, тестостерона - до 4 нг/мл, повышении в моче уровня андростерона - до 20 мкМоль/24 часа, этиохоланолона - до 11 мкМоль/24 часа, суммы 17-кетостероидов - до 35 мкМоль/24 часа, дискриминанты ван де Калсейде до 3 назначают комбинированный оральный контрацептив с антиандрогенным эффектом Джес. В случае повышения еще и уровней иммунореактивного инсулина - до 12,90 мкЕД/мл и инсулиноподобного фактора роста 1 до 361,04 нг/мл назначают комбинированный оральный контрацептив с антиандрогенным эффектом Джес и Метформин или Метформин. При снижении в крови уровня эстрадиола до 140 пмоль/л и повышении концентрации лютеинизирующего гормона до 7 мМЕ/мл, дигидроэпиандростерона сульфата - до 4 ммоль/л, 17 - гидроксипрогестерона - до 4 нмоль/л и тестостерона - до 4 нмоль/л в крови и повышении в моче уровня андростерона до 17 мкМоль/24 часа, этиохоланолона - до 17 мкМоль/24 часа, 11 - кетоандростерона - до 2,5 мкМоль/24 часа, 11 - кетоэтиохоланолона - до 2,5 мкМоль/24 часа, 17 - кетостероидов - до 50 мкМоль/24 часа и дискриминанты ван де Калсейде до 3 назначают глюкокортикостероид - метипред. При повышенной концентрации лютеинизирующего гормона в крови до 15 мМЕ/мл, дигидроэпиандростерона сульфата - до 6,82 мкмоль/л, 17 - гидроксипрогестерона до 4 нмоль/л и повышении в моче уровня андростерона до 19,5 мкМоль/24 часа, этиохоланолона - до 16 мкМоль/24 часа, дигидроэпиандростерона - до 7 мкМоль/24 часа, 17 - кетостероидов - до 45 мкМоль/24 часа и дискриминанты ван де Калсейде до 3,5 применяют комбинированный оральный контрацептив с антиандрогенным эффектом Джес и глюкокортикостероид - метипред. А с такими же показателями плюс повышении в крови пролактина до 750 МЕ/мл и снижением эстрадиола - до 95,48 пкг/мл в крови применяют препарат Достинекс. Способ позволяет повысить избирательность и эффективность лечения акне при отстутствии необходитмости проводить всестороннее обследование.4прим.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии, и описывает способ исследования всасывания аминокислот в желудочно-кишечном тракте. Способ заключается в том, что производят исследование крови после приема аминокислотной смеси для определения всасывания аминокислот. Утром натощак производят определение суммарного расчетного содержания азота аминокислот в крови, затем перорально вводят 100,0 мл раствора аминокислот, транспортируемых по одному из путей всасывания с известной концентрацией раствора и содержания в нем азота аминокислот. После этого через 30 и 50 минут повторно определяют объем циркулирующей крови, гематокрит и суммарное расчетное содержание азота аминокислот, после чего рассчитывают в пробе крови с максимальными показателями остаточного азота коэффициент всасывания аминокислот и при показателях коэффициента всасывания аминокислот <0,9 выявляют снижение всасывания аминокислот в пищеварительном тракте. Изобретение обеспечивает повышение достоверности оценки всасывания аминокислот из пищеварительного тракта с учетом транспортного пути их всасывания. 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может использоваться для прогнозирования риска прогрессирования глаукомной оптической нейропатии (ГОН). У больных ГОН определяют уровень лактата в крови и при значении уровня лактата ≥4,33 ммоль/л прогнозируют высокий риск прогрессирования глаукомной оптической нейропатии в течение 1 года после обследования. Изобретение обеспечивает доступный и дешевый клинико-лабораторный способ прогнозирования риска прогрессирования ГОН. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования общей выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции, включающий определение клинико-патологических (морфологических), гистологических и молекулярных факторов прогноза, отличающийся тем, что с помощью иммуногистохимического метода проводят исследование молекулярных характеристик микроокружения опухоли, а именно наличие и количество сосудов с гладкомышечным актином в их стенке для стромы метастаза печени в трех полях зрения микроскопа, при этом поля зрения выбирают по максимальной выраженной иммуногистохимической реакции с каждого среза биоптата печени с метастатической опухолью и при наличии в каждом из трех полей зрения сосудов с наличием гладкомышечного актина в их стенке, пациента определяют в группу благоприятного прогноза (дожитие после резекции печени три года и более), при отсутствии сосудов с наличием в стенке гладкой мускулатуры во всех трех полях зрения, пациента включают в группу неблагоприятного прогноза (с продолжительностью жизни меньше двух лет). Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования общей выживаемости. 5 пр., 1 табл.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения риска развития сердечно-сосудистых осложнений у женщин с гипертонической болезнью путем забора крови у больных, определения в крови уровня интерлейкина-1α, рецепторного антагониста интерлейкина-1 иммуноферментным методом, отличающийся тем, что определяют показатель, равный отношению рецепторного антагониста интерлейкина-1 к интерлейкину-1α, фактор ингибирования лейкозных клеток в крови и количество CD34 клеток с последующим диагностированием развития сердечно-сосудистых осложнений в течение 5 лет, при этом устанавливают высокий, средний или низкий риски развития осложнений. Изобретение позволяет повысить точность определения индивидуального риска развития фатальных и нефатальных сердечно-сосудистых событий у женщин с эссенциальной артериальной гипертензией. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности (НБ). Сущность способа: в супернатанте аспирационной жидкости из полости матки или менструальной крови определяют одномоментно содержание карбонильных групп белков и малонового диальдегида. При значениях от 9,43 до 16,91 нмоль/мг карбонильных групп и от 0,71 мкмоль/л до 7,28 мкмоль/л малонового альдегида судят об отсутствии их повреждающего воздействия на эндометрий и плодное яйцо. При значениях карбонильных групп белков от 22,32 нмоль/мг и выше и при значениях малонового диальдегида более 7,28 мкмоль/л судят о их повреждающем воздействии на плодное яйцо и высоком риске развития неразвивающейся беременности. Изобретение направлено на оптимизацию способа прогнозирования развития НБ на доклинической стадии, на предупреждение повреждающего воздействия продуктов оксидативного стресса на эндометрий на этапе предгравидарной подготовки. Способ отличается малой инвазивностью, технической простотой, доступностью выполнения в условиях женской консультации и стационарах. 6 пр.
Представленное изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа обнаружения микроорганизма вида Vibrio parahaemolyticus. Способ включает посев исследуемого штамма на газон культуры, нанесение капли диагностического препарата фага в центр чашки, выдерживание при температуре 37°С в течение 20-24 часов и подтверждение его принадлежности к микроорганизмам вида V. parahaemolyticus по присутствию лизиса. При этом диагностический препарат фага готовят путем смешивания фагов ФК-44 и ФК-46, приготовленных на основе штамма Vibrio parahaemolyticus КМ-97, в соотношении 1:1 в титре n·108 БОЕ/мл. Представленное изобретение позволяет ускорить идентификацию штаммов V. parahaemolyticus и может быть использовано в лабораторной диагностике острых кишечных инфекций, вызываемых этим микроорганизмом.1 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и касается определения степени тяжести психосоматических нарушений у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ). Для этого проводят стандартное терапевтическое, неврологическое, инструментальное исследование. Дополнительно определяют титры первичных антител (AT) к белку S100B в сыворотке крови. При выявлении показателей титра до 150 их учитывают при установлении дисциркуляторной энцефалопатии 3-й степени с когнитивными нарушениями, достигающими степени умеренной или тяжелой деменции и сопровождающимися грубыми аффективными и поведенческими нарушениями. Результат, достигаемый при реализации изобретения, состоит в повышении специфичности, точности, чувствительности и надежности способа молекулярной диагностики.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии и молекулярной биологии, и может быть использовано для оценки риска развития рака шейки матки при цервикальной интраэпителиальной неоплазии и носительстве вируса папилломы человека (ВПЧ) у женщин репродуктивного возраста. Для этого берут клетки с поверхности экзоцервикса, выделяют из них РНК и измеряют уровни экспрессии мРНК генов: MKI67, CDKN2A, PGR, ВАХ. На основании соотношений уровней экспрессии мРНК вычисляют значение линейной дискриминантной функции (ЛДФ): ЛДФ=l,2*lg[CDKN2A]/[ВАХ]-lg[PGR]/[MKI67]-1, где [CDKN2A]/[ВАХ] - отношение уровней экспрессии мРНК CDKN2A и ВАХ, [PGR]/[MKI67] - отношение уровней экспрессии мРНК прогестеронового рецептора и MKI67, и если значение ЛДФ≤0, делают заключение о низком риске неопластической трансформации; при значении ЛДФ>0 риск неопластической трансформации определяют как повышенный. Способ позволяет оценить риск развития рака шейки матки по представленности мРНК референсных генов. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки эффективности лекарственных средств (ЛС) для улучшения когнитивных функций человека. В сыворотке крови пациента определяют содержание белка HLDF, титров идиотипических и антиидиотипических антител к HLDF до и после введения ЛС и на основании полученных данных вычисляют значение показателя MMSE до и после введения ЛС по формуле, после чего проводят сравнение полученных значений показателя MMSE и оценку эффективности ЛС по результатам такого сравнения. Предлагаемое изобретение позволяет повысить оперативность выбора того или иного ЛС и/или продолжительность курса его приема, в том числе оперативно назначать такой курс при резких ухудшениях состояния пациента. 3 табл., 2 пр.
Наверх