Способ определения аллельного полиморфизма ccr5 delta 32

Изобретение относится к области медицинской генетики и предназначено для определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32. Осуществляют выделение ДНК из криоконсервированной пуповинной крови. Проводят полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с использованием специфических праймеров. Наличие специфических ДНК-фрагментов определяют после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания бромистым этидием. При нормальном варианте гена длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. При аллельном полиморфизме CCR5 delta 32 длина ПЦР фрагментов составляет 192 п.н. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 в образце пуповинной крови и может быть использовано для проведения скринингового обследования. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно генетике, гематологии, и может использоваться для определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 при скрининговом обследовании образцов пуповинной крови, поступающих в банк пуповинной крови.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) проникает в клетки посредством связывания гликопротеина вирусной оболочки gp 120 с мембранными рецепторами CD4 и CCR5. Одновременная экспрессия рецепторов CD4 и CCR5 встречается на T-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках. Белок CCR5 кодируется геном CCR5, расположенным на коротком плече хромосомы 3 в позиции 21 (3p21). Существует полиморфизм CCR5 delta 32, представляющий из себя делецию 32 пар нуклеотидов в кодирующей области гена CCR5. В результате экспрессии мутантного гена в гомозиготном состоянии транслируется укороченный, функционально неактивный белок CCR5. Вследствие этого гомозиготные носители этого полиморфизма обладают практически полной резистентностью к инфицированию ВИЧ. Гомозиготными носителями делеционного аллеля являются около 1% белого населения [1, 2]. Известен успешный случай трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) периферической крови в 2007 году в Германии ВИЧ-инфицированному пациенту с острым миелоидным лейкозом от донора, гомозиготного носителя полиморфизма CCR5 delta 32 [3, 4]. Однако несмотря на успешность проведенного лечения, это был лишь единичный случай и в последующем ни одной ТГСК для лечения ВИЧ-инфекции не было проведено вследствие редкой встречаемости полиморфизма CCR5 delta 32 и строгими условиями подбора образцов костного мозга и периферической крови по системе HLA. В то же время гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) пуповинной крови с генотипом CCR5 delta 32/delta 32 могли бы со значительно большей вероятностью быть использованы для проведения трансплантации при ВИЧ-инфекции в связи со значительно менее строгими требованиями подбора образца по системе HLA [5].

В настоящее время в Российской Федерации представлено незначительное количество тест-систем для детекции мутации CCR5 delta 32. Доступные диагностические тест-системы обладают высокой стоимостью, для проведения исследований требуется наличие дорогостоящего оборудования. Кроме того, на данные диагностические тест-системы не получены сертификаты соответствия, что предполагает применение этих наборов только для научных целей и не допускает использование этих наборов в любых видах диагностических процедур. Пример - комплект реагентов «АмплиСенс CCR5del32-скрин» для определения полиморфизма CCR5 delta 32 методом пиросеквенирования.

Существуют способы определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 методом аллель-специфичной ПЦР в реальном времени [5, 6].

В качестве прототипа можно рассматривать способ определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32, основанный на использовании метода ПЦР с рестрикционным анализом продуктов амплификации (ПЦР-ПДРФ) [7].

К недостаткам способа, выбранного нами в качестве прототипа, а также вышеуказанных аналогов, можно отнести то, что данные способы отличаются необходимостью использования дополнительных этапов анализа, реагентов и оборудования для проведения исследования, что увеличивает себестоимость метода, трудоемкость и время проведения анализа и не позволяет использовать данный метод для проведения скринингового обследования.

Техническим результатом изобретения является упрощение способа определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32, сокращение времени его проведения и снижение его себестоимости, что обеспечит возможность проведения скринингового обследования.

Технический результат изобретения достигается тем, что способ определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 заключается в выделении ДНК, проведении ПЦР, детекции продукта реакции с использованием электрофореза, при этом ДНК выделяют из криоконсервированной пуповинной крови, а при проведении ПЦР используют следующие праймеры:

F: TGTGTTTGCGTCTCTCCCA

R: CTCTTCTTCTCATTTCGACACCG,

ПЦР проводят при 94°C в течение 5 мин, затем проводят 35 циклов, каждый из которых состоит из 3-х этапов: 94°C - 30 с, 56°C - 40 с, 72°C - 40 с. После чего проводят ПЦР при 72°C - 10 мин и 15°C - 5 мин. Детекцию полиморфизма осуществляют в 8% полиакриламидном геле с применением вертикального электрофореза. Наличие специфических ДНК-фрагментов определяют после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания геля бромистым этидием с помощью трансиллюминатора. Длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. при нормальном варианте гена и 192 п.н. при аллельном полиморфизме CCR5 delta 32.

Способ осуществляется следующим образом:

Перед постановкой реакции криоконсервированную при -70°C пуповинную кровь в микропробирках типа Эппендорф размораживают при комнатной температуре в течение 20-40 мин. Геномную ДНК выделяют из 0,9-1,0 мл пуповинной крови с использованием коммерческих наборов Protrans (Германия) или Axygen (США). Скрининговое исследование образцов на CCR5 delta 32 аллель проводят методом ПЦР. ДНК амплифицируют в конечном объеме реакционной смеси 20 мкл. Реакционная смесь содержит 10-кратный буфер для Taq-полимеразы, 2 мМ MgCl2, 2 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (dNTP), прямой и обратный праймеры (по 30 нг каждого), 0,1 Ед Taq-полимеразы, 40-120 нг исследуемой геномной ДНК. Используют следующие праймеры, фланкирующие делеционный сайт:

F: TGTGTTTGCGTCTCTCCCA

R: CTCTTCTTCTCATTTCGACACCG.

ПЦР проводят в амплификаторе Biorad My Cycler Version 1.065. Условия реакции: 94°C - 5 мин; далее 94°C - 30 с, 56°C - 40 с, 72°C - 40 с в течение 35 циклов; затем 72°C - 10 мин и 15°C - 5 мин. Детекцию полиморфизма осуществляют в 8% полиакриламидном геле с применением вертикального электрофореза. Наличие специфических ДНК-фрагментов определяют после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания геля бромистым этидием с помощью трансиллюминатора. Длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. при нормальном варианте гена и 192 п.н. при аллельном полиморфизме CCR5 delta 32.

Электрофореграмма продуктов амплификации представлена на Фиг. 1:

1 - гетерозиготное носительство полиморфизма CCR5 delta 32;

2 - нормальный тип гена CCR5;

3 - полиморфизм CCR5 delta 32 в гомозиготном состоянии.

Существенными отличительными признаками заявляемого способа являются:

- при проведении ПЦР используют следующие праймеры:

F: TGTGTTTGCGTCTCTCCCA

R: CTCTTCTTCTCATTTCGACACCG;

- ПЦР проводят при 94°C в течение 5 мин, затем проводят 35 циклов, каждый из которых состоит из 3-х этапов: 94°C - 30 с, 56°C -40 с, 72°C - 40 с; после чего проводят ПЦР при 72°C - 10 мин и 15°C - 5 мин;

- длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. при нормальном варианте гена;

- аллельный полиморфизм CCR5 delta 32 определяется при наличии ПЦР-фрагментов размером 192 п.н.

Причинно-следственная связь между существенными отличительными признаками и достигаемым результатом:

Дизайн специфичных праймеров разработан с использованием биоинформационной базы данных NCBI (http://www.ncbi.nlm.). Подобраны оптимальные условия для прохождения ПЦР - длина праймеров, температура отжига, длина ДНК-амплификата, соотношение нуклеотидов. Произведена проверка пары праймеров на возможность образования димеров, дуплексов, шпилек. Результаты подтверждены прямым секвенированием с использованием секвенатора CEQ 8800 (Beckman Coulter, США).

Пример конкретного выполнения способа:

Пример 1

Амплификация проводилась в объеме 18 мкл. Состав реакционной смеси: 14,5 мкл бидистиллированной воды, 2 мкл буфера для полимеразы (Taq буфер, 10-кратный, pH 8.6, без Mg2+), 1,2 мкл 25 мМ MgCl2, 2 мкл смеси прямого и обратного праймеров (50 нг каждого праймера), 0,4 мкл смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов (10 mM dNTP), 0,1 мкл Taq-полимеразы (1 единица активности), 2 мкл анализируемой геномной ДНК (40-120 нг). ПЦР проводилась в амплификаторе Biorad My Cycler Version 1.065. Условия реакции: 94°C - 5 мин; далее 94°C - 30 с, 56°C - 40 с, 72°C - 40 с в течение 35 циклов; затем 72°C - 10 мин и 15°C - 5 мин. Детекция полиморфизма осуществлялась в 8% полиакриламидном геле с применением вертикального электрофореза. Наличие специфических ДНК-фрагментов определяли после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания геля бромистым этидием с помощью трансиллюминатора. Длина ПЦР фрагментов составляла 224 п. н. при нормальном варианте гена и 192 п.н. при аллельном полиморфизме CCR5 delta 32.

Длины фрагментов, получаемые при генотипировании аллельного полиморфизма:

В процессе скринингового исследования детекции аллельного полиморфизма CCR5 delta32 обследовано 2960 образцов пуповинной крови общественного регистра. В результате исследования выявлен 31 образец с генотипом CCR5 delta 32/delta 32, что составило 1,05%. В 534 образцах аллельный полиморфизм CCR5 delta 32 присутствовал в гетерозиготном состоянии (18,04%).

Таким образом, заявляемый способ определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 методом ПЦР по сравнению с прототипом снижает трудоемкость и сокращает время проведения исследования, уменьшает себестоимость анализа за счет отсутствия дополнительного этапа исследования (этапа рестрикционного анализа продуктов амплификации), при этом не возникает необходимости в приобретении дополнительных реагентов, в частности дорогостоящей рестриктазы. Данный метод может быть использован для проведения скринингового обследования на носительство аллельного полиморфизма CCR5 delta 32.

Источники информации

1. Deng, Н. Identification of a major co-receptor for primary isolates of HIV-1 / H. Deng, R. Liu, W. Ellmeier [et al.] // Nature. - 1996. - Vol. 381. - P. 661-666.

2. Dragic, T. HIV-1 entry into CD4+ cells is mediated by the chemokine receptor CC-CKR-5 / T. Dragic, V. Litwin, G.P. Allaway [et al.] // Nature. - 1996. - Vol. 381. - P. 667-673.

3. Hutter, G. Long-Term Control of HIV by CCR5 Delta32/Delta32 Stem-Cell Transplantation / G. Hutter, D. Nowak, M. Mossner // N. Engl. J. Med. - 2009. - Vol. 360. - P. 692-698.

4. Alters, K. Evidence for the cure of HIV infection by CCR5Δ32/Δ32 stem cell transplantation / K. Allers, G. Hütter, J. Hofmann // Blood. - 2011. - Vol. 117, №10. - P. 2791-2799.

5. Petz, L.D. Hematopoietic Cell Transplantation with Cord Blood for Cure of HIV Infections / L.D. Petz, I. Redei, Y. Bryson [et al.] // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2013. - Vol. 19, №3. - P. 393-397.

6. Кофиади И.А. Распределение аллелей генов CCR5, CCR2 и SDF1, ассоциированных с устойчивостью к ВИЧ-инфекции, в Российских популяциях / И.А. Кофиади, Д.В. Ребриков, Д.Ю. Трофимов [и др.] // Доклады академии наук. - 2007. - Т. 415, №6. - С. 842-845.

7. Патент RU 2249619 C2, 23.04.2003 г. Способ одновременного определения мутаций CCR5del32 и CCR5M303 в гене CCR5 человека, обуславливающих генетическую устойчивость обследуемых к инфицированию вирусом иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ1). Рахманалиев Э.Р., Апрятин С.А., Николаева И.А., Климов Е.А., Сулимова Г.Е., Сидорович И.Г

Способ определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32, заключающийся в выделении ДНК, проведении полимеразной цепной реакции (ПЦР), детекции продукта реакции с использованием электрофореза, отличающийся тем, что ДНК выделяют из криоконсервированной пуповинной крови, а при проведении ПЦР используют следующие праймеры:
F: TGTGTTTGCGTCTCTCCCA
R: CTCTTCTTCTCATTTCGACACCG
и ПЦР проводят при 94°C в течение 5 мин, затем проводят 35 циклов, каждый из которых состоит из 3-х этапов: 94°C - 30 с, 56°C - 40 с, 72°C - 40 с, после чего проводят ПЦР при 72°C - 10 мин и 15°C - 5 мин; детекцию полиморфизма осуществляют в 8% полиакриламидном геле с применением вертикального электрофореза; наличие специфических ДНК-фрагментов определяют после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания геля бромистым этидием с помощью трансиллюминатора, длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. при нормальном варианте гена и 192 п.н. при аллельном полиморфизме CCR5 delta 32.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа состоит в том, что определяют оптическую плотность экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, и дополнительно определяют содержание сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов, систолодиастолическое отношение (S/D) и индекс резистентности (IR) спиральных артерий в день введения триггера овуляции, а затем рассчитывают значение регрессионной функции (Z) по формуле.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выявления присутствия двух или более представляющих интерес белков с известными аминокислотными последовательностями в образце растительного происхождения (варианты) и способу сохранения генотипа сорта трансгенного растения.

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к набору для детекции спор, происходящих из микобактерий в образце. Набор содержит антитело, которое специфически связывает относящийся к спорам пептид из микобактерий, где относящийся к спорам пептид из микобактерий выбран из группы, состоящей из CotA, CotD, CotT, SpoVK, CotSA, YrbC, SpoVE, Soj, SpoIIIE и SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 22, 24 и 26, где указанное антитело получают иммунизацией человека или организма, не являющегося человеком, указанным относящимся к спорам пептидом.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для детекции гриба Microsporum canis. Осуществляют выделение тотальной нативной ДНК из образца кожи и волос, проводят полимеразную цепную реакцию и амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Microsporum canis с использованием специфических праймеров.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования эффективности антиэстрогенной терапии тамоксифеном. У пациенток с люминальным типом рака молочной железы проводят иммуногистохимическое исследование ткани опухоли, определяют характер распределения экспрессии рецепторов эстрогенов альфа в ткани опухоли.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования остеопенического синдрома в послеродовом периоде, включающий исследование генетического полиморфизма Fok-I гена VDR и прогнозирование остеопенического синдрома при выявлении генотипов Ff или ff.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения риска развития рака тела матки у женщин с гиперпластическими процессами эндометрия. Осуществляют выделение ДНК из периферической венозной крови, проводят генотипирование гена APOE, выявляют полиморфные аллели APOE*2, APOE*3, APOE*4 и при наличии генотипов, содержащих аллели APOE*2 прогнозируют высокий риск рака эндометрия.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики биполярного аффективного расстройства. Сущность способа состоит в том, что выявляют достоверные различия в спектре распределения белков сыворотки крови без белков альбумина, иммуноглобулина G, иммуноглобулина А, антитрипсина, трансферина и гаплоглобина у больных эндогенным психозом.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике бесплодия женщин. Для этого проводят определение цитотоксичности сыворотки женщин к мужским лимфоцитам, включая их совместное культивирование с контрольной мужской и исследуемой женской сывороткой в лунках 96-луночного планшета в присутствии питательной среды RPMI 1640 в СО2-инкубаторе.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики окклюзирующих поражений сосудов у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. У пациента определяют возраст, уровень общего гомоцистеина в крови, наличие мутаций полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы, Лейденовской мутации G1691A в гене фактора V, мутаций полиморфизма 675 4G/5G в гене ингибитора активатора плазминогена I типа, затем рассчитывают значение дискриминантной функции по формуле.
Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для диагностики воспалительного процесса вульвы и влагалища бактериальной этиологии у девочек в возрасте от 0 до 8 лет. У пациента производят забор биоматериала путем мазка-соскоба с боковой стенки слизистой влагалища за гименом и проводят ПЦР в режиме реального времени с анализом качественного и количественного состава микроорганизмов и уровня экспрессии мРНК гена CD45. В случае обнаружения геном-эквивалентов на образец микроорганизмов в заданных интервалах и мРНК гена CD45 не менее 0,5 единиц относительно референсных генов, у девочек в возрасте от 0 до 8 лет диагностируют воспалительный процесс вульвы и влагалища бактериальной этиологии. Изобретение обеспечивает комплексную оценку микробиоты слизистой влагалища совместно с маркером воспалительной реакции на основе использовании метода количественной ПЦР в режиме реального времени. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для детекции гриба Trichophyton mentagrophytes. Осуществляют выделение тотальной нативной ДНК из образца кожи и волос, проводят полимеразную цепную реакцию и амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Trichophyton mentagrophytes с использованием специфических праймеров. При электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 182 п.н. определяют наличие возбудителя. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию Trichophyton mentagrophytes в клиническом материале и может быть использовано для диагностики зооантропонозной трихофитии. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина. При уровне десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 и уровне гельсолина в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и гельсолина в крови ниже эталонных значений диагностируют болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. 4 н.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 6 пр.
Группа изобретений относится к ветеринарии и может быть использована для лечения остеоартрита у псовых. Способ по изобретению включает введение псовым диеты, содержащей в перерасчете на сухую массу: DHA+ЕРА 0,5-2,5%, витамин C 75-1000 мг/кг, витамин E 250-1000 мг/кг, L-карнитин 100-1000 мг/кг. Композиция по изобретению включает в перерасчете на сухую массу: DHA+ЕРА 0,5-2,5%, витамин C 75-1000 мг/кг, витамин E 250-1000 мг/кг, L-карнитин 100-1000 мг/кг. Использование изобретений позволяет нормализовать экспрессию генов в хрящевой ткани, улучшить показатели ортопедических тестов у псовых. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами. Осуществляют забор венозной крови, выделение ДНК, проведение ПЦР со специфическими праймерами, определение нуклеотидной последовательности генов ФНОα, ИЛ 4 и ИЛ 10. При обнаружении генотипа АА гена ФНОα в полиморфном положении G308A, генотипа ТТ ИЛ 4 С589Т, генотипа ТТ ИЛ 10 Т819С, генотипа АА ИЛ 10 A1082G или генотипа АА ФНОα G308A, генотипа ТТ ИЛ 4 С589Т, генотипа АА ИЛ 10 A1082G определяют наследственную предрасположенность к сенсибилизации производственными аллергенами. Изобретение позволяет выявлять лиц, предрасположенных к развитию профессиональных аллергодерматозов и формировать группы повышенного риска развития профессиональной патологии. 3 пр.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования уровня артериального давления на сроке родоразрешения. У женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России, из периферической венозной крови выделяют ДНК. Методом полимеразной цепной реакции проводят анализ генетического полиморфизма 4a/4b eNOS. При выявлении генетического варианта 4а4а eNOS прогнозируют повышение показателей систолического артериального давления у женщин на сроке родоразрешения. Изобретение обеспечивает получение эффективного критерия оценки уровня артериального давления у женщин на сроке родоразрешения, позволяющего до наступления беременности или на ранних сроках беременности определить вероятность изменения артериального давления и применить определенную тактику ведения женщин группы риска. 1 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования риска развития III стадии гипертонической болезни. Из периферической венозной крови пациентов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, выделяют ДНК и определяют генотипы полиморфизма -308G/A гена TNFα. В зависимости от выявленных вариантов по локусу -308G/A TNFα и других предикторов развития данного заболевания по формуле определяют риск развития III стадии гипертонической болезни. В случае если полученная величина выше 0,50, прогнозируют высокий риск развития данного заболевания. Изобретение позволяет эффективно прогнозировать риск развития III стадии гипертонической болезни. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики нарушений белково-синтетической функции печени на основании снижения активности фермента холинэстеразы. Способ включает взятие крови из вены, получение сыворотки и определение в сыворотке крови уровня альбумина, общего белка и активности фермента холинэстеразы на биохимическом анализаторе. При обнаружении снижения активности фермента холинэстеразы на фоне нормального уровня общего белка и альбумина в сыворотке крови диагностируют нарушение белково-синтетической функции печени у детей. Способ обеспечивает повышение точности диагностики донозологических нарушений здоровья у детей, проживающих в условиях избытка в окружающей среде вредных веществ. 1 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для прогнозирования риска невынашивания первой половины беременности. Осуществляют выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови пациентки и проводят генотипирование. При выявлении аллеля А rs-4680 гена катехол-О-метилтрансферазы СОМТ прогнозируют повышенный риск невынашивания беременности. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование риска невынашивания первой половины беременности при помощи специфичности генетических маркеров. 1 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для прогнозирования отслойки хориона на ранних сроках беременности. Осуществляют выделение ДНК с последующей амплификацией полиморфных вариантов Arg353Gln (G10976A) гена коагуляционного фактора VII и Ile22Met (A66G) гена метионинсинтазы редуктазы (MTRR) при помощи метода ПЦР. При выявлении сочетания гетерозиготы GA полиморфного варианта Arg353Gln (G10976A) гена коагуляционного фактора VII с гомозиготой GG полиморфного варианта Ile22Met (A66G) гена MTRR прогнозируют риск развития отслойки хориона в первом триместре беременности. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование отслойки хориона в первом триместре беременности на основании определения сочетания генотипов генов тромбофилии и фолатного цикла. 4 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицинской генетики и предназначено для определения аллельного полиморфизма CCR5 delta 32. Осуществляют выделение ДНК из криоконсервированной пуповинной крови. Проводят полимеразную цепную реакцию с использованием специфических праймеров. Наличие специфических ДНК-фрагментов определяют после электрофоретического разделения ПЦР-амплификационной смеси и окрашивания бромистым этидием. При нормальном варианте гена длина ПЦР фрагментов составляет 224 п.н. При аллельном полиморфизме CCR5 delta 32 длина ПЦР фрагментов составляет 192 п.н. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию аллельного полиморфизма CCR5 delta 32 в образце пуповинной крови и может быть использовано для проведения скринингового обследования. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Наверх