Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием



Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием
Азолоазиниевые соли фторхинолонов, обладающие антибактериальным и противовирусным действием

 


Владельцы патента RU 2547835:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской Академии наук (RU)

Изобретение относится к азолоазиниевым солям соединений фторхинолонового ряда формул 4а-в, 5а-в, 7а-б и 8а-б, обладающим антибактериальным и противовирусным свойствами. Заявленные соединения могут быть использованы для создания лекарственного средства для экстренной профилактики и лечения инфекций, вызванных патогенами как бактериальной, так и вирусной природы, в том числе особо опасных. В общих формулах 4 и 5 R=СН3, R12Н5; R=Н, R12Н5; R=С2Н5, R1=цикло-С3Н7, в формулах 7 и 8 R=Н (7а, 8а); R=СН3 (7б, 8б). 8 табл., 2 пр.

 

1. Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области биологически активных соединений и касается новых азолоазиниевых солей антибактериальных препаратов фторхинолонового ряда (пефлоксацина, норфлоксацина, энрофлоксацина, левофлоксацина и др.), обладающих антибактериальным и противовирусным действием и предназначенных для лечения и профилактики бактериальных и вирусных заболеваний человека и животных. Изобретение может быть использовано в научно-исследовательских лабораториях, химико-фармацевтической промышленности, лечебных учреждениях, а также в ветеринарии.

2. Уровень техники

Анализ современного состояния санитарно-эпидемиологической обстановки показывает, что в некоторых сопредельных с территорией Российской Федерации странах сохраняется эпидемически неблагополучная ситуация по целому ряду инфекционных заболеваний. При этом наибольшую угрозу представляют особо опасные инфекции (далее - ООИ), к числу которых относятся чума, сибирская язва, туляремия, геморрагические лихорадки, энцефалиты и др. С увеличением миграционных потоков возрастает вероятность завоза и распространения ООИ на территории Российской Федерации.

В современной социально-политической обстановке нельзя исключать возможность применения различных типов биопатогенов в качестве диверсионных средств, а также в ходе локальных вооруженных конфликтов. При этом наиболее высока вероятность использования биологических средств, включающих возбудителей сибирской язвы, туляремии, венесуэльского энцефаломиелита лошадей, лихорадок разных видов.

В этой связи экстренная профилактика и этиотропное лечение, для осуществления которых рекомендован ряд эффективных антибактериальных препаратов фторхинолонового ряда, очень важны. Фторхинолоны прочно вошли в арсенал самых современных антибактериальных средств и широко представлены на фармацевтическом рынке России.

Однако даже самые современные фторхинолоны 4-го поколения с широким спектром действия не обладают защитным эффектом в отношении патогенов вирусной природы (монография В.Н. Чарушина, Э.В. Носовой, Г.Н. Липуновой, О.Н. Чупахина. Фторхинолоны.- М.: Физматлит, 2013). Необходим поиск новых средств и методов экстренной профилактики и раннего этиотропного лечения ООИ - создание комплексного лекарственного средства, обладающего одновременно и антибактериальным и противовирусным действием.

В широком кругу синтетических гетероциклических соединений, обладающих противовирусным действием, значимое место занимают азолоазины, содержащие в структуре молекулы мостиковый атом азота: 1,2,4-триазоло[1,5-а]триазины (1) и 1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины (2). Интерес к азолоазинам обусловлен, прежде всего, их структурным сходством с нуклеиновыми основаниями. Благодаря этой особенности они могут выступать в роли антиметаболитов, проявляя противовирусное действие.

На основе азолоазиниевых соединений разработаны лекарственные препараты с широким спектром противовирусного действия - Триазавирин и Триазид, которые по результатам доклинического и клинического изучения могут быть рекомендованы к медицинскому применению.

Препарат Триазавирин (7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло [5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид натрия) эффективен в отношении широкого спектра вирусов гриппа. Препарат Триазавирин® находится на завершающей стадии клинических исследований. (О.Н. Чупахин, В.Л. Русинов, Е.Н. Уломский, В.Н. Чарушин, А.Ю. Петров, О.И. Киселев. Патент РФ №2294936. Опубликован 10.03.2007).

Триазид (5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинид l-аргининия моногидрата) рекомендован для клинического изучения (О.Н. Чупахин, В.Н. Чарушин, В.Л. Русинов, Е.Н. Уломский, С.К. Котовская, О.И. Киселев, Э.Г. Деева, К.В. Саватеев, С.С. Борисов. Заявка на патент РФ от 15.04.2013 №2013116765/024823).

Анализ патентной и научной литературы показывает, что комбинации фторхинолонов с противовирусными средствами встречаются достаточно редко. Такие композиции, как правило, представляют собой физические смеси, в которых присутствуют в определенных весовых соотношениях антибактериальный фторхинолон, противовирусный препарат (один и более) и вспомогательные вещества. Так, комбинации фторхинолонов с противовирусными средствами применяются в качестве средств профилактики и лечения вирусных и бактериальных инфекций в ветеринарии [CN 1185318. Pressure-sensitive adhesive sheet and convered structure / Isao S., Tomoo O., Hiroshi K. Lintec Corp) // Appl. 28.08.2002 CN Appl. 20018000796, 05.03.2001. (C09J 7/02). 32 pp.; WO 0145727. Veterinary compositions / Shoa A A.R., Hossny E.-B., Kefah D.A. (New Pharma Res Sweden Ab; Shoa A A.R.; Hossny E.B.; Kefan D.A.) // Appl. 28.06.2001 WO Appl. 2000 EP 13017, 20.12.2000. (A61K 31/70; A61K 45/06; A61K 47/10; A61K 47/12; A61K 47/18; A61K 47/22; A61P 31/12). 31 pp.; CN 101467999. Compound preparation of berberine hydrochloride / Hongyun W., Jianzheng L., Changchao B. (Zhengzhou Houyi Pharmaceutical) // Appl. 01.07.2009 CN Appl. 20071300060, 25.12.2007. (A61K 31/4375). 7 pp.].

При анализе патентной и специальной литературы соединений, полученных химическим синтезом на основе фторированных хинолонов и обладающих одновременно как антибактериальным, так и противовирусным действием, не выявлено.

3. Сущность изобретения

Техническим результатом данного изобретения является создание новых химических соединений - азолоазиниевых солей соединений фторхинолонового ряда. Указанный технический результат достигается тем, что согласно изобретению синтезированы новые азолоазиниевые соли фторхинолонов формул 4а-в, 5а-в, 7а, б и 8а, б, обладающие антибактериальным и противовирусным действием. Данные соединения могут быть использованы для создания отечественных лекарственных средств - комплексных препаратов для экстренной профилактики и лечения инфекций, вызванных патогенами как бактериальной, так и вирусной природы.

В литературе указанные соединения 4а-в, 5а-в, 7а, б и 8а, б, способы их получения и физико-химические характеристики не описаны.

4. Сведения, подтверждающие сущность изобретения

4.1. Синтез азолоазиниевых солей фторхинолонов

В структуре большинства представленных на фармацевтическом рынке фторированных хинолонов содержится остаток замещенной аминогруппы, благодаря чему фторхинолоны проявляют выраженные N-основные свойства. По этой причине некоторые препараты фторхинолонового ряда применяют в виде солей с неорганическими и органическими кислотами (пефлоксацин - метансульфонат, норфлоксацин и ципрофлоксацин - гидрохлориды и т.д.) для повышения растворимости и улучшения биодоступности лекарственного средства. Что касается азолоазинов, то они по своей природе являются NH-кислотами и могут образовывать соли с неорганическими и органическими основаниями (триазавирин - натриевая соль, триазид - аргининиевая соль).

Способность двух сложных органических молекул вступать в реакции солеобразования (N-оснований с NH-кислотами) была нами использована для получения новых химических соединений - азолоазиниевых солей фторхинолонов. В качестве N-оснований использованы бициклические фторхинолоны (пефлоксацин 3а, норфлоксацин 3б, энрофлоксацин 3в) и трициклические фторхинолоны (левофлоксацин 6а и его аналог 6б), а в качестве NH-кислот - азолоазины: 7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид (1) и 5-метил-6-нитро-7-оксо-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (2). Получение азололазиниевых солей на основе бициклических фторхинолонов 3а-в и трициклических фторхинолонов 6а, б представлено схемами 1 и 2.

Пример 1. Синтез 7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-идов фторхинолонов (4а-в, 7а, б) (солей фторхинолонов 3а-в и 6а, б с NH-кислотой триазавирина 1). В двугорлую колбу, помещенную на магнитную мешалку с нагревом, добавляют 3 ммоль соответствующего фторхинолона 3а-в, 6а, б в 30 мл этанола, смесь нагревают при перемешивании до 50-70°С. К полученной суспензии медленно прикапывают раствор 5 ммоль 7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ида (NH-кислоты триазавирина 1) в 30 мл этанола. При этом реакционная масса из суспензии переходит в раствор, из которого начинает выпадать хлопьевидный осадок. Реакционную массу перемешивают 3 ч при комнатной температуре до полного выпадения соответствующей соли 4а-в, 7а, б. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 80 мл этанола в два приема, высушивают и перекристаллизовывают из смеси этанол: вода.

7-Метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид 1,4-дигидро-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-этил-3-хинолинкарбоновой кислоты (4а). Выход 76,4%. Т. пл. ≥250°С. Найдено, %: С 47,35; Н 4,44; N 22,24. Брутто-формула C22H24FN9O6S*1,5H2O. Вычислено, %: С 47,48; Н 4,89; N 22,65. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.46 д. (3Н, СН2СН 3), 2.62 с. (3Н, SCH3), 1.94 с. (3Н, NCH3), 2.94-3.58 м. [8Н, 2 N(CH2)2], 4.60 д. (2Н, СН 2СН3), 7.22 д. (1Н, Н-8), 7.89 д. (1Н, Н-5), 8.91 с. (1H, Н-2).

7-Метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид 1,4-дигидро-7-(пиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-этил-3-хинолинкарбоновой кислоты (4б). Выход 70,6%. Т. пл. ≥250°С. Найдено, %: С 42,91; Н 4,14; N 21,35. Брутто-формула C21H22FN9O6S*2H2O. Вычислено, %: С 43,23; Н 4,49; N 21,60. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.46 д. (3Н, СН2СН 3), 2.62 с. (3Н, SCH3), 3.32 м. [4Н, N(CH2)2], 3.53 м. [4Н, N(CH2)2], 4.59 д. (2Н, СН 2СН3), 7.22 д. (1Н, Н-8), 7.93 д. (1Н, Н-5), 8.92 с. (1Н, Н-2).

7-Метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид 1,4-дигидро-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-циклопропил-3-хинолинкарбоновой кислоты (4в). Выход 80,0%. Т. пл. ≥250°C. Найдено, %: С 48,99; Н 4,14; N 21,56. Брутто-формула C24H26FN9O6S. Вычислено, %: С 49,06; Н 4,46; N 21,46. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.3-1.4 м. [7Н, СН2СН 3, (СН2)2], 2.61 с. (3Н, SCH3), 3.3-3.8 м. [11Н, СН 2СН3, СН, 2N(CH2)2], 7.56 д. (1Н, Н-8), 7.83 д. (1Н, Н-5), 8.61 с. (1Н, Н-2), 9.48 уш. с. (1H, NH), 14.81 уш. с.(1Н, ОН).

7-Метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид (3S)-(-)-9-фтор-3-метил-10-(пиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо[1,2,3-d,е][1,4]-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (7а). Выход 75,8%. Т. пл. >250°C. Найдено, %: С 45,20; Н 3,97; N 21,96. Брутто-формула C22H22FN9O7S*0,5H2O. Вычислено, %: С 45,20; Н 3,97; N 21,56. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.50 д. (3Н, СН-CH 3), 2.62 с. (3Н, SCH3), 3.24 м. [4Н, N(CH2)2], 3.49 м. [4Н, N(CH2)2], 4.40 д.д. (1H, Н-2а), 4.58 д.д. (1H, Н-2в), 4.95 м. (1Н, Н-3), 7.48 д. (1Н, Н-8), 8.92 с. (1Н, Н-5).

7-Метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1,2,4]триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин-1-ид (3S)-(-)-9-фтор-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо [1,2,3-d,е][1,4]-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (7б). Выход 71,9%. Т. пл. ≥250°С. Найдено, %: С 46,75; Н 3,92; N 21,27. Брутто-формула C23H24FN9O7S. Вычислено, %: С 46,86; Н 4,10; N 21,39. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.49 д. (3Н, СН-СН 3), 2.62 с. (3Н, SCH3), 2.94 с. (3Н, N-CH3), 2.9-3.5 м. [8Н, 2N(CH2)2], 4.39 д.д. (1Н, Н-2а), 4.58 д.д. (1Н, Н-2в), 4.95 м. (1Н, Н-3), 7.55 д. (1H, Н-8), 8.97 с.(1Н, Н-5), 14.84 уш. с. (1Н, ОН).

Пример 2. Синтез 5-метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинидов фторхинолонов (5а-в, 8а, б) (солей фторхинолонов 3а-в и 6а, б с NH-кислотой триазида 2). В двугорлую колбу, помещенную на магнитную мешалку с нагревом, добавляют 3 ммоль соответствующего фторхинолона 3а-в, 6а, б в 30 мл этанола, нагревают при перемешивании до 50-70°C. К полученной суспензии медленно прикапывают раствор 5 ммоль 5-метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинида (NH-кислоты триазида 2) в 30 мл этанола. При этом реакционная масса из суспензии переходит в раствор, из которого начинает выпадать хлопьевидный осадок. Реакционную массу перемешивают 3 ч при комнатной температуре до полного выпадения соответствующей соли 5а-в, 8а, б. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 80 мл этанола в два приема, высушивают и перекристаллизовывают из смеси этанол: вода.

5-Метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло [1,5-а] пиримидинид 1,4-дигидро-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-этил-3-хинолинкарбоновой кислоты (5а). Выход 75,0%. Т. пл. ≥250°C. Найдено, %: С 51,12; Н 4,60; N 20,99. Брутто-формула C23H25FN8O6*0,5Н2О.%. Вычислено, %: С 51,40; Н 4,89; N 20,85. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O, δ (м.д.): 1.45 д. (3Н, СН2СН 3), 2.47 с. (3Н, ССН3), 2.90 с. (3Н, NCH3), 3.39 м. [4Н, N(CH2)2], 3.58 м. [4Н, N(CH2)2], 4.59 д. (2Н, СН 2СН3), 7.22 д. (1Н, Н-8), 7.92 д. (1H, Н-5), 8.04 с. (1Н, CH=N), 8.93 с. (1Н, Н-2).

5-Метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинид 1,4-дигидро-7-(пиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-этил-3-хинолинкарбоновой кислоты (5б). Выход 81,2 %. Т. пл. ≥300°С. Найдено, %: С 50,69; Н 4,34; N 21,39. Брутто-формула C22H23FN8O6. Вычислено, %: С 50,36; Н 4,51; N 21,78. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.45 д. (3Н, СН2СН 3), 2.43 с. (3Н, ССН3), 3.30 м. [4Н, N(CH2)2], 3.54 м. [4Н, N(CH2)2], 4.61 д. (2Н, СН 2СН3), 7.24 д. (1Н, Н-8), 7.90 д. (1H, Н-5), 7.96 с. (1Н, CH=N), 8.95 с.(1Н, Н-2).

5-Метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинид 1,4-дигидро-7-(4-этилпиперазин-1-ил)-4-оксо-6-фтор-1-циклопропил-3-хинолинкарбоновой кислоты (5в). Выход 77,9%. Т. пл. ≥300°C. Найдено, %: С 54,17; Н 4,79; N 19,98. Брутто-формула C25H27FN8O6. Вычислено, %: С 54,15; Н 4,91; N 20,21. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.1-1.6 м. [7Н, СН2СН 3, (СН2)2], 2.7 с. (3Н, ССН3), 3.2-3.8 м. [11Н, CH 2CH3, СН, 2N(CH2)2], 7.59 д. (1Н, Н-8), 7.92 д. (1Н, Н-5), 8.02 с. (1Н, CH=N), 8.67 с.(1Н, Н-2), 14.81 уш. с. (1Н, ОН).

5-Метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинид (3S)-(-)-9-фтор-3-метил-10-(пиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо[1,2,3-d,e][1,4]-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (8а). Выход 72,6%. Т. пл. ≥250°C. Найдено, %: С 49,88; Н 4,32; N 20,10. Брутто-формула C23H23FN8O7*0,5H2O. Вычислено, %: С 50,10; Н 4,39; N 20,30. Спектр 1Н ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.49 д. (3Н, СН-СН 3), 2.46 с. (3Н, ССН3), 3.28 м. [4Н, N(CH2)2], 3.51 м. [4Н, N(CH2)2], 4.38 д.д. (1Н, Н-2а), 4.57 д.д. (1Н, Н-2в), 4.95 м. (1Н, Н-3), 7.58 д. (1H, Н-8), 7.91 с. (1Н, CH=N), 8.96 с. (1H, Н-5), 14.82 уш. с.(1Н, ОН).

5-Метил-6-нитро-7-оксо-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинид (3S)-(-)-9-фтор-3-метил-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-2,3-дигидро-7Н-пиридо[1,2,3-d,е][1,4]-бензокса-зин-6-карбоновой кислоты (8б). Выход 77,7%. Т. пл. ≥250°С. Найдено, %: С 50,82; Н 4,34; N 19,91. Брутто-формула C24H25FN8O7*0,5H2O. Вычислено, %: С 50,96; Н 4,65; N 19,82. Спектр 1H ЯМР (400 МГц, D2O), δ (м.д.): 1.49 д. (3Н, СН-СН 3), 2.46 с. (3Н, ССН3), 2.95 с. (3Н, N-CH3), 3.0-3.6 м. [8Н, 2N(CH2)2], 4.38 д.д. (1Н, Н-2а), 4.57 д.д. (1Н, Н-2), 4.95 м. (1H, Н-3), 7.55 д. (1Н, Н-8), 8.10 с. (1H, CH=N), 8.95 с. (1Н, Н-5).

Полученные нами азолоазиниевые соли (триазавирина и триазида) фторхинолонов (пефлоксацина, норфлоксацина, энрофлоксацина, левофлоксацина и его аналога) 4а-в, 5а-в, 7а, б и 8а, б исследованы на моделях ООИ бактериальной и вирусной природы и проведена оценка эффективности азолоазиниевых солей фторхинолонов.

4.2. Эффективность азолоазиниевых солей фторхинолонов на экспериментальных моделях особо опасных инфекций бактериальной природы.

4.2.1. Для моделирования ООИ бактериальной природы использованы вирулентные и вакцинные штаммы возбудителей сибирской язвы и туляремии.

Сибирская язва - вторая вакцина Ценковского (штамм 71/12). Споровую форму возбудителя готовят следующим образом: на мясопептонном бульоне (рН 7,2-7,4) при температуре 37°C в течение 24 ч выращивают маточный материал. Суточную бульонную культуру равномерно распределяют по поверхности пшеничного агара, разлитого в матрицы, и культивируют в термостате при температуре (32±0,5)°C в течение 72 ч. По окончании культивирования в термостате матрацы заворачивают в темную бумагу и выдерживают в темном месте при температуре 10°C в течение 5-7 суток. Выросшую культуру смывают с поверхности агара стерильной дистиллированной водой. Полученную суспензию спор переносят в стерильную колбу с притертой пробкой, которую встряхивают в шутель-аппарате в течение 60 мин. По истечении времени встряхивания содержимое колбы фильтруют через стерильный ватно-марлевый фильтр в стерильный флакон с бусами и хранят при температуре (4±0,5)°C.

Туляремия - вакцинный штамм 15 линии НИИЭГ. Сухую туляремийную вакцину, содержащую лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма 15 линии НИИЭГ, разводят ампулированной дистиллированной водой, находящейся в комплекте с препаратом, с соблюдением правил асептики. Ампулу встряхивают в течение трех минут до образования гомогенной взвеси, которую равномерно распределяют по 0,2 мл на поверхности Ft-агара в чашках Петри. Чашки помещают в термостат при температуре 37°C и культивируют в течение трех суток. Выросшую культуру смывают с поверхности Ft-агара стерильным физиологическим раствором (рН 7,2-7,4). Полученную суспензию переносят в стерильную колбу и используют для получения различных концентраций взвесей микроба и дальнейшего внутрибрюшинного заражения экспериментальных животных.

4.2.2 Моделирование сибиреязвенной инфекции in vivo осуществляют на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем их подкожного заражения взвесью спор штамма 71/12 в объеме 0,5 мл. Модель характеризуется высокой остаточной вирулентностью и вызывает у мышей остротекущую септицемию, заканчивающуюся на 3-4 сутки летальным исходом. Наблюдают за инфицированными животными в течение 14 суток, ежедневно регистрируя число живых и павших в опытных и контрольных группах. Специфичность гибели животных подтверждают бактериологически - посевом селезенки павших животных на специальную питательную среду.

4.2.3 Биологическую (ингибирующую) активность полученных соединений в отношении агентов бактериальной природы оценивают in vitro с использованием вакцинного штамма 71/12 сибирской язвы in vitro по минимальной подавляющей концентрации (МПК) оцениваемых препаратов, которую определяют макрометодом серийных (двукратных) разведений в жидкой питательной среде.

4.2.4 Показатель токсичности (ЛД50) исследуемых соединений определяют по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Статистические методы в микробиологических методах. - Л.: Гос. изд-во мед. лит., 1962. - 178 с.). Эффективность соединений оценивают по выживаемости животных в подопытных (получавших соответствующие препараты) и контрольных группах. Процент выживших животных определяют по таблицам Генеса B.C. (Генес B.C. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. - М.: Наука, 1967. - 208 с.). Определяют защитную эффективность (%) оцениваемых средств экстренной профилактики и этиотропного лечения как разность между количеством выживших инфицированных животных в подопытной группе (%) и количеством выживших инфицированных животных (%) в контрольной группе, а также вычисляют среднюю продолжительность жизни (СПЖ, суток) подопытных и контрольных животных. Среднюю продолжительности жизни Т, суток, инфицированных животных в подопытной и контрольной группах вычисляют по формуле:

,

где N - количество выживших животных, голов;

S - срок наблюдения, суток;

N1 - количество зараженных мышей в группе, голов.

4.2.5 Статистический анализ результатов исследования произведен с помощью компьютерной программы статистической обработки данных Statistica 6.0 for Windows. Для оценки количественных показателей определяют стандартные количественные характеристики: среднее значение показателя (М), среднеквадратичное отклонение, стандартная ошибка средней величины (m). Сравнение количественных данных проводят при помощи парного и непарного теста Стьюдента с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты представлены как М±m. Различия считают достоверными при p≤0,05.

4.2.6 Модель сибиреязвенной инфекции

Результаты исследований in vitro, характеризующие биологическую (ингибирующую) активность оцениваемых азолоазиниевых солей фторхинолонов, представлены в таблице 1.

Представленные в таблице 1 данные свидетельствуют, что наиболее выраженными ингибирующими свойствами в отношении Bacillus anthracis (штамм 71/12) обладают азолоазиниевые соли (триазавирина и триазида) с фторхинолонами (пефлоксацином, энрофлоксацином и левофлоксацином) - соединения: 4а, 5а, 4в, 5в, 7б и 8б. Минимальная подавляющая концентрация (МПК) этих соединений составляет от 0,075 до 0,25 мкг/мл. Полученные результаты находятся на уровне соответствующих показателей собственно фторхинолонов, применяемых в качестве антибактериальных препаратов.

Азолоазиниевые соли (триазавирина и триазида) с фторхинолонами (норфлоксацином и аналогом левофлоксацина) 4б, 5б, 7а и 8а в отношении сибиреязвенных бацилл проявляют менее выраженную антибактериальную активность (МПК 5,0-20,0 мкг/мл), поскольку сами фторхинолоны проявляют не столь выраженную активность в отношении сибиреязвенных бацилл в сравнении с пефлоксацином, энрофлоксацином и левофлоксацином.

Исследования антимикробной активности соединений с учетом особенностей их действия на уровне макроорганизмов проведены in vivo на сибиреязвенной модели с оценкой защитной эффективности соединений, при этом заражающие дозы Bacillus anthracis (штамм 71/12) составляют 10 и 100 ЛД50. Численность каждой опытной и контрольной групп - 10 особей. Оцениваемые соединения вводят животным в различных концентрациях в объеме 0,5 мл per os. Изучают следующие схемы введения оцениваемых соединений - одновременно с заражением, через 24 и 48 ч после заражения. Результаты исследований приведены в таблице 2.

Представленные в таблице 2 данные свидетельствуют, что наибольшим защитным эффектом обладают азолоазиниевые соли фторхинолонов 4в, 7б, и 8б. Уровень защиты составляет 80, 90 и 100% в условиях заражения возбудителем в дозе 10 ЛД50 и 50, 50 и 90% - в условиях заражения возбудителем в дозе 100 ЛД50.

Остальные исследованные соединения проявляют меньшую защитную эффективность в отношении сибиреязвенной инфекции. Так, соединение 5в обеспечивает защиту 70% инфицированных возбудителем Bacillus anthracis (штамм 71/12) животных вне зависимости от его заражающей дозы 10 или 100 ЛД50. Соединения 4а и 5а обеспечивают защиту 40 и 60% животных, инфицированных возбудителем в дозе 10 ЛД50, и соответственно 20 и 10% животных, инфицированных возбудителем в дозе 100 ЛД50. Наименее эффективными оказались азолоазиниевые соли норфлоксацина и аналога левофлоксацина 4б, 5б, 7а и 8а, которые обеспечивают уровень защиты от сибиреязвенной инфекции 30% и менее.

Таким образом, азолоазиниевые соли фторхинолонов следует рассматривать как перспективные средства экстренной профилактики и этиотропного лечения сибиреязвенной инфекции, наиболее перспективными из них являются азолоазиниевые соли на основе энрофлоксацина и левофлоксацина.

4.2.7 Модель туляремийной инфекции

Исследуемые соединения разводят химически чистым 1% водным раствором крахмала с твином и вводят per os по 0,5 мл в дозе 2,0 мг/особь через 4 ч, 24 ч и 48 ч после заражения возбудителем туляремии, который используют в двух заражающих дозах - 10 и 100 ЛД50. Всего в исследовании использованы 340 белых беспородных мышей-самцов массой 18-20 г, по 170 особей на каждой заражающей дозе возбудителя. Результаты исследований приведены в таблице 3.

Представленные в таблице 3 данные свидетельствуют, что азолоазиниевые соли фторхинолонов обладают выраженной противотуляремийной активностью. Показатели выживаемости всех соединений, за исключением азолоазиниевых солей (триазавирина и триазида) с норфлоксацином 4б и 5б, в подопытных группах составляют 90-100%, независимо от заражающей дозы возбудителя. Для соединений 4б и 5б среди животных, инфицированных возбудителем в дозе 10 ЛД50, выживаемость составила 100 и 91%, тогда как в дозе 100 ЛД50 - 34 и 71% соответственно. Следует отметить, что соединения 4б и 5б показали менее выраженную защитную эффективность и на модели сибиреязвенной инфекции.

Таким образом, выраженной активностью в отношении ООИ бактериальной природы обладают азолоазиниевые соли (как триазавирина, так и триазида) на основе фторхинолонов - пефлоксацина, энрофлоксацина и левофлоксацина. Противомикробный эффект азолоазиниевых солей фторхинолонов обусловлен фармацевтической природой входящего в состав молекулы антибактериального средства - фторированного хинолона.

4.3 Эффективность азолоазиниевых солей фторхинолонов на экспериментальных моделях особо опасных инфекций вирусной природы

4.3.1. Для моделирования ООИ использованы вирулентные и вакцинные штаммы возбудителей: вирусов венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ), лихорадки долины РИФТ (ЛДР), лихорадки Денге типа 1 (ЛД), лихорадки Западного Нила (ЛЗН), оспы коров (ВОК).

Вирус ВЭЛ - патогенный штамм Тринидад. Накопление вируссодержащего материала для последующего заражения лабораторных животных осуществляют с использованием 9-11-дневных развивающихся куриных эмбрионов - 30-50 шт. Первоначально готовят пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащей суспензии. По 0,2 мл каждого разведения вируссодержащей суспензии вносят в аллантоисную полость развивающихся куриных эмбрионов. Место инъекции вируссодержащей суспензии покрывают расплавленным парафином. Затем развивающиеся куриные эмбрионы помещают в термостат при температуре (37±0,5)°С на 18 ч, периодически оценивая их жизнеспособность с помощью овоскопа. По истечении времени инкубации в термостате оценивают жизнеспособность развивающихся куриных эмбрионов и из «тушек» живых эмбрионов готовят 10% суспензию вируссодержащего материала с использованием физиологического раствора с добавлением антибиотиков (пенициллин из расчета 100 ЕД на 1 мл, стрептомицин - 200 ЕД на 1 мл). Полученную суспензию центрифугируют в течение 10 мин при 1,5-2,0 тыс.об/мин и температуре (3±0,5)°C. Надосадочную жидкость разливают во флаконы объемом 1,0 мл и используют для дальнейшего заражения экспериментальных животных. Исходный титр вируса 107-108 ЛД50/мл.

Вирус лихорадки долины Рифт (ЛДР) - вирулентный штамм 8-87. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных осуществляют с использованием 3-5-дневных мышей-сосунков в количестве 10-15 голов. Первоначально готовят пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала. Вируссодержащий материал (по 0,02 мл каждого разведения) вводят в мозг мышам-сосункам, за которыми устанавливают наблюдение в течение 24-48 ч. Животных забивают эфиром, извлекают головной мозг и депонируют его по три образца в пенициллиновые флаконы, которые хранят в морозильной камере при температуре минус (20±0,5)°C. В дальнейшем 10% суспензию головного мозга используют в качестве вируссодержащего материала. Исходный титр вируса 105-106 ЛД50/мл.

Вирус лихорадки денге типа 1 (ЛД) - патогенный штамм Гавайский. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных проводят на мышах-сосунках. Первоначально готовят пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала, которым служит центрифугат 10% суспензии мозга зараженных ранее мышей или регидратированный из лиофильного состояния вируссодержащий материал. Вируссодержащий материал (по 0,02 мл каждого разведения) вводят в мозг мышам-сосункам, за которыми устанавливают наблюдение в течение 24-72 ч. Животных забивают эфиром, извлекают головной мозг и депонируют его по три образца в пенициллиновые флаконы, которые хранят в морозильной камере при температуре минус (50±0,5)°С. В дальнейшем 10% суспензию головного мозга используют в качестве вируссодержащего материала. Исходный титр вируса 102-103 ЛД50/мл.

Вирус лихорадки Западного Нила (ЛЗН) - патогенный штамм Нр-91. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных проводят на мышах-сосунках. Первоначально готовят пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала, которым служит центрифугат 10% суспензии мозга зараженных ранее мышей или регидратированный из лиофильного состояния вируссодержащий материал. Вируссодержащий материал (по 0,02 мл каждого разведения) вводят в мозг мышам-сосункам, за которыми устанавливают наблюдение в течение 96-120 ч. Животных забивают эфиром, извлекают головной мозг и депонируют его по три образца в пенициллиновые флаконы, которые хранят в морозильной камере при температуре минус (50±0,5)°С. В дальнейшем 10% суспензию головного мозга используют в качестве вируссодержащего материала. Исходный титр вируса 103-104 ЛД50/мл.

Вирус оспы коров (ВОК) - патогенный штамм Пуменок. Накопление вируссодержащего материала для заражения лабораторных животных осуществляют с использованием 11-12-дневных развивающихся куриных эмбрионов - 30-50 шт. Первоначально готовят пять последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала. Вируссодержащий материал (по 0,2 мл каждого разведения) вносят на хорион-аллантоисную оболочку развивающихся куриных эмбрионов. Место инъекции покрывают расплавленным парафином. Инфицированные развивающиеся куриные эмбрионы помещают в термостат при температуре (35±0,5)°C на 72 ч, ежедневно оценивая их жизнеспособность с помощью овоскопа. По окончании времени инкубации оценивают жизнеспособность развивающихся куриных эмбрионов, из хорион-аллантоисной оболочки которых готовили 60 мл 10% суспензии вируссодержащего материала с использованием физиологического раствора с добавлением антибиотиков (пенициллин из расчета 100 ЕД на 1 мл, стрептомицин - 200 ЕД на 1 мл). Полученную суспензию вируссодержащего материала центрифугируют в течение 10 мин при 1,5-2,0 тыс.об/мин и температуре (3±0,5)°C. Надосадочную жидкость разливают во флаконы объемом 10 мл (пенициллиновые флаконы) и используют для заражения лабораторных животных. Исходный титр вируса 103-104 ЛД50/мл.

4.3.2 Моделирование смертельной инфекции ВЭЛ проводят на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем их подкожного заражения вируссодержащим материалом в объеме 0,3 мл. Используют две заражающие дозы возбудителя, вызывающие в контроле гибель 57-100% инфицированных животных. После заражения за мышами устанавливают ежедневное наблюдение в течение 21 суток с регистрацией количества живых и павших особей. Инкубационный период моделируемой инфекции составляет в среднем 5 суток. Заболевания характеризуется следующими признаками: мыши становятся малоподвижными, отказываются от еды и питья, шерсть у них взъерошена. В последующем развиваются и нарастают явления энцефалита (нарушение координации, появление парезов и параличей), и наступает гибель инфицированных животных. Максимальная гибель мышей отмечается, как правило, на 7-9 день после заражения.

4.3.3. Моделирование смертельной инфекции ЛДР проводят на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем их подкожного заражения вируссодержащим материалом в объеме 0,5 мл. В эксперименте используют две заражающие дозы, которые различаются на один порядок и в контрольных группах вызывают гибель 40-100% мышей (в зависимости от использованной заражающей дозы вируса). После заражения за инфицированными животными устанавливают ежедневное наблюдение в течение 14 суток с регистрацией количества живых и павших особей. Инкубационный период моделируемой инфекции составил 3 суток. Заболевание характеризовалось следующими признаками: у мышей развивалась адинамия, они отказывались от еды и питья, шерсть у них была взъерошена. В последующем развивались параличи, и наступала гибель животных. Максимальную гибель мышей отмечают, как правило, на 5-7 сутки после инфицирования.

4.3.4. Моделирование смертельной инфекции ЛД проводят на белых беспородных мышах массой 8-10 г путем их подкожного заражения вируссодержащим материалом в объеме 0,5 мл. В эксперименте используют две заражающие дозы, которые различаются на один порядок и в контрольных группах вызывают гибель 40-100% мышей (в зависимости от использованной заражающей дозы вируса). После заражения за инфицированными животными устанавливают ежедневное наблюдение в течение 14 суток с регистрацией количества живых и павших особей. Инкубационный период при моделируемой инфекции составляет 3-4 суток. Заболевание характеризуется следующими признаками: у мышей развивалась адинамия, они отказывались от еды и питья, шерсть у них была взъерошена. В последующем развивались параличи, и наступала гибель животных. Максимальная гибель инфицированных мышей отмечалась, как правило, на 6-9 сутки после инфицирования.

4.3.5. Моделирование смертельной инфекции ЛЗН проводят на белых беспородных мышах массой 8-10 г путем их подкожного заражения вируссодержащим материалом в объеме 0,5 мл. В эксперименте используют две заражающие дозы, которые различаются на один порядок и вызывают гибель 50-100% мышей (в зависимости от использованной заражающей дозы вируса). После заражения за инфицированными животными устанавливают ежедневное наблюдение в течение 14 суток с регистрацией количества живых и павших особей. Инкубационный период при экспериментальной инфекции ЛЗН у экспериментальных животных составляет 5-6 суток. Заболевание характеризуется следующими признаками: у мышей развилась адинамия, они отказывались от еды и питья, шерсть у них была взъерошена. В последующем развивались параличи, и наступала гибель животных. Максимальная гибель мышей отмечалась, как правило, на 6-9 сутки после инфицирования.

4.3.6. Моделирование смертельной инфекции ВОК проводят на белых беспородных мышах массой 8-10 г, предварительно проводя им эфирный рауш-наркоз, и в дальнейшем интраназальное заражение вируссодержащего материала в объеме 0,03 мл в каждую ноздрю. В эксперименте используют две заражающие дозы возбудителя, которые различаются на один порядок. После заражения за инфицированными животными устанавливают ежедневное наблюдение в течение 14 суток с регистрацией количества живых и павших особей.

4.3.7 Показатель токсичности (ЛД50) исследуемых соединений определяют по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Статистические методы в микробиологических методах. - Л.: Гос. изд-во мед. лит., 1962. - 178 с.). Эффективность соединений оценивают по выживаемости животных в подопытных (получавших соответствующие препараты) и контрольных группах. Процент выживших животных определяют по таблицам Генеса B.C. (Генес B.C. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. - М.: Наука, 1967. - 208 с.). Помимо этого определяют защитную эффективность (%) оцениваемых средств экстренной профилактики и этиотропного лечения, представляющую собой разность между количеством выживших инфицированных животных в подопытной группе (%) и количеством выживших инфицированных животных (%) в контрольной группе, а также среднюю продолжительность жизни (СПЖ, суток) подопытных и контрольных животных. Среднюю продолжительность жизни Т, суток, инфицированных животных в подопытной и контрольной группах вычисляют по формуле:

,

где N - количество выживших животных, гол.;

S - срок наблюдения, сут;

N1 - количество зараженных мышей в группе, гол.

4.3.8 Статистический анализ результатов исследования произведен с помощью компьютерной программы статистической обработки данных Statistica 6.0 for Windows. Для оценки количественных показателей определяют стандартные количественные характеристики: среднее значение показателя (М), среднеквадратичное отклонение, стандартная ошибка средней величины (m). Сравнение количественных данных проводят при помощи парного и непарного теста Стьюдента с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты представлены как М±m. Различия считают достоверными при р≤0,05.

4.3.9 Модель венесуэльского энцефалита лошадей

Азолоазиниевые соли фторхинолонов применяют по одинаковой схеме (через 4 ч, 24 ч и 48 ч после заражения), вводят per os в разовой дозе 2,0 мг/особь. Заражение экспериментальных животных осуществляют вирусом ВЭЛ в дозах 1, 2, 10 или 20 ЛД50. Численность животных в подопытных и контрольных группах - по 10 особей. Полученные результаты представлены в таблице 4.

Представленные в таблице 4 данные свидетельствуют, что наибольшим защитным эффектом обладают азолоазиниевые соли пефлоксацина 4а и 5а - уровень защиты 80 и 60% при заражении возбудителем в дозе 20 ЛД50. Эти соединения обеспечивают достаточно высокий уровень защиты при заражении наиболее высокими дозами вируса ВЭЛ. Остальные соединения проявляют менее выраженную активность в отношении экспериментального ВЭЛ.

4.3.10 Модель лихорадки долины Рифт

Азолоазиниевые соли фторхинолонов применяют в дозе 2,0 мг/особь per os, начиная через 4 ч и далее один раз в сутки через 24 ч и 48 ч после заражения вирусом ЛДР в диапазоне доз от 1 до 25 ЛД50. Численность животных в группе - по 10 особей. Полученные результаты представлены в таблице 5.

Представленные в таблице 5 данные свидетельствуют, что наибольшим защитным эффектом обладают азолоазиниевые соли пефлоксацина 4а и 5а - защита на уровне 70 и 40% при заражении животных вирусом ЛДР в дозе 2,5 ЛД50. Соединения 4а и 5а увеличивают СПЖ инфицированных животных на 3-4 сутки по сравнению с аналогичным показателем в контроле заражения. Остальные соединения проявляют менее выраженную активность в отношении экспериментального ВЭЛ - уровень защиты 10-20% при заражении животных вирусом ЛДР в диапазоне доз от 2,5-25 ЛД50.

4.3.11 Модель лихорадки Западного Нила

Азолоазиниевые соли используют в разовой дозе 1,0 мг/особь один раз в сутки в течение трех дней подряд, начиная через 4 ч после заражения животных вирусом ЛЗН в дозах 5 и 50 ЛД50. Количество животных в группе - по 10 особей. Полученные результаты представлены в таблице 6.

Наибольшим защитным эффектом обладают азолоазиниевые соли фторхинолонов 4а, 4в и 7б - уровень защиты 50, 60 и 60% при заражении вирусом ЛЗН в дозе 50 ЛД50, а также азолоазиниевые соли 5а, 5в и 8а - уровень защиты 50, 50 и 70% при заражении вирусом ЛЗН в дозе 50 ЛД50. Азолоазиниевые соли 4б, 5б, 7а и 8б проявляют слабую противовирусную активность (уровень защиты 20-30%). Следует отметить, что применение азолоазиниевых солей фторхинолонов способствует увеличению СПЖ инфицированных вирусом ЛЗН мышей на 2-3 суток по сравнению с аналогичным показателем в контрольных группах.

4.3.12 Модель лихорадки Денге

Азолоазиниевые соли вводят экспериментальным животным в разовой дозе 1,0 мг/особь, схема введения: начиная через 4 ч после заражения и далее через 24 ч и 48 ч после заражения вирусом ЛД в дозах 17 и 170 ЛД50. Количество животных в группе - по 10 особей. Полученные результаты представлены в таблице 7.

Выраженным защитным эффектом в отношении экспериментальной ЛД обладают азолоазиниевые соли фторхинолонов 4б, 5в, 7а, 8а и 8б - уровень защиты 90% при заражении животных вирусом в дозе 17 ЛД50 (р≤0,05). Несколько меньший эффект получен при применении в аналогичных условиях соединений 4а и 7б - уровень защиты 70% (р≤0,05). Следует отметить, что применение азолоазиниевых солей фторхинолонов способствует увеличению СПЖ инфицированных вирусом ЛД мышей в 2 и более раз по сравнению с аналогичным показателем в контроле.

Анализ результатов противовирусной активности азолоазиниевых солей на моделях геморрагических лихорадок показывает, что азолоазиниевые соли фторхинолонов являются перспективным средством экстренной профилактики и раннего этиотропного лечения этих инфекций. Наличие в составе молекулы антибактериального компонента не сказывается отрицательно на его противовирусной активности. Более того, в ряде случаев отмечено даже некоторое увеличение противовирусной активности, хотя и не носящее достоверный характер (р≤0,05).

4.3.13 Модель ортопоксвирусной инфекции

Исследования выполнены на модели оспы коров. Азолоазиниевые соли фторхинолонов применяют в дозе 1,0 мг/особь по единой схеме: начало введения через 4 ч и далее через 24 ч и 48 ч после заражения животных возбудителем в дозах 30 или 300 ЛД50. Полученные результаты представлены в таблице 8.

Как свидетельствуют представленные в таблице 8 данные, соли триазавирина с фторхинолонами (пефлоксацина, норфлоксацина, энрофлоксацина) 4а, 4б и 4в, соль триазида с левофлоксацином 8б в условиях заражения животных возбудителем экспериментальной ортопоксвирусной инфекции в дозе 300 ЛД50 обеспечивают защиту на уровне 30-50%, а при заражении в дозе 30 ЛД50 - 70-80% (р≤0,05). Следует отметить, что применение азолоазиниевых солей способствует увеличению в 2-2,5 раза СПЖ инфицированных животных по сравнению с контрольными значениями.

В данной заявке реализована возможность синтеза ранее недоступных химических соединений на основе базовых субстанций антибактериальных препаратов фторхинолонового ряда и противовирусных веществ азолоазинового ряда. Синтез новых молекул химическими методами позволил улучшить растворимость и показатели токсичности исследуемых соединений и, как следствие, биодоступность молекул. Показана эффективность азолоазиниевых солей фторхинолонов на экспериментальных моделях особо опасных инфекций бактериальной и вирусной природы в экспериментах in vitro и in vivo. Выявлено, что азолоазиниевые соли фторхинолонов способствуют увеличению средней продолжительности жизни инфицированных животных по сравнению с контрольными значениями. Полученные результаты могут быть использованы для создания лекарственного средства для экстренной профилактики и лечения инфекций, вызванных патогенами как бактериальной, так и вирусной природы, в том числе особо опасных.

Азолоазиниевые соли фторхинолонов формул:

где R=СН3 R12Н5 (4а, 5а); R=Н, R12Н5 (4б, 5б); R=С2Н5, R1=цикло-С3Н7 (4в, 5в)

где R=Н (7а, 8а); R=СН3 (7б, 8б), обладающие антибактериальным и противовирусным действием.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу получения высокочистого 4а,5,9,10,11,12-гексагидро-6Н-бензофуро[3а,3,2-ен][2]бензазепина, а также его производных общей формулы I и II исходят из рацемического бромнарведина, который дебромируют при катализе палладием.

Изобретение относится к новым соединениям, обладающим свойствами модуляторов рецепторов эстрогена, общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 означает атом водорода или (С1-С6)алкил, -SO2NR7R8, фенил (С1 -С3)алкил или (С1-С3)алкил, замещенный 5-8-членным насыщенным гетероциклическим радикалом, содержащим атом азота; R2 и R3 каждый независимо означает атом водорода или гидроксил, атом галогена или (C 1-С6)алкокси; Х означает О, S, SO, SO2 или NR4; R4 означает атом водорода или (C1-С6)алкил, фенил, фенил(С1 -С3)алкил, (С1-С3)алкил, замещенный 5-8-членным насыщенным гетероциклическим радикалом, содержащим один атом азота, или группу -COR7, -CO2 R7 или -SO2NR7R8, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена и фенил(С1-С3)алкокси; Y обозначает прямую связь, -(CR10R11)n- или -R 10C=CR11-; R7 и R8 каждый независимо обозначают атом водорода или (С1-С 6)алкильную группу; R10 и R11 каждый независимо обозначают атом водорода или циано, или группу -CONR 7R8; n равно 1 или 2; А означает (С3 -С12)циклоалкил или фенил, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, (С1-С 3)алкил, (С1-С3)алкокси; когда Х означает NR4, то Y и R2 вместе с содержащим их индазольным циклом могут также образовать 1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол; при условии, что: 1) когда Х означает О, S или NR4 , R1 обозначает атом водорода или (С1-С 6)алкил, а Y означает прямую связь, то А не является необязательно замещенным фенилом; 2) когда Х означает О, R1O означает 6-ОН или 6-ОСН3, Y означает прямую связь, а А означает циклопентил, то (R2, R3) или (R3 , R2) отличны от (Н, Cl) в позиции 4, 5; 3) когда X означает О, R1O означает 6-ОН, R2 и R 3 означают Н, a Y означает СН=СН, то А не является фенилом или 4-метоксифенилом; 4) когда Х означает SO2, A означает фенил и R1O означает 5- или 6-ОСН3, то (R2, R3) или (R3, R2 ) отличны от (Н, ОСН3) в позиции 6- или 5-, причем соединение не является одним из следующих: 3-фенил-5-(фенилметокси)-1Н-индазол; 6-гидрокси-3-фенилметил-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол; 3-(4-хлорфенилметил)-6-гидрокси-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол; 6-гидрокси-3-(2-фенилэтил)-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол; 3-циклопропил-6-гидрокси-3-фенилметил-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол; 3-циклогексилметил-6-гидрокси-3-фенилметил-7-пропил-бенз[4,5]изоксазол.

Изобретение относится к способу получения гидробромида галантамина, включающему в себя способ очистки галантамина (I) осаждением гидробромида галантамина из смеси алкалоидов, полученной из растения семейства Amaryllidaceae, содержащей галантамин, с последующей обработкой гидробромида щелочью, экстракцией и кристаллизацией галантамина растворителем общей формулы (II) в которой R1 представляет собой водород или метил, a R2 выбирают из н-бутила, изобутила, втор-бутила и трет-бутила.

Изобретение относится к способу получения производных 4а,5,9,10,11,12-гексагидро-6H-бензофуро/3a,3,2-ef//2/бензазепина общей формулы (I) или его солей, где R2, R4, X1, X2, Y1, Y2 одинаковы либо различны и обозначают водород, фтор, хлор, бром, иод, гидрокси- или алкоксигруппу; низшую, в случае необходимости, разветвленную и в случае необходимости замещенную, например, по меньшей мере одним галогеном алкильную группу, низшую, в случае необходимости разветвленную алкенильную группу; низшую, в случае необходимости разветвленную алкинильную группу; в случае необходимости замещенную арильную, аралкильную или арилоксиалкильную группы, алкильная цепь которой в случае необходимости разветвлена и ароматическое ядро которой в случае необходимости замещено; формил, а также незамещенный или замещенный одним или несколькими галогенами линейный или разветвленный алкилкарбонил, арилкарбонил, аралкилкарбонил, алкилоксикарбонил, арилоксикарбонил, аралкилоксикарбонил, алкилсульфонил, аралкилсульфонил, арилсульфонил, или Y1 и Y2 вместе обозначают =O и где A обозначает бензольное ядро, в случае необходимости однократно или многократно замещенное по меньшей мере одной низшей, в случае необходимости разветвленной алкильной группой; по меньшей мере одной низшей, в случае необходимости разветвленной алкеновой группой; по меньшей мере одной низшей, в случае необходимости разветвленной алкиновой группой; по меньшей мере одной низшей, в случае необходимости разветвленной алкоксигруппой; фтором, хлором, бромом, иодом или несколькими одинаковыми либо различными галогенами, по меньшей мере одной замещенной одним галогеном или несколькими одинаковыми либо различными галогенами алкильной группой, например хлорметилом и трифторметилом; по меньшей мере одной, в случае необходимости замещенной аралкильной группой и/или по меньшей мере одной гидроксигруппой; первичной, вторичной или третичной аминогруппой, нитрогруппой, нитрильной группой, алкиламиногруппой, ариламиногруппой, альдегидной группой, карбоксильной группой, всеми производными карбоксильной группы, например эфирами, амидами, галогенангидридами.

Изобретение относится к соединениям формулы (1) в которой R1 - атом водорода; R2 - атом водорода, (C3-C12) алкенилкарбонилокси, (C3-C12)циклоалкилкарбонилокси, (С3-С12)циклоалкиламинокарбонилокси, (C3-C12)алкинилкарбонилокси, (C3-C12)циклоалкил (C1-C12)алкилкарбонилокси, пиридилокси, морфолинокарбонилокси или тетрагидроизохинолинилкарбонилокси, галоид(C1-C6)алкилсульфонилокси, (C1-C6)алкилсилокси; R3 - атом водорода или галогена; R4 - атом водорода или (C1-C6)алкил, или их геометрическим, оптическим или стереоизомерам, или фармацевтически приемлемым аддитивным солям, которые полезны для лечения различных нарушений памяти, характеризующихся понижением холинэргической функции, таких, как болезнь Альцгеймера.

Изобретение относится к производным галантамина, в частности к производным галантамина общей формулы (II) в которой R1 представляет собой водород, (C1-C12)алкилкарбонил, (C1-C12)алкоксикарбонил, моно-(C1-C12)алкиламинокарбонил или ди-(C1-C12)алкиламинокарбонил; R2 представляет собой моно-(C1-C18)алкиламинокарбонилокси или ди-(C1-C8)алкиламинокарбонилокси группу; R3 представляет собой водород или галоген; или их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям.

Изобретение относится к соединениям формулы где R1 - водород, (C1C12) алкилкарбонил, (C1-C12) алкоксикарбонил, R2 - (C1-C12) алкилкарбонилокси-, (C1-C12) алкоксикарбонилокси-, гидрокси-, (C1-C6) алкоксикарбонил (C1-C6) алкокси- или гидрокси (C1-C10) алкокси- и фенилкарбонилоксигруппа, где фенильный фрагмент является незамещенным или замещенным C1-C6 алкилом или трифторметилом.

Изобретение относится к соединениям, отвечающим следующей формуле I: где R1- представляет группу формул где n = 1 или 2, R3 представляет гидроксил, низшую алкоксигруппу, арил (низшую) алкоксигруппу, аминогруппу, низшую алкиламиногруппу или ди (низший алкил) аминогруппу, R4 представляет водород, низший алкил или арил (низший) алкил , R5 представляет водород, низший алкил, арил (низший) алкил или низший алкилкарбонил, R6 представляет водород или низший алкил, при условии, что когда R6 представляет низший алкил, тогда R6 замещает один из метиленовых атомов водорода, R2 представляет группу формул где X представляет водород, галоген, низший алкил или низкую алкоксигруппу, R7 представляет низший алкил или арил (низший) алкил, R8 представляет водород или низший алкил, R9 представляет водород, низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, арил (низший) алкил, формил, низший алкил-карбонил, арил (низший алкил) карбонил или низший алкоксикарбонил, R10 представляет водород, низший алкил, арил (низший) алкил или низший алкилкарбонил, R11 представляет водород, низший алкил или арил (низший) алкил, и такие соединения применимы для облегчения различных расстройств памяти, характеризующихся холинэргическим дефицитом, таких как болезнь Алъцхаймера.

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к 5Н-3,4,6,7-тетрагидро-10-метокси-5-метил-6-(1', 1'-диоксидо)-3'- метахлоранилино-4'-метокси-бензо[B] тиофен-7'ил)-фуро-[4.3.2.

Настоящее изобретение относится к цитрату соединения, имеющему приведенную ниже формулу (II), и фармацевтической композиции, содержащей заявленный цитрат. Экспериментальные результаты настоящего изобретения доказывают, что заявленный цитрат может подавлять активность фосфодиэстеразы 5 типа и может быть использован для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбозов, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, лечения астмы и диабетического гастропареза.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и (II), фармацевтической композиции на их основе и способу лечения или предупреждения рака, иммунологических состояний, диабета, ожирения, неврологических расстройств и возрастных заболеваний, способу ингибирования mTOR киназы в клетке, способу лечения или предупреждения состояния, которое можно лечить или предупреждать ингибированием mTOR киназного метаболического пути.

Изобретение относится к химическому соединению формулы I, где R=бензил и к противотуберкулёзному лекарственному средству, представляющему собой композицию производного имидазо[1,2-b][1,2,4,5]тетразина формулы I, где R=бензил, изопропил или фенил и известного противотуберкулёзного препарата пиразинамида при мольном соотношении компонентов 1:1.

Изобретение относится к способу получения циклического гуанидина, который может найти применение в композициях покрытия, в частности в электроосаждаемых композициях покрытия.

Изобретение относится к соединению структурной формулы (I), которое обладает ингибирующей активностью в отношении фосфодиэстеразы 10. В формуле (I) R1 представляет собой водород, галоген или низший алкил; кольцо А представляет собой необязательно замещенные 6-10-членный моноциклический или бициклический гетероарил, содержащий от 1 до 3 атомов азота в качестве гетероатомов, или группу, содержащую циклоалифатическое 6-членное кольцо, конденсированное с указанным гетероарилом, которое выбрано из 6-членного циклоалкана и алифатического 6-членного гетероциклического кольца, содержащего атом кислорода; кольцо В представляет собой необязательно замещенные 4-6-членную моноциклическую содержащую азот гетероциклическую группу, которая может дополнительно содержать атом кислорода или 3-6-членную моноциклическую углеводородную группу, которая необязательно частично насыщена; R3 представляет собой водород; низший алкил, необязательно замещенный заместителем, выбранным из низшего алкокси; или низший циклоалкил.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами модулятора рецептора 5-HT2C и/или 5-НТ6, фармацевтической композиции на их основе и способам их получения.

Изобретение относится к новым циклическим индолизинкарбоксамидам и азаиндолизинкарбоксамидам формул Ia и Ib, приведенных ниже, где значения R, Ra, R10, R20, R30, R40, Y, n, p и q указанны в пункте 1 формулы.

Изобретение относится к новым соединениям формулы Ia, их стереомерам или фармацевтически приемлемым солям, ингибирующим активность JAK киназы. Соединения могут найти применение при лечении воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, при лечении аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка, рассеянный склероз, нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, и др.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) где R1 представляет собой гидроксиадамантил, метоксикарбониладамантил, карбоксиадамантил, аминокарбониладамантил или аминокарбонилбицикло[2.2.2]октанил и где A представляет собой CR5R6; или фенил, хлорбензил, бензил, хлорфенилэтил, фенилэтил, дифторбензил, дихлорфенил, трифторметилфенил или дифторфенилэтил и где A представляет собой CR5R6; R2 и R3 вместе с атомом азота N* и атомом углерода С*, к которому они присоединены, образуют группу или ; R4 представляет собой водород, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкоксиалкил, арилалкил, арилалкоксигруппу, арилалкоксиалкил, гидроксиалкил, арил, гетероарилалкил, гетероарилоксиалкил, замещенный арил, замещенный гетероарилалкил или замещенный гетероарилоксиалкил, где замещенный арил, замещенный гетероарилалкил и замещенный гетероарилоксиалкил замещены 1-3 заместителями, независимо выбранными из алкила, циклоалкила, цианогруппы, галогена, галогеналкила, гидроксигруппы и алкоксигруппы; R5 представляет собой водород; R6 представляет собой водород;, а также их фармацевтически приемлемым солям и сложным эфирам, которые могут быть использованы в качестве ингибиторов 11b-HSD1.

Изобретение относится к соединению формулы I или его терапевтически приемлемым солям, где А1 представляет собой фурил, имидазолил, изотиазолил, изоксазолил, пиразолил, пирролил, тиазолил, тиадиазолил, тиенил, триазолил, пиперидинил, морфолинил, дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-ил, бензотиен-2-ил, бензотиазол-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидин-2-ил или имидазо[2,1-b][1,3]-тиазол-5-ил; где А1 незамещен или замещен одним, или двумя, или тремя, или четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из R1, OR1, C(O)OR1, NHR1, N(R1)2, C(N)C(O)R1, C(O)NHR1, NHC(O)R1, NR1C(O)R1, (O), NO2, F, Cl, Br и CF3; R1 представляет собой R2, R3, R4 или R5; R2 представляет собой фенил; R3 представляет собой пиразолил или изоксазолил; R4 представляет собой пиперидинил; R5 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен заместителями, выбранными из R7, SR7, N(R7)2, NHC(O)R7, F и Cl; R7 представляет собой R8, R9, R10 или R11; R8 представляет собой фенил; R9 представляет собой оксадиазолил; R10 представляет собой морфолинил, пирролидинил или тетрагидропиранил; R11 представляет собой C1-C10алкил; Z1 представляет собой фенилен; Z2 представляет собой пиперидин, не замещенный или замещенный OCH3, или пиперазин; Z1A и Z2A оба отсутствуют; L1 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен R37B; R37B представляет собой фенил; Z3 представляет собой R38 или R40; R38 представляет собой фенил; R40 представляет собой циклогексил или циклогексенил; где фенилен, представленный Z1 не замещен или замещен группой OR41; R41 представляет собой R42 или R43; R42 представляет собой фенил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом, имидазолилом или пиразолом; R43 представляет собой пиридинил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом; где каждый вышеуказанный циклический фрагмент, представленный R2, R3, R4, R8, R9, R10, R38, R40, R42 и R43, независимо не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из R57, OR57, С(О)OR57, F, Cl CF3 и Br; R57 представляет собой R58 или R61; R58 представляет собой фенил; R61 представляет собой C1-C10алкил; и где фенил, представленный группой R58, не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из F и Cl.

Данное изобретение относится к новым производным 2,3,4,5-тетрагидро-1Н-пиридо[4,3-b]индола, которые можно использовать для модулирования гистаминовых рецепторов у индивидуумов или для лечения нейродегенеративных заболеваний.
Наверх