Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины



Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины
Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины
Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины
Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины

 


Владельцы патента RU 2565803:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйству. Изобретение представляет собой способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины, заключающийся в изоляции пазушных почек, предварительном их обезвоживании в средах, содержащих осмолитики, переносе почек в криопробирки, криоконсервации криопробирок с почками в жидком азоте, оттаивании почек и посткриогенной регенерации из них растений, отличающийся тем, что на этапе обезвоживания перед быстрым замораживанием сначала почки помещают в раствор I, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM с добавлением к сахарозе (0,2-0,5М) глицерола (1,7-2,5М)), затем почки переносят в раствор II, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM, сахароза (0,2-0,5М), глицерол (2,5-3,5М), этиленгликоль (1-1,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)), с последующим переносом в жидкость для замораживания (WPM, содержащая сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (3,5-4М), этиленгликоль (1,5-2,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)). Изобретение позволяет проводить прямую регенерацию из почек, обеспечивая генетическую сохранность in vitro культур ценных селекционных генотипов и генетически модифицированных клонов осины и выживаемость до 80% после криохранения в течение года. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйству и может быть использовано для сохранения генетических ресурсов и создания криобанка особо ценных и траснформированных клонов in vitro растений осины (Вепринцев Б.Н. Консервация генетических ресурсов. / Б.Н Вепринцев, Н.Н. Ротт - Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР. - 1980. - 15 с.).

В современной биотехнологии поддержание растений в культуре in vitro является одним из передовых способов сохранения генотипических особенностей растений. Однако указанный способ является материально затратным, поэтому наиболее перспективным способом сохранения генетических ресурсов рассматривается криоконсервация изолированных меристем из пазушных почек. Использование эффективного и современного способа криосохранения меристем осины, позволяющего отказаться от программируемых замораживателей, необходимых для медленного замораживания растительного материала и специального оборудования для обезвоживания материала, может интенсифицировать создание криобанков ценных и трансформированных клонов in vitro растений осины.

Осина (Populus tremula) и ее гибриды широко используется в биотехнологии как модель для изучения различных аспектов генетики лесных древесных растений по ряду причин: относительно небольшой размер генома и возможность его эффективной трансформации, быстрый рост, простота клонального микроразмножения и выращивания in vitro. В лесном хозяйстве осина начинает занимать приоритетное направление для использования в целлюлозно-бумажной промышленности, химической промышленности и для получения стройматериалов. Поэтому криоконсервация in vitro культур рассматривается как способ долгосрочного сохранения растений, обладающих ценными свойствами.

Известно несколько способов криохранения растений, в частности известны методы для криоконсервации ряски (патент США US 20120190004 A1). Методы включают в себя инкубацию с обезвоживающим криозащитном растворе, который содержал около 1,9 M диметилсульфоксид, около 2,4 M этиленгликоля, около 3,2 M глицерина и около 0,4 M сахарозы. Указанное состояние обезвоживания имеет продолжительность от примерно 5 дней до примерно 35 дней при прохладных температурных условиях (от 2°C до 25°C). Замораживание осуществлялось в обезвоживающем растворе, охлаждение до -150°C культуры ряски осуществляли медленным снижением температуры криоконсерванта (скорость замораживания от 1°C до 25°C в час). Размораживание культуры ряски осуществляли при температуре в пределах от 15°C до 40°C. Среда для восстановления содержала сахарозу в концентрации от 0,5 M и 1,5 М. Выживаемость после замораживания в среднем составила 60%. Описанный метод является очень трудоемким и ресурсозатратным. Возможность использования данного способа для других растений не описана и, очевидно, потребует дополнительных модификаций метода и финансовых затрат.

Известен также способ криоконсервации различных голосемянных и покрытосемянных растений (патенты США US 5965438 A, US 20030031998 A1). Предварительно обработанные клетки подготавливали к действию пониженных температур с помощью предварительной инкубации в жидкостях с криопротекторами и лиофилизации клеток. Сочетание лиофилизации и удаления воды криопротекторами обеспечивает обезвоживание растительной клетки от 80% до около 95% воды. Раствор для замораживания включал в себя диметилсульфоксид (1 - 50%), пропиленгликоль (около 5-25%), глицерин (около 0-50%), полиэтиленгликоль - 8000 (около 5-20%), этиленгликоль (около 10-75%), этиленгликоль/сорбит (около 60/20 весовых процентов до примерно 10/60 весовых процентов) и этиленгликоль/сорбит (около 40/30 весовых процентов). Осуществлялось быстрое замораживание путем непосредственного погружения в жидкий азот. Клетки быстро размораживали при температуре +30°C. Выживаемость эксплантов не указана. Использовались суспензионные культуры, что усложняет процесс регенерации и получения генетически однородного материала. Возможность использования данного способа для культуры древесных растений, в частности осины, не оценивалось.

Запатентовано изобретение «способ криосохранения меристем земляники, изолированных из растений in vitro» (заявка на изобретение №2002113550/13 от 24.05.2002 с решением о выдаче патента от 02.09.2003). В этом способе растения земляники, размноженные in vitro, закаливали в течение 1-2 месяца на модифицированной питательной среде, дополненной 6% сахарозой или глюкозой, обработку изолированных меристем перед замораживанием (18-19 часов) проводили на жидкой питательной среде с криопротекторами (6% сахарозы или глюкозы и 5-7% диметилсульфоксида), апексы охлаждали в криоампулах, заполненных раствором 6% сахарозы или глюкозы и 7-9% диметилсульфоксида, содержащим лед, в программируемом замораживателе по оригинальной программе со скоростью 0,3-0,33°C/мин до (-38-40)°C, затем со скоростью 9-11°C/мин до -75°C с погружением в жидкий азот (-196°C) на срок не менее часа, посткриогенное восстановление растений из оттаявших меристем, освобожденных от избытка криопротекторов, проводили на модифицированной питательной среде с 0,5-1 мг/л бензиламинопурина и 3%-ными глюкозой или сахарозой. Данный метод не пригоден для сохранения меристемной ткани древесных растений, в частности осины. Метод неудобен подбором условий постепенного замораживания.

Способ криосохранения in vitro меристем, изолированных из растений земляники садовой (Fragaria L.) (заявка на изобретение № от 2006103654/13 от 08.02.2006 с решением о выдаче патента от 08.02.2006) включает в себя закаливание растений-доноров на твердой агаризованной питательной среде, дополненной 5-10% сахарозой в течение 2-8 недель, предкультивирование апексов 46-50 часов на агаризованной питательной среде, дополненной 0,79-0,81 M сахарозы и 0,5-1,0 мг/л паклобутразола ([1-(4-хлорофенил)-4,4-диметил-2(1,2,4-триазол-1-ил)пентан-3-ол], последующее высушивание, в потоке стерильного воздуха, апексов в течение 3-4 часов для удаления 70-80% воды, погружение криоампул с апексами в жидкий азот (-196°C) на срок не менее часа, оттаивание сначала при +38-40°C 1-5 сек в водяной бане, а затем при комнатной температуре на стерильной фильтровальной бумаге, посткриогенное восстановление растений из оттаявших меристем на модифицированной питательной среде проводилось с использованием 0,5 мг/л бензиламинопурина и 3% сахаров (сахароза + глюкоза). Способ трудоемкий, высушивание в потоке стерильного воздуха неконтролируемо.

Наиболее близким техническим решением из описанных по криоконсервации является «A cryopreservation method maintaining the genetic fidelity of a mode forest tree, Populus trémula L. × Populus tremuloides Michx.» (Jokipii S., Ryynänen L., Kallio P.T., Aronen T., Häggman H. // Plant Science 2004, №166, PP. 799-806). В статье описывается методика криоконсервации почек осины с предварительным кратковременным депонированием при низких положительных температурах на среде MS, содержащей 0,09 М сахарозы. Почки постепенно замораживались со скоростью 10°C/ч до -38°C в среде, содержащей 0,25 мл жидкости без гормонов MS и 1 мл криосреды (10% полиэтиленгликоль 6000 глюкозы и 10% диметилсульфоксид). Криопробирки с растительным материалом хранили в жидком азоте. По прошествии четырех недель образцы оттаивали при 37°С в водяной бане, затем промывали жидкой среде MS в течение 30 минут и культивировали на полутвердые MS среды, содержащей 2,22 µМ ВАР и 2,85 µМ IAA, для регенерации растений. Однако при таких условиях растения долго хранили (не более 4 недель). Описанный способ требует долгой подготовки растительного материала, неудобен вследствие постепенной заморозки.

Целью предлагаемого изобретения является создание способа быстрой криоконсервации особо ценных и трансформированных клонов in vitro растений осины и сохранение их промежуток времени до 12 месяцев.

Поставленная цель достигается за счет того, что при проведении криоконсервации используется поэтапная смена сред, обеспечивающая дегидратацию пазушных растительных почек и возможность быстрой «шоковой» заморозки в жидком азоте.

Суть изобретения заключается в том, что для криоконсервации используют изолированные пазушные почки из in vitro растений осины, содержащие мелкие меристемные клетки, которые предварительно обезвоживают в средах, содержащих осмолитики, сначала почки помещают в раствор I, содержащий WPM (Lloyd G., McCown В., Commercially feasiblemicropropagation of mountain laural (Kalmla latlfolia) by use of shoot tip cultures. Ccmb Proc Intl Soc 1980. 30: PP. 421-427.) с добавлением к сахарозе (0,2-0,5М) таких осмолитиков как глицерола (1,7-2,5М). После инкубации с раствором I почки переносят в раствор II, содержащий WPM, сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (2,5-3,5М), этиленгликоль (1-1,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М). Раствор II меняют на жидкость для заморозки, содержащую WPM, сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (3,5-4М), этиленгликоль (1,5-2,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М). Физические свойства жидкости для заморозки обеспечивают возможность непосредственного переноса криопробирок из комнатной температуры в жидкий азот. Размораживание осуществлялось при температуре +40°С. Экспланты инкубируют в среде для промывки WPM содержащей сахарозу (1-1,5М) и переносят на среду для восстановления MSm - модифицированную среду Murashige и Skoog (Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol. Plant, 1962. - Vol. 15, №2. - P. 473-497.), содержащую 25-30 мг/мл сахарозы, 0,5-1 мг/мл индолил-3-масляной кислоты, 3,5-4 мг/мл N6-(2-изопентил) аденина. В результате использование малообводненных пазушных почек и поэтапной смены сред с различной концентрацией осмолитиков позволяет быстро и с минимальными манипуляциями сохранять растения осины с выживаемостью до 80% сроком до года. Способ подходит для криоконсервации in vitro культур осины как генетически модифицированных клонов, так и ценных селекционных генотипов отобранных в природе.

Анализ известных способов криоконсервации in vitro микрорастений трансгенной и нетрансгенной осины в условиях, проведенный по научно-технической и патентной документации, показал, что совокупность существенных признаков заявляемого способа неизвестна из уровня техники, следовательно, он соответствует такому условию патентоспособности изобретения как «новизна».

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.

1. В нестерильных условиях готовятся питательные среды и растворы, содержащие питательные среды и осмолитики, для криоконсервации и восстановления культуры растений осины. В них добавляются необходимые количества макро-, микроэлементов, хелата железа, мио-инозита, объем доводится дистиллированной водой, рН 5,6-5,8. Растворяются необходимые количества сахарозы и осмолитиков (этиленгликоль и глицерол). После этого добавляется навеска агара. Среда разливается по колбам; автоклавирование проводится при 1 атм. (=1 изб. атм.) в течение 25 минут. В охлажденную до 55°С среды и жидкости в ламинар-боксе добавляются стерильные растворы гормонов и диметилсульфоксид в необходимых концентрациях. Полученная среда для восстановления разливается по стерильным культуральным сосудам. Все дальнейшие манипуляции с растительным материалом производятся в ламинар-боксе в условиях стерильного воздуха.

2. Из микрорастений осины изолируют фрагменты размером 2-3 мм, содержащие по одной пазушной почке. Для обезвоживания почки помещают на 30 мин в раствор I, далее экспланты переносят в раствор II на 10 мин. Инкубация происходит при комнатной температуре.

3. В криопробирки объемом 1,5 мл с жидкостью для заморозки вносят по 25 обезвоженных почек. Инкубируют 10 мин при комнатной температуре, жидкость меняется и добавляется свежая. Криопробирки с эксплантами сразу переносят в жидкий азот. Хранение проводят в жидком азоте в течение года.

4. Размораживание осуществляется при температуре +40°С на водяной бане в течение 1 минуты. После экспланты переносятся в среду для промывки и инкубируются в ней течение 20 мин при комнатной температуре. Далее они переносятся на среду для восстановления и культивируются до прорастания побегов из пазушных почек. Восстановление осуществляется при длиннодневном режиме освещения 16 часов «день», 8 часов «ночь» интенсивностью 5000 люкс, при температуре +22°С. Процент выживания оценивается после 2 недель инкубации на среде для восстановления.

Кроме криоконсервации растений дикого типа, данный способ пригоден для длительной криоконсервации растений генетически модифицированной осины с рекомбинантными генами. Была проведена криоконсервация разных нетрансформированных генотипов осины (Pt, PtV22) и трансгенных растений осины с разными рекомбинантными генами (Gus, Bar, Xeg,). Выживаемость и трансгенных и нетрансгенных клонов всех генотипов после года криоконсервации в жидком азоте составляла в среднем 80% (таблица 1).

На рисунке 1 показаны размороженные трехдневные экспланты после года криоконсервации в жидком азоте. На рисунке видно, что дифференцированная ткань стебля и черешка листа отмирает и обесцвечивается, жизнеспособной остается только почка, обеспечивая прямую регенерацию без каллусообразования.

На рисунке 2 показаны двухнедельные экспаланты после года криоконсервации в жидком азоте. Доказано, что идет прямая регенерация без образования каллуса, а следовательно, генотип сохраняется без изменения после процесса замораживания. Сохранение экспрессии рекомбинантных генов в трансгенных растениях осины после года криохранения при температуре -196°С подтверждено методом ОТ-ПЦР на селективного гена nptII (рис. 3).

Преимуществом предложенного способа проведения криоконсервации in vitro растений осины является сохранение параметров микрорастений. Предложенный способ криоконсервации не является затратным, так как требует лишь смены осмолитических сред без закупки дополнительного оборудования для обезвоживания и медленного замораживания. Также данный способ отличается быстротой исполнения и не требует длительной подготовки растений к криоконсервации. Поэтому способ может быть успешно использован для научных исследований, сохранения ценных генотипов осины или для создания криобанков посадочного материала растений в лесном хозяйстве.

1. Способ криоконсервации пазушных почек in vitro растений осины, заключающийся в изоляции пазушных почек, предварительном их обезвоживании в средах, содержащих осмолитики, переносе почек в криопробирки, криоконсервации криопробирок с почками в жидком азоте, оттаивании почек и посткриогенной регенерации из них растений, отличающийся тем, что на этапе обезвоживания перед быстрым замораживанием сначала почки помещают в раствор I, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM с добавлением к сахарозе (0,2-0,5М) глицерола (1,7-2,5М)), затем почки переносят в раствор II, содержащий питательную среду и осмолитики (WPM, сахароза (0,2-0,5М), глицерол (2,5-3,5М), этиленгликоль (1-1,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)), с последующим переносом в жидкость для замораживания (WPM, содержащая сахарозу (0,2-0,5М), глицерол (3,5-4М), этиленгликоль (1,5-2,5М), диметилсульфоксид (1,5-2М)).

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве растений осины используются генетически модифицированные растения осины с рекомбинантными генами.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии и растениеводства. Изобретение представляет собой способ сохранения in vitro растений земляники (Fragaria L.), заключающийся в том, что растения помещают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, модифицированную 6% сахарозы, 10-12 г/л агар-агара, 0,2 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-0,5 мг/л паклобутразола, 6 мМ глюконата кальция, а на ее поверхность выкладывают гранулы альгината кальция с тиосульфатом серебра, закрывают пробирки и переносят их в условия при температуре от 1 до 10°С, 6-часовом световом дне и освещенности 0,5-0,8 клк.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения пеперомии in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, где при микроразмножении экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 10 г/л глюкозы и 0,1 мг/л Рибав-Экстра и культивируют в течение 4 недель, затем сформировавшиеся растения-регенераты с корнями замачивают в растворе 3 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси торфа и песка 1:1.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения хризантемы, включающий микрочеренкование растительных побегов, стерилизацию растительных эксплантов с последующей их высадкой на безгормональную питательную среду Мурасига и Скуга, размножение микроклонов, укоренение вновь образованных in vitro побегов и адаптацию растений-регенерантов к почвенным условиям, где на этапе стерилизации растительных эксплантов используют обработку микрочеренков водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03% в течение 10 мин, без последующего промывания стерильной дистиллированной водой, на этапе микроразмножения проводят обработку микрочеренков раствором католита в течение 3 мин, на этапе адаптации почвенный субстрат обрабатывают водным раствором анолита нейтрального катодно-обработанного в концентрации 0,03%, а микрорастения обрабатывают раствором католита в течение 10 мин.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения дигаплоидных растений ячменя из культивируемых микроспор in vitro, включающий: - выращивание растений-доноров при пониженной температуре воздуха 15-20°C, световом режиме: 16 ч день/8 ч ночь, влажности воздуха 60-70%, интенсивности освещения 10000-15000 люкс, с проведением фитосанитарной обработки, при этом выращивание растений-доноров осуществляют до стадии от открытия влагалища флагового листа, когда соцветие находится внутри флагового листа, - стрессовую обработку колосьев при 4°C, в пробирках с бедной средой, содержащей KCl - 1,5 г/л, MgSO4×7H2O - 0,25 г/л, CaCl2×2Н2О - 0,1 г/л, маннитол - 60 г/л, калий-фосфатный буфер - 1 мл/л, pH 7,0, в течение 7 дней для переключения из гаметофитного пути развития микроспоры на спорофитный путь, - выделение микроспор из колосков в стерильных условиях, - культивирование выделенных микроспор на модифицированной среде для индукции эмбриогенеза, включающей 6% мальтозу, 10 завязей на 1,5 мл культуры и регуляторы роста растений в количестве 1 мг/л 2,4-Д, 0,2 мг/л зеатина, причем добавление вышеуказанных компонентов осуществляется перед добавлением микроспор, - регенерацию растений из эмбриоидов путем культивирования на твердой питательной среде Мурашига и Скуга без добавления регуляторов роста растений, - обработку гаплоидных растений ячменя антимитотическим препаратом N-диацетил-N-(β,γ-эпоксипропил) аминоколхицином для удвоения хромосом и получения дигаплоидых растений.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения подвоев яблони ММ 106, СК 2, СК 3, СК 4, СК 7, где на этапах введения в культуру в среду Мурасиге-Скуга добавляется в качестве санирующего агента антибиотик гризеофульвин 500 мг/л.

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений гвоздики in vitro. Изобретение представляет собой способ размножения гвоздики in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, отличающийся тем, что при микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS, затем образовавшиеся конгломераты микропобегов делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro с деконтаминацией от микоплазменной инфекции, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на твердую питательную среду Мурасиге и Скуга без ростовых веществ и с уменьшенным количеством макроэлементов.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения винограда in vitro, включающий микрочеренкование пробирочных растений, высадку их на питательную среду в присутствии ростовых веществ и культивирование, где высадку и культивирование осуществляют на твердой питательной среде Мурасиге и Скуга, содержащей в качестве росторегулирующего вещества препарат Мелафен в концентрации 10-7-10-11%.
Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения гречихи in vitro, включающий размножение гречихи из асептических проростков семян.

Изобретение относится к области биотехнологии растений и лесному хозяйстве. Изобретение представляет собой способ подготовки микропобегов in vitro ясеня, осины, ивы для последующего укоренения в условиях ex vitro, включающий перенос растений после стадии мультипликации на питательную среду WPM для элонгации, с добавлением сахарозы 30 г/л, агар-агара 9 г/л, инозитола 100 мг/л, пиридоксина 0,1 мг/л, тиамина 0,1 мг/л и никотиновой кислоты 0,5 мг/л, где в среду для элонгации добавляют глутамин в концентрации 0,5 или 1,0 ммоль/л, при этом культивирование растений осуществляется при повышенной освещенности - от 5 до 8 тыс. люкс. Изобретение позволяет получать физиологически и морфологически выровненные побеги осины, ясеня и ивы, что обеспечивает значительное повышение эффективности их укоренения ex vitro. 4 табл.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности картофелеводства. В способе выращивают мини-клубни оздоровленного картофеля в защищенном грунте, полученные от пробирочных растений. При этом после проверки исходных растений на вирусную инфекцию проводят черенкование здоровых растений, в конце мая - начале июня подготовленные растения высаживают в марлево-пленочный изолятор с повышенной густотой посадки. Растения высаживают непосредственно в пластиковые ящики с торфогрунтом, выстланные изнутри агриловой пленкой. Перед посадкой растения в торфогрунт вносят удобрения. Способ позволяет получать безвирусные мини-клубни картофеля. 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba L.) в условиях гидропоники, включающий использование черенков материнских растений, размножение и выращивание, где в качестве эксплантов используются черенки материнских растений, которые высаживают на питательную среду по прописи Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают для микроразмножения на питательную среду Мурасиге-Скуга (MS), содержащую 0,5 мкМ БАП+0,25 мкМ ИМК+0,05 мкМ ГК, укореняют побеги на агаризированной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мкМ НУК, затем растения-регенеранты вынимают из культуральных сосудов, отмывают корни в дистиллированной воде от агара, закрепляют в кассетах и помещают в гидропонную установку на 90 суток для адаптации и выращивания растительного лекарственного сырья на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей 1/4 состава макросолей, 1/4 состава микросолей, полный набор витаминов, хелата железа и кальция хлористого, при температуре 24-26°C, режим освещения: 16 часов день, 8 часов ночь. Изобретение позволяет увеличить выход лекарственного растительного сырья лапчатки белой по сырой массе за 1 год в условиях круглогодичных теплиц с содержанием экстрактивных веществ, идентичных в растительном сырье лапчатки белой, выращенной в полевых условиях. 3 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Предложена система контроля фотосинтетического и дыхательного СО2-газообмена в культуре in vitro. Система герметичным образом через типовой уплотнитель сопрягается с прозрачным технологическим объемом in vitro с культивируемыми полноценными растениями на различных этапах онтогенеза, регенерантами, изолированными органами и тканями. Система образует вместе с подключенным технологическим объемом общий замкнутый герметичный воздушный контур. Контур состоит из последовательно соединенных между собой указанного технологического объема и воздушного насоса, ротаметра, воздушного осушителя и CO2-газоанализатора. Контур между CO2-газоанализатором и технологическим объемом in vitro дополнительно оборудован двухпозиционным газовым переключателем. Изобретение обеспечивает многократную воспроизводимость процедуры измерения. 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Представлен способ получения моноклональной линии растительных клеток от гетерологичной популяции растительных клеток, включающий следующие стадии. Способ включает получение гетерологичной популяции растительных клеток и получение протопластов от указанной гетерологичной популяции растительных клеток. Затем осуществляют разделение единичных протопластов путем подвергания получения протопластов проточно-цитометрическому сортингу. После этого осуществляют регенерацию отделенного единичного протопласта до образования микроколонии посредством совместного культивирования в присутствии материала фидерных клеток. Полученные микроколонии выделяют из материала фидерных клеток и культивируют до образования моноклональной линии растительных клеток. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ культивирования лимона in vitro, заключающийся в том, что стерильные пазушные почки предварительно культивируют до появления микропобегов на питательной среде МС с добавлением БАП 0,1 мг/л, НУК 0,5 мг/л, агар 0,7%, затем вычленяют из них меристемы размером 0,4-0,6 мм с 2-3 примордиями и прививают их на подвой, выращенный in vitro на среде WPM, дополненной БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 0,7%, микропривитые растения культивируют на среде WPM с добавлением БАП 1 мг/л, ГК 2 мг/л, агар 7 г/л, сахарозы 20 г/л. Изобретение позволяет сохранять в коллекции in vitro ценные генотипы цитрусовых культур с высокой степенью генетической стабильности и однородности растительного материала. 3 табл.
Изобретение относится к области декоративного садоводства. Изобретение представляет собой способ размножения растений фритиллярий методом in vitro, включающий стерилизацию эксплантов, разделение их на части, посадку на питательную среду Данстена и Шорта, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение и адаптацию, отличающийся тем, что после разделения эксплантов их помещают на питательную среду Данстена и Шорта, содержащую 6 г/л агара с добавлением - 5 мкМ 6-бензиламинопурина и 2 мкМ α-нафтилуксусной кислоты, после культивирования на данной среде микролуковицы размножают на безгормональной среде Данстена и Шорта в течение 4 недель при освещении 3 клк 16 ч свет/ 8 ч темнота при температуре 24°C, укореняют и адаптируют в контейнерах со сфагновым мхом, в темноте, при температуре 7°C, в течение 2 месяцев. Изобретение позволяет получить высокий выход посадочного материала представителей рода фритиллярия при минимальных затратах регуляторов роста. 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ сохранения качественных характеристик культуры in vitro некоторых древесных видов растений (лимонник китайский, рододендрон, сирень, береза повислая), включающий размножение микропобегов на искусственных питательных средах, где через 7-10 дней после культивирования в стандартных условиях побеги помещают в условия с температурой 4-8°С и уровнем освещенности 500-1000 люкс на срок до 8 (лимонник китайский, береза повислая) или до 12 месяцев (рододендрон, сирень). Изобретение позволяет повысить сохранность качественных характеристик культуры in vitro Лимонника китайского и Березы повислой. 3 табл.
Наверх