Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии



Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии
Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2540477:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "УрНИИДВиИ" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине и описывает способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии. Способ включает забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию. Для повышения точности диагностики центрифугированию подвергают исходную желчь, полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка микроскопируют. Изобретение позволяет получить более прозрачный осадок, концентрированный до малых объемов, без потерь яиц трематод, что повышает качество диагностики описторхид из желчи. Вероятность ложноотрицательного ответа при наличии яиц в пробе практически отсутствует. Способ является менее трудозатратным, т.к. позволяет сократить в 3 раза время микроскопирования, при этом увеличивая в 3 раза результативность диагностики описторхоза, особенно при низком содержании яиц в желчи. 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики описторхозного поражения печени и желудочно-кишечного тракта.

Широко известны способы ультразвуковой диагностики описторхозного поражения печени (RU, патент №2136216, МПК А61В 8/00, опубл. 09.10.1999 г., Ярошина Т.Н. «Ультразвуковая диагностика» в книге «Хирургия печени и желчных путей» под ред. Б.И. Альперовича, Томск, СГМУ, 1997, с. 151-189). Недостатком данной методики является низкая точность диагностики.

Известен также способ диагностики описторхоза с применением микроскопии, включающий диагностику натощак с первоначальной анестезией ротоглотки, затем эзофагогастродуоденоскопию, во время которой оценивают степень поражения слизистой оболочки пилорического отдела желудка, а также наличие и степень доуденогастрального рефлюкса. При наличии последнего, под визуальным контролем, проводят аспирацию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки и дальнейшую прямую микроскопию содержимого луковицы двенадцатиперсной кишки с целью обнаружения яиц гельминтов (RU, патент №2257152, МПК А61В 10/00, G01N 33/48, опубл. 27.07.2005). Данный способ достаточно трудоемок и может вызывать повреждение желудочно-кишечного тракта.

Наиболее близким решением к заявляемому является исследование желчи с центрифугированием для выявления яиц трематод (в т.ч. описторхид), включающий взбалтывание желчи с равным количеством диэтилового эфира, центрифугирование в центрифужных пробирках всех порций дуоденального содержимого не менее 20 мин при 1500-2000 об/мин, слив надосадочной части желчи в отдельную емкость. Осадок переносят пипеткой или прямо из пробирки на предметное стекло. Микроскопию осуществляют без покровного стекла при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10 (Паразитологичесие методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: Методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. - 72 с.) [МУК 4.2735-99, с. 31].

Данный способ исследования желчи с центрифугированием позволяет выявлять яйца описторхид, однако он недостаточно эффективен при их малом содержании в исследуемой желчи.

Задачей данного изобретения является усовершенствование методики предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии.

Технический результат, который будет достигнут от использования изобретения, заключается в повышении точности диагностики.

Технический результат достигается тем, что в способе предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии, включающем забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию, центрифугированию подвергают исходную желчь, затем полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Сущность изобретения заключается в увеличении концентрации яиц описторхид в исследуемом материале.

Первоначальное центрифугирование всех порций исходной желчи, затем экстрагирование полученного концентрированного осадка желчи с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, центрифугируя в течение 2 мин, затем удаление надосадочной жидкости, и микроскопия нанесенного на предметное стекло, полученного очищенного концентрированного осадка в количестве 200 мкл позволяет с высокой точностью за 1 раз выявить яйца описторхид и с высокой точностью выставить диагноз.

Из анализа научно-технической и патентной литературы дополнительного центрифугирования предварительно центрифугированной желчи с получением высоко концентрированного очищенного осадка и его микроскопии, приводящих к существенному повышению точности и качества диагностики описторхозной инвазии, нами не выявлено, что позволяет сделать выводы о соответствии заявляемого решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение осуществляется следующим образом.

Желчь от пациента при зондировании наливают в центрифужные пробирки объемом 10 мл. Для исследования на яйца трематод, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы, берут порции пузырной желчи «В» и печеночной «С». Порции «В» в норме может быть 30-50 мл, порции «С» - 10-30 мл. От одного пациента может быть забрано для анализа на наличие яиц трематод от 10 до 80 мл желчи. Яйца трематод распределены в желчи неравномерно, поэтому очень важно весь биологический материал, полученный от пациента, без потерь, использовать для анализа.

Всю доставленную в лабораторию желчь от пациента центрифугируют в центрифужных пробирках 20 минут при 1500-2000 об/мин. После чего надосадочную часть желчи сливают в отдельную емкость.

Оставшиеся осадки первичной желчи (до 500 мкл в каждой пробирке) сливают в одну пробирку. К полученному осадку добавляют до 8 мл 3% уксусной кислоты и 2 мл диэтилового эфира. Встряхивают при закрытой крышке и ставят в штатив на 2 минуты, затем центрифугируют в течение 2-х минут при 2000 об/мин.

После центрифугирования надосадочную часть сливают в отдельную емкость. Излишки влаги снимают со стенок пробирки ватным тампоном, а полученный осадок (200 мкл) переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом на предмет яиц описторхид.

При параллельном независимом исследовании образцов желчи от 33 пациентов в трех лабораториях (в двух из которых исследования проводились традиционным методом (по прототипу), в третьей - заявляемым способом), показано, что заявляемый способ предварительной обработки желчи позволяет повысить чувствительность диагностики описторхоза из желчи за счет выявления инвазии при низком содержании яиц в образце в 3 раза по сравнению со способом обработки и микроскопии желчи по прототипу.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Сравнительные данные показателей по заявляемому способу и способу по прототипу приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы, заявляемый способ по сравнению со способом по прототипу является менее ресурсо- и трудозатратным, т.к. позволяет сократить расходы экстрагента (диэтилового эфира) в 2,5 раза, время микроскопирования в 3 раза, минимизировать потери образцов желчи, идущих на анализ, при этом увеличивая качество выявления яиц трематод в 3 раза, особенно при низком их содержании в образце.

Заявляемый способ позволяет получить более прозрачный осадок, концентрированный до малых объемов, без потерь яиц трематод, что повышает качество диагностики описторхид из желчи. Вероятность ложноотрицательного ответа при наличии яиц в пробе практически отсутствует.

Таким образом, двойное центрифугирование всех порций желчи позволяет без потерь сконцентрировать яйца трематод в малом объеме жидкости, а применение 3% уксусной кислоты растворяет слизистую структуру желчи, переводя ее в прозрачный раствор, что способствует лучшим условиям для микроскопирования осадка и в 3 раза повышает результативность диагностики описторхоза, особенно при низком содержании яиц в желчи, по сравнению с методом, указанным в МУК.

Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии, включающий забор желчи, центрифугирование при 1500-2000 об/мин не менее 20 мин, удаление надосадочной части желчи, экстрагирование желчи с диэтиловым эфиром, нанесение полученного осадка на предметное стекло и последующую микроскопию, отличающийся тем, что центрифугированию подвергают исходную желчь, затем полученный концентрированный осадок желчи экстрагируют с 2 мл диэтилового эфира в присутствии 3%-ной уксусной кислоты до 8 мл, после чего снова центрифугируют в течение 2 мин, затем удаляют надосадочную жидкость, а микроскопии подвергают полученные 200 мкл очищенного концентрированного осадка.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к детской кардиологии и детским инфекционным болезням, и может быть использовано для оценки показаний к кардиометаболической терапии при инфекционных поражениях миокарда у детей.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики инфекционной патологии почек, вызванной Chlamydia trachomatis. Сущность способа состоит в том, что определяют в моче газохроматографическим и масс-спектрометрическим методами 2-пропанамид, N-амино-оксиметиламид, 2-метил-5-(1-метил-этил)-фенол и 4-4-дигидроокси-дифенил-сульфон и при их количестве 0,002-0,06 ммоль/л; 0,002-0,06 ммоль/л; 0,003-0,11 ммоль/л и 0,002-0,05 ммоль/л соответственно диагностируют инфекционную патологию почек, вызванную Chlamydia trachomatis.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для дифференциальной диагностики цервикальных дисплазий и рака шейки матки. Получают биопсию шейки матки.

Изобретение относится к области фармакологии, биофармации и фармацевтики и касается способа определения биологической неэквивалентности образцов наноалмазов путем сравнительного определения влияния образцов наноалмаза на мембранный потенциал митохондрий животных.
Изобретение относится к области судебной медицины. В долевой бронх предполагаемой поврежденной доли легкого вводят шланг от аппарата искусственной подачи воздуха.

Изобретение относится к биологии, токсикологической и аналитической химии, а именно к способам определения прокаина в плазме крови. В плазму крови, содержащую прокаин, вводят фторид натрия для создания концентрации 10 мг/мл, полученную смесь обрабатывают ацетоном, извлечение отделяют от выпавшего осадка путем фильтрования, ацетон из фильтрата испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, водный остаток разбавляют путем прибавления воды, образующийся раствор насыщают сульфатом аммония, подщелачивают аммонийным буферным раствором до pH 9,0-9,5, экстрагируют двукратно порциями органического экстрагента, в качестве которого используется 30% раствор камфоры в метилацетате, при соотношении водной и органической фаз 1:1 по объему, органические экстракты отделяют, объединяют, растворитель из объединенного экстракта испаряют в токе воздуха при комнатной температуре, остаток хроматографируют в тонком слое силикагеля СТХ-1А на пластинах «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А-УФ, применяя подвижную фазу дихлорметан-этанол в соотношении 6:4 по объему, хроматограмму проявляют в УФ-свете, анализируемое вещество элюируют из сорбента смесью ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему, хроматографируют методом ВЭЖХ с применением обращеннофазового сорбента «Nucleosil C18», полярной подвижной фазы ацетонитрил-метанол-0,025 М раствор дигидрофосфата калия с pH 3,0 в соотношении 10:10:90 по объему и УФ-детектора, регистрируют оптическую плотность при длине волны 298 нм и вычисляют количество анализируемого соединения по площади хроматографического пика.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и описывает способ исследования состояния детоксикационной функции печени. Способ включает определение утром натощак в крови содержание МСМ (молекулы средней массы), АЛТ (аланинаминотрансферазы) и ACT (аспартатаминотрансферазы), определение этих же параметров накануне вечером перед сном, а также определение утром и вечером объема циркулирующей крови и гематокрит с последующей оценкой коэффициента состояния детоксикационной функции печени и при значениях коэффициента К≤0,6 детоксикационную функцию печени расценивают как удовлетворительную, а при К>0,6 - как снижение детоксикационной функции печени.
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской бактериологии и медицинской микологии, и описывает способ количественной оценки адгезивных свойств условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от человека и объектов окружающей среды.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и ветеринарных лабо-раторий.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и может быть использовано в практике химико-токсикологических, экспертно-криминалистических и клинических лабораторий.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения степени тяжести симфизиопатии у беременных во II и III триместрах. Сущность способа состоит в том, что у беременных во II и III триместрах определяют диастаз лонного сочленения с помощью УЗИ, определяют в сыворотке крови магний общий в ммоль/л, суточную экскрецию кальция с мочой в ммоль/сутки, а также выявляют жалобы на боли в области лонного сочленения и пояснично-крестцовом отделе позвоночника, парестезии, судорожные подергивания и сведения икроножных мышц, болезненности при пальпации лонного и/или крестцово-подвздошного сочленения и при определенных значениях указанных параметров определяют легкую, среднюю и тяжелую степени симфизиопатии. Использование заявленного способа позволяет точно и эффективно определить степень тяжести симфизиопатии у беременных во II и III триместрах. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки нарушения импрегнации зародыша в слизистую оболочку матки на первых неделях беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции, характеризующейся тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, гистохимическим методом определяют активность 5β-прегнен-3,20-дион-дегидрогеназы, а также определяют содержание прогестерона, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, подавлении активности 5β-прегнен-3,20-дион-дегидрогеназы до 47,6±0,25 усл. ед., снижении содержания прогестерона до 90,5±2,0 нмоль/л, оценивают нарушение импрегнации зародыша в слизистую оболочку матки. 1 пр., 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунотерапии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения у пациента с раком. Для этого пациенту вводят иммуногенную композицию, которая содержит рекомбинантный вирусный вектор, экспрессирующий in vivo весь или часть MUC-1 антигена. При этом способ анализа включает получение биологического образца от пациента после введения указанной иммуногенной композиции и измерение уровней интерферона γ в образце. Уровни интерферона γ свыше приблизительно 4 пг/мл свидетельствуют о том, что пациент демонстрирует успешный клинический выход для лечения. Изобретение позволяет оценить клинический результат лечения рака у пациента.14 з.п. ф-лы., 3 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для диагностики дисбаланса Cu, Mo и W у сельскохозяйственных копытных животных. Способ включает подготовку проб биоиндикаторов, определение в них содержания микроэлементов и оценку полученных результатов. В качестве биоиндикаторов используют образец пахты, выделенный из молока сельскохозяйственных копытных животных. Определяют в нем валовое содержание меди, молибдена и вольфрама. Находят отношение валовых содержаний Cu/Mo и Mo/W. При значениях отношения Cu/Mo, не превышающих 1, и отношения Mo/W, не превышающих 250, считают, что дисбаланс микроэлементов в организме животных и среде их обитания отсутствует. При превышении указанных значений диагностируют наличие микроэлементного дисбаланса. Заявленный способ позволяет быстро и точно диагностировать микроэлементоз дисбаланса Cu, Mo и W у сельскохозяйственных копытных животных. 4 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано в клинической практике для оценки эффективности антибактериальной терапии у больных с бактериальной инфекцией, в том числе с бактериальным сепсисом. Предложенный способ заключается в том, что в крови пациентов одновременно определяют концентрации пара-гидроксифенилуксусной, фенилмолочной и пара-гидроксифенилмолочной кислот. Если в течение 24-48 часов при повторном анализе крови суммарная концентрация трех измеряемых кислот снижается в 2 и более раз, а концентрации всех трех кислот раздельно имеют направленность к снижению, то антибактериальную терапию расценивают как эффективную. Способ может применяться для пациентов всех возрастных групп и позволяет уменьшить смертность от инфекционных заболеваний и осложнений. 4 ил., 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и касается прогнозирования ранней постинфарктной стенокардии (РПИС) у пациентов с острым инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST в госпитальном периоде. Для этого осуществляют анализ клинических данных и параметров липидного профиля в первые сутки от начала заболевания. Риск развития РПИС прогнозируют по формуле:P=-3,238+0,01·КДО+0,049·ФВ-0,532·СЖК+0,002·анти омЛПНП+0,001·ПВ-1,129·ХС ЛПВП,где КДО - конечный диастолический объем, ФВ - фракция выброса левого желудочка, СЖК - свободные жирные кислоты, анти омЛПНП - антитела к окислительно-модифицированным липопротеинам низкой плотности, ПВ - пероксид водорода, ХС ЛПВП - холестерин липопротеинов высокой плотности. При значениях Р меньших 0,606 и максимально приближенных к центроиду - 0,080 у пациента прогнозируют РПИС. Способ обеспечивает повышение достоверности индивидуального прогнозирования РПИС в первые сутки от начала заболевания, что, в свою очередь, позволяет максимально рано проводить соответствующую корригирующую терапию. 2пр., 2 таб.
Изобретение относится к медицине, в частности к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования состояния тонуса артериальных и венозных сосудов мозга у больных гриппом. Для этого у больного определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. Полученные данные подставляют в формулы: ППа=-28,64+А*7-В*3,1+С*5,2 и ППв=-5,37+А*6,87-В*2,7+С*4,02, где ППа - прогностический показатель состояния тонуса артериальных сосудов мозга; ППв - прогностический показатель состояния тонуса венозных сосудов мозга; 28,64 - константа математических расчетов для прогнозирования состояния тонуса артериальных сосудов мозга; 5,37 - константа математических расчетов для прогнозирования состояния тонуса венозных сосудов мозга; А - возрастная группа пациентов, где первая группа - если возраст пациентов колеблется от 21 до 35 лет, в формулу подставляют цифру 1, вторая группа - от 36 до 50 лет - цифру 2, третья группа - от 51 до 65 лет - цифру 3; В - срок наблюдения, где 1-й срок наблюдения - 1-3 дни болезни, в формулу подставляют цифру 1; 2-й срок - 4-5 дни болезни - цифру 2; 3-й срок - 6-8 дни - цифру 3; 4-й срок - 9-14 дни от начала заболевания - цифру 4; 5-й срок - один месяц от начала заболевания - цифру 5; С - значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах. При значении ППа и ППв больше 0, но меньше 5 включительно прогнозируют развитие атонии сосудов. Для артериальных сосудов мозга при значении ППа больше 5 и меньше 40 прогнозируют развитие гипотонии сосудов. При значении ППа от 40 и до 60 включительно прогнозируют развитие нормотонии сосудов. При значении ППа больше 60 - развитие повышенного тонуса. Для венозных сосудов мозга при значении ППв больше 5 и меньше 50 прогнозируют развитие гипотонии сосудов. При значении ППв от 50 включительно и до 70 включительно прогнозируют развитие нормотонии сосудов. При значении ППв больше 70 - развитие повышенного тонуса. Способ обеспечивает возможность своевременного выявления изменений тонуса сосудов мозга у больных гриппом и обоснованного проведения их коррекции. 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для оценки риска развития хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) у пациентов с хроническим бронхитом. Способ основан на идентификации и анализе состава жирных кислот мембран эритроцитов крови пациентов с последующим расчетом коэффициента риска (R) по соотношению жирных кислот С20:4n-6 и С20:5n-3. При значении R до 10,40-10,64 степень риска развития ХОБЛ оценивают как низкую; при значении R от 10,65 до 14,71-17,31 степень риска развития ХОБЛ оценивают как среднюю; при значении R в диапазоне от 17,32 до 29,80-35,4 диагностируют наличие ХОБЛ легкой степени. Использование способа позволяет в более ранние сроки от начала заболевания устанавливать возможность риска развития ХОБЛ, прогнозировать динамику развития болезни и проводить своевременное лечение. Предложенный способ является достоверно информативным и точным методом ранней диагностики ХОБЛ, не имеющим противопоказаний, который позволяет прогнозировать развитие заболевания при минимальных клинических проявлениях патологического процесса. 2 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа идентификации пациентов с инфарктом миокарда, имеющих повышенный риск развития патологического состояния сердца, включающего исследование, после инфаркта, образца биологической жидкости пациента на предмет уровней сосудистого эндотелиального фактора роста В (VEGFB), тромбоспондина-1 (THBS1) и плацентарного фактора роста (PGF). Также группа изобретений касается способа осуществления прогноза для пациента с инфарктом миокарда; системы для идентификации пациентов с инфарктом миокарда. Группа изобретений обеспечивает проведение надежной диагностики повышенного риска развития патологического состояния сердца у пациентов после инфаркта миокарда. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 пр., 9 ил., 7 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии, и может быть использовано для прогнозирования замедленной консолидации переломов. Описано прогнозирование замедленной консолидации переломов, которое осуществляют на основании определения относительного содержания ростового фактора (TGFβ1), лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (ЛТА), дезоксипиридинолина (ДПИД), регистрации показателя микроциркуляции (ПМ) конечностей пациента на 10-е сутки посттравматического периода и расчета коэффициента по предлагаемой формуле, на основании значения которого прогнозируют замедленную консолидацию переломов. Техническим результатом является повышение точности прогноза. 1 табл., 3 пр.
Наверх